TECNOLÓGICO NACIONAL DE MÉXICO

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE LA PAZ

Ingeniería Bioquímica

Práctica 4. “Técnicas de siembra y

cultivo de microorganismos”.
Microbiología

Alumno: Jesús Alberto Geraldo León

Profesor(a): Rubí Alejandra Martínez Camacho

Fecha de entrega: Viernes 11 de Noviembre del 2016.

0
Resumen
Se realizaron los diferentes métodos de siembra así como también cultivos puros y su identificación por medio de tinción
Gram con el objetivo de ejercitar estas técnicas manteniendo condiciones asépticas y así mismo aislar una colonia de
bacterias y caracterizarlas de manera microscópica mediante tinción Gram. Esto se realizó, en el caso de las siembras
en placa, colocando una muestra diluida sobre la placa con el asa o varilla previamente esterilizada con fuego
agregándolo en forma de estría o dispersando en toda la superficie. En el vaciado en placa solo se le agregó la dilución
con pipeta junto con agar nutritivo. En la siembra en tubos se utilizó también el asa previamente esterilizada para inocular
el cultivo de las placas ya sea en el caso del medio solido por estría, en el semisólido por picadura y en el líquido
homogenizando dentro del tubo y finalmente se realizaron los frotis de estos cultivos puros para la tinción Gram al que
se le agregaron colorantes y alcohol con intervalos de espera y se visualizaron bajo el microscopio. Se observaron
bacilos Gram negativos en todas las muestras, además, se presentó movilidad y colonias amarillas en el agar nutritivo
y rosa salmón en el Hektoen. Todo esto sumado a la habitual característica de las bebidas lácteas de aguas frutales de
tener bacterias colifomes indica el aislamiento de estos microorganismos. Todo esto es una probabilidad ya que deben
llevarse a cabo pruebas morfológicas, bioquímicas y/o serológicas para lograr una identificación final.

Palabras clave:

Cultivo,aislar,bacteria,morfología,siembra

Abstract:
different methods were performed using different planting methods as well as pure cultures and identification by means
of Gram staining in order to exercise these techniques maintaining aseptic conditions and likewise isolate a colony of
bacteria and characterize microscopically were performed using Gram staining. This was done, in the case of the
platings, placing a diluted sample on the plate with the handle or rod previously sterilized with heat by adding shaped
groove or dispersing the entire surface. Emptying plate it is only added dilution pipette with agar nutritivo.En planting
tubes the previously sterile handle is also used to inoculate culture plates either in the case of solid by spline means, in
semisolid pitting and homogenizing the liquid inside the tube and finally the pure cultures of these smears for Gram
staining which was added dyes and alcohol timeouts and visualized under a microscope were performed. Gram
negative bacilli was observed in all samples, in addition, mobility and yellow colonies on nutrient agar and salmon pink
on Hektoen presented. All this plus the usual characteristic of fruit milk drinks waters have coliforms, bacteria indicates
the isolation of these microorganisms. All this is likely because it must be performed morphological, biochemical and /
or serological tests to achieve a finish identification

Keywords:
Culture,isolate,,bacterium,morphology,planting

1

Introducción
Pasteur diseño matraces con cuellos largos y finos
doblados, pero abiertos al exterior, dentro de los
cuales había introducido caldos de carne. Tras
hervirlos y calentar los cuellos de los matraces
demostró que no se producía crecimiento, aun
cuando se mantuvieran sin cerrar los extremos. Por
su parte, John Tyndall demostró en 1877 la existencia
de formas de microorganismos muy termoresistentes
que justificaban algunos resultados publicados por
los partidarios de la generación espontánea, y
desarrolló un método de esterilización mediante
calentamientos separados entre si 24 horas que
eliminaban estas formas de resistencia. En 1882
Koch empleo técnicas de aislamiento de
microorganismos con medios de cultivo solificados
con gelatina o agar en placas estériles de gran
superficie (placa de Petri, desarrolladas por Richard
Petri) para aislar e identificar al agente causante de
la tuberculosis. (Berenguer, 2003)
El éxito de Koch, conjuntamente con el de Pasteur
aproximadamente en la misma época, fue el punto de
partida de un periodo de intensa investigación. Este
periodo (desde finales del siglo diecinueve hasta
principios del siglo veinte) es conocido como la edad
de oro de la bacteriología clínica. La mayoría de los
principales patógenos bacterianos fueron aislados
durante esta época; las técnicas eran muy básicas:
aislar el microorganismo, cultivarlo en cultivo puro y
examinar células humanas y microbianas al
microscopio. (Ingraham, 1998).Entonces los medios
de cultivo ideados y aplicados por Robert koch y Luis
Pasteur fueron importantes para el desarrollo del
aislamiento e identificación de los agentes causantes
de las grandes enfermedades infecciosas que
azotaban a la humanidad; además los trabajos de los
rusos Beijerink y Winograsky en la microbiología del
suelo dieron las bases para la preparación adecuada
de los medios de cultivo para aislar in vitro las
bacterias y hongos de diferentes ambientes. (Toro,
2005).Hasta hace relativamente muy poco tiempo,
casi todo lo que sabíamos acerca de la virulencia
microbiana, y la patogénesis se basaba en las
mismas técnicas; los médicos observaban las
manifestaciones o síntomas de la enfermedad, los
patólogos examinaban el tejido enfermo, a simple
vista y al microscopio: los microbiólogos utilizaban los
postulados de Koch para demostrar que un
determinado microorganismo es el agente etiológico
de una determinada enfermedad. Las prácticas de
sembrar, aislar y teñir son rutinarias en un laboratorio
de microbiología independientemente del campo en
que se desarrollen pero aún existen muchas
bacterias, archeas y hongos que no crecen en los
medios de cultivo. Algunos autores afirman que solo
hemos podido cultivar el 1% de las bacterias
existentes, las pruebas de ADN directamente
aplicada a una muestra de suelo evidencian esta
afirmación. La biodiversidad del suelo es mucho
mayor a la que se puede cultivar.
El cultivo de microorganismos es una actividad que
requiere del conocimiento de técnicas de siembra o
inoculación y de aislamiento para transferirlos de un
medio a otro, o mantener su crecimiento y actividad.
Es indispensable para realizar diversos estudios
morfológicos, de identificación, bioquímicos, de
patogenicidad y ecológicos, entre otros.
Las aguas frescas son bebidas que se elaboran con
frutas, en ocasiones leche condensada, cereales y/o
semillas, además de agua y azucares para endulzar.
Es una bebida tradicional mexicana, sin alcohol y que
se consume fría, la finalidad no es tan solo
refrescarse, sino que son fuente de vitaminas y
minerales, que contribuyen a fortalecer el sistema
inmunológico, y algunas de ellas tienen cualidades
antioxidantes. Los microorganismos mesófilos,
Staphylococcus aureus, coliformes, hongos y
levaduras son marcadores presentes en los
alimentos y en aguas de consumo humano (aguas de
bebidas preparadas) que advierten sobre la
manipulación incorrecta y/o contaminación previa de
la materia prima, así como de una contaminación por
instalaciones inadecuadas en el sitio de elaboración,
indicando la presencia de un peligro para el
consumidor.
Un cultivo puro es aquel que contiene una sola
especie de microorganismos, mientras que el cultivo
mixto es el que tiene dos o más especies. En la
naturaleza las bacterias conviven con gran variedad
de otros microorganismos y solo en muy raras
ocasiones se encuentran como especie única. En
muchos procesos industriales es necesario recuperar
solo el agente de interés, dentro de una flora mixta.
Por estas y otras razones, se emplean técnicas que
permitan la separación de los diferentes tipos de
bacterias presentes en una muestra, así como
también que permitan evaluar la pureza de un cultivo.
Solo al tener la certeza de que el cultivo esta puro, es
posible realizar cualquier estudio bacteriológico.
(Rodriguez, 2005)
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Las bacterias se cultivan en el laboratorio en
materiales nutritivos denominados medios de cultivo,
cuyos componentes son muy variados. La elección
del medio se basa en el propósito de estudio. El
material que se inocula en el medio se denomina
inoculo, cuando se inocula un medio como el agar
nutritivo u otros medios con agar en cajas de Petri,
por el método de siembra por estría cruzada en placa,
las células quedan separadas individualmente.
Durante la incubación, las células microbianas
individuales se reproducen tan rápidamente que en
un tiempo de 18 a 24 horas producen masas visibles
a simple vista, denominadas colonias. Cada colonia
que se observe diferente, presumiblemente es un
cultivo puro de una sola clase de bacterias. Si dos
células microbianas procedentes del inoculo original
quedan muy cerca una de la otra sobre el medio de
agar, las colonias que resultan pueden quedar
mezcladas o muy juntas. Las siembras por estría
permiten aislar las bacterias que dan lugar a colonias
separadas y posteriormente, transfiriendo una sola
colonia a un medio nuevo, se permite el desarrollo de
un cultivo puro bacteriano. (Alarcón, 2004)
Los métodos de aislamiento más frecuentes son:
siembra por agotamiento por estrías, siembra por
diseminación en superficie y siembra por diluciones
seriadas. En la siembra por agotamiento por estrías,
se trata de un método rápido y simple de agotamiento
progresivo y continuo del inoculo (material
microbiano utilizado para sembrar un medio de
cultivo) sobre un medio solido contenido en una
capsula de Petri. A medida que se realizan estrías las
bacterias pasan del asa al medio en un número cada
vez menor, de manera que las estrías iniciales
proporcionan un crecimiento confluyente, mientras
que a lo largo de las últimas estrías se desarrollan
colonias bien aisladas. La siembra por diseminación
en superficie es un método que consiste en colocar
0.005ml del inoculo en el centro de una placa de Petri
con medio de cultivo. Se extiende con espátula de
Drigalsky hacia adelante y atrás, mientras se hace
girar la placa, se tapa, se invierte la placa y se lleva a
incubar. En la siembra de diluciones seriadas
consiste en realizar diluciones sucesivas de la
muestra con el objeto de sembrar después
cantidades conocidas de esas diluciones en capsulas
de Petri. Esto permite conocer el número de
microorganismos viables. La viabilidad en
microbiología se define como la capacidad del
microorganismo para multiplicarse en un medio de
cultivo. (Negroni, 2009)
El aislamiento de un microorganismo con
características específicas es una labor ardua y
costosa. Muchos microorganismos son
irremplazables, pues han sido obtenidos por
procedimientos empíricos: no existe un método bien
definido para obtener la cepa nuevamente, en caso
de perderla. Además, la modificación de un
microorganismo para variar sus características hace
que sea muy inestable y susceptible de perderlas con
facilidad.
Actualmente, el aislamiento se realiza en condiciones
cada vez más estandarizadas y repetibles, y se
recurre al mejoramiento genético de las cepas para
obtener cualidades especiales, tales como una mayor
productividad de biomasa o sustancias de interés.
(Hernández, 2014)
La evaluación inicial de la morfología de la colonia
en las placas de cultivo tiene extrema importancia y
que permite decidir qué medidas se adoptaran para
lograr la identificación y la caracterización definitivas
del microorganismo. Para toda identificación
bacteriana es importante destacar las características
clave de una colonia bacteriana: el éxito o fracaso
de los procedimientos posteriores de identificación a
menudo dependen de la precisión de estas
observaciones.
Los criterios utilizados con frecuencia para
caracterizar el crecimiento bacteriano son:
tamaño de la colonia (por lo común calculado en
milímetros o descrito en términos relativos como
cabeza de alfiler, pequeño, medio grande)
pigmentación de la colonia, forma de la colonia
(incluye forma, elevación y bordes de la
colonia),aspecto de la superficie de la colonia(por
ejemplo brillante, opaca, mate,
transparente),cambios en los medios con agar como
resultado del crecimiento bacteriano(por ejemplo
patrón hemolítico en agar sangre, cambios en el color
de los indicadores de pH, corrosión de la superficie
del agar),olor(ciertas bacterias producen olores
característicos que pueden ayudar a la identificación
preliminar).Aunque es importante la determinación
cuidadosa del aspecto de la colonia, es imprudente
confiar totalmente en la morfología de la colonia para
su identificación preliminar. Las colonias de una
especie bacteriana a menudo presentan
características casi indistinguibles de las mucha
otras especies. Además, las bacterias de la misma
especie exhiben diversidad morfológica. Por ejemplo,
ciertas características de la colonia pueden ser
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típicas de una especie dada pero otras cepas de esa
especie pueden tener morfología distintas,
El aislamiento de las colonias individuales durante los
cultivos no solo es importante para examinar la
morfología y las características sino que también es
necesario para la realización oportuna de la tinción
de Gram y los subcultivos. La tinción gram y la
evaluación microscópica de los cultivos de las
bacterias, junto con la morfología de la colonia, sirven
para decidir los pasos de identificación necesarios,
Para evitar confusiones se tiñen los microorganismos
provenientes de cada colonia. En muchos casos
debe teñirse cada colonia que presenta una
morfología diferente en placa primaria, En otros
casos la tinción puede no ser necesaria porque el
crecimiento en un agar selectivo determinado
proporciona datos relacionados con la morfología de
la tinción de Gram del microorganismo (Forbes,
2009)
Esta práctica se realizó con el objetivo de organizar
el material para su identificación y fácil manejo dentro
de una zona aséptica, de manipular adecuadamente
los dispositivos que se emplean en la transferencia
de cultivos microbianos y aplicar diferentes técnicas
de siembra (métodos de aislamiento). Con el objetivo
específico de aprender a trabajar en condiciones
asépticas esterilizando el material y con técnicas para
mantener dicha esterilidad. También realizar
diferentes métodos de siembra como vaciado en
placa, dispersión con varilla de vidrio, estría cruzada,
siembra en medio solido (tubos en slant), siembra de
agar semisólido y siembra en medios líquidos y
cuantificar y describir las UFC desarrolladas. Por
último identificar las bacterias aisladas en el cultivo
puro por medio de tinción de Gram.
Metodología
Se prepararon 5 diluciones decimales a partir de la
muestra láctea de agua frutal y se realizaron los
siguientes métodos de siembra:
Vaciado en placa. Se tomaron 5 cajas Petri y se
rotularon con el nombre y fecha. Se colocaron 1 ml
de cada dilución seriada respectivamente en cada
caja, y se vertió agar nutritivo en cada una de las
placas.
Dispersión con varilla de vidrio. Se tomó 1 placa con
agar nutritivo y se colocaron 0.1 ml de la dilución 10-
2 margen entero y las colonias rosa salmón fusiformes
. Se dispersó la muestra con una varilla de vidrio
(asa de Digralsky) previamente flameada, y
suspendida en alcohol de 96°.
Estría cruzada. Se tomó una caja Petri con Agar
entérico Hektoen y otra con Sal y manitol. Se
esterilizó el asa flameando y se procedieron a realizar
la primera estría con una muestra de la dilución 10-2.
Se esterilizó el asa de nuevo y se continúo con la
siguiente estría tocando la estría anterior. Se repitió
este proceso hasta haber echo 4 estrías.
Las cajas Petri se colocaron en la incubadora (VWR
USA) durante 48 horas a 37°C. Una vez que se
observó el crecimiento y se escogieron las colonias
aisladas de la placa de vertido 10-3 se resembraron
con las siguientes técnicas:
Siembra en medio sólido ( tubos en Slant). Se
esterilizó el asa de platino en la flama, se retiró el asa
y se dejó enfriar. Se destapo la caja Petri y se tomó
el inoculo introduciéndolo en el tubo inclinado (slant)
por la técnica de estría ondulada.
Siembra en Agar Semisólido. Se esterilizó el asa de
platino recta en la flama del mechero. Una vez fría,
se tomó el inoculo de la caja Petri y se depositó la
muestra por picadura evitando tocar el fondo.
Siembra en medios líquidos. Se esterilizó el asa de
platino en la flama del mechero y se tomó el inoculo
de la caja Petri. Se colocó en el tubo de cultivo liquido
homogenizando.
Se incubaron durante 48 horas (VWR USA) y se les
realizó tinción Gram a los medios sólido, semisólido
y líquido. Se observó en el microscopio Sargent-
Welch (Mod S664733, USA) y se describieron sus
características
Resultados
En las diferentes siembras en placa que se
realizaron en distintos medios se obtuvieron una
variedad de microorganismos provenientes de la
muestra de la bebida láctea de agua frutal. Se
observaron colonias predominantemente verdes y
rosa salmón con halo alrededor y algunas negras en
el cultivo de agar Hektoen (fig. 1).Estas últimas
irregulares con margen ondulado. Las colonias
verdes circulares con elevación convexa y con
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 con elevación umbonada y margen ondulada. En el
cultivo de sal y manitol (fig. 2) se presentaron
colonias amarillentas irregulares, convexa y margen
entero y en el cultivo de agar nutritivo(fig. 3) colonias
blancas grandes irregulares, planas y onduladas,
también se presentaron colonias amarillas circulares
elevadas con margen ondulado, mas acentuadas en
la dilución 1x10-3. Esta relación del crecimiento de
colonias con las disoluciones realizadas a la muestra
láctea de agua frutal se puede apreciar en la tabla I
donde el numero de UFC va disminuyendo conforme
la dilución es mayor, incluso se observó que en las
últimas dos diluciones no hubo un aparente
crecimiento bacteriano. Fig. 2. Cultivo sal y manitol en placa

1x10-1 1x10-2

1x10-3 1x10-4

Fig. 3. Cultivo agar Hektoen en placa

1x10-5

Fig. 1. Cultivo agar nutritivo en placa con

diferentes diluciones.

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 Muestra Dilución UFC/ml
1x10-1 incontable> 300
Bebida 1x10-2 109
láctea de 1x10-3 56
1x10-4 0
agua frutal 1x10-5 0
Tabla 1. Cantidad de UFC en diferentes
diluciones de muestra

Se inoculó una colonia del medio agar nutritivo hacia

los diferentes tubos con medios distintos para
obtener cultivos puros. En todos se presentaron
crecimiento microbiano percibido por la dilatación de
las estrías realizadas en el tubo inclinado con medio
solido (fig 4),la desaparición de la picadura en el
medio semisólido(fig 5) junto con el surgimiento de un
precipitado en la superficie de este, y el precipitado
también en la superficie del medio liquido (fig 6) Fig. 5. Tubo con cultivo puro en medio
acompañado de su turbidez. semisólido

fig. 6. Tubo con cultivo puro en medio líquido

Fig. 4. Tubo inclinado con cultivo puro en medio Se realizó la técnica de tinción Gram a los cultivos
solido puros de bacterias coliformes; encontrándose bacilos
Gram negativos en los 3 frotis de los diferentes
medios (fig 7,8 y 9) .se visualizan mejor las
características en la Tincion gram de colonia de
medio semisólido (fig 7), en las demás la cámara no
captó de manera clara y definida la morfología y color
de las bacterias, pero si se tomó datos de éstos
donde se mostró que comparten las mismas
características que en el medio semisólido.

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Fig. 7. Tinción Gram de colonia de medio
semisólido
Fig. 8. Tinción Gram de colonia de medio sólido
Fig. 9. Tinción Gram de colonia de medio líquido
Discusión
Se notó que la cantidad de colonias de bacterias
disminuía conforme la dilución era mayor. Esto tiene
sentido ya que ese precisamente es el objetivo de la
dilución seriada, como dice Tortora;2007 la dilución
seriada se lleva a cabo hasta llegar a un número
factible para contar los microorganismos (Tortora,
2007)
Las características de las colonias que se observan
en el medio de cultivo agar hektoen corresponden a
lo dicho por Leboffe, 2016’’. Los entéricos que
producen ácido a partir de la fermentación producirán
colonias amarillas a rosa salmón. Ni las salmonelas
ni las especies de shigella fermentan ninguno de los
azúcares; Sino que rompen el tejido animal, lo que
eleva el pH del medio ligeramente y da a sus colonias
un color azul verdoso. Además, las especies de
salmonella reducen el azufre a H2S, por lo que los
colonias formados también contienen FeS, lo que las
hace parcialmente o completamente negras’’
(Leboffe, 2016)
Lo observado en el cultivo de sal y manitol arroja la
probabilidad de identificar el microorganismo como
estafilococos por lo que presenta E. Rodriguez, 2005
y Chapman, 1945’’ el medio de cultivo de agar sal y
manitol tiene una alta concentración de cloruro de
sodio (7.5%), que impide el crecimiento de la mayoría
de las bacterias pero, tolerada por el grupo de los
estafilococos Los estafilococos positivos a la
coagulasa (por ejemplo, Staphylococcus aureus)
producen colonias de color amarillo y un medio
circundante de color amarillo, mientras que los
estafilococos negativos a la coagulasa producen
colonias de color rojo y no producen cambio de color
en el indicador de rojo fenol’’ (Rodriguez, 2005)
(Chapman, 1945).El medio de agar nutritivo es un
medio de uso general para el cultivo de una amplia
variedad de organismos bacterianos. (Becton, 2014)
En el medio líquido donde se sembró el cultivo puro
de una colonia del agar nutritivo se aprecia
crecimiento microbiano debido a la turbidez que
presenta (García, 2006)
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Las características del medio semisólido apuntan
hacia la presencia de bacterias móviles y no
fermentadoras, ya que como indica E. rodriguez,2005
‘’si las bacterias no son móviles, crecerán únicamente
a lo largo de la línea de inoculación; en tanto que las Bibliografía
bacterias móviles lograran desplazarse a partir de
Alarcón, L. (2004). Manual de prácticas de
esta línea, enturbiando el medio de cultivo, sin que
microbiología básica y microbiología de
sea muy aparente la línea de inoculación, si las
bacterias son móviles y no son fermentadoras, el alimentos. UACJ.
crecimiento se concentrara en la superficie del Bectón, D. a. (2014). Prócedimientós de cóntról de
medio’’. (E.Rodriguez, 2005) calidad. BD.
Berenguer, J. (2003). Cuestiones de microbiología.
Las bacterias que se observaron mediante la tinción Editórial elice.
gram fueron puras gram negativas ya que solo se Camachó, A. (2009). Método para la determinacion de
presentó bacterias de color rojo o rosado (Montoya, bacterias coliformes, coliformes fecales y
2008). Esto tiene sentido ya que Los Escherichia coli por la técnica de diluciones en
microorganismos coliformes entre otros son tubo múltiple (Número mas probable o NMP).
marcadores presentes en los alimentos y en aguas UNAM.
de consumo humano (aguas de bebidas preparadas) Chapman, G. (1945). The significance óf sódium
que advierten sobre la manipulación incorrecta y/o chlóride in studies óf staphylócócci. J. Bacteriol,
contaminación previa de la materia prima, así como 50:201-203.
de una contaminación por instalaciones inadecuadas E.Ródriguez, M. G. (2005). Bacteriología general:
en el sitio de elaboración, indicando la presencia de principios y prácticas de laboratorio.
un peligro para el consumidor (López JM, 2009) Universidad de Cósta Rica.
además aumenta la probabilidad de la presencia de Fórbes, S. W. (2009). Diagnóstico microbiológico.
estos microorganismos en la muestra de aguas Editóral medica panamericana.
frescas con leche ya que estos fermentan la lactosa García, C. (2006). Técnico especialista en laboratorio de
(Camacho, 2009),y estos coliformes son Gram atención primaria. MAD.
negativos aeróbicos (Patiño, 2000) dadas las Hernandez, A. (2014). Microbiología industrial. EUNED.
condiciones de cultivo. Hólt, J. (1994). Bergey´s manual of determinativ
bacteriology. Baltimóre.
Los organismos que se encuentran en un cultivo puro. Ingraham, J. (1998). Introducción a la microbiología.
Deben llevarse a cabo pruebas morfológicas,
Editórial Reverte.
bioquímicas y/o serológicas para lograr una
Lebóffe, M. J. (2016). Microbiology: laboratory theory y
identificación final. Consultar los textos
application. Mórtón.
correspondientes para obtener información detallada
López JM, O. E. (2009). Calidad sanitaria de bebidas
y procedimientos recomendados (Murray, 2003),
preparadas que se ofrecen al publico en una
(Holt, 1994), (Forbes, 2009)
institucion de educacion superior en querétaro.
Universidad Autónóma de Aguas Calientes.
Móntóya, H. (2008). Microbiología básica para el área
Conclusión de la salud y afines. Editórial Universidad de
Antióquia.
Se inoculó de manera correcta la muestra en placas Murray, P. (2003). Manual of clinical microbiology.
ya que presentaron crecimiento microbiano a American Sóciety fór micróbiólógy.
excepción de la placa llevada a cabo con la técnica Negróni. (2009). Microbiología estomatológica,
de estría cruzada. En todos los tubos se presentó fundamentos y guía práctica. Editórial medica
crecimiento bacteriano pero solo en el tubo inclinado
panamericana.
con medio sólido se obtuvo el cultivo puro. En los
Patinó, J. (2000). Lecciones de cirugía. Editórial Medica
tubos con medio semisólido y líquido hubo presencia
Panamericana.
de otros microorganismos. Bajo el microscopio se
Ródriguez, E. (2005). Bacteriología general.
observó probablemente bacterias coliformes ya que
Universidad de Cósta Rica.
presentaron gram negativas y éstas comúnmente se
encuentran en las aguas frutales.
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Tóró, D. (2005). Manual para la introducción al
laboratorio de microbiología. Editórial
Universidad Caldas.
Tórtóra, F. C. (2007). Introducción a la Microbiología .
Medica panamericana.

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