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UNIVERSIDAD DE COLIMA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y AGROPECUARIAS.

P.E. LICENCIADO EN BIOLOGÍA

1°B

REPORTE DE PRÁCTICA II

Morfología y tinciones bacterianas.

Introducción.
Las bacterias son procariotas y se dividen en dos grupos: eubacterias y arqueobacterias; según el libro
de Darnell et al.: “Los procariotas incluyen todas las bacterias, divididas en dos linajes separados: las
eubacterias y las arqueobacterias. La mayoría de las bacterias son eubacterias; en general, cuando se
discute la estructura o el metabolismo bacteriano, se habla de las eubacterias” (Darnell et al., 1993).

 Arqueobacterias: presencia de ácidos grasos ramificados y nucleótidos; según el libro de Maillet:

“Las arqueobacterias se distinguen por la organización de su pared, la existencia de ácidos
grasos ramificados en la membrana plasmática y la presencia de nucleótidos particulares como la
N1-metilinosina, encontrada específicamente en los ARNt.” (Maillet, 2003)
 Eubacterias: Presencia de micoplasmas y cianobacterias; según el libro de Maillet: “Constituyen
una población heterogénea que comprende micoplasmas (parásitos de células animales y
vegetales, bacterias fotosintéticas y cianobacterias, que son autótrofas fotosintéticas, es decir,
utilizan la energía luminosa para sintetizar sus propios constituyentes.” (Maillet, 2003)
Agrupamiento morfológico general de las bacterias. Por su forma, las bacterias se clasifican en tres
grupos principales: 1) Bacilos u organismos en forma de bastón; 2) Cocos, de forma redonda o esférica y,
3) Espirilos, organismos en forma de coma o espiral, móviles (Brayan et al., 1981).

En la biología existen diversos

Objetivo.

Reconocer e identificar la morfología y formas bacterianas a través de la aplicación de técnicas

de tinciones simple, negativa y Gram

Metodología.

Materiales:

 Microscopio compuesto.
 Papel para lentes y líquido limpiador
 Aceite de inmersión
 Portaobjetos .
 Gotero.
 Pinzas.
 Cristal violeta 1%.
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 Lugol (Yoduro de Gram).

 Cajas de petri.
 Safranina 1%.
 Azul de metileno 1%.
 Etanol 95% o mezcla isopropanol/acetona
 (3:1 v/v) – En pizeta.
 Mechero bunsen.
 Asa bacteriológica.
 Pizetas con agua destilada.
 Papel secante.
 Plumón.
 Tinta china.
 Encendedor.
 Yogurt natural.
 Yakult.
 Hisopos.
 Levadura (5 g).
 Azúcar (10 g).

Procedimiento:

Durante la práctica se siguieron una serie de pasos para lograr observar las bacterias de
diferentes muestras como el yakult, levadura, yogurth natural y residuos de bacterias de la boca
y para lograrlo se utilizo técnicas de coloración. Los pasos que se siguieron fue rotular los
portaobjetos poniéndoles los nombres y se agregandoles una pequeña porción de muestras
para ser utilizado en cada tinción, las cuales fueron; (1) Tinción simple, en esta parte se preparó
1 lamina de cada cultivo para hacer el uso del frotis y así las bacterias quedaran adheridas al
portaobjetos y para después agregarle azul de metileno durante (60-90) segundos y a las otras
con cristal violeta (20-30 seg.), después se lavo con agua y se secó con papel secante para
finalmente observarse en el microscopio compuesto a 100X. (2) En la tinción negativa después
de poner una pequeña muestra en la esquina superior de la lamina se le agrega una o dos
gotas de tinta china para mezclarlas y así se desplazado por el centro con la utilización de un
portaobjetos formando un ángulo de 45° y dejar secar al aire libre, sin usar calor, después se
observara los residuos en el microscopio con una exploración de 4X para ver si el grosor de la
capa es ideal para que puedan ser vistas los microorganismos. (3) Y por último la técnica
siguiente fue la tinción de Gram en la que también se utilizó una lamina por muestra y lo que se
hizo con ellas es preparar el frotis como en la tinción simple, además se cubrió con cristal
violeta para que se tiñeran por 30 segundos y se lava con agua por 5 segundos, después se
utiliza yoduro de Gram por 60 segundos y se vuelve a lavar con agua destilada para que se
decolore con etanol 95% por (15-30 seg.) y lavar con agua para que finalmente se le agregue
safranina por 60-80 segundos y se lave con agua 5 seg. Y por último sea secado
cuidadosamente la lámina con papel secante y pueda ser observado en el microscopio a 100X.

Resultados.

Se utilizó las técnicas de tinción simple, negativa y Gram en 4 tipos de muestras las cuales son
la levadura, yakult, yogurth natural y saliva, para diferenciarlas y saber sus estructuras y formas
de las bacterianas y así clasifircarlas como se muestra en la imagen( Figura 1.). Como se
mostró en la metodología, la primera tinción en aplicarse fue la simple y se obtuvo resultados
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favorables ya que si se mostro las formas que tenían las bacterias como los cocos (esferas),
bacilos (barra) y espirales (Pommerville, 2011), esto se logró al usar azul de metileno y cristal
violeta, aunque muy poco se diferenciaban. Sin embargo en la tinta china al realizar este paso,
se cometió un error al desarrollar esta técnica ya que fue pasado por calor cuando no debía ser
así y lo que arrojo como resultados fue que no se logro ver las formas bacterianas. Después se
volvió a repetir el paso como debía de ser y esta vez se mejoró aunque, también no se logró
distinguir muy bien ya que al parecer agregamos una capa gruesa de tinta china, debido a eso
en esta técnica hubo complicaciones para clasificarla. En la tinción de Gram, este paso lo
repetimos 2 veces el proceso de coloración, ya que no se observar en el microscopio
compuesto.

a) b)

Materiales Forma bacteriana

Se observaron Bacilos, sien
do específicos lactobacillus
Yakult
Se observaron cocos, fáciles
de identificar por su forma
Yogurth esférica

c) d)
Se observaron cocos y
bacilos (diplobacilos y
Levadura streptobacilos) Figura 1. Muestras de bacterias sometidas a diferentes tipos de
tinción: a) Azul de metileno (tinción simple), b) Cristal violeta
(tinción simple), c) Tinta china (tinción negativa), y d) Tinción de
Gram.

Célula No se identifico
animal
Muestras comerciales.

Nostoc (a) es una cianobacterias y probablemente se encuentre entre los organismos más
primitivos que dependiendo del agua pudieron empezar a colonizar el medio terrestre, sólo
necesita la luz del sol y cierta humedad, el resto lo consigue por ella misma de una manera tan
eficiente, que probablemente se pierda en el origen de los tiempos de nuestro Planeta, cuando
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empezaron a surgir las primeras formas de vida. (Ortiz, 2010). Su descripción es que son
esférica y juntas forman una cadena irregular.

Bacteria capsule (b) muchas células bacterianas secretan algún material extracelular en forma
de una cápsula o una capa de limo. Una capa de limo está ligeramente asociada con la bacteria
y puede lavarse fácilmente, mientras que una cápsula está unida firmemente a la bacteria y
tiene límites definidos. Las cápsulas se pueden ver bajo un microscopio de luz colocando las
células en una suspensión de tinta china. (Kadner, 2018). Descripción: tiene una forma de
capsula se encuentra separadas y de diferente tamaño.

Bacterial spores (c) término para la forma inactiva de bacterias formadoras de esporas. La
formación de esporas bacterianas generalmente se desencadena por condiciones de
crecimiento desfavorables. Dependiendo del tipo de bacteria, las esporas se dividen en
endosporas, exoesporas, myxospores y quistes. Especialmente las endosporas se caracterizan
por una estructura compleja y resistencia a altas temperaturas (center, s.f.)

Oscillatoria (d) esta alga filamentosa no ramificada, que aparece sola o en esteras
enmarañadas, deriva su nombre de su movimiento oscilante lento y rítmico, que se cree que es
el resultado de una secreción de mucílago que aleja al filamento de la dirección de la
excreción. La reproducción es por fragmentación en la que las células cóncavas muertas
(discos de separación) separan las secciones del filamento (hormogonia), (Británica., 2016)

Anabaena (e) están hechos de pequeñas cuentas esféricas que se dividen con rapidez por el
arte de la magia de la vida, por eso parecen cuentas dobles hasta que se separan, pero en su
madurez no se independizan, prefieren la compañía de sus vecinas y hermanas y como en la
diatomea de ayer, Fragilaria forma largos filamentos que enjoyan el agua en la que viven.
Anabaena es una cianobacteria, un alga verdeazulada, tan antigua como la vida en la Tierra y
tan moderna quizá como todos los seres que vengan en tiempos futuros, (guilen, 2010).

Bacterias types (f) Las tres formas básicas de las bacterias son esféricas, en forma de barra y
en espiral. Las bacterias en forma de espiral pueden clasificarse aún más dependiendo en parte
de la cantidad de espiral que muestran. No todas las bacterias son capaces de causar
enfermedades, pero cada grupo basado en la morfología tiene al menos algunos
representantes que causan enfermedades, (LEANN MIKESH, 2017).

Ventajas y desventajas:

-Tinción simple: La muestra toma el mismo color; según el artículo de López-Jácome y cols.:
“Las tinciones se pueden clasificar como simples cuando toda la muestra se tiñe del mismo
color y se utiliza un sólo colorante (azul de lactofenol o tinta china) …” (López-Jácome, et al.,
2014).

-Tinción de Gram: Se observa más de un color por utilizar más de un colorante; según el
artículo de López-Jácome y cols.: “Es definida como una tinción diferencial, ya que utiliza dos
colorantes y clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y
bacterias Gram positivas” (López-Jácome, et al., 2014).

-Tinción negativa: Rodea y delinea las bacterias no teñidas; según el artículo de López-Jácome
y cols.: “La tinción negativa fue desarrollada originalmente para microscopia de luz con el fin de
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rodear y delinear las bacterias no teñidas u otros materiales biológicos” (López-Jácome, et al.,
2014).

a) b) c)

d) e) f)

Figura 1. Muestras de bacterias comerciales: a) Nostoc, b) Bacteria capsule, c) Bacterial spores, d) Oscillatoria, e)
Anabaena, y f) Bacterias types.

Discusión:

Las bacterias para lograr distinguirlas es necesario utilizar distintos tipos de tinciones, los cuales
ayudará para que se logre un contraste el fondo y con el microorganismo ademas de que esto
se hace para poder ver el tamaño, forma (tinción simple), capsulas (tinción negativa) y para
diferenciar entre tipos de bacterias (tinción de Gram), (Harley, 2002). Sin embargo su unidad de
medición son micrómetros y el tamaño de una bacteria media es de 2 - 5 , Escherichia
coli, (Rohde M, 2007), ademas de que la mayoría de ellas son de color transparentes siendo la
razón por la cual se realiza este desarrollo para poder observar la morfología. En la muestra de
levadura se encontraron cocos, en el yogurt lactobacillos y streptococos, en el yakult
lactobacillus y en la saliva al estar expustas a diversas bacterias las cuales podrían contener
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hasta 10 millones de diferentes pero la más común es streptococus mutans, que son los que
provocan las caries en los dientes.

Referencias:
da
Darnell, J., Lodish, H., Baltimore, D., Grinberg, D. (1993). Biología Celular y Molecular 2 edición. W. H.
FREEMAN AND COMPANY. Ediciones Omega, S.A, Barcelona.

López L, Hernández M, Colín C, Ortega S, Cerón G, Franco R. (2014). Las tinciones básicas en el
laboratorio de microbiología. Volumen: 3(1): Pp: 10-18. Laboratorio de Infectología, Centro Nacional de
Investigación y Atención a Quemados (CENIAQ), Instituto Nacional de Rehabilitación.

Maillet, M. (2003). Biología Celular: “Manual (Masson)”. Masson S.A. Barcelona, España.