UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA

“Norte de la Universidad Peruana”

FACULTAD DE INGENIERÍA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE INGENIERÍA SANITARÍA

SEDE CELENDÍN

“Año del Buen Servicio al Ciudadano”

MICROBIOLOGIA

 PRACTICA:

MEDIOS DE CULTIVO

 ALUMNO:

MAYTA NOVOA SALUSTIANO

 DOCENTE:

GISSELA FIORELLA PEREZ FLORES

 CICLO:

IV

 FECHA:

26 DE OCTUBRE DE 2017

CELENDÍN – CAJAMARCA
 I. INTRODUCCION

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y en
condiciones físicas optimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son
esenciales en el laboratorio de microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación,
conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproductibilidad de los resultados
obtenidos. Para el estudio de los microorganismos es indispensable contar entre otras cosas con
material y medios de cultivo estériles. En Microbiología la esterilización se define como “el proceso
mediante el cual se eliminan todos los microorganismos (incluyendo formas de resistencia) de un
objeto, medio o superficie” y su aplicación garantiza la ausencia de microorganismos en el material y
medios de cultivo a ser empleados. Existen diversos métodos de esterilización, entre ellos: calor
(seco o húmedo), filtración (para sustancias termolábiles y aire), radiaciones y aplicación de gas de
óxido de etileno (para jeringas y cajas de plástico). Un medio de cultivo está constituido por una
mezcla de agua y sustancias orgánicas e inorgánicas, los que en conjunto proporcionan los
requerimientos nutricionales para el desarrollo de los microorganismos.

II. OBJETIVOS

1. objetivo general

 Aprender y Conocer las diferentes formas de preparación de los medios de cultivo en el

laboratorio de microbiología.

2. Objetivos específicos

 Envasar los medios de cultivo de manera adecuada en las cajas de Petri.

 Aprendimos a pesar el (Simmons Citrato Agar) en la balanza analítica.

III. MARCO TEORICO

MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que

crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. La diversidad metabólica
de estos es tan grande que la variedad de medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de
cultivo universal adecuado para todos ellos, ni siquiera refiriéndonos a las bacterias con exclusividad.
El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los
microorganismos. La composición precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar, porque las
necesidades nutricionales varían considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes que
crecen bien en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan
determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.Se usa para determinar si el
organismo es capaz de utilizar el citrato como única fuente de carbono y compuesto amoniacales
como única fuente de nitrógeno. El medio contiene citrato sódico, fosfato de amonio y azul de
bromotimol como indicador; este se tornará azul cuando el medio se basifica. Las bacterias que
metabolizan el citrato liberan iones amonio al medio (degradación del fosfato amónico) lo que
provoca que este se alcalinice y el indicador vire azul.

Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato Mono amónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato de sodio
es la única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo bacteriano. Las
sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El cloruro de sodio
mantiene el balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que vira al color azul
en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial en base a que los microorganismos capaces de
utilizar citrato como única fuente de carbono, usan sales de amonio como única fuente de
nitrógeno, con la consiguiente producción de alcalinidad. El metabolismo del citrato se realiza, en
aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El
desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de
un medio alcalino, da origen a ácidos orgánicos que, al ser utilizados como fuente de carbono,
producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de
la producción de citrato permeasa.

Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, sembrar en superficie un inóculo ligero, usando un ansa
sin arrastrar el agar.

Incubación
A 35-37 ºC, durante 24-48 horas, en aerobiosis.
Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4 días de incubación.

Resultados
- Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.
- Negativo: el medio permanece de color verde debido a que no hay desarrollo bacteriano y no
Hay cambio de color.

IV. MATERIALES Y METODOLOGIA

Materiales.

 Balanzas Analítica
 Medios de cultivo (Simmons Citrato Agar)
 Espátulas
 Agua destilada
 Matraz Erlenmeyer de 50 ml
 Tubos de ensayo
 Mecheros
 Piseta
A. PROCEDIMIENTO

1. Encontramos la cantidad a pesar de agar nutritivo con la regla de tres simple.

2. Pesamos 6.5 gramos de agar nutritivo en la balanza analítica.

3. Medimos 100 ml de agua destilada.

4. Agregamos el agua destilada y el nitrato de Simmons a un matraz Erlenmeyer movemos para q se
disuelva el agar

5. Cubrimos con papel y amarramos con hilo pabilo

6. Ponemos al autoclave a esterilizar durante 15 minutos

7. Calentamos en el mechero haciendo movimientos suaves hasta lograr su completa disolución

8. Distribuimos en las cajas de Petri y dejamos enfriar.

9. Cuando esta frio observamos que tiene una consistencia gelatinosa.

V. CONCLUSIONES

 Esta práctica fue muy importante debido a que aprendimos a pesar el (Simmons Citrato
Agar) en la balanza analítica, preparar adecuadamente medios de cultivo, esterilizar y a
envasar adecuadamente cada uno de ellos en las cajas de Petri.

VI. BIBLIOGRAFIA
 Difco y BBL. 2003. Manual de Medios de Cultivo Microbiológicos
 Miller, KJ, 1987, microbiología general, Ed. Haurcourt Brace. Barcelona.

 Ortega, Y; Quevedo F. 1991. Garantía de la Calidad de los Laboratorios de Microbiología

Alimentaria. Organización Panamericana de la Salud. Arla S.A. México D.F.

 Kolter, R, 1990, microbiología, Madrid. Amaru editores.