Industrial Y De Servicios 236

“Agustín de Iturbide”

PRACTICA-3- NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-092-SSA1-1994,

BIENES Y SERVICIOS. MÉTODO PARA LA CUENTA DE BACTERIAS
AEROBIAS EN PLACA.

Grupo: “4°F”
Turno: Matutino
Especialidad: Laboratorio Químico
Maestra: Ing. Ileana Pérez Navarro
Sub-Modulo: Cuantifica Microorganismos con Base
a Normas
Alumno: Luis Eduardo Estrada Muñoz
Equipo: N°6
Fecha: 18 de Marzo del 2018
 RESUMEN
En la práctica a realizar se optó por utilizar el método de inoculación en esta técnica
primero se tuvieron que tomar muestras.
En este caso del queso para después hacer unas divisiones consecutivas y así poder ir
explosión tos y haciendo que los microorganismos presentes forma colonias para
después por parte del cultivo microbiano el cual se distribuirá en la superficie del Agar,
en este caso la toma de muestra de las diluciones del queso ya antes mencionado para
proseguir mediante unos movimientos de rotación y arrastre se logra hacer que la
muestra se extiende por todo el haga.
Para pasarlo incubar lo más a 35 grados durante 24 y 48 horas para que una vez
terminado está poder contar el número de colonias obtenidas mediante la práctica y así
lograr su cuantificación mediante tablas de conteo con las que paso para averiguar y
comparar los resultados de todos los equipos., dándonos como resultado de la
existencia de microorganismos aerobios algo para lo cual se trabaja arduamente en esta
práctica.
 OBJETIVO

 Establecer el método para estimar la cantidad de microorganismos viables presentes

en un alimento, por la cuenta de colonias en un medio sólido, incubado aeróbicamente.
 INTRODUCCION

Cuando se requiere investigar el contenido de microorganismos viables en un alimento,

la técnica comúnmente utilizada es la cuenta en placa.

En realidad esta técnica no pretende poner en evidencia todos los microorganismos

presentes. La variedad de especies y tipos diferenciables por sus necesidades
nutricionales, temperatura requerida para su crecimiento, oxígeno disponible, etc., hacen
que el número de colonias contadas constituyan una estimación de la cifra realmente
presente y la misma refleja si el manejo sanitario del producto ha sido el adecuado.

Por otra parte el recuento de termofílicos, psicrofílicos y psicotróficos es importante para

predecir la estabilidad del producto bajo diferentes condiciones de almacenamiento.Para
obtener resultados reproducibles y por lo tanto significativos, es de suma importancia
seguir fielmente y controlar cuidadosamente las condiciones.Esta técnica puede
aplicarse para la estimación de microorganismos viables en una amplia variedad de
alimentos.

Esta técnica es empleada en esta ocasión para detección de las bacterias que en este
caso se clasifican de dos maneras, de acuerdo a sus capacidades para sobrevivir con o
sin oxígeno.
En el caso de nuestras protagonistas, las bacterias aerobias forman parte de un tipo de
organismo que necesita de un ambiente que contenga oxígeno diatómico (un gas
compuesto por dos átomos de oxígeno) para poder existir y desarrollarse
adecuadamente, es decir, éstas bacterias necesitan oxígeno para la respiración celular.
Los organismos anaerobios o anaeróbicos son los que no utilizan oxígeno (O2) en su
metabolismo, más exactamente que el aceptor final de electrones es otra sustancia
diferente del oxígeno. Si el aceptor de electrones es una molécula orgánica (piruvato,
acetaldehido, etc.)
se trata de metabolismo fermentativo; si el aceptor final es una molécula inorgánica
distinta del oxígeno (sulfato, carbonato, etc.) se trata de respiración anaeróbica.
El metabolismo aerobio de muchos organismos es una consecuencia evolutiva de la
fotosíntesis, que comenzó a liberar grandes cantidades de oxígeno y que inicialmente
resultó tóxico para muchos seres vivientes, asi como los tipos de organismos aerobios

-Aerobios Obligados: Estos requieren oxígeno para la respiración celular aerobia.

Utilizan el oxígeno para oxidar sustratos (tales como grasas y azúcares) para obtener
energía.
-Anaerobios Facultativos: Pueden emplear oxígeno pero también tienen la capacidad
de producir energía por medios anaeróbicos.
-Microaerófilos: Emplean oxígeno pero en cantidades muy bajas. ---
Aerotolerantes: Pueden sobrevivir en presencia de oxígeno pero no lo emplean ya que
son anaeróbicos.
De los cuales en el mundo bacteriano se pueden encontrar varios ejemplos de estos
seres aerobios como lo son:

-Bacilos:
Los bacilos mas comunes son los que producen enfermedades como la tuberculosis,
el tétanos y la fiebre tifoidea.Estas bacterias pueden habitar en diversos ambientes y
solo pueden ser visibles a través de un microscopio.

-Mycobacterium tuberculosis:
es una bacteria aerobia estricta patógena responsable de la mayor cantidad de casos de
tuberculosis en el mundo

-Nocardia:
es un género de bacterias Gram-positivas que se encuentran en suelos de todo el
mundo ricos en materia orgánica.

-Lactobacillus:
Género bacteriano de bacilos largos, rectos o curvados, gram-positivos, no formadores
de endosporas, catalasanegativos y, en general, inmóviles.

-Pseudomonas: Los pseudomonas constituyen un género específico de los bacilos,

formado por bacterias oxidasa positivas

-Staphylococcus (facultativo):
Comprende microorganismos que están presentes en la mucosa y en la piel de los
humanos y de otros mamíferos y aves

-Especies de Enterobacteriaceae:
Los miembros de este grupo forman parte de
la microbiota del intestino (llamados coliformes) y de otros órganos del ser humano y de
otras especies animales.
MATERIALES, “AUXILIARES”, EQUIPO/INTRUMENTOS

MATERIALES:
 6 tubos de ensaye grandes con tapa
 4 matraces de 250ml
 1 Vaso de precipitado de 50 ml
 1 Probeta
 3 Pipetas de 1ml y de 10ml
 Perilla
 Gradilla
 Embudo
 Puntillas para pipeteador automático

EQUIPOS:
 Autoclave
 Incubadora
 Mecheros
 Pipeteador automático
 Refrigerador
 Balanza analítica
 Contador de colonias

REACTIVOS:
 Agar AME

MUESTRA:
 Queso
 PROCEDIMIENTO/PROTOCOLO
PROTOCOLO DE MUESTREO
Para los productos no envasados en los cuales no esta definida su vida útil o de anaquel, tomando en
cuenta su fecha de caducidad con base en productos con características similares. Su manejo y
transporte deberán efectuarse de la forma que se impida su ruptura o alteración, o contaminación,
evitando su exposición a la luz solar; su transportación será bajo a temperaturas de 2C° a 8C° y deben
mantenerse a esa temperatura hasta el momento de realizar las pruebas la cual deberá ser después
de 24hrs de su recolección.

PROTOCOLO DE ANALISIS
ACONDICIONAMIENTO DE LA MUESTRA

Las muestras sólidas y semisólidas congeladas, deben descongelarse en refrigeración de 4 a 8ºC durante
18 horas y no más de 24 horas antes de proceder a su análisis.

Pesar una cantidad de 10 u 11 g de la muestra por analizar en un recipiente o bolsa plástica estériles de
tamaño adecuado. Para luego Operar la licuadora o el homogeneizador peristáltico de 1 a 2 minutos
hasta obtener una suspensión completa y homogénea según se indique en la técnica correspondiente
para cada alimento. Aún en los equipos más lentos, este tiempo no debe exceder de 2,5 minutos.

Meterlo en una licuadora o desmoronarlo para después dejarlo en el diluyente para dejar que Permita que
las partículas grandes se sedimenten, y transferir la cantidad deseada tomando de las capas superiores de
la suspensión.
Ya cuando la dilución primaria es muy viscosa o pegajosa, adicionar más diluyente, lo cual debe tomarse
en cuenta para las operaciones subsecuentes o expresión de resultados.

PREPARACION DE LAS DILUCIONES

Transferir 1 ml o un múltiplo, por ejemplo, 10 u 11 ml de la dilución primaria 1 + 9 (10-1), en otro recipiente

conteniendo nueve veces el volumen del diluyente estéril a la temperatura apropiada, evitando el contacto
entre la pipeta y el diluyente. Mezclar cuidadosamente cada botella de diluyente siempre de la misma
manera que se describe en

La selección de las diluciones que se vayan a preparar y de aquellas que se van a inocular, dependen del
número esperado de microorganismos en la muestra, con base a los resultados de análisis previos y de la
información que se obtenga del personal de inspección que la haya colectado. En ausencia total de
información, trabajar con las diluciones de la primera a la sexta.

Utilizando pipetas diferentes para cada dilución inoculando simultáneamente las cajas que se hayan
seleccionado. El volumen que se transfiera nunca debe ser menor al 10% de la capacidad total de la
pipeta.

Si la pipeta es terminal y se transfiere un volumen de líquido equivalente a su capacidad total, escurrir

aplicando la punta de la pipeta una sola vez en una área de la caja Petri sin líquido.
 PROCEDIMIENTO DEL ANALISISI CORRESPONDIENTE

Distribuir las cajas estériles en la mesa; para la adición de medio de cultivo lo cual se
puedan realizar cómoda y libremente..

Después de eso inocular las diluciones de las muestras preparadas según, en las cajas
Petri, agregar de 12 a 15 ml del medio preparado, mezclarlo mediante 6 movimientos de
derecha a izquierda, 6 en el sentido de las manecillas del reloj, 6 en sentido contrario y 6
de atrás a adelante, sobre una superficie lisa hasta lograr una completa incorporación en
el medio; cuidar que el medio no moje la cubierta de las cajas y Dejar solidificar.

El tiempo transcurrido desde el momento en que la muestra se incorpora al diluyente

hasta que finalmente se adiciona el medio, no debe exceder de 20 minutos para
después Incubar las cajas, Y ya en la lectura seleccionar aquellas placas donde
aparezcan entre 25 a 250 UFC, para disminuir el error en la cuenta para finalizar Contar
todas las colonias desarrolladas en las placas seleccionadas (excepto las de mohos y
levaduras), incluyendo las colonias puntiformes. Hacer uso del microscopio para resolver
los casos en los que no se pueden distinguir las colonias de las pequeñas partículas de
alimento.
 RESULTADOS

TABLA DE CONTEO

DILUCION 24hrs 48hrs 72hrs OBSERVACIONES

A INCONTABLE INCONTABLE INCONTABLE -
B 150 200 INCONTABLE -
C 54 70 85 -
D 27 30 40 -
E INCONTABLE INCONTABLE INCONTABLE OPACA
F 2 5 5 -
F2 0 2 6 -

EVIDENCIA
 ETIQUETAS

REGISTRO DE MUESTRA PARA EL ANALISIS

 N°DE CONTROL DE LA MUESTRA: 3
 ORIGEN: Av. Asentamiento
 FECHA(Inicio de Análisis): 7 de Mayo del 2018
 HORA: 9:12am
 DETERMINACION: Coliformes Totales, Fecales y E.coli
 ANALISTA: Equipo 6
IDENTIFICACION DE LA MUESTRA

 TIPO DE MUESTRA: Producto Lácteo solido “Queso”

 LUGAR DE MUESTREO: Av. Asentamiento
 HORA DE MUESTREO:
 FECHA: 7 de Mayo del 2018
 NOMBRE DEL MUESTREADOR: Ángela Tijerina
 TIPO DE ANALISIS: Microbiológico
 TEMPERATURA:4°C
 DISCUCION DE RESULTADOS
Aunque en el Vaciado en una de las placa se observe que no cumpla con la norma, en la
Inoculación de superficie marca claramente que apenas cumple con la norma.
Seguramente existe esta diferencia a una falla técnica por parte de los miembros del
equipo. Pero No existe la mayor duda que el queso comprado en el la Avenida
Asentamientos no cumple con los máximos índices de Mesófilos Aerobios permitidos.
Aunque seguramente exista una contaminación de la materia prima, o que exista una
mala manipulación durante el proceso de elaboración.
 CONLCUSION
Los resultados del la presente practica dan una idea del alto riesgo para los
consumidores de contraer alguna enfermedad transmitida por los alimentos, y de su
deficiente control sanitario. Pero debido a que estos estudios lo realizaron estudiantes de
no son del todo concluyentes los resultados. Pero si se volviera a realizar las pruebas
descritas, y dieran nuevamente los resultados presentados, sería necesaria la
participación de autoridades sanitarias, preparadores de alimentos y consumidores,
además de mejorar la educación sanitaria en el manejo de alimentos, así como la
implementación de programas, pero se dio como cumplido el objetivo de esta práctica el
cual era la cuantificación de microorganismos aerobios por medio de placa.
 LITERATURA CITADA
 NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, Protección
ambiental - salud ambiental - residuos peligrosos biológicoinfecciosos -
clasificación y especificaciones de manejo.
 NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-109-SSA1-1994 Procedimientos para la
toma, manejo y transporte de muestras de alimentos para su análisis
microbiológico
 NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-110-SSA1-1994 Preparación y dilución de
muestras para su análisis microbiológico
 NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-092-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. MÉTODO
PARA LA CUENTA DE BACTERIAS AEROBIAS EN PLACA.
 Pelczar , reid, chan “Microbiologia” 4Edicion, Mc. Graw-Hill Mexico,1993