La tabla compara tres generaciones de métodos de secuenciación de ADN por su longitud de lectura, tipo de ADN molde utilizado y método de secuenciación. La primera generación incluye el método de Sanger y permite lecturas de hasta 1 kb. La segunda generación, como Illumina y 454, realiza lecturas más cortas de 35 a 700 pb usando PCR. La tercera generación, como Pacific Biosciences y Oxford Nanopore, logra lecturas más largas de hasta 100 kb sin amplificación previa.
La tabla compara tres generaciones de métodos de secuenciación de ADN por su longitud de lectura, tipo de ADN molde utilizado y método de secuenciación. La primera generación incluye el método de Sanger y permite lecturas de hasta 1 kb. La segunda generación, como Illumina y 454, realiza lecturas más cortas de 35 a 700 pb usando PCR. La tercera generación, como Pacific Biosciences y Oxford Nanopore, logra lecturas más largas de hasta 100 kb sin amplificación previa.
La tabla compara tres generaciones de métodos de secuenciación de ADN por su longitud de lectura, tipo de ADN molde utilizado y método de secuenciación. La primera generación incluye el método de Sanger y permite lecturas de hasta 1 kb. La segunda generación, como Illumina y 454, realiza lecturas más cortas de 35 a 700 pb usando PCR. La tercera generación, como Pacific Biosciences y Oxford Nanopore, logra lecturas más largas de hasta 100 kb sin amplificación previa.
Tabla comparativa de métodos de secuenciación primera, segunda, tercera generación
LONGITUD DE MÉTODO DE GENERACIONES CARACTERÍSTICAS ADN MOLDE LECTURA SECUENCIACIÓN
Secuenciación de genes individuales.
Secuenciar hasta 96 muestras. Identificación de patógenos. 1 kb 1ra Método de Sánger Análisis de fragmentos. Molécula única Polimerasa Análisis de microsatélites
Utiliza enzimas, reacciones acopladas y
bioluminiscencia para controlar la liberación de pirofosfato. PCR por emulsión 500-700 pb Polimerasa (Pirosecuenciación) Roche - 454 Determinar una secuencia de DNA a Liberación de pirofosfato gran escala, aplicable a genomas completos, mediante luminiscencia. 2da Capacidad de extremo emparejado de Illumina – GA II inserción corta para la secuenciación Polimerasa (terminadores del genoma de alta resolución. reversibles) lecturas de extremo emparejado de PCR emulsión 35 pb inserción larga para un ensamblaje de secuencia eficiente. Secuenciación por ligación SOLiD (Applied Posicionamiento de nucleosomas Biosystems) Secuenciación de ARN de cadena PCR emulsión 50 pb Ligasa (octámeros con código sensible y secuenciación humana de dos bases)
Secuenciar miles de fragmentos
Helicose distintos de DNA. Molécula única 100 – 200 pb Polimerasa
Mejora la capacidad de asignación para
SMRT Pacifico la resecuenciación y simplifica el Biosciences ensamblaje de novo. Resolución de una sola molécula Molécula única 35,000 pb – 45 Kb Polimerización Mayor precisión de consenso Cobertura uniforme Uso de nucleótidos marcados con Illumina = HiSeQ, fluoróforos que bloquean de forma MiSeQ reversible la elongación de la cadena 3ra Molécula única 2x150 pb Secuenciación por síntesis Secuenciación completa de todo el genoma (humano, vegetal, animal) Perfil de expresión génica con ARNm- Seq Primer aparato que utiliza tecnología superconductora, usando fluidos integrados y micromaquinaria para Ion Torrent traducir la información de DNA a información digital. Molécula única 100 pb Polimerización No usa nucleótidos modificados químicamente
Se analiza el ADN de forma directa al
empujarlo a través de un poro suspendido en una membrana Los nucleótidos o letras que componen Molécula única 100 kb Nanoporos exonucleasa - Oxford Nanopore el ADN se diferencian debido a los acoplados cambios de corriente eléctrica que se producen durante su paso por la membrana.