GESTIÓN DE FORMACIÓN PROFESIONAL INTEGRAL

PROCEDIMIENTO DESARROLLO CURRICULAR

GUÍA DE APRENDIZAJE

1. IDENTIFICACIÓN DE LA GUIA DE APRENDIZAJE: PRODUCCIÓN DE BIOINSUMOS

 Denominación del Programa de Formación: TECNÓLOGO EN AGROBIOTECNOLOGÍA

 Código del Programa de Formación: 722142
 Nombre del Proyecto: PROPAGACIÓN IN VITRO, EX VITRO DE MATERIALES VEGETALES PROMISORIOS Y
PRODUCCION DE BIOINSUMOS PARA EL FORTALECIMIENTO AGRICOLA DEL DEPARTAMENTO DE
CUNDINAMARCA
 Fase del Proyecto: ANÁLISIS
 Actividad de Proyecto: ESTABLECER PROTOCOLOS Y RECURSOS PARA LA PRODUCCIÓN BIOTECNOLÓGICA DEL
MATERIAL VEGETAL Y/O BIOINSUMO SELECCIONADO.
 Competencia: PRODUCIR BIOINSUMOS DE ACUERDO CON CRITERIOS TÉCNICOS, ECOLÓGICOS Y DE
BIOSEGURIDAD SEGÚN LOS ESTÁNDARES DE CALIDAD REQUERIDOS.
 Resultados de Aprendizaje Alcanzar:
ESTABLECER PROTOCOLOS PARA PREPARACIÓN DE BIOINSUMOS DE ACUERDO CON LAS NECESIDADES DEL
SECTOR Y LA NORMATIVIDAD VIGENTE.
SUPERVISAR LA PRODUCCIÓN DE BIOINSUMOS DE ACUERDO CON LOS PARÁMETROS DE CALIDAD Y LOS
REQUERIMIENTOS ESTABLECIDOS POR LA EMPRESA.

 Duración de la Guía: 24 HORAS

2. PRESENTACION

“Los insumos para el agro desarrollados en base a microorganismos benéficos, surgen como respuesta a la demanda
de los mercados mundiales por alimentos de alta calidad, producidos en forma amigable con el ambiente, trazables e
inocuos”.

Mantener un suelo de calidad o saludable es una característica de interés creciente entre los agricultores dado que
esto mejorará la productividad. Es así que una de las formas de conservar la calidad del suelo viene dada por la
diversidad de los microorganismos presentes, su número y la forma en la que se hallan distribuidos (Coyne, 2000) y
sobre todo por el tipo de microorganismos presentes que contribuirían a la mejora de los cultivos y su rendimiento.

La producción de los cultivos y el crecimiento de las plantas están íntimamente relacionados en muchos aspectos con
las actividades microbianas. Considerando estas asociaciones, se han diseñado estrategias para identificar y
comprender los microorganismos y mecanismos involucrados en cultivos de interés agrícola. Numerosas bacterias y
hongos promueven el crecimiento vegetal, Algunas especies microbianas son capaces de inhibir microorganismos
patógenos (Caballero-Mellado, 2006), un numeroso grupo de bacterias y hongos reacciona de forma antagónica con
ciertos microorganismos, acción que resulta benéfica para formular agentes de control biológico de patógenos
vegetales.

En general, los microorganismos desarrollan en el suelo actividades relacionadas con procesos de descomposición,
mineralización de complejos orgánicos y translocación de bioproductos y elementos minerales que conllevan al
desplazamiento de nutrientes en el ecosistema suelo-planta. Dentro de la gran diversidad de microorganismos
presentes en el suelo llaman la atención los que se encuentran vinculados con la estimulación de los ciclos
biogeoquímicos de los nutrientes, ya que a través de estos se genera la movilización de elementos como carbono,
nitrógeno, oxígeno, hidrógeno, calcio, sodio, azufre, fósforo y potasio entre los seres vivos y la atmósfera o la biomasa,
(Vessey, 2003).

GFPI-F-019 V3
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En la actualidad la forma más común de incorporar nutrientes al suelo ha sido mediante el uso de fertilizantes químicos,
cuyo uso indiscriminado ha alterado significativamente los constituyentes orgánicos y vivos del suelo y con ello el
equilibrio ecológico; debido a esto se han buscado alternativas agrícolas que favorezcan el desarrollo de suelos fértiles
llevando a una sostenibilidad agrícola, que represente beneficios para el hombre y para el balance ecológico, (Álvarez
et al., 2009). La conservación de los recursos productivos y del medio ambiente son dos exigencias básicas, en una
agricultura sostenible; así, al considerar el daño ambiental que produce la aplicación exagerada y periódica de
fertilizantes químicos, surge un creciente interés en usar técnicas basadas en la manipulación de microorganismos
considerados para tal caso biofertilizantes, como una alternativa hacia la sustitución parcial o total de estos insumos,
(Vessey, 2003).

Los biofertilizantes o abonos biológicos son productos obtenidos a partir de microorganismos que promueven y
favorecen la nutrición y el crecimiento de los cultivos. Estos biofertilizantes son generados con microorganismos que
habitan en el suelo, involucrados en la nutrición y crecimiento de las plantas. En la actualidad se ha extendido
ampliamente el uso de biofertilizantes a partir de microorganismos solubilizadores de fosfatos, otros que promueven
el crecimiento vegetal, así como también los biofertilizantes fijadores de nitrógeno. Sin embargo, la biofertilización de
potasio es un tema poco desarrollado. Existen otras maneras de proveer el potasio necesario a los cultivos, mejorando
la productividad y sin ocasionar los daños ambientales que producen los fertilizantes químicos. Es así que el empleo
de biofertilizantes producidos en base a microorganismos propios de la tierra y reproducidos in vitro, son una
alternativa para ejecutar agricultura sostenible. La creciente investigación biotecnológica ha solucionado problemas
en el sector agroproductivo, y continúa haciéndolo, como es el caso de la fertilización.

El uso de biofertilizantes es una alternativa para desarrollar agricultura sostenible al sustituir parcial o completamente
a los fertilizantes químicos, con ventajas ambientales y económicas, y con mayor productividad de los cultivos. De igual
manera los biofertilizantes pueden ayudar a la recuperación agrícola de suelos marginales (BIOFAG, 2008). 22 El
desarrollo a nivel investigativo e industrial, de microorganismos que favorecen el crecimiento vegetal y el control de
enfermedades presenta un futuro promisorio. Existen dos clases de inoculantes: en primer lugar están aquellos que
controlan enfermedades en las plantas y a continuación se encuentran los que estimulan el crecimiento de los cultivos
(ECO-SAFE. 2002). Los inoculantes que controlan las enfermedades y plagas son agentes de control biológico, que
suplen o reducen la aplicación de pesticidas y fungicidas. Los inoculantes que estimulan el crecimiento proporcionan a
las plantas nutrientes y fitohormonas (ECO-SAFE. 2002).

Hoy por hoy, el área de microbiología es un gran aliado para la agrobiotecnología en los países latinoamericanos, varios
estudios trabajan con biofertilización mixta para proporcionar diversos nutrientes como fijadores de nitrógeno y
solubilizadores de fósforo y de potasio. El empleo de biofertilizantes que sustituyan a los fertilizantes químicos,
establece una manera de aumentar la productividad agrícola y reducir los efectos atroces de la fertilización química.

¿QUÉ SON BIOINSUMOS?

Son productos de origen biológico formulados con microorganismos (ej. bacterias, hongos, virus) o con compuestos
bioactivos microbianos, los cuales son utilizados para mejorar la productividad, la calidad y la salud de las plantas, o
las características biológicas del suelo. Para formular un bioinsumo, las cepas o metabolitos microbianos son
seleccionados por su capacidad de promover el crecimiento vegetal: de forma directa facilitando la absorción de
nutrientes por la planta o indirecta contribuyendo al manejo sanitario de enfermedades y plagas de impacto
económico. Incluyen Biofertilizantes y Biocontroladores, aunque también se consideran productos con
denominaciones alternativas como inoculantes, agentes microbianos de control biológico, bioplaguicidas, entre otros.
Cabe destacar que muchas veces una misma cepa microbiana posee mecanismos múltiples que permiten explotar su
capacidad para formularlo como biofertilizante o biocontrolador.

Biofertilizante: bioinsumo elaborado con base en una o más cepas de microorganismos benéficos que, al aplicarse al
suelo o a las semillas, promueve el crecimiento vegetal o favorece el aprovechamiento de los nutrientes en asociación
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con la planta o su rizósfera. Incluye entre otros los inoculantes elaborados con rizobios, micorrizas, rizobacterias
promotoras del crecimiento vegetal.
Biocontrolador: bioinsumo elaborado con una o más cepas de microorganismos benéficos que tienen capacidad de
mejorar el estado sanitario vegetal mediante la supresión de poblaciones de fitopatógenos o insectos plaga por
antagonismo, antibiosis, competencia, patogenicidad, producción de enzimas, resistencia inducida, entre otros
mecanismos.

Cuando un bioinsumo se produce a escala comercial, se formula, empaqueta y vende como biofertilizante o
biocontrolador, se requiere de su registro ante la autoridad competente, quien debe asegurar las pautas de identidad,
eficacia agronómica, seguridad para el ambiente, la salud y el control de calidad. Se entiende por control de calidad el
conjunto de acciones destinadas a garantizar la producción uniforme de lotes que cumplan entre otros los parámetros
de identidad, actividad y pureza establecidos.
(Tomado de http://www.inia.uy/Publicaciones/Documentos%20compartidos/18429300612191129.pdf)

3. FORMULACION DE LAS ACTIVIDADES DE APRENDIZAJE

 Realice un Trabajo escrito en el cual describa detalladamente el microorganismo que le fue asignado, para ser
usado como biofertilizante y/o biocontrolador, teniendo en cuenta sus características morfológicas,
fisiológicas, clasificación, importancia agrícola y en la producción de bioinsumos, aplicación y modo de acción.
Realice dibujos o esquemas de ser necesario.

 Realice la lectura de la Resolución ICA 698 del 4 de Febrero de 2011, diseñe y elabore la etiqueta de su
producto de acuerdo con los lineamientos establecidos en este documento.

3.1 PROCESO DE PRODUCCIÓN DE BIOINSUMOS

3.1.1 Manejo de la cepa

Las cepas de Bacillus Licheniformis, Bacillus Thuringiensis, Trichoderma sp., Saccharomyces sp. y EM, son tomadas del
Banco de Cepas del Laboratorio de Biotecnología Vegetal del Centro de Biotecnología Agropecuaria y recuperadas en
los medios de cultivo específicos para cada microorganismo.

Las cepas de Actinomicetos, Micorrizas, Pseudomonas Aeruginosa, Azotobacter sp., Azospirillum sp. y Paecilomyces sp.
son aisladas a partir de muestras de suelo rizosférico de la huerta del Centro de Biotecnología Agropecuaria, teniendo
en cuenta el procedimiento descrito en la Guía “Aislamiento de Microorganismos de Suelo”.

Para la recuperación de Bacillus Licheniformis y Bacillus Thuringiensis, prepare Agar BHI de acuerdo con la formulación
descrita en la etiqueta del producto.

Para la recuperación de Trichoderma sp., Saccharomyces sp, Paecilomyces sp. Micorrizas y EM, prepare Agar PDA de
acuerdo con la formulación descrita en la etiqueta del producto.

Para la recuperación de Pseudomonas aeruginosa prepare Agar King B de acuerdo con la formulación descrita en la
etiqueta del producto.

Para la recuperación de Azotobacter sp. prepare Agar Ashby de acuerdo con la formulación descrita en la etiqueta del
producto.
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Para la recuperación de Actinomicetos prepare Agar Avena según la siguiente formulación:

Composición
Harina de avena . . . . . . . . . . . . . .30 g
SO4Mg.7H2O . . . . . . . . . . . . . . . .1 g
PO4H2K . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1,5 g
Agar . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .15 g
Agua destilada . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 L
Preparación
a) Hervir lentamente los 30 g de harina de avena en 1 L de agua durante 1 h.
b) Filtrar y ajustar el volumen del caldo a 1 L.
c) Añadir las sales y calentar hasta su disolución.
d) Esterilizar a 121 °C durante 15 min.
e) Dispensar en placas de Petri.

3.1.2 Producción de Inóculo

Para la producción de inóculo de Trichoderma sp., Saccharomyces sp, Paecilomyces sp. Micorrizas y EM, prepare 100
mL de Caldo PDA de acuerdo con la formulación descrita en la etiqueta del producto.

Para la producción del Inóculo de Bacillus Licheniformis, Bacillus Thuringiensis, Pseudomonas aeruginosa, Azotobacter
sp., Azospirillum sp., y Actinomicetos prepare 100 mL de Caldo BHI teniendo en cuenta la formulación descrita en la
etiqueta del producto.

Tome una caja de Petri o un Tubo en los que se observen colonias aisladas de cada microorganismo recuperado del
Banco de Cepas o aislado de la muestra de suelo rizosférico, seleccione una de las colonias y realice la coloración
correspondiente al tipo de microorganismo (Coloración de Gram, Coloración simple o Coloración con Azul de
Lactofenol), si el cultivo está puro, tome la misma colonia con asa recta o redonda y suspéndala en el Caldo específico
para cada microorganismo.

Incube los Caldos Inoculados a 30 °C durante 24 horas para las bacterias y 72 horas para actinomicetos y a 25º C durante
3 a 5 días para los hongos, las micorrizas y las levaduras, en agitación constante a 150 rpm.

3.1.3 Control de Calidad del Inóculo

Por cada microorganismo:

Aliste y Esterilice el siguiente material: 9 pipetas, 8 rastrillos, 20 puntas amarillas y azules.

Aliste y Desinfecte: Pipeteadores, Micropipetas de 10 a 100 µL y de 100 a 1000 µL.

Aliste: Asa Redonda y/o Asa Recta, Mechero y recipientes para recolección de material contaminado.

Prepare 72 mL de Agua Peptonada según la formulación descrita en la etiqueta del producto y distribúyalos en 8 tubos
de ensayo con tapa rosca, de tal manera que cada tubo contenga 9 ml de Agua Peptonada. Esterilice.

Para las bacterias y actinomicetos prepare 160 mL de Agar Nutritivo o Plate Count según la formulación descrita en la
etiqueta del producto. Esterilice y distribúyalos en 8 cajas de Petri estériles, de tal manera que cada caja contenga
aproximadamente 20 mL de medio.
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Para los hongos, levaduras y micorrizas prepare 160 mL de Agar PDA según la formulación descrita en la etiqueta del
producto. Esterilice y distribúyalos en 8 cajas de Petri estériles, de tal manera que cada caja contenga
aproximadamente 20 mL de medio.

Una vez cumplido el tiempo de incubación de los inóculos:

1. Realice la coloración correspondiente al tipo de microorganismo (Coloración de Gram, Coloración simple o

Coloración con Azul de Lactofenol) para verificar pureza.

Si el cultivo está puro:

2. Con una pipeta de vidrio estéril tome 1 mL del inóculo y deposítelo en condiciones de esterilidad a un tubo
de ensayo con 9 mL de agua peptonada estéril. Agite para homogenizar la muestra. (Figura 1).

3. Con una nueva pipeta estéril tome 1 mL del tubo anterior y deposítelo a otro tubo de ensayo con 9 mL de
agua peptonada estéril y agite. (Figura 1).

4. Repita el punto tres, tomando siempre, con una pipeta estéril, 1 mL del último tubo inoculado y depositándolo
a un tubo nuevo con 9 mL de agua peptonada estéril y agitando (Figura 1). Hasta completar 8 tubos
inoculados, marcados previamente con el número de la dilución correspondiente: 10 -1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5,
10-6, 10-7, 10-8

5. Al terminar la serie de tubos, tome de cada tubo 0.1 mL medio de una pipeta de vidrio estéril o 100 µL con
una micropipeta y deposítelo en el centro de cada caja de Petri, previamente marcadas con las mismas
diluciones de los tubos para su identificación. (Figura 1)

6. Tome una espátula de Drigalsky o rastrillo de vidrio estéril y distribuya la muestra sobre toda la superficie del
agar, girando la caja de Petri para homogenizar la muestra sobre todo el agar. Repetir este proceso con cada
caja de Petri usando un rastrillo estéril para cada caja. (Figura 2)

Figura 1. Proceso de Diluciones y Recuento en placa

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Figura 2. Homogenizar la muestra con espátula de Drigalsky

7. Coloque las cajas de Petri en la incubadora a 30°C durante 24 horas para bacterias y 72 horas para
actinomicetos y a 25°C durante 72 horas para hongos, levaduras y micorrizas.

8. Una vez finalizado el tiempo de incubación retire las cajas de Petri de la incubadora y realice los recuentos en
placa de cada dilución reportando UFC/mL.

3.1.4 Producción del Bioinsumo o Biocontrolador

Para la producción de Trichoderma sp., Saccharomyces sp., Paecilomyces sp., Micorrizas y EM, prepare 400 mL de
Caldo PDA teniendo en cuenta la formulación descrita en la etiqueta del producto.

Para la producción de Bacillus Licheniformis, Bacillus Thuringiensis, Pseudomonas aeruginosa, Azotobacter sp.,
Azospirillum sp. y Actinomicetos prepare 400 mL de Caldo BHI teniendo en cuenta la formulación descrita en la etiqueta
del producto.

Tome el inóculo y en condiciones de esterilidad realice la coloración correspondiente al tipo de microorganismo

(Coloración de Gram, Coloración simple o Coloración con Azul de Lactofenol) para verificar pureza, si el cultivo está
puro, deposite el inóculo en el Erlenmeyer que contiene los 400 mL de Caldo específico para cada microorganismo.

Incube los Caldos Inoculados a 30 °C durante 24 horas para las bacterias y 72 horas para los actinomicetos y a 25º C
durante 3 a 5 días para los hongos, las micorrizas y las levaduras, en agitación constante a 150 rpm.

3.1.5 Control de Calidad del Producto

Por cada microorganismo:

Aliste y Esterilice el siguiente material: 9 pipetas, 8 rastrillos, 20 puntas amarillas y azules.

Aliste y Desinfecte: Pipeteadores, Micropipetas de 10 a 100 µL y de 100 a 1000 µL.

Aliste: Asa Redonda y/o Asa Recta, Mechero y recipientes para la recolección de material contaminado.

Prepare 72 mL de Agua Peptonada según la formulación descrita en la etiqueta del producto y distribúyalos en 8 tubos
de ensayo con tapa rosca, de tal manera que cada tubo contenga 9 ml de Agua Peptonada. Esterilice.

Para las bacterias y actinomicetos prepare 160 mL de Agar Nutritivo o Plate Count según la formulación descrita en la
etiqueta del producto. Esterilice y distribúyalos en 8 cajas de Petri estériles, de tal manera que cada caja contenga
aproximadamente 20 mL de medio.
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Para los hongos, levaduras y micorrizas prepare 160 mL de Agar PDA según la formulación descrita en la etiqueta del
producto. Esterilice y distribúyalos en 8 cajas de Petri estériles, de tal manera que cada caja contenga
aproximadamente 20 mL de medio.

Una vez cumplido el tiempo de incubación de los productos:

1. Realice la coloración correspondiente al tipo de microorganismo (Coloración de Gram, Coloración simple o

Coloración con Azul de Lactofenol) para verificar pureza.

Si el cultivo está puro:

2. Con una pipeta de vidrio estéril tome 1 mL del inóculo y deposítelo en condiciones de esterilidad a un tubo
de ensayo con 9 mL de agua peptonada estéril. Agite para homogenizar la muestra. (Figura 1).

3. Con una nueva pipeta estéril tome 1 mL del tubo anterior y deposítelo a otro tubo de ensayo con 9 mL de
agua peptonada estéril y agite. (Figura 1).

4. Repita el punto tres, tomando siempre, con una pipeta estéril, 1 mL del último tubo inoculado y depositándolo
a un tubo nuevo con 9 mL de agua peptonada estéril y agitando (Figura 1). Hasta completar 8 tubos
inoculados, marcados previamente con el número de la dilución correspondiente: 10 -1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5,
10-6, 10-7, 10-8

5. Al terminar la serie de tubos, tome de cada tubo 0.1 mL medio de una pipeta de vidrio estéril o 100 µL con
una micropipeta y deposítelo en el centro de cada caja de Petri, previamente marcadas con las mismas
diluciones de los tubos para su identificación. (Figura 1)

6. Tome una espátula de Drigalsky o rastrillo de vidrio estéril y distribuya la muestra sobre toda la superficie del
agar, girando la caja de Petri para homogenizar la muestra sobre todo el agar. Repita este proceso con cada
caja de Petri usando un rastrillo estéril para cada caja. (Figura 2)

Figura 1. Proceso de Diluciones y Recuento en placa

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Figura 2. Homogenizar la muestra con espátula de Drigalsky

7. Coloque las cajas de Petri en la incubadora a 30°C durante 24 horas para bacterias y 72 horas para
actinomicetos y a 25°C durante 72 horas para hongos, levaduras y micorrizas.

8. Una vez finalizado el tiempo de incubación retire las cajas de Petri de la incubadora y realice los recuentos en
placa de cada una reportando UFC/mL.

3.1.6 Envase del Producto

Seleccione y esterilice el envase adecuado para su producto.

En condiciones de esterilidad deposite el producto en el envase seleccionado. En el caso de los hongos debe envasar
filtrando el producto usando un embudo estéril cubierto con una tela de baja porosidad, con el fin de retener el micelio.

3.1.7 Etiquetado del Producto

Etiquete el producto con la etiqueta diseñada.

PRESENTE SU PRODUCTO SUSTENTANDO LA INFORMACIÓN CORRESPONDIENTE AL TIPO DE BIOINSUMO QUE ES, AL

MICROORGANISMO QUE LO CONSTITUYE Y AL PROCESO DE PRODUCCIÓN REALIZADO.

 Ambiente Requerido: Salón de Clase, Laboratorio de Biotecnología Vegetal

 Materiales: Documentos de Consulta, Material y Equipos de Laboratorio, Reactivos, Cepas de MO y EPP.

4. ACTIVIDADES DE EVALUACIÓN

Evidencias de Aprendizaje Criterios de Evaluación Técnicas e Instrumentos de

Evaluación

Evidencias de Conocimiento: Maneja Diseña protocolos para elaboración Trabajo escrito sobre el
los conceptos de bioinsumo, de bioinsumos, teniendo en cuenta microorganismo para producir el
fertilizante, controlador biológico, los conceptos de compatibilidad, bioinsumo
inocuidad, toxicología y trazabilidad
entre otros
y la normatividad vigente. Lista de Chequeo Producción de
Elabora el plan de producción de
Evidencias de Desempeño: Proceso Bioinsumos
bioinsumos garantizando la
de Producción del bioinsumo
disponibilidad de los recursos. Presentación del producto terminado
Documenta el proceso de
Evidencias de Producto: Bioinsumo y sustentación sobre el proceso de
producción teniendo en cuenta los
producido y etiquetado parámetros establecidos. producción
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Evalúa el procedimiento para

preparar los bioinsumos de acuerdo
con los protocolos establecidos por
la empresa.
Selecciona los empaques y/o
envases a utilizar de acuerdo con la
normatividad vigente

5. GLOSARIO DE TERMINOS:

Consulte los términos que no hayan quedado claros durante el desarrollo del proceso.

6. REFERENTES BILBIOGRAFICOS

http://www.inia.uy/Publicaciones/Documentos%20compartidos/18429300612191129.pdf

Antonio Rezusta López, Aurora Sánchez Sousa, Joaquina Gil Tomás; Fundamentos básicos para el diagnóstico
micológico; Revista Iberoamericana de Micología; 2007

M. en C. Laura Elena Santana Contreras, M. en C. Ma. Zulema Poncio Acosta; MANUAL DE PRÁCTICAS DE
MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL; Universidad Autónoma de Ciudad Juárez; 2011

7. CONTROL DEL DOCUMENTO

Nombre Cargo Dependencia Fecha

Autor (es) LINA FERNANDA PATIÑO INSTRUCTOR ARTICULACION JULIO DE 2017

TOVAR CON LA MEDIA

8. CONTROL DE CAMBIOS

Nombre Cargo Dependencia Fecha Razón del Cambio

Autor (es)