PRUEBAS DE DIFERENCIACIÓN BIOQUÍMICA

1. INTRODUCCIÓN

2. OBJETIVOS

Se llevó a cabo la siguiente práctica con el objetivo de comprender las características

propias de las pruebas biológicas, también para poder llegar a analizar cada una de
las pruebas y conocer si son positivas o negativas.

3. MATERIALES Y MÉTODOS

4. MÉTODO
I) AISLAMIENTO DE ENTEROBACTERIAS

 Se estrió en placas Petri con Agar (EMB) para Enterobacterias, posteriormente se

incubo a 24H a 35°C y se comparó con un manual de estándares las características
de colonias típicas de enterobacterias respectivamente y finalmente se clasifico.

II) PURIFICACIÓN

 Se tomó una asada de las colonias diferentes encontradas en el medio selectivo

para enterobacterias (EMB) y se inoculo por estriamento en placas Petri con agar
MacConkey, posteriormente se incubo a 24H a 35°C, finalmente se realizó una
tinción Gram, una vez que se observó un solo tipo de colonia se procedió a la
clasificación.

III) IDENTIFICACIÓN
Partiendo de un cultivo puro en Agar MacConkey, se realizó pruebas bioquímicas
para las colonias de ENTEROBACTERIAS aisladas. Posteriormente se leyó los
resultados y se revelo si las pruebas requerían la adición de reactivos.
 Finalmente se determinó el género y especie de las colonias aisladas, según el
Manuel de Bergey.

4. RESULTADOS

REPORTE DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS.

Antes de que la bacteria fuera inoculada en el medio de cultivo se pudo observar los colores
característicos que poseían los mimos como lo observamos en el siguiente gráfico:

Muestra RMVP
Color amarillo – café

Manitol sal y Simmons Citrato TSI y Úrea

Rosa taxo - verde Naranja café – amarillo (rosa pálido)

Lia y medio SIM

Lila – amarillo pálido
Después de que se realizó la incubación a las 24 horas se obtuvieron los siguientes
resultados:

MEDIO SIM
El medio SIM generalmente se presenta como un medio semisólido cuyo objetivo es el de verificar la
movilidad, producción de indol y de sulfuro de hidrógeno de los microorganismos. Este medio se
utiliza para diferenciar miembros de Enterobacterias. (CEDENO, 2015)

En medio SIM se presentaron las siguientes características de:

1. Movilidad: positiva
2. Producción de gas sulfhídrico: positiva
3. Indol: positivo.

MEDIO TSI

Medio empleado para la diferenciación de enterobacterias, esta diferenciación se basa en la

fermentación de glucosa, lactosa, sacarosa y la producción de ácido sulfhídrico. (BD
Diagnostic Systems Europe , 2003)

El medio TSI se mostró un cambio de coloración: de color de naranja café a un color negro
verdoso. “El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce ácido
sulfhídrico.” (Britania Lab, s.f)

MEDIO LIA

El medio de cultivo LIA es utilizada para diferenciar los microorganismos mediante la

decarboxilación y desaminacion de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico.
(BRITANIA LAB, S.F)

En medio LIA se observó un ennegrecimiento en coloración de lila a amarillo- café. Este

ennegrecimiento producido entre el límite de la superficie y profundidad representa un
resultado positivo a producción de SH2. (BRITANIA LAB, S.F)

MEDIO SIMMONS CITRATO

Generalmente este medio se utiliza para la diferenciación de enterobacterias basada en la

capacidad de utilizar el citrato como una única fuente de citrato. (FDA, 1923)

Se obtuvo un resultado negativo debido a que no se produjo un cambio de coloración en el

medio.

MEDIO MANITOL SAL

Medio de cultiivo diferencial que tiene el objetivo de aislar y diferenciar estafilococos.

Debido a que el cultivo presenta un color amarillo anaranjado indica que existe presencia
de cloruro de sodio, esto indica que el microorganismo es fermentador de manitol.
(Britania lab, 2001)

MEDIO UREA

Se utiliza generalmente para la detección de microorganismos que producen ureasa,

después de observar la coloración del tubo de ensayo (COLOR FUCSIA) esto nos indica
que es una reacción positiva debido a que se produce la hidrolisis de la urea y por tanto se
produce el cambio de color del medio, es decir se produjo una reacción alcalina. (MAST
Group, 2007)

MEDIO RMVP

ROJO DE METIL: Esta prueba se realiza para determinar la capacidad de un

microorganismo de fermentar la glucosa con producción de ácido. En esta prueba fue
necesario colocar alguna gotitas de solución indicadora de rojo de metilo. Se observó que
la coloración fue de color amarillento por lo que se consideró como una prueba negativa.
(Gomez, 2010)

VOGES PROSKAUER: para obtener el resultado para la prueba de voges proskaer se

utilizó el reactivo alfa naftol el mismo que incrementa la sensibilidad dela reacción y KOH,
ambos detectan la presencia de la acetoína. Si los microorganismos presentan acetoína se
origina una coloración roja. (UGR.es, s.f)

Se obtuvo en el tubo de ensayo que la prueba de Voges Proskauer no cambio de color, es

decir se mantuvo con la coloración amarillenta, por lo que se consideró la prueba negativa.

TSI UREA

RMVP SIM

MANITOL RMVP
 SIMMONS CITRATO Lia

5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
5.1. CONCLUSIONES

Los recuentos de bacterias viables se basan en el número de colonias desarrolladas

en placas de agar previamente inoculadas e incubadas en condiciones ambientales
predeterminadas. Tales recuentos se denominan recuentos totales en placa, aunque solo
pueden contarse aquellas bacterias que crecen en dichas condiciones ambientales
elegidas. Después de analizar los resultados obtenidos en las cajas Petri, se pudo determinar
que la técnica de extensión permitió obtener más colonias aisladas facilitando el conteo y
posterior cálculo de recuento en pacas, mientras que en la técnica de vertido, existió más
crecimiento bacteriano por lo que se dificultó el conteo de colonias. El suelo agrícola posee
propiedades que lo inducen a poseer microorganismos en mayor cantidad, por lo que se
necesita realizar más diluciones de la muestra para que sea factible la obtención de colonias
aisladas y su posterior conteo.

RECOMENDACIONES
Para la adecuada elaboración de esta práctica se recomienda tener en cuenta aspectos
como:
 Todos los procedimientos técnicos se practicarán de manera que se reduzca al
mínimo la formación de aerosoles.
 Todos los derrames, accidentes y exposiciones reales o potenciales a materiales
infecciosos se comunicarán al instructor o supervisor del laboratorio.
 Estará estrictamente prohibido pipetear con la boca. No se colocará ningún material
en la boca.
 Realizar las actividades cerca del mechero con suma precaución para evitar
accidentes

6. CUESTIONARIO DE INVESTIGACIÓN

1. ¿Por qué es importante trabajar con cultivos puros para identificación de

microorganismos?
Los cultivos puros nos permiten poder estudiar directamente las características de
los microorganismos y para así poder identificarlos con seguridad. Debido a que se
logra generar una cantidad mínima de crecimiento bacteriano en forma de 1 colonia,
se es posible observar e identificar características físicas y biológicas de manera más
simple y fácil (unavarra.es, 2002)

2. Indique que reactivos que se utilizan para revelar las pruebas de Indol, Rojo de
metílo y Voges Proskauer y como se interpretan los resultados

Indol:
Reactivos: kovacs o de Enrich
Interpretación:
Positivo: anillo rojo o fucsia sobre el medio.
Negativo: no hay ningún cambio en la coloración, aparece un anillo turbio.

Rojo de metilo
Voges Proskauer
3. ¿Qué pruebas se pueden realizar en agar TSI? Describa detalladamente como
se interpretan lo resultados negativos y positivos en las muestras

4. Describa las actividades enzimáticas que se evalúan en los medios: Simmons

Citrato, TSI, LIA, SIM, Agar urea, Agar manitol sal, Caldo RM – VP.

7. BIBLIOGRAFÍA: