Material Química General Unidades 1 y 2

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ede2007
Requerimientos básicos para la implementación del Laboratorio de Biotecnología
REQUERIMIENTOS BÁSICOS PARA LA

IMPLEMENTACIÓN DEL LABORATORIO DE
BIOTECNOLOGÍA
UNIVERSIDAD RAFAEL LANDÍVAR
Autoridades institucionales
Rector
Rolando Alvarado, S.J.
Vicerrectora académica
Lucrecia Méndez de Penedo
Vicerrector de investigación y proyección

Carlos Cabarrús, S.J.
Vicerrector de integración universitaria

Eduardo Valdés, S.J.
Vicerrector administrativo
Ariel Rivera
Secretaria general
Fabiola Padilla de Lorenzana
Textos
Carlos Orozco
Coordinación
Juventino Gálvez
Hernán Perla
Edición
Juventino Gálvez
Cecilia Cleaves
Tabla de contenido
1. Introducción ...................................................................................................................... 1
2. Objetivo ............................................................................................................................... 3
3. Generalidades ................................................................................................................... 4
4. Condiciones de bioseguridad....................................................................................... 5
4.1 Orden y limpieza .................................................................................................................... 5
4.2 Espacios de trabajo por trabajador ................................................................................. 6
4.3 Temperatura, humedad y ventilación ............................................................................ 6
4.4 Precauciones previas a la aplicación .............................................................................. 7
4.5 Precauciones durante la aplicación ................................................................................ 8
4.6 Precauciones después de la aplicación .......................................................................... 8
4.7 Iluminación ............................................................................................................................... 8
4.8 Señalización.............................................................................................................................. 9
4.8.1 Señales de advertencia de un peligro ....................................................... 10
4.8.2 Señales de prohibición .............................................................................. 10
4.8.3 Señales de obligación ............................................................................... 11
4.8.4 Señales relativas a los equipos de lucha contra incendios....................... 11
4.8.5 Otras señales ............................................................................................ 12
5. Equipo de laboratorio ................................................................................................. 13

5.1 Equipamiento general ....................................................................................................... 13
5.2 Equipo específico ................................................................................................................ 21
5.3 Cristalería específica a utilizar ....................................................................................... 23
5.4 Plásticos .................................................................................................................................. 29
5.5 Cristalería en general ........................................................................................................ 30
5.6 Otros equipos importantes.............................................................................................. 32
6. Infraestructura .............................................................................................................. 33
6.1 Características de los muebles ....................................................................................... 33
6.3 Ubicación de espacios en un laboratorio de biotecnología con énfasis en
marcadores moleculares .......................................................................................................... 34
7. Reactivos específicos para PCR ................................................................................ 35
8. Listado específico con precios actualizados de reactivos, equipo básico y

otros materiales necesarios para un laboratorio de biotecnología con énfasis
en marcadores moleculares............................................................................................... 37
0
0
1. Introducción
La biotecnología se refiere a cualquier aplicación tecnológica que utilice sistemas
biológicos y organismos vivos o sus derivados para la creación o modificación de
productos o procesos para uso específico.
La biotecnología no es, en sí misma, una ciencia; es un enfoque multidisciplinario

que involucra varias disciplinas y ciencias (biología, bioquímica, genética, virología,
agronomía, ingeniería, química, entre otras).
Para poder desarrollar investigaciones y experimentos que estén relacionados con

la biotecnología, es necesario llevarlo a cabo en un laboratorio correspondiente a
esta área. Los laboratorios de biotecnología y de tipo biológico debe de reunir unas
condiciones, que si bien pueden variar notablemente en función de su finalidad (un
laboratorio dedicado a la aplicación de marcadores moleculares a diversos
propósitos, por ejemplo análisis de variabilidad genética y la mejora genética
agrícola y forestal, difiere de un laboratorio dirigido la obtención de antígenos
monoclonales, u otro destinado a realizar investigaciones microbiológicas).
Como todo laboratorio de experimentación e interacción con la ciencia, se deben de

tomar en cuenta distintas condiciones ambientales que deben de reunir conforme a
las disposiciones legales vigentes; entre estas condiciones ambientales se
encuentras: temperatura, humedad y ventilación e iluminación.
El presente documento se refiere a aspectos fundamentales que deben considerarse

para la implementación de un laboratorio de Biotecnología, con énfasis en
marcadores moleculares. Se indica en principio, consideraciones generales para el
establecimiento de un laboratorio de biotecnología; entre otras, condiciones
básicas de bioseguridad; condiciones ambientales, y señalización de los lugares de
trabajo. Seguidamente de describen aspectos de funcionamiento y utilidad de dicho
laboratorio para investigación básica y aplicada. Así también la infraestructura y
mobiliario que debe poseer un laboratorio de biotecnología. Adicionalmente, se
describe de manera general el equipo, materiales, cristalería, y reactivos con el que
debe contarse, para poder funcionar como laboratorio de investigación. Finalmente,
se lista el equipo, materiales, cristalería y reactivos mínimos, incluyendo precios
actualizados, necesarios para iniciar trabajos de investigación en Biotecnología con
énfasis en Marcadores Moleculares.
La implementación de este laboratorio mínimo, debiera permitir la realización de

actividades de investigación que incluyen colecta y extracción de muestras de ADN,
Cuantificación de ADN, Replicación, Amplificación y Multiplicación de ADN, usando
PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa), Implementación de sistemas de
electroforesis, análisis de patrones electroforeticos, Utilizacion de Técnicas
Moleculares, entre otras, Microsatélites, Amplificación de Fragmentos de Restricción
1
(AFLP) , amplificación de Fragmentos Al Azar (RAPDs). El campo de acción del

laboratorio puede incluir entre otras aplicaciones, estudios sobre recursos
fitogenéticos, con énfasis en el sector forestal, incluyendo identificación y
caracterización de cultivares, variedades y materiales nativos, identificación de
marcadores moleculares asociados a genes de interés en mejora genética, estudios
de identificación y caracterización de agentes patógenos (fitopatológicos y
entomológicos), estudios microbiológicos, estudios ecológicos y estudios de
mejoramiento genético forestal.
2
2. Objetivo
Establecer los requerimientos básicos para la implementación de un laboratorio de
Biotecnología, con énfasis en Marcadores Moleculares, incluyendo infraestructura,
mobiliario, equipo, materiales y reactivos.
3
3. Generalidades
Como cualquier lugar de trabajo, los laboratorios de biotecnología y de tipo
biológico han de reunir unas condiciones, que si bien pueden variar notablemente
en función de su finalidad todos ellos deben reunir las condiciones mínimas de
seguridad y salud en los lugares de trabajo.
Para definir las distintas condiciones ambientales que los laboratorios de

biotecnología y de tipo biológico deben reunir conforme a lo establecido en las
disposiciones legales vigentes, deben considerarse las actividades que se realizan en
dichos laboratorios. Al respecto, dada la intención de las funciones posibles del
laboratorio, se pueden considerar las siguientes actividades laborales:
 Tareas docentes y de administración
 Trabajos de investigación propiamente dichos, incluyendo las

operaciones preparatorias previas, mantenimiento de equipos, y otras
actividades propias de un laboratorio de biotecnología.
4
4. Condiciones de bioseguridad
Un laboratorio de Biotecnología debe tener las condiciones mínimas de seguridad.
Los aspectos básicos relacionados con estas condiciones de seguridad, se indican de
la siguiente manera.
4.1 Orden y limpieza
Ambos factores deben ser consustanciales con el trabajo, porque un laboratorio

limpio y ordenado significa trabajar en condiciones que permiten prevenir
incidentes que puedan poner en riesgo la salud de los trabajadores del laboratorio y
al mismo tiempo disponer de lo necesario y en condiciones óptimas para desarrollar
cualquier actividad en todo momento.
Algunas directrices generales para mantener limpia y ordenada el área de trabajo en

el laboratorio se indican de la manera siguiente:
 No sobrecargar las estanterías y zonas de almacenamiento.

 Mantener siempre limpias, libres de obstáculos y debidamente
señalizadas las escaleras y zonas de paso.
 No bloquear los extintores, mangueras y elementos de lucha contra
incendios con cajas o mobiliario.
 No dejar botellas, garrafas y objetos en general tirados por el suelo y
evitar que se derramen líquidos por las mesas de trabajo y el piso.
 Colocar siempre los residuos y la basura en contenedores y recipientes
adecuados.
 Recoger los frascos de reactivos, materiales y útiles de trabajo al acabar
de utilizarlos.
 Limpiar, organizar y ordenar sobre la marcha, a medida que se realiza el
trabajo.
 Disponer de un lugar en el puesto de trabajo que resulte fácilmente
accesible, que se pueda utilizar sin llegar a saturarlo y sin que queden
ocultos los útiles y equipos de uso habitual, así como los manuales de
instrucciones.
 Mantener limpio el puesto de trabajo, evitando que se acumule suciedad,
polvo o restos de los productos utilizados.
 Limpiar, guardar y conservar correctamente el material y los equipos
después de usarlos, de acuerdo con las instrucciones y los programas de
mantenimiento establecidos.
 Desechar el material de vidrio roto o con fisuras en el contenedor
apropiado.
 En el caso de que se averíe un equipo, informar inmediatamente al
supervisor, evitando utilizarlo hasta su completa reparación.
5
 Guardar los materiales y productos, en las zonas de almacenamiento

habilitadas a tal fin.
4.2 Espacios de trabajo por trabajador
Para que puedan darse unas buenas condiciones de orden y limpieza es necesario
también respetar las dimensiones mínimas de los espacios de trabajo, permitiendo a
trabajadores realizar sus actividades sin riesgos para su seguridad y salud y en
condiciones ergonómicas aceptables. Las dimensiones mínimas que deben reunir
tales espacios son las siguientes:
 Altura desde el suelo hasta el techo: 3 metros.

 Superficie libre por trabajador: 2 metros cuadrados.
 Volumen (metros cúbicos) no ocupado por el trabajador: 10 metros cúbicos.
La separación entre los elementos materiales existentes en el laboratorio deberá ser

suficiente para que los trabajadores puedan realizar su labor en condiciones de
seguridad, salud y bienestar.
Cuando el espacio libre de que se disponga en el laboratorio no permita a los

trabajadores la libertad de movimientos requerida para el desarrollo de su
actividad, deberá disponerse de un espacio adicional suficiente en las inmediaciones
del puesto de trabajo.
4.3 Temperatura, humedad y ventilación
La exposición de los trabajadores a las condiciones ambientales de los laboratorios

en general no debe suponer un riesgo para su seguridad y salud, ni debe ser una
fuente de incomodidad o molestia. Deben evitarse:
 Humedad y temperaturas extremas.

 Cambios bruscos de temperatura.
 Corrientes de aire molestas.
 Olores desagradables.
El aislamiento térmico de los locales donde se hallan ubicados los laboratorios debe
adecuarse a las condiciones climáticas propias del lugar.
El Cuadro 1 muestra las condiciones de temperatura, humedad y ventilación que,

normalmente deben reunir los laboratorios de biotecnología y de tipo biológico
6
Cuadro 1. Límites de temperatura, humedad y ventilación, según lo establecido en

normas vigentes de bioseguridad.
Concepto Límites
Temperatura 17°C - 27°C
Humedad relativa 30% - 70%
Velocidad del aire 0.25 – 0.50 m/s
Sistemas de aire acondicionado 0.25 m/s
Renovación del aire 30 m3 por hora y trabajador
Mención especial merece el trabajo con cámaras de climatización y frigoríficas

Aunque, por las características propias del trabajo no sea habitual que los
trabajadores permanezcan en su interior durante espacios de tiempo prolongados,
es preciso tener en cuenta las siguientes precauciones:
 Considerando las diferencias de temperatura con el exterior, las personas que

deban acceder al interior de dichas cámaras irán provistas de ropa adecuada,
especialmente en aquellas cuya temperatura es inferior a 0 °C.
 Las puertas de las cámaras de climatización deben disponer de un sistema de
cierre que facilite la apertura desde su interior. En ningún caso deberán
disponer de cerradura con llave.
 Es conveniente que en el exterior de dichas cámaras exista una señal
luminosa que advierta de la presencia de personas en su interior.
Con independencia de las condiciones de aireación del local, siempre que sea
necesario manipular productos que puedan originar emanaciones de sustancias
peligrosas u olores desagradables, el trabajo en cuestión se llevará a cabo bajo
campana extractora, que deberá ir provista de filtros adecuados y estar sujeta a un
programa de mantenimiento preventivo acorde a sus características.
Cuando el trabajo se lleve a cabo en invernaderos y especialmente, cuando se

realicen labores de fumigación con plaguicidas, se tendrán en cuenta las siguientes
precauciones:
4.4 Precauciones previas a la aplicación
 Elegir el producto adecuado y leer atentamente las instrucciones de uso

contenidas en la hoja de seguridad, respetando las dosis recomendadas.
 Extremar las precauciones durante la preparación de la mezcla de los
productos a aplicar, ya que se trabaja con principios activos concentrados y
revisar todo el equipo, evitando operar con aparatos defectuosos.
7
4.5 Precauciones durante la aplicación
 Llevar siempre el equipo de protección adecuado que se indica en la hoja de

seguridad del producto, comenzando por utilizar ropa recién lavada y
prendas de protección limpias.
 No comer, beber ni fumar, ni mantener alimentos o bebidas en la zona de
trabajo, ni limpiar las boquillas de aplicación soplando.
 Aplicar siempre a favor de las corrientes de aire y evitar que las personas no
ajenas a la aplicación estén en la zona de trabajo.
 Lavarse las manos antes de ir a orinar, ya que muchos de estos productos se
absorben por las mucosas genitales provocando lesiones.
 Cuando se realice algún descanso, hacerlo siempre fuera de la zona tratada.
4.6 Precauciones después de la aplicación
 Extremar la higiene personal, duchándose y cambiándose de ropa al terminar

el trabajo y separar adecuadamente la ropa de trabajo de la de calle, evitando
que se mezclen. La ropa contaminada debe guardarse bien cerrada hasta su
lavado, que debe hacerse separada del resto.
 No permanecer ni entrar en la zona tratada hasta, como mínimo, 48 horas
después del tratamiento o del tiempo que se especifique en la etiqueta y
señalizar el campo tratado para evitar accidentes.
 Mantener el plaguicida sobrante en su envase original, almacenado en lugar
fresco, seguro y ventilado y fuera del alcance de personas que desconozcan
sus riesgos.
 Ante cualquier malestar que se experimente tras haber aplicado un
plaguicida (dolores de cabeza, náuseas, mareos, vómitos...) incluso después
de 2 ó 3 semanas de la aplicación, acudir inmediatamente al médico.
4.7 Iluminación
La iluminación de los laboratorios debe adaptarse a las características de la

actividad que se realiza en ellos, tomando en cuenta los siguientes puntos:
 Los riesgos para la seguridad y salud de los trabajadores, dependientes de

las condiciones de visibilidad.
 Las exigencias visuales de las tareas desarrolladas.
 Los distintos tipos de iluminación se utilizarán según las circunstancias, es
decir:
 Siempre que sea posible, los laboratorios deben tener preferentemente
iluminación natural.
 La iluminación artificial debe complementar la natural.
8
 La iluminación localizada se utilizará en zonas concretas que requieran

niveles elevados de iluminación.
Conviene señalar que los requerimientos mínimos de iluminación en estos locales,
se indican en el Cuadro 2.
Cuadro 2. Condiciones mínimas de iluminación
Actividad desarrollada Nivel mínimo en lux

Todos los trabajos llevados a cabo en los 500
laboratorios de biotecnología y de tipo biológico
Vías de circulación y lugares de paso 50
Estos niveles mínimos deben duplicarse cuando:
 Existan riesgos apreciables de caídas, choques u otros accidentes en los

locales de uso general y en las vías de circulación.
 Ante la posibilidad de errores de apreciación visual, se generen peligros para
el trabajador que ejecuta las tareas o para terceros.
 Sea muy débil el contraste de luminancias o de color entre el objeto a
visualizar y el fondo sobre el que se encuentra.
La distribución de los niveles de iluminación debe ser uniforme, evitando

variaciones bruscas de luminancia dentro de la zona de trabajo y entre ésta y sus
alrededores. Asimismo, hay que evitar los deslumbramientos:
 Directos: producidos por la luz solar o por fuentes de luz artificial de alta
luminancia.
 Indirectos: originados por superficies reflectantes situadas en la zona de
operación o sus proximidades.
No utilizar fuentes de luz que perjudiquen la percepción de los contrastes,

profundidad o distancia entre objetos dentro de la zona de trabajo.
Instalar alumbrado de emergencia de evacuación y de seguridad en los lugares en

los que un fallo del alumbrado normal suponga riesgo para la seguridad de los
trabajadores. Por último, los sistemas de iluminación utilizados no deben originar
riesgos eléctricos, de incendio o de explosión.
4.8 Señalización
En los laboratorios de biotecnología y de tipo biológico, la señalización contribuye a

indicar aquellos riesgos que por su naturaleza y características no han podido ser
eliminados. Considerando los riesgos más frecuentes en estos lugares de trabajo, las
señales a tener en cuenta son:
9
4.8.1 Señales de advertencia de un peligro
Tienen forma triangular y el pictograma negro sobre fondo amarillo. Las que con
mayor frecuencia se utilizan son:
o Riesgo eléctrico. Esta señal debe situarse en todos

los armarios y cuadros eléctricos del laboratorio.
o Materias tóxicas. En aquellos laboratorios en los

que se manipulen sustancias clasificadas como muy
tóxicas, tóxicas, cancerígenas o mutágenas, tales
como la colchicina o la azida sódica, se colocará la
señal indicada en los lugares donde se guarden tales
sustancias.
o Materiales inflamables. Siempre que se manipule

este tipo de materiales, se utilizará la señal indicada
a continuación.
o Baja temperatura. Esta señal deberá situarse a la

entrada de las cámaras de climatización y frigoríficas
que trabajen a temperaturas bajas.
o Riesgo biológico. En cumplimiento de lo dispuesto

en el anexo III del Real Decreto 664/1997, de 12 de
mayo, se colocará esta señal en todos los laboratorios
en los que se manipulen agentes biológicos de los
grupos 2, 3 ó 4.
o Riesgo de radiaciones ionizantes. En los

laboratorios en que manipulen isótopos radiactivos,
se utilizará la señal indicada.
4.8.2 Señales de prohibición
De forma redonda con pictograma negro sobre fondo blanco. Presentan el borde del
contorno y una banda transversal descendente de izquierda a derecha de color rojo,
formando ésta con la horizontal un ángulo de 45º.
10
o Prohibición de fumar y de encender fuego.

Siempre que en el laboratorio se utilicen materiales
inflamables deberá emplazarse la señal que indica
expresamente la citada prohibición.
4.8.3 Señales de obligación
Son también de forma redonda. Presentan el pictograma blanco sobre fondo azul.
Atendiendo al tipo de riesgo que tratan de proteger, cabe señalar como más
frecuentes en estos lugares de trabajo, las siguientes:
o Protección obligatoria de la cara. Se utilizará

siempre y cuando exista riesgo de salpicaduras a la
cara y los ojos, como consecuencia de la
manipulación de productos corrosivos o irritantes.
o Protección obligatoria de vías respiratorias. Esta

señal se colocará en aquellas áreas de trabajo donde
se manipulen productos tóxicos o nocivos
susceptibles de ser inhalados, sin perjuicio de que
deban ser manipulados bajo campana extractora,
siempre que sea posible.
o Protección obligatoria de las manos. Esta señal
debe exhibirse en aquellos lugares de trabajo donde
se manipulen productos corrosivos, irritantes,
sensibilizantes por contacto cutáneo o tóxicos y
nocivos, con posibilidad de ser absorbidos por la
piel.
4.8.4 Señales relativas a los equipos de lucha contra incendios
Son de forma rectangular o cuadrada. Presentan el pictograma blanco sobre fondo

rojo. Las más frecuentes en los laboratorios son las que indican el emplazamiento
de extintores y de mangueras para incendios, es decir:
11
4.8.5 Otras señales
En función de las características del local y teniendo en cuenta sus riesgos

específicos, los laboratorios de biotecnología y de tipo biológico deben exhibir
aquellas señales que avisen de la existencia de tales riesgos.
Conviene recordar también la obligatoriedad de señalizar las salidas de emergencia

y elementos de primeros auxilios (botiquín, duchas de emergencia, lavaojos, etc.).
Por último, otra señalización no menos importante es aquella que permite

identificar las tuberías por el color con que están pintadas, en función del fluido por
ellas transportado, tal como se indica en el cuadro 3.
Cuadro 3. Señalización de tuberías, acorde al fluido transportado
Fluido transportado Color de identificación

Agua Verde
Aire Azul
Gas Amarillo
Vacío Gris
12
5. Equipo de laboratorio
Se citan a continuación descripciones y en algunos casos precios estimados de
equipo, infraestructura, cristalería y reactivos básicos para un laboratorio de
biotecnología con énfasis en marcadores moleculares.
5.1 Equipamiento general
6 Fuentes de poder: 520W ALTA POTENCIA precio estimado: $ 300 IVA incluido.
1 Balanza analítica: Modelo Kern ABT 120 - 4 M precio estimado: $ 1,853.
1 Estufa de cultivo: Su cámara interior es de acero inoxidable con soporte para

estantes fácilmente desmontables, lo que facilita su limpieza. Doble puerta, metálica
en el exterior y de vidrio templado en el interior. Precio estimado $ 1,100.00.
13
1 Parrilla de calentamiento y agitación.
1 Lámpara de luz ultravioleta: es un proceso germicida que logra erradicar la

contaminación microbiológica. Con una tecnología simple (sin adición de químicos
ni cambios en la química general del agua), se hace pasar el influente por un cámara
donde se encuentran las lámparas que emiten rayos de luz ultravioleta. Cuando los
microorganismos tienen contacto con la radiación UV son automáticamente
destruidos, logrando una exterminación del 99.99% precio estimado: $119.00.
1 Centrífuga de mesa: precio estimado $ 200.00.
14
1 Microscopio invertido con sistema de iluminación de campo claro

contraste de fases, varel y fluorescencia,equipo fotográfico y de video.
1 Campana de flujo laminar.
1 Potenciómetro.
1 Autoclave eléctrico horizontal.
15
1 Secador de portaobjetos: precio estimado $ 540.00c/u.
1 Lavador y enjuagador de pipetas.
1 Incubadora Percival I - 30BLL con control electrónico de temperatura y

fotoperiodo.
16
1 Densitómetro marca Tobias RCP – N.
1 Osmómetro de presión de vapor. Para la determinación de osmolalidad para

laboratorios clínicos o de investigación.
1 Cabina de extracción de gases.
17
1 Congelador de –80°C .
1 Microcentrífugas convencional y refrigerada.
1 Frigoríficos y congelador –20°C.
1 Baño termostatizado: Capacidades desde 3 litros hasta 12 litros. Con cubeta

interior estampada en acero inoxidable. Teclado de membrana, selección digital de
temperatura desde ambiente +5ºC hasta 100ºC. Temporizador digital con dos
opciones, continuo o selección de 1 a 9h 59 min. Precio estimado: $ 440.0.
Cubetas de electroforesis horizontales para DNA y RNA, verticales para

proteínas.
Electroporador.
Tanque de revelado manual.
18
Termocicladores.
Sistema de documentación de geles y análisis de imagen.
Sintetizador de oligonucleótidos.
Sintetizador de péptidos.
19
Sistema de transferencia de geles MultiphorII.
Cámara de incubación: Precio estimado: $ 2,930.00.
20
5.2 Equipo específico
ABI PRISM 7000 (Applied Biosystems): Sistema de detección y cuantificación a

tiempo real de secuencias de ácidos nucleicos mediante la combinación de un
termociclador y un sistema de detección de fluorescencia. Puede funcionar con tres
técnicas de marcaje: sondas específicas diseñadas por el usuario (sondas TaqMan.,
TaqMan. MGB) o fluorocromo inespecífico (SYBR. Green). Tiene capacidad para 96
muestras.
GeneAmp 2700 (Applied Biosystems): Termociclador para la amplificación de de

ácidos nucleicos mediante PCR con capacidad para 96 muestras.
21
Electroforesis agarosa (Biorad). Separación de biomoléculas mediante

electroforesis en geles de agarosa y tinción con bromuro de etidio.
Sistema electroforesis acrilamida GenePhor (Amerham Biosciences). Sistema

para separación de fragmentos de ADN de pequeño tamaño que requieran
electroforesis de alta resolusión (SSCP, SSRs, RAPDs y expresión diferencial).
Tinción con nitrato de plata.
Sistema de fotodocumentación Bio-doc It (UVP) de geles, membranas, placas

etc, bajo luz UV.
Software específico: Primer Express (Programa de diseño de oligos); Lasergene-

DNA Star (Programa para análisis de secuencias de ADN).
22
5.3 Cristalería específica a utilizar
La cristalería que se utiliza en un laboratorio es muy variada. La empresa Ryvex le

provee de todos los materiales descartables, incluyendo línea de plásticos que se
requieren para el desempeño de las actividades de cualquier laboratorio. Nuestra
línea de productos incluye los siguientes insumos:
Producto Cat #
Recolector de muestra 5545
Cubeta, 2 lados transparentes, 100/caja 111117
Cubeta, 4 lados transparentes, 120/caja 111127
Recolector de muestra, 0.5mL 110021
Producto Cat #
23
Producto Cat #
Cubetas y 24 bolsas de deshecho 5108
Recolector de muestra pedriático 5521
Bolsas de deshecho 5107
Producto Cat #
Cartucho de cubetas (12,000 Tests) 5115
24
Producto Cat #
Cubeta de reacción para Sherwood® Coagulyzer® 110511
Cubeta de reacción para CU500®,
6610
Logos®, o Fibrintimer®
Cubeta de reacción y barras de mezclado 6612
Fibrometer® Cup 6601
Fibrometer® Tip 6602
25
Producto Cat #
Cubeta 5132
Cubeta 5130B
Tubo de muestra 119040A
Cubeta 5131
Base de lámpara de halógeno 130141
5512
Recolector de muestra
26
Producto Cat#
Cubeta (individualmente envueltas) 5120
Cubeta (individualmente envueltas) 5121
Cubeta (15/Rack) 5123
Recolector de muestra, azul 6500B
Recolector de muestra, transparente 6500C
Recolector de muestra, rojo 6500R
Recolector de muestra, amarillo 6500Y
27
Producto Cat #
Cubeta de reacción 110511
Producto Cat #
Tubo de reacción 5530
Tubo de reacción 5532
 Las cubetas de vidrio tienen un precio que oscila entre $ 0.70 y $ 85.00
dependiendo del tamaño.
28
5.4 Plásticos
Microplacas de 96 pocillos para PCRa tiempo real. $ 51.35 / Unidad(es)
 Placas de 96 pocillos para PCR a tiempo real.

 Referencia: PCR-96M2-HS.
 Compatible con la mayoría de equipo de PCR a tiempo real.
 Unidad mínima de compra: Bolsa con placas.
Adaptador para tubo de 0.5 ml de pcr pk/6.
PUNTAS TRANSPARENTES PARA MICROPIPETA Precio estimado $23.33

Volumen de 1-200ul.
Bolsa de 1000u
Compatibilidad universal
TUBO PARA PCR DE 0.2 ML PK/1000: Precio estimado $ 120.53 las 1000 u
29
5.5 Cristalería en general
Buretas
Pipetas pasteur
Agitadores de vidrio
Aparato de destilación completo de 1lt
Cajas petri
30
Capilares sin heparina
Porta objetos y cubre objetos
Erlenmeyer de diferentes tamaños
Probetas de diferentes tamaños
31
Balones de aforo
5.6 Otros equipos importantes
Pipetas de Microlitros
32
6. Infraestructura
6.1 Características de los muebles
 Base de madera.
 Terminado en laminado plástico.
 Cubierta en acero inoxidable, resina epóxica o laminado.
6.2 Espacio de trabajo:
 Gabinetes, estantes, vitrinas, muebles de guardado.

 Mesa isla, mesa para titular, mesa de trabajo, mesa de lavado.
 Mesa para balanza, mesas escolares.
 Repisas, campanas de flujo, campanas de extracción laminar.
33
6.3 Ubicación de espacios en un laboratorio de biotecnología

con énfasis en marcadores moleculares
Dados los requerimientos mínimos se pueden considerar dos ambientes de 6 por 10

metros, para instalar un laboratorio con condiciones para realizar trabajos de
investigación en Biotecnología, usando marcadores moleculares.
34
7. Reactivos específicos para PCR

7.1 Enzimas
Taq DNA Polimerasa $ 105.73 / Unidad
 Nueva DNA polimerasa "DFS" Ultralimpia, libre completamente de cualquier

traza de DNA
 Polimeriza nucleótidos en la dirección 5´-3´
 Posee actividad exonucleasa 5´- 3´
 Suministrada con 2 buffer diferentes, con y sin MgCl2 !!
 Cantidad: 500U
Disponible la variante Taq red DNA polimerasa, para facilitar el pipeteo

Tth-pol DNA Polimerasa $ 334.17 / Unidad(es)

 Taq modificada que incorpora dUTP y dideoxinucleótidos
 Enzima recomendada:
 Ciclos de secuenciación
 Reacciones de incorporación de dUTP/bio-dUTP
 Cantidad: 500 U
Pfu DNA Polimerasa (DNA-tested) $ 334.17 / Unidad(es)

 Cataliza la polimerización de ADN en la dirección 5´-3´(Tª75ºC)
 Actividad correctora exonucleasa en la dirección 3´-5´
 Recomendada para:
o Reacciones de PCR
o Extensión de primer (síntesis de alta fiabilidad)
 Cantidad: 500 U
 Suministrada con dos buffer, con o sin MgCl2.
Klein-Taq $ 126.40 / Unidad(es)

 Enzima derivada de la Taq polimerasa, procedente de thermus, clonada y
purificada a partir de E.coli.
 Esta enzima es más activa y termoestable en comparación con la Taq
polimerasa
 La exposición repetida a 98ºC no disminuye su actividad
 Cantidad: 200 U
35
7.2 Otros reactivos
Reverase (M-MuLV RT) $ 123.06 / Unidad(es)
 Sintetiza la hebra complementaria de ADN, a partir de un primer, de ARN

(síntesis de cDNA) o una hebra simple de ADN como molde.
 Esta enzima ha sido genéticamente alterada eliminando la actividad RNasa H,
esto le confiere un incremento de la longitud total de los productos de cDNA
que puede generar.
 Cantidad: 10.000 U
dUTP (2'-Deoxiuridina-5'-triosfato) $ 55.21 / Unidad(es)
 Puede ser usado en lugar de dTTP en protocolos de PCR y RT-PCR para

prevenir contaminaciones en amplificaciones previas
 Para amplificaciones específicas de ADN
 Cantidad: 200ul
4 dNTPs mix 40mM (Nucleósidos trifosfato y monofosfato) $ 18.30 /

Unidad(es)
 Solución premezclada que contiene las sales sódicas (a concentración 10mM

en agua, pH 7.5) de:
o dATP
o dCTP
o dGTP
o dTTP
 Solución lista para su uso
 Optimizada para PCR y otras aplicaciones
 Cantidad: 200ul
Psp DNA pol (DNA-tested) $ 284.76 / Unidad(es)
 Enzima termoestable
 Replica ADN a 75ºC dirección 5´- 3´
 Posee actividad exonuclease 3´- 5´
 Cantidad: 500 U
100bp DNA Ladder $ 57.53 / Unidad(es)
Es el marcador ideal para deterninar el tamaño de fragmentos de ADN desde 100

hasta 1000 pares de bases, en incrementos de 100pb.
 Concentración: 0,2mg/ml
 Nº de bandas: 10
Ref: 304005 (0,05mg)
36
8. Listado específico con precios actualizados de

reactivos, equipo básico y otros materiales
necesarios para un laboratorio de biotecnología
con énfasis en marcadores moleculares
A continuación se describe de manera especifica equipo y reactivos básicos para
implementar un laboratorio de Biotecnología, con énfasis en Marcadores
Moleculares. Se incluyen también los precios aproximados de cada uno de los
materiales, tomando como promedio precios de diferentes casas comerciales que los
distribuyen.
Algunas de las empresas consultadas para cotización de precios a nivel local, fueron
Empresa DILAB S.A., KRON S. A. Y MERCK.
8.1 Listado de reactivos
Valor
Descripción Cantidad Valor total
unitario
Ácido nítrico 2.5 litros, grado ACS 4 Q290.00 Q1,160.00
Acido fórmico 500ml 1 Q350.00 Q1,140.00
Acido láctico 500 g 1 Q450.00 Q607.26
Acido nítrico, 2.5 litros, grado ACS 3 Q290.00 Q1,169.30
Agar agar 2 Q735.00 Q860.40
AGAR PATATA DEXTROSA (39 g/1LITRO DE 1 Q.537.72 Q420.00
MEDIO DE CULTIVO) (MERCK (MDA))
Alcohol amílico 500ml 4 Q.537.73 Q1,650.00
Alcohol etílico al 70% galón 5 Q.537.74 Q3,120.00
Alcohol etílico al 95%, galón 5 Q.537.75 Q1,472.00
Alcohol isopropilico, galón 5 Q.537.76 Q2,271.00
Alcohol metílico al 98%, galón 5 Q.537.77 Q2,338.60
Amonio púrpura 5 Q.537.78 Q2,338.60
Amonio púrpura 5 Q.537.79 Q870.00
Cianuro alcalino 1 Q.537.80 Q275.00
Cianuro alcalino 1 Q.537.81 Q425.00
cloruro de 3,5 difeniltetrazolio 6 Q.537.82 Q250.00
Cloruro de potasio, 1 kg, grado ACS 3 Q.537.83 Q275.00
Cloruro de potasio, 1 kg, grado ACS 3 Q.537.84 Q249.20
D Galactosa, anhidro 3 Q.537.85 Q1,470.00
Detergente no iónico, galón 4 Q.537.86 Q2,075.00
Detergente no iónico, galón 4 Q.537.87 Q3,030.00
Diclorometano 4 lts 3 Q.537.88 Q1,384.00
Diclorometano, frasco de 4 litros, grado ACS 3 Q.537.89 Q1,384.00
37
Valor
Descripción Cantidad Valor total
unitario
Dicromato de potasio, 1 kg, grado ACS 2 Q.537.90 Q350.00
Dicromato de potasio, 1 kg, grado ACS 4 Q.537.91 Q910.92
Fosfato de potasio tribásico 4 Q.537.92 Q450.00
Fosfato de potasio tribásico 4 Q.537.93 Q1,520.00
Gentra Puregene Cell Kit:Reagents (Para células 1 Q.537.94 Q1,140.00
de 8 X 108) (antes D-5000A)
Gentra Puregene Cell Kit:RNase A Solution and
Reagents (Para células de 6.7 X 109) (antes D- 1 Q.537.95 Q727.44
50KA)
Glucosa, 200ml 4 Q.537.96 Q3,325.00
Hexano, 4 litros, grado ACS 4 Q.537.97 Q2,338.60
Hexano, 85% 4 lts 7 Q.537.98 Q420.00
Indicador Attest, PQ50 4 Q780.00 Q2,338.60
Indicador Attest, PQ50 4 Q793.00 Q249.20
Indicador metil púpura 6 Q275.00 Q1,050.00
Indicador metil púpura 6 Q345.00 Q2,075.00
Kit de AFLPs 1 12,000.00 Q3,030.00
Kit de extraccion de ADN 1 3,000.00 Q.537.72
Methyl Purple in H2O Marca Sigma Aldrich 6 Q691.35 3,000.00
Frasco de 1L
Nitrato de plata 100 ml 3 Q350.00 12,000.00
Potassium chloride ReagentPlus®, 3 Q938.00 Q4,275.00
≥99.0% Marca Sigma Aldrich Frasco de 1kg
Potassium dichromate ReagentPlus®, 2 Q1,380.35 Q19,990.00
≥99.5% Marca Sigma Aldrich Frasco de 2kg
Potassium phosphate tribasic reagent grade, 1 Q225.80 Q2,225.00
≥98% Marca sigma Frasco de 25g
Solución buffer pH 4, 500ml 10 Q138.40 Q4,148.10
Solución buffer pH 7, 500ml 10 Q138.40 Q2,760.70
Solución de Glycogen 500 μl) (antes D-5010) 1 Q2,225.00 Q2,814.00
Solución estándar EDTA 6 Q378.50 Q225.80
Solución estándar EDTA 6 Q421.30 Q2,070.00
Sulfato ferroso, 1 kg, grado ACS 2 303.63 Q3,172.00
Sulfato ferroso, 1 kg, grado ACS 3 Q303.64 Q2,040.00
Yoduro yodato de potasio, 1000 ml 6 Q505.00 Q2,527.80
TOTAL Q27,307.37 Q111,407.52
38
8.2 Equipo básico para laboratorio
Descripción Cant Precio $ Precio Q

Agitadores 2 $545.00 Q4,251.00
Autoclave 1 $8,713.9 Q67,968.42
Balanza analítica 1 $2,795.00 Q21,801.00
Baño María 1 $325.00 Q2,535.00
Cabina de bioseguridad clase II 1 $156.00 Q1,216.80
Cámara de bioseguridad clase II 1 $260.00 Q2,028.00
Cámaras de electroforesis 3 $3,000.00 Q23,400.00
Cámara fotográfica digital para microscopio 3 $550.00 Q4,290.00
Campana de extracción de gases 1 $2,500.00 Q19,500.00
Centrífuga 1 $975.00 Q7.60
Centrífuga refrigerada 1 $1,213.00 Q9,461.40
Freezer 1 $2,300.00 Q17,940.00
Destilador de agua 1 $2,500.00 Q19,500.00
Estereoscopio 1 $780.00 Q6,084.00
Congelador de ultra baja temperatura 1 $8,800.00 Q68,640.00
Fuente de poder 1 $1950.00 Q15,210.00
Horno eléctrico 2 $312.00 Q2,433.60
Iluminador de alta intensidad 1 $260.00 Q2,028.00
Impresora digital 1 $70.00 Q546.00
Incubadora de CO2 1 $7,566.00 Q59,014.80
Microondas 1 $65.00 Q507.00
Micropipetas (0,1-200) Μl 11 $5,000.00 Q39,000.00
Microscopio de Fluorescencia 1 $11,173.00 Q87,149.40
Microscopio Invertido 1 $7,200.00 Q56,160.00
Monitor cámara digital 1 $200.00 Q1,560.00
Nevera 1 $45.00 Q351.00
pH Metro 1 $900.00 Q7,020.00
Pipeta multicanal 3 $970.00 Q7,566.00
Plancha térmica 1 $1,105.00 Q8,619.00
Sistema analizador de geles 1 $1,100.00 Q85,800.00
Termociclador 1 $10,400.00 Q81,120.00
Transluminador 1 $1,950.00 Q15,210.00
Jeringa multicanal para geles 1 $2,000.00 Q15,600.00
Tubos y capsulas PCR 1 $1170.00 Q9,126.00
Puntas amarillas, rango de 2-200 ul, paquete de 1000
unidades. Marca Eppendorf 1 $50.00 Q390.00
Puntas azules, rango de 50-1000 ul, paquete de 1000
unidades, marca Eppendorf 1 $50.00 Q390.00
Microtubos de 0.2 ml, grado PCR, paquete de 1000,
marca Eppendorf 1 $200.00 Q1,560.00
39
Descripción Cant Precio $ Precio Q

TOTAL Q764,984.02
8.3 Otros materiales, reactivos y equipo de laboratorio
Precio/ Precio
Descripción Cantidad
unidad total
Caja de cubreobjetos 22x22 6 Q19.04 Q114.24
Cajas de portaobjetos 1 Q19.04 Q19.04
Beakers de vidrio de 600 mL 6 Q30.24 Q181.44
Beakers de vidrio de 1000 mL 6 Q60.48 Q362.88
Beakers de plastico de 2000 mL 6 Q91.84 Q551.04
Probetas de 50 mL de vidrio 3 Q34.72 Q104.16
Probetas de 100 mL de vidrio 3 Q44.80 Q134.40
Erlenmeyer de 2000mL 6 Q60.48 Q362.88
Erlenmeyer de 1000mL 6 Q122.08 Q732.48
Recipientes para pesar pequeños de plastico 1 Q600.00 Q600.00
PQ 500
Cajas de petri plasticas PQ 10 200 Q8.40 Q1,680.00
Calibrador para potenciometro pH 4, 7, y 10, 1 Q356.16 Q356.16
fcos. De 500 ml
Pizetas de 500 mL 6 Q25.76 Q154.56
Incinerador de agujas 1 Q3,449.60 Q3,449.60
Frasco de vidrio con tapon de rosca BOECO de 6 Q45.92 Q275.52
500Ml
Frasco de vidrio con tapon de rosca BOECO de 6 Q58.93 Q353.58
1000mL
Acido acético glacial gal 1 Q310.00 Q310.00
Atomizadores de 500ml 3 Q34.72 Q104.16
Nitrato de plata 100 g 1 Q1,625.00 Q1,625.00
Carbonato de sodio 500 g 10 Q250.00 Q1,250.00
Tiosulfato de sodio g 25 Q150.00 Q750.00
Etanol absoluto gal 2 Q285.00 Q570.00
Isopropanol galón 1 Q89.60 Q89.60
Ácido bórico 500 g 8 Q215.00 Q430.00
Formaldehido galón 1 Q62.72 Q62.72
Hidróxido de sodio kg 2 Q225.00 Q450.00
Embudo grande plástico 3 Q64.96 Q194.88
Guantes medianos 18 Q40.00 Q720.00
Guantes pequeños 3 Q40.00 Q120.00
Peptona 500 g 2 Q560.00 Q1,120.00
Gradillas para tubos de 15 ml para 40 tubos 3 Q112.00 Q336.00
Papel parafilm 4 Q172.48 Q689.92
Buffer de almacenamiento para electrodo. 1 Q293.44 Q293.44
40
Precio/ Precio
Descripción Cantidad
unidad total
Caseína hidrolizada 2 Q300.00 Q600.00
TOTAL Q19,147.70
El total de costos aproximado de equipo, cristalería, reactivos y otros materiales, para el

establecimiento del laboratorio de Biotecnología, con énfasis en marcadores moleculares
seria de Q 895,539.24.
41
9. Conclusiones
1. Se han establecido los requerimientos mínimos para implementar un
laboratorio de biotecnología con énfasis en marcadores moleculares.
2. Estos requerimientos mínimos incluyen infraestructura, espacio
físico, equipo, reactivos, cristalería y otros materiales.
3. El costo mínimo preliminar de un laboratorio básico de biotecnología
con énfasis en marcadores moleculares, en cuanto a equipo,
cristalería, reactivos y otros materiales seria de Q 895,539.24
4. La implementación de este laboratorio mínimo, debiera permitir la
realización de actividades de investigación que incluyen colecta y
extracción de muestras de ADN, Cuantificación de ADN, Replicación,
Amplificación y Multiplicación de ADN, usando PCR (Reacción en
Cadena de la Polimerasa), Implementación de sistemas de
electroforesis, análisis de patrones electroforéticos, Aplicación de
Técnicas Moleculares, entre otras, Microsatélites, Amplificación de
Fragmentos de Restricción (AFLP) , amplificación de Fragmentos Al
Azar (RAPDs). El área de acción del laboratorio puede incluir entre
otras aplicaciones, estudios sobre recursos fitogenéticos, con énfasis
en el sector forestal, estudios fitopatológicos y entomológicos,
estudios microbiológicos, estudios ecológicos, y estudios de
mejoramiento genético forestal.
42
10. Bibliografía
1. Crueger, W. y Crueger, A. (1993). Biotecnología. Manual de microbiología
industrial. Zaragoza: Ed. Acribia.
2. Glick, B. y Pasternak, J. (1998). Molecular biotechnology. Principles and

applications of recombinant DNA. 2ª Ed. ASM Press.
3. Izquierdo, M. (1999). Ingeniería genética y transferencia génica. Madrid:

Ediciones Pirámide.
4. Laboratorio de Biotecnología y Biología Molecular. Recuperado el 9 de

noviembre de 2011, de:
http://www1.universia.net/CatalogaXXI/C10047PPPEII1/E155991/inde
x.html
5. Toledo, M. Catálogo de productos y aplicaciones. Recuperado el 9 de

noviembre de 2007, de: http://gt.mt.com/home
6. Universidad de Málaga. Laboratorio de Bioquímica y Biotecnología

Vegetal. Recuperado el 10 de noviembre de 2007, de:
http://www.bmbq.uma.es/lbbv/
7. Universidad Politécnica de Valencia. Manual de seguridad para

operaciones en laboratorios de biotecnología y de tipo biológico.
Recuperado el 10 de noviembre de 2007, de:
http://www.sprl.upv.es/msbiotecnologia1.htm
43

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REQUERIMIENTOS BÁSICOS PARA LA

UNIVERSIDAD RAFAEL LANDÍVAR

Vicerrector de investigación y proyección

Vicerrector de integración universitaria

5. Equipo de laboratorio ................................................................................................. 13

7. Reactivos específicos para PCR ................................................................................ 35

8. Listado específico con precios actualizados de reactivos, equipo básico y

La biotecnología no es, en sí misma, una ciencia; es un enfoque multidisciplinario

Para poder desarrollar investigaciones y experimentos que estén relacionados con

Como todo laboratorio de experimentación e interacción con la ciencia, se deben de

El presente documento se refiere a aspectos fundamentales que deben considerarse

La implementación de este laboratorio mínimo, debiera permitir la realización de

(AFLP) , amplificación de Fragmentos Al Azar (RAPDs). El campo de acción del

Para definir las distintas condiciones ambientales que los laboratorios de

 Tareas docentes y de administración

 Trabajos de investigación propiamente dichos, incluyendo las

4.1 Orden y limpieza

Ambos factores deben ser consustanciales con el trabajo, porque un laboratorio

Algunas directrices generales para mantener limpia y ordenada el área de trabajo en

 No sobrecargar las estanterías y zonas de almacenamiento.

 Guardar los materiales y productos, en las zonas de almacenamiento

4.2 Espacios de trabajo por trabajador

 Altura desde el suelo hasta el techo: 3 metros.

La separación entre los elementos materiales existentes en el laboratorio deberá ser

Cuando el espacio libre de que se disponga en el laboratorio no permita a los

4.3 Temperatura, humedad y ventilación

La exposición de los trabajadores a las condiciones ambientales de los laboratorios

 Humedad y temperaturas extremas.

El Cuadro 1 muestra las condiciones de temperatura, humedad y ventilación que,

Cuadro 1. Límites de temperatura, humedad y ventilación, según lo establecido en

Mención especial merece el trabajo con cámaras de climatización y frigoríficas

 Considerando las diferencias de temperatura con el exterior, las personas que

Cuando el trabajo se lleve a cabo en invernaderos y especialmente, cuando se

4.4 Precauciones previas a la aplicación

 Elegir el producto adecuado y leer atentamente las instrucciones de uso

4.5 Precauciones durante la aplicación

 Llevar siempre el equipo de protección adecuado que se indica en la hoja de

4.6 Precauciones después de la aplicación

 Extremar la higiene personal, duchándose y cambiándose de ropa al terminar

La iluminación de los laboratorios debe adaptarse a las características de la

 Los riesgos para la seguridad y salud de los trabajadores, dependientes de

 La iluminación localizada se utilizará en zonas concretas que requieran

Cuadro 2. Condiciones mínimas de iluminación

Actividad desarrollada Nivel mínimo en lux

Estos niveles mínimos deben duplicarse cuando:

 Existan riesgos apreciables de caídas, choques u otros accidentes en los

La distribución de los niveles de iluminación debe ser uniforme, evitando

No utilizar fuentes de luz que perjudiquen la percepción de los contrastes,

Instalar alumbrado de emergencia de evacuación y de seguridad en los lugares en

En los laboratorios de biotecnología y de tipo biológico, la señalización contribuye a

4.8.1 Señales de advertencia de un peligro

o Riesgo eléctrico. Esta señal debe situarse en todos

o Materias tóxicas. En aquellos laboratorios en los

o Materiales inflamables. Siempre que se manipule

o Baja temperatura. Esta señal deberá situarse a la

o Riesgo biológico. En cumplimiento de lo dispuesto

o Riesgo de radiaciones ionizantes. En los

4.8.2 Señales de prohibición

o Prohibición de fumar y de encender fuego.

4.8.3 Señales de obligación

o Protección obligatoria de la cara. Se utilizará

o Protección obligatoria de vías respiratorias. Esta

4.8.4 Señales relativas a los equipos de lucha contra incendios