MICROSCOPIA

PRACTICA DE LABORATORIO N° 2
MICROSCOPIA

OBJETIVOS

 Identificar cada una de las partes del microscopio y aprender a utilizarlos

correctamente
 Formular y enumerar los cuidados básicos que se debe tener en cuenta en el
uso y manejo del microscopio durante las sesiones de practica

MARCO TEORICO

EL MICROSCOPIO

El microscopio es un instrumento diseñado para ser posible la observación y examen

de seres muy pequeños o los elementos formativo de uno de ellos y que están fuera de
la visibilidad adecuada del ojo humano. Hay varios tipos de microscopio, los más usados
y conocidos son los microscopios simples o lupa, los microscopios compuestos y el
microscopio binocular estereoscopio, luego podemos encontrar otros tipos de uso más
especializado en determinados campos de la biología y otras ciencias. El más
revolucionario en el campo biológico es el microscopio electrónico que usa como fuente
de funcionamiento un chorro de electrones

El microscopio simple (de un lente o varios lentes), es un instrumento que amplifica una
imagen y permite la observación de mayores detalles de los posibles a simple vista. El
microscopio más simple es una lente de aumento o un par de anteojos. El poder de
resolución del ojo humano es de 0,2 mm es decir que para ver dos objetos separados
estos deben estar como mínimo a esa distancia.

El microscopio aumenta la imagen hasta el nivel de la retina, para captar la información.

La resolución depende de la longitud de onda de la fuente luminosa, el espesor del
espécimen o muestra, la calidad de la fijación y la intensidad de la coloración.

Teóricamente la máxima resolución que se puede alcanzar es de 0,2 um dada por una
luz con longitud de onda de 540 nm, la cual pasa por un filtro verde (muy sensible por
el ojo humano) y con objetos condensadores adecuados. El ocular aumenta la imagen
producida por el objetivo, pero no puede aumentar la resolución.

Existen distintos microscopios ópticos generales y de investigación que se diferencian

en factores tales como la longitud de onda de la iluminación, del espécimen o muestra ,
la alteración física de la luz que incide en la muestra y procesos analíticos que se aplican
a la imagen final.
Microscopio compuesto

SISTEMA ÓPTICO

OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.

OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.

CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.

DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.

FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

SISTEMA MECÁNICO

SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.

PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.

CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular

REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los
objetivos.

TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que

consigue el enfoque correcto.

MATERIALES Y METODOS

 Microscopio
 Aceite de inmersión
 Xilol
 Papel filtro o papel de arroz
 Papel milimetrado
 Letra “e” minúscula recortada de periódico o revista
 Hebras de hilo
 Recorte de una figura o foto de revista
 Laminas portaobjetos
 Laminas cubreobjetos
 Gotero

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la

platina completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso
anterior, ya debería estar en esas condiciones.

2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas

metálicas

3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o

colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.

4. Para realizar el enfoque:

a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación,

empleando el tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando
directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de
incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos
o ambos.

b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando

lentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico y, cuando
se observe algo nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un
enfoque fino.

5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y

suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque
fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible
volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3.
El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello
es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se
descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si
se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión (100x)

Para realizar el proceso descrito anteriormente se utilizara como muestra o preparación

una letra “e” minúscula y una hebra de hilo, las cuales se colocaran sobre el centro de
un portaobjetos con el lado de debajo de la letra hacia arriba en el caso de la “e”
minúscula. Ponga una gota de agua sobre la muestra. Después de esperar unos
segundos hasta que el agua haya empapado el papel, coloque la laminilla (cubreobjetos)
sobre la preparación, si quedan algunas burbujas de aire se presiona ligeramente la
laminilla con un lápiz hasta que desaparezcan y continúe con el proceso

6. Dibujar lo que observa en cada aumento observado

Empleo del objetivo de inmersión (100x) : Bajar totalmente la platina

a. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de

luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar
el aceite.
b. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión
c. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre la muestra
en la lámina portaobjetos.
 d. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del
objetivo de inmersión
e. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta
que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la
gota ascendiera y se adosara a la lente.
f. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de
trabajo entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun
menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande
g. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación,
ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se
mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que
bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.
h. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la
platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En
este momento ya se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se
debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.
i. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel
especial para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está
perfectamente limpio.

Para realzar el proceso descrito anteriormente se usan preparaciones fijas previamente

coloreadas. Dibujar lo observado.

Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de
observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde
de la misma y dejarlo cubierto con su funda

CAMPO VISUAL

El campo de visión de un microscopio es la zona circular que se observa al mirar la

preparación bajo un determinado aumento. Para medir el campo de visión de un
microscopio, se debe usar una unidad llamada micra. Una micra equivale a 0,0001 mm;
en otras palabras, hay 1000 micras en un milímetro. El diámetro de este campo es su
medida.

Para calcular el diámetro del campo de visión para un determinado aumento hay que
seguir los siguientes pasos:
 Recorte un cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado
 Ponerlo sobre la abertura central del portaobjeto
 Observando por el ocular y con el objetivo de 4X, mover la muestra hasta lograr
que la línea 0 mm quede en el borde izquierdo del campo visual
 Enfocar con el objetivo de menor aumento 4X hasta que se vea con claridad.
Enfocar la preparación quiere decir situarla a la distancia del objetivo que permite su
observación nítida. Esta distancia se conoce como distancia de trabajo y es tanto menor
cuanto mayor es el poder de aumento del objetivo
 Medir el campo visual haciendo coincidir una de las líneas del papel milimetrado
con el borde del campo de visión
 Contar el número de milímetros que se ven (recuerde que la distancia entre dos
líneas es un milímetro) y estimar aproximadamente la fracción sobrante, si la hay. El
resultado será el diámetro del campo visual para ese aumento (objetivo x ocular).
 Si queremos calcular el diámetro del campo de visión para aumentos mayores,
hay que tener en cuenta que cuanto mayor sea el aumento, el campo será menor, es
decir, se verá menos de la muestra que estemos observando. De forma que, si el
 aumento es el doble, el campo será la mitad, si el aumento es el triple, el diámetro será
la tercera parte, etc. (inversamente proporcionales). Por tanto, bastará con realizar un
sencillo cálculo matemático para saber el nuevo diámetro.
 Dibujar lo observado
RECOMENDACIONES

 Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda
para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada,
se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.

 Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy
suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.

 No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio

 Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el
objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos
recomendable). En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y
con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que
limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este
tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las
lentes y su sujeción.

 No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico,

platina, revólver y condensador).

 El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la

preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de
objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a
través del ocular.

 Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido,
secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol.

CUESTIONARIO

1. Explique brevemente la definición del microscopio y su finalidad

2. Identifica en un grafico un microscopio compuesto y todas sus partes
3. Describa los diferentes tipos de microscopios
4. Explique la trayectoria del rayo de luz a través del microscopio y por que
se invierte la imagen que observamos
5. Defina: poder de definición del microscopio, poder de penetración o
profundidad, poder de resolución, campo de visión
6. Como se determina el aumento total (Xt) del microscopio óptico
compuesto
7. Por que se usa aceite de inmersión para utilizar el objetivo de 100x?

ANEXOS

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_microscopio1.htm
http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_microscopio2.htm
http://canal.unad.edu.co/laboratorio/index/main.html
Practica 2: Observacion de celulas animales y vegetales
Titulo: Observacion de celulas animales y vegetales
Introduccion: Las células son la porción más pequeña de materia viva capaz de realizar todas las
funciones de los seres vivos, es decir, reproducirse, respirar, crecer, producir energía, etc.
Existen dos tipos de células con respecto a su origen, células animales y células vegetales:
En ambos casos presentan un alto grado de organización con numerosas estructuras internas
delimitadas por membranas.
La membrana nuclear establece una barrera entre el material genético y el citoplasma.
Las mitocondrias, de interior sinuoso, convierten los nutrientes en energía que utiliza la planta.
Diferencias entre células animales y vegetales
Tanto la célula vegetal como la animal poseen membrana celular, pero la célula vegetal cuenta,
además, con una pared celular de celulosa, que le da rigidez.
La célula vegetal contiene cloroplastos: organelos capaces de sintetizar azúcares a partir de
dióxido de carbono, agua y luz solar (fotosínteis) lo cual los hace autótrofos (producen su propio
alimento) , y la célula animal no los posee por lo tanto no puede realizar el proceso de
fotosíntesis.
Pared celular: la célula vegetal presenta esta pared que está formada por celulosa rígida, en
cambio la célula animal no la posee, sólo tiene la membrana citoplasmática que la separa del
medio.
Una vacuola única llena de líquido que ocupa casi todo el interior de la célula vegetal, en
cambio, la célula animal, tiene varias vacuolas y son más pequeñas.
Las células vegetales pueden reproducirse mediante un proceso que da por resultado células
iguales a las progenitoras, este tipo de reproducción se llama reproducción asexual.
Las células animales pueden realizar un tipo de reproducción llamado reproducción sexual, en el
cual, los descendientes presentan características de los progenitores pero no son idénticos a él.

Materiales y métodos:
Microscopio
Porta objetos
Cubre objetos
Navaja de afeitar
Cebolla
Palillos
Agua
Lugol
Azul de metileno

Métodos:
Células vegetales
Toma una porción de cebolla, y quita cuidadosamente la membrana exterior
Colócala en un porta objetos,agrega una gota de agua y colocar encima el cubre objetos
Observa en el microscopio
Tomar la misma muestra y añade una gota de lugol y vuelve a observa en microscopio

Células animales

Poner una gota de agua sobre el portaobjetos

Con un palillo hacer un raspado en la pared interna de una de tus mejillas
Mezcla el raspado con la gota de agua del portaobjetos, coloca el cubreobjetos
Observa en microscopio
Tomar la misma muestra y añade una gota de azul de metileno y vuelve a observar en
microscopio
Resultados
Cuestionario
Menciona tres características principales de las células animales y vegetales R: Celula
vegetal: Presentan Cloroplastos, Vacuola centra, Vacuola centraCelula animal: Son
Heterótrofas, Poseen un organelo no membranoso, Poseen Glucógeno
Representa el esquema de una célula vegetal y una animal R:
¿Cual es la diferencia en la muestra de cebolla con y sin lugol? R: En la muestra con lugol
se pueden observar mejor los componentes y el tipo de textura de la capa de cebolla
¿Cual es la diferencia en la muestra de epitelio de mucosa oral humana con y sin azul de
metileno? R: En la muestra de azul de metileno se define mejor las células que conforman a la
muestra
Observaciones
Muestra de cebolla sin lugol: Se puede observar la muestra como un tipo de escamas con varios
cuadritos unidos
Muestra de cebolla con lugol: se puede observar que la muestra se tona de un tono amarillento y
las divisiones del cuadriculado se notan mas.
Mucosa oral sin azul de metileno: se nota muy tenue el núcleo de la célula con un parecido a un
gusanito de color verde
Mucosa oral con azul de metileno: Se nota bien definido el núcleo de la célula en forma circula y
tintado de azul.

Conclusiones
Las células vegetales y animales son un tanto parecidas a simple vista, pero al verlas
detenidamente en el microscopio se logra ver que por dentro son muy parecidas y gracias a
algunas sustancias se notan mejor los componentes que no se ven a simple vista.