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ANEXOS
MEDIOS DE TRANSPORTE PARA MUESTRAS MICROBIOLOGICAS

BACTO -TRANSPORT MEDIUM AMIES Código 0996

BACTO -TRANSPORT MEDIUM AMlES W/O CHARCOAL Código 0832
BACTO -TRANSPORT MEDIUM STUART Código 0621
BACTO -TRANSPORT MEDIUM W/CHARCOAL Código 0744
BACTO – SWABS STUART Código 3108

El Bacto - Transport Medium Amies.se recomienda para el transporte de muestras

microbiológicas por el correo u otras vías hasta el laboratorio para su siembra
posterior. Ha sido diseñado según la modificación lograda por Cary y Blair del
Medio de Transporte de Stuart.

El Bacto - Transport Medíum Amies w/o Charcoal está formulado de forma similar
al Bacto - Transport Medium Amies excepto que el carbón es omitido. Puede ser
usado como medio .de transporte sin carbono o como medio base al cual se le
añade el carbono para lograr la formulación completa de Amies.

El Bacto - Transport Medium Stuart se recomienda como substrato para el

transporte de muestras clínicas conteniendo bacterias hongos o parásitos en la
práctica de los laboratorios de salud pública.

Está preparado de acuerdo a la fórmula de Stuart y posee la capacidad de

mantener viables durante el transporte la mayoría de los microorganismos más
difíciles de crecer.

El Bacto - Transport Medium w/Charcoal está diseñado para usarse como medio
de transporte en muestras conteniendo bacterias, levaduras y hongos. Es el
mismo Bacto Transport.Medium Stuart al cual se le añade 1 % de carbono.

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Algunos laboratoristas prefieren usar simplemente hisopos y el medio conteniendo

carbono en lugar del medio de transporte Stuart e hisopos Stuart impregnados con
carbono.

Las condiciones en las cuales la muestra es recibida por el laboratorio para su

cultivo es una variable significativa en la recuperación e identificación final de
posibles patógenos.

Una muestra no satisfactoria una muestra en la cual y sobre crecimiento de

contaminantes, contiene microorganismos no viables o una en la cual el número
de patógenos esta disminuido notablemente puede conducir a resultados erróneos
o inconclusivos.

Las condiciones óptimas dictan que la muestra sea inoculada directamente en un

Medio apropiado o caldo de enriquecimiento, o que la muestra sea conducida al
laboratorio inmediatamente para su evaluación. Sin embargo, esto no es posible
en todas las circunstancias. Por consiguiente, es necesario proveer un método el
cual mantenga viables los patógenos significativos y al mismo tiempo controle la
proliferación de contaminantes durante períodos extensos de tránsito. .

Varios métodos son usados para preservar las muestras. El método de elección
depende del tipo demuestras en cuestión. Un método de preservativo es el uso de
medios de transporte. Estos medios están diseñados para proveer un ambiente
adecuado y mantener la integridad de la muestra.

Mofett, Young y Stuart describieron un medio y un método para transportar

muestras de gonococos al laboratorio. Stuart, Toshach y Patsula elaboraron,
basados en ese método de transporte, la formulación del medio de transporte de
Stuart, el cual usaron exitosamente para los envíos de muestras de gonococos al
laboratorio.

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Este es esencialmente un medio no nutritivo, semisólido y altamente reducido el

cual inhibe la reacción de enzimas auto destructoras en la célula al tiempo que
previene los efectos letales de la oxidación manteniendo así al organismo en un
«status quo" dentro de la muestra.

Crookes y Stuart observaron la presencia ocasional de coliformes en muestras con

gonococos, los cuales eran capaces de propagarse en el medio de transporte
sobrecreciendo a los gonococos. Añadiendo aerosporina al Medio de Transporte
de' Stuart lograron suprimir los contaminantes. Este antibiótico parece restringir el
crecimiento de los coliformes satisfactoriamente, sin afectar de forma apreciable a
los gonococos.

Aunque el medio de Stuart fue diseñado originalmente para el transporte de

gonococos, su capacidad para mantener viables organismos difíciles de crecer
llevó a otros investigadores a explorar la posibilidad de su uso con una gran
variedad de muestras.

Cooper halló que el método de Stuart, usando el Medio de Transporte Stuart en

hisopos impregnados con carbono, era un método satisfactorio para mantener a la
viabilidad de patógenos entéricos y otros patógenos aislados en el tracto
respiratorio superior.

Entre los microorganismos que han sido transportados con éxito en este medio se
incluyen Neissena gonorrhoeae, N. intracellularis, Haemophilus influenzae, B.
pertussis, Streptococcus, Staphylococcus, Pneumococeus, Shigella, Salmonella,
Escherichia, Aerobacter y Trichomonas vaginalis. Por regla general, estos
microorganismos no muestran reducción alguna en su viabilidad en este medio
dentro de las 24 horas de transporte. Después de las 24 horas se observa una
disminución gradual en el número de células viables. Los organismos más
resistentes pueden permanecer viables por periodos de más de 72 horas. Se

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recomienda, sin embargo, que las muestras sean cultivadas sin demora una vez
que son recibidas en el laboratorio.

Cary y Blair usando el Medio de Transporte de Stuart para el transporte de

muestras fecales conteniendo Shigella, también encontraron dificultades con sobre
crecimiento en numerosas muestras. Estos autores reconocieron la relación entre
los organismos contaminantes (E. coli, E. freundi y E. aerógenes) y la composición
del medio de transporte concluyendo que los contaminantes utilizaban como
fuente de energía el glicerofosfato. Cary y Blair observaron también que
Verkatraman y Ramakrishnan habían mantenido el Vibrio cholerae viable por más
de 92 días en un medio de agua salada libre de nutrientes con pH ajustado a 9.2.
Por consiguiente ellos sustituyeron el glicerofosfato en el Medio de Transporte de
Stuart por fusfatos inorgánicos eliminando de esta forma el sobre crecimiento de
los contaminantes.

Amies confirmo las observaciones de Cary y Blair de que el tampón de sales

inorgánicas era superior al glicerofosfato. Luego modificó la fórmula de Cary y
Blair usando una solución balanceada de fosfatos inorgánicos y omitiendo el azul
de metileno. El medio así modificado, de acuerdo al autor, arrojó un porciento
significativamente mayor de cultivos positivos que el antiguo medio de Stuart

REACTIVOS
Bacto – Transpor Médium Amies Código 0996

Cloruro de Sodio 3g Fosfato Disódico 1.15 g

Cloruro de Potasio 0.2 g. Tioglicolato de Sodio 1 g.
Cloruro de Calcio 0.1 g. Carbono 10 g.
Cloruro de Magnesio 0.1 g. Bacto - Agar 4 g.
Fosfato Monopotásico 0.2 g. Agua destilada 1000 ml.

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El pH final del medio es 7.3 a 25 C.

Bacto Transport Medium Amies w/o Charcoal Código 0832

Bacto – Transport Medium w/oi Charcoal es la misma fórmula que el código 0996
excepto que el carbono ha sido omitido.

El pH final del medio es 7.3 a 25°C.

Bacto – Transport Médium Stuart Código 0621

Tioglicolato de Sodio 0.9 g. Azul de Metileno 0.002 g.
Glicoerofosfato de Sodio 10 g. Bacto-Agar 3 g.
Cloruro de Sodio USP 0.1 g. Agua destilada 1000 ml.

El pH final del medio es 7.4 a 25 C

Bacto – Swabs Stuart Código 3108

Bacto – Swabs Stuart son hisopos estériles impregnados con carbono tamponado
para ser usados con el Bacto – Transport Médium Stuart en la toma y transporte
de muestras clínicas conteniendo bacterias, hongos y parásitos. Los mismos son
preparados de acuerdo al procedimiento descrito por Stuart.

Bacto - Transport Medium w/Charcoal

Bacto - Transport Medium w/Charcoal es la misma fórmula que el código 0621 a la
cual se le ha añadido l % de carbono. El pH final del medio es 7.4 a 25 °c.

Estos medios están disponibles en viajes con tapa de rosca y permanecerán

estables hasta la fecha de vencimiento indicada en la etiqueta cuando son
almacenados entre 15 y 30 °c.

Viales de Transport Medium Stuart desarrollan una leve oxidación en la boca del

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vial. Esto es indicado por el color azul en la -parte superior periférica del medio.
Sin embargo, viales que demuestran una coloración azul en todo el medio deben
de ser desechados.

Para el uso diagnóstico In Vitro.

NOTA: Para preparar los medios a partir de la base deshidratada ver la sección
MD: Medio Deshidratado

OBTENCION de la MUESTRA
Tome la muestra e inserte el hisopo o los hisopos en el tercio superior de! envase
conteniendo el medio de transporte.

Corte o quiebre las porciones sobresalientes del hisopo y enrosque la tapa en el

vial. Esta operación usualmente fuerza el hisopo hacia abajo y lo centra en el
medio de! transporte. Rotule las muestras y regréselas al laboratorio tan pronto
sea posible. Mantenga las muestras en el refrigerador hasta que puedan ser
transportadas,

PROCEDIMIENTO
Materiales provistos:
Bacto - Transport Medium Amies
Bacto - Transport Medium w/o Charcoal
Bacto - Transpon ivledium Stuart
Baeto - Transport Medium w/Charcoal
Bacto - Swabs Stuart (para ser usados con el Bacto - Transport Medium Sfuart)
Materiales necesarios pero no provistos:
Pinzas Largas
Cajas con medio de cultivo
Estufa a 37 °C

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1. Agarre los hisopos firmemente con las pinzas.

2. Aplique el hisopo a una caja de medio de cultivo e inocule de la manera usual. .
3. Si se usa el caldo de cultivo, sumerja el hisopo en el caldo utilizando las pinzas.
4. Incube los tubos de caldo o las cajas de Agar a 37°C por 18 -24 horas. Otras
condiciones de incubación pueden ser usadas si el organismo que se sospecha
así lo requiere.
5. Examine las cajas y tubos.

RESULTADOS
Un crecimiento aceptable y la morfología típica deben de ser aparente después de
18 – 24 horas de incubación. Los Microorganismos patogénicos no deben ser
sobrecrecidos por flora contaminante.

Aunque el medio de Stuart y las formulaciones de Amies más tarde han sido
usados para el transporte de muestras sospechosas de contener N. gonorrhoeae y
N. meningitidis se recomienda el Bacto - Transgrow Medium para este propósito.
Para una discusión más completa sobre el transporte y el aislamiento de estos
patógenos, favor de referirse a la Información Técnica 0580.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Muestras tomadas en medios de transporte no mostrarán el crecimiento óptimo, ni
podrán .ser comparadas con aquellas inoculadas directamente en el medio de
cultivo. Estos medios de transporte, sin embargo, proveen un grado adecuado de
preservación para aquellas muestras que no puedan ser llevadas rápidamente al
laboratorio para su evaluación. .

La viabilidad de las células disminuirá durante el tiempo y cierto grado de

crecimiento de contaminantes puede ocurrir durante períodos prolongados de
tránsito. Esto tiene mayor significado en las muestras fecales que contienen un
número substancial de coliformes.

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SECCIÓN DM
La preparación de los Medios de Transporte enumerados en la sección de
"Reactivos" u partir de formula deshidratada puede lograrse por los siguientes
métodos:

Para rehidratar el Bacto - Transport Medium Amies suspenda 20 g en 1000 ml de

agua destilada y caliéntelo hasta el punto de ebullición para lograr una solución
completa. Dispense el medio caliente en pequeños viales con tapa de rosca, de 6 -
8 mi de capacidad, hasta unos 50 mm de la boca. Enrosque las tapas firmemente
y esterilice en autoclave por 15 minutos a 15 lb de presión (121 C). Invierta los
viales justamente antes de que el medio se solidifique para distribuir el carbono
uniformemente. Vuelva a apretar las tapas de los viales si fuese necesario una
vez que los mismos se hayan enfriado. La reacción final del medio será pH 7.2 a
25 C. Una libre de para 22.7 litros del medio final.

Para rehidratar el Bacto. Transport Medium Amies w/o Charcoal, suspenda 10 gen
1000 ml de agua destilada y caliéntelo hasta el punto de ebullición para lograr una
solución completa. Dispense el medio caliente en pequeños viales con tapa de
rosca de 6 - 8 mi de capacidad, hasta unos 50 mm de la boca. Enrosque las tapas
firmemente y esterilice en autoclave por 15 minutos a 15 lb. presión (121 C).
Vuelva a apretar las tapas de los viales si fuese necesario una vez que los mismos
se hayan enfriado. La reacción final del medio será pH 7.-+ a 25 C. Una libra de
para 32 litros del medio final.

Para rehidratar el Bacto - Transport Medium w/Charcoal,suspenda 24 g en 1000

mi de agua destilada y caliéntelo hasta el punto de ebullición para lograr una
solución completa. Dispense el medio caliente en pequeños viales con tapa de
rosca de 6. 8 ml. de capacidad, hasta unos 50 mm de la boca. Enrosque las tapas
firmemente y esterilice en autoclave por 15 minutos a 15 lb. presión (I21 C).
Vuelva a apretar las tapas de los viales si fuese necesario una vez que los mismos

GUIA DE LABORATORIO 239 Biol. Ms C. Alicia Decheco Egusquiza

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se hayan enfriado. La reacción final del medio será pH 7.4 3. 25 C. Una libra de
para 19 litros del medio final.

ENVASE

Medios Listos para Usarse

Bacto – Transport Médium Amies 0996.34.6 12 viales
996.37.3 144 viales
Bacto – Transport Médium Amies w/o Charcoal 0832.34.4 12 viales
Bacto – Transport Médium Stuart 0621.34-9 12 viales
0621.37-6 144 viales
Bacto Transport Médium w/Charcoal 0744-34-1 12 viales
0744-37-8 144 viales
Bacto – Swabs Stuart 31089-30-9 50x2 algodones
Medios Deshidratados
Bacto – Transport Medium Amies 0996-02-4 ¼ libre
0996-01-5 1 libre
Bacto – Transport Médium Amies w/o Charcoal 0832-02-02 ¼ libre
832-01-3 1 libre
Bacto-Transport Médium Stuart 0621-02-7 ¼ Libre
621-01-08 1 Libre
Bacto – Transport Médium w/Charcoal 0744-02-9 ¼ Libre

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REPORTE DE ANLISIS MICROBIOLOGICO DE UN KIOSKO

Para el análisis microbiológico es necesario conocer los puntos críticos

analizando todas las fases de producción.

Distribución de materias primas

1. Identificar los materiales crudos y los potencialmente peligrosos.

2. Identificar las posibles fuentes de contaminación por medio del
análisis de cada una de las fases de la cadena alimentaría .
3. Determinar la probabilidad de supervivencia y multiplicación
microbiana durante la fase de producción procesado distribución ,
almacenamiento y preparación culinaria .
4. Valorar sus riesgos y su gravedad.

CONCEPTOS BASICOA DE MANIPULACIÓN DE ALIMENTOS

1. Todos deberían tener una buena educación e higiene personal.

2. Lavarse y secar bien las manos .
3. Conservar los alimentos al menor tiempo posible .
4. Lavar las frutas y verduras s consumir crudas .
5. Mantener limpios los utensilios de cocina .
6. Manipular y conservar de forma separada los alimentos crudos y
cocidos.

GUIA DE LABORATORIO 241 Biol. Ms C. Alicia Decheco Egusquiza

MICROBIOLOGIA II
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BIBLIOGRAFIA

1. SCHLEGEL, Hans G “Microbiología General", editorial: Omega Barcelona,

segunda edición.

2 MENDO, Manuel "Lecciones De Microbiología Y Medios De Cultivo", cuarta

edición.

3. http//v.wwgb.fcen.uba.ar/microinmuno/Seminario Tinciones. htm

4. ENGENDERHEALTH."Como Tratar el Instrumenta

http://www.engenderhealth.com/spanichs/sip/instrum/index.html.
5. INTRAH. « Prevención de Infecciones en Clínicas de PF/SMI.USAID».
Mayo 1998.

6. MINSA “Vigilancia, Prevención y Control de Infecciones Intrahospitalarias

en
el Perú». 9998 - 2002. Lima Per.2002.

7. SOC. DE ENFERMERAS EN PAB. QUIRURGICOS y ESTERILlZACION,

ZONA SUR. «Lavado de Material de Uso Médico ». En http://\.vww.
enfermeraspabellonyesterilizacion.cl .

8. SILVESTRE, ET AL. "Esterilización". En Anales Sis. San Navarra 2000,23

(Sup!.2): 95 – 103.

9. EMERGENCIAS. ES “Protocolo de Limpieza, Desinfección y Esterilización

del Material, Equipamiento y Vehículos Sanitarios”.
En http://www.emergencias.es.org/Publicado el :12/04/2004

GUIA DE LABORATORIO 242 Biol. Ms C. Alicia Decheco Egusquiza

MICROBIOLOGIA II
UNFV/FIIS ANEXOS

10. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. CDC/NIH.

U.S. Department of Health and Human Services, Public Health Service (4
ed.). Washington, 1999.

11. Prevención de riesgos biológicos en el laboratorio. M.C. Martí y cols.

Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo. Madrid, 1997.

12. Laboratory Biosafety Guidelines. M.E. Kennedy (ed.). Laboratory

Center for Disease Control, Health (2 ed.). Ottawa, 1996.

13. Primary Containment For Biohazards. Selection, Installation and Usé of

Biological Safety Cabinets. CDC/NIH. US. Department of Health and Human
Services, Public Health Service. Washington, 1995.

14. Seguridad y condiciones de trabajo en el laboratorio. M..Bultó y cois

Instituto Nacional de Seguridad e Higiene en el Trabajo. Madrid, 1992.

15. Guía para el transporte seguro de substancias infecciosas y especímenes

diagnósticos. Organización Mundial de la Salud. 1997.

16. NCCLS General Laboratory Safety (2a ed.). 1991.

17. Biosafety Guidelines for Diagnostic and Research Laboratories working with
HIV. WHO AJOS series (9). 1991.

18. The United Nations Committee of Experts on the Transport of Dangerous

Goods (UN ECOSOC). Recomendations on the ,Transport of Dangerous
Goods (10a ed.). 1997.

GUIA DE LABORATORIO 243 Biol. Ms C. Alicia Decheco Egusquiza

MICROBIOLOGIA II
UNFV/FIIS ANEXOS

19. UN European Agreement concerning the international carriage of

dangerous goods by road (ADR Agreernent, Geneva, 1957). Edition: 1999.
Convention conceming the International Carriage by Rail (COTIF).

20. The International Air Transport Association (lATA). "Dangerous Goods

Regulations (403 ed.). 1999.

21. The International Civil Aviation Organization (ICAO). "ICAO Technical

Instructions", made legally binding by Annex 18 to the Convention on
InternationaI Civil Aviation (the "Chicago Convention") of which Annex 18 is
Safe Transport of Dangerous Goods by Air, amplified by TechnicaI
lnstructions on the Safe Transport of Dangerous Goods, 1984.
Ultima ed.: 1999.

22. The International Maritime Organization (IMO, London). "International

Maritime Dangerous Goods,Code", made legally binding through Regulation
VII/1.4 of SOLAS Convention (International Convention for the Safety of Life
al Sea), 1974. ed,: 1995.

23. The World Health Organization (WHO). "Guidelines for the Safe Transport
of Infectious Substances and Diagnostic Specimens". 1997.

24. The World Health Organization (WHO). "Laboratory Biosafety Manual”.

1993. Lic. Erie Caballero
ecaballe@ewpanama.net

LABORATORIO CLINICO COMPLEJO HOSPITALARIO METROPOLITANO.

PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATOLICA DE CHILE
ESCUELA DE MEDICINA
MANUAL DE PATOLOGÍA QUIRURGICA

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MICROBIOLOGIA II
UNFV/FIIS ANEXOS

25. Versión en inglés revisada por: David R. Knowles M.D., Department of

Urology, New York-Presbyterian Hospital Columbia Campus, New York, NY.
Review provided by VeriMed Healthcare Network.
Traducción y localización realizada por: DrTango, ¡nc

26. ''http://www.arrakis.es/RlIuengo/bacteri2.gif' \*

27. http://www.arrakis.es/RlIuengo/logbacte.gif”\*

28. http://www.ugr.es/Reianez/Microbiologia/O:5 Micro.html

29. http://wwwnacion.co.cr.lneeESPECIALES.siglo.siglo7
siglo3html.

30 http://wwwcienciasunaes/publicacionesENCUENTRO 62/método.html.
ttp://edición-micro.usal.es/web/educativo
micro2/tema01.html

31. http://www.mw.nl!informamihtml/cienciapenicilina990902.html

32. http://wwwdanival.org/notasmicro/tinción_madre_tincion.html.

33. CROSA, J.H. (1989): Genetics and molecular biology ofsiderophore-

mediated iron transport ln bacteria. Microbiol. Rev. 53:517-530

34. GARBISU, CARLOS. et al (1999): Biotecnologia con Cianobacterías,

Investigación y Ciencia,Mayo: 64 -71 .

35. htlp:í/www.danival.org/notasmicro/tincion/-madre- fincion.html

GUIA DE LABORATORIO 245 Biol. Ms C. Alicia Decheco Egusquiza

MICROBIOLOGIA II
UNFV/FIIS ANEXOS

36. DR. B. MORENOGARCIA

Analisis Micróbio!ogico de los alimentos. Ed.Acribia. 1973

37. HERCHANT - PACKER

Bacteriología y Virologia Veterinarias. 23 Edicion Española. Ed, Acribia.
1965.

38. HARRY W. SEELEY: JR.lPAUL J VAl\f DENfARK

Manual de Laboratorio para Microbiologia. Editorial Blume. 1973.

39. JOHN T. NICKERSON. ANTHONY J. SINSKEY

Microbioogía de los alimentos y sus Procesos de Elaboración Ed. Ascribia.
1978.

40. F.S. THATCHER, D.S. CLARK

Análisis de los alimentos Ed. Acribia. 1973.

41. UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN MARCOS

VIII Cursointernacional de Microbiología e Higiene de los alimentos. Centro
Latinoamericano de Enseñanza e Investigación de Bacteriología Alimentaria
(LEEIBD)
Del 15 al 29 de agosto de 1982.

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MICROBIOLOGIA II