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UNIVERSIDAD PRIVADA ANTONIO GUILLERMO URRELO

FACULTAD DE INGENIERIA
CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL Y PREVENCION DE
RIESGOS

ANÁLISIS MICROBIOLOGICO, FÍSICOS Y QUÍMICOS DE AGUA PARA


CONSUMO HUMANO-DESA CAJAMARCA.

INFORME DE PRACTICAS PREPROFESIONALES

INSTITUCION:
DIRECCION REGIONAL DE SALUD- CAJAMARCA

RESPONSABLES:

PRACTICANTE: MENDO HUAMAN, ALEXANDER ALBERTO

ASESOR: BIOLOGO Mg. SANCHEZ PEÑA, MARCO ALFREDO

CAJAMARCA, JULIO DEL 2018


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DEDICATORIA

Dedico este informe de prácticas a Dios, a mi familia y a mis maestros quienes


han sido motivo de inspiración dándome siempre todo su amor y apoyo,
permitiéndome saber que, en medio de tantas pruebas, todo se puede lograr.

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AGRADECIEMIENTO

A mi familia, por brindarme todo su apoyo, cariño y comprensión y acompañarme a


alcanzar una de las metas más importantes de mi vida.
Al Biólogo Jorge Rafael Salazar Cabañas, por brindarme esa grata oportunidad
para realizar mis prácticas y por colaborar con su apoyo en el ejercicio diario
durante el trascurso del ciclo de prácticas.
Al Biólogo Mg. Marco Alfredo Sánchez Peña, por confiar en mi persona y por
brindarme su asesoramiento técnico y también por el aporte que me dio durante el
desarrollo y culminación de mis prácticas.

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INDICE GENERAL

DEDICATORIA ........................................................................................................... 2

AGRADECIEMIENTO ............................................................................................... 3

RESUMEN ................................................................................................................... 6

ABSTRACT ................................................................................................................. 7

PRESENTACION ........................................................................................................ 8

INTRODUCCION ....................................................................................................... 9

CAPITULO I: ............................................................................................................. 10

GENERALIDADES................................................................................................... 10

1.TITULO ..................................................................................................................... 10

“ANÁLISIS MICROBIOLOGICO, FÍSICOS Y QUÍMICOS DE AGUA PARA


CONSUMO HUMANO-DESA CAJAMARCA.”..................................................... 10

1.1.DATOS GENERALES .......................................................................................... 10

1.7 MATERIALES Y EQUIPOS ................................................................................. 14

1.8.DESCRIPCIÓN DE
ACTIVIDADES ......................................................................................................... 16

CAPITULO II: ........................................................................................................... 19

MARCO TEORICO ................................................................................................... 19

CAPITULO III ........................................................................................................... 31

APLICACIÓN DE LA METODOLOGIA ................................................................ 31

CAPITULO IV: .......................................................................................................... 36

4.CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ...................................................... 36

4.1.CONCLUSIONES RECOMENDACIONES ....................................................... 36

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4.1.2.CONCLUSIONES ............................................................................................ 36

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ....................................................................... 39

APENDICE Y ANEXOS ........................................................................................... 41

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RESUMEN

El presente informe de prácticas preprofesionales tiene como objetivo,


complementar los conocimientos y dinamizar las capacidades en el análisis de la
calidad de agua mediante ensayos microbiológicos.

En este trabajo se ha logrado realizar el Analís de los principales parámetros tanto


físicos químicos y bacteriológicos del agua. Los parámetros establecidos e indicados
por la metodología seleccionada por la dirección ejecutiva de salud ambiental
indican la procedencia, cantidad de sustancias y niveles presentes en aguas naturales
y tratadas.

Las practicas preprofesionales se concluyó satisfactoriamente, brindando nuevos


conocimientos sobre el análisis bacteriológico y físico químicos del agua, se
realizaron en la dirección regional de salud Cajamarca(DIRESA), en el laboratorio
de aguas y alimentos de la dirección ejecutiva de salud ambiental Cajamarca
(DESA), donde se fue complementando la formación académica para el mejor
desenvolvimiento dentro del campo profesional.

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ABSTRACT

This report on Preprofessional practices aims to complement knowledge and


dynamize capacities in the analysis of water quality through microbiological tests.

In this work we have managed to make the Analís of the main parameters both
chemical and bacteriological physical water. The parameters established and
indicated by the methodology selected by the Executive Directorate of
Environmental Health indicate the origin, quantity of substances and levels present
in natural and treated waters.

The preprofessional practices were completed satisfactorily, providing new


knowledge on the bacteriological and Physical chemical analysis of the water, were
carried out in the Regional Directorate of Health Cajamarca (Direa), in the
Laboratory of water and food of The Executive Directorate of Environmental Health
Cajamarca (DESA), where it was complementing the academic training for the best
development within the professional field.

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PRESENTACION

El presente informe titulado “análisis microbiológico y fisicoquímico de la calidad


del agua en el laboratorio de la dirección ejecutiva de salud – Cajamarca” resalta la
importancia que tiene los análisis microbiológicos y fisicoquímicos del agua,
utilizado como indicador de calidad de agua y de esta manera comparar con la
normativa nacional si el agua que se consume está dentro de los parámetros
establecidos.

Las practicas pre- profesional fueron desarrolladas en la empresa dirección regional


de salud Cajamarca, llevadas a cabo desde el 28 de agosto del 2018 hasta el 25 de
noviembre del 2018 a cargo del Blog. Jorge Rafael Salazar Cabañas.

Las practicas pre- profesionales es una etapa de transición entre la vida como
estudiante y profesional el cual está orientada a la integración, profundización y
aplicación de los conocimientos técnicos, científicos y habilidades adquiridas.

En tal sentido el presente informe constituye una importante y fundamental


herramienta, contiene las actividades realizadas y funciones desempeñadas que
favorecieron al cumplimiento de los objetivos y resultados debidamente planteados
a partir de la identificación de las necesidades de la empresa.

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INTRODUCCION

El agua es un elemento esencial para la vida y todos somos conscientes, que es


necesario para todos los seres vivos, el agua forma parte te todos los procesos
naturales de la tierra, por lo que tiene un impacto en todos los aspectos de la vida.
Debido a que cada organismo depende del agua, esta se ha convertido en el eje
principal del desarrollo de la sociedad atreves de la historia.

Por lo general la calidad del agua se determina comprobando las características


microbiológicas, físicas y químicas de una muestra de agua con unas directrices de
la calidad del agua o estándares. En el caso del agua potable, estas normas se
establecen para asegurar un suministro de agua limpia y saludable para el consumo
humano y, de este modo, proteger la salud de las personas.

Este informe explicara los tipos de Análisis que se realiza al agua para consumo
humano y brindar información a las personas que soliciten un Analís de calidad de
agua además incluyendo un informe con sus resultados.

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CAPITULO I: GENERALIDADES

1. TITULO

ANÁLISIS MICROBIOLOGICO, FÍSICOS Y QUÍMICOS DE AGUA


PARA CONSUMO HUMANO - DESA CAJAMARCA.

1.1.DATOS GENERALES

1.1.1. DEL EJECUTOR

Apellidos y Nombres: Mendo Huamán, Alexander Alberto.

Semestre: Décimo ciclo.

Código: 70204552

Dirección: Jr. 22 de febrero M D L 6

Teléfono: 976091894

E-mail: alexmendoh27@gmail.com

Asesor UPAGU: Biólogo Mg. Marco Alfredo Sánchez Peña.

1.2.DATOS DE LA EMPRESA

Nombre: Dirección Regional de Salud Cajamarca (DIRESA.


Área: Laboratorio de Aguas y Alimentos de la Dirección Ejecutiva de Salud
Ambiental.
Dirección: Av. Mario Urteaga N° 500.
Teléfono: 076 363864 Anexo laboratorio: 158.
RUC: 20165645325.
Asesor de la empresa: Blgo. Jorge Rafael Salazar Cabañas.

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1.3.PERIODO DE PRÁCTICAS
Fecha de inicio: 28 de agosto del 2018.
Fecha de culminación: 25 de noviembre del 2018.

1.4.PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Cada día y con el pasar de los años, se observa que es muy importante la toma de
conciencia acerca de la conservación del agua, convirtiéndose en una necesidad
de dimensión mundial. Donde el equilibrio que mantenía el agua se ha roto, ya
que el hombre para obtener mejores beneficios económicos empezó a utilizar los
recursos ayudándose con la evolución de la industria, modificando la calidad de
esta.

El agua es considerada fuente de vida, la cual se ha convertido en el “basurero


del mundo”, pues allí va a parar todos los desechos producidos por el hombre.
Hasta ahora no sé ha tomado conciencia ya que las consecuencias han ido
incrementando por nuestra irresponsabilidad, pues este problema se seguirá
suscitando, puesto que con el pasar de los años los efectos seguirán
incrementando, del no hacer algo para remediar esta situación desde ahora antes
que sea demasiado tarde.

1.5. JUSTIFICACIÓN
Realizar las practicas pre - profesionales en el Laboratorio de Aguas y Alimentos,
tiene como propósito poder afianzar los conocimientos teóricos adquiridos en la
Universidad, para así poder desarrollar habilidades en el manejo de equipos de
monitoreo, el procesamiento de muestras de agua para el análisis fisicoquímico
y microbiológico y de esta manera poder proceder con responsabilidad
ambiental, frente a los diferentes problemas que afectan a la calidad de agua en
Cajamarca.

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1.6.OBJETIVOS:
1.6.1. Objetivo General

 Complementar los conocimientos adquiridos a lo largo de la carrera


profesional sobre el análisis de agua para consumo humano, a través del
desarrollo práctico en el laboratorio de aguas y alimentos de la Dirección
Ejecutiva de Salud Ambiental (DESA).

1.6.2. Objetivos Especifico


 Determinar los parámetros físicos químicos y bacteriológicos de un agua,
así como los limites existentes para consumo humano y conocer la
normativa vigente respecto al agua potable.
 verificar los conocimientos teóricos y prácticos en cuanto a análisis de
agua.
 Aprender los métodos de análisis de agua para consumo humano.
 Consolidar destrezas y capacidades para el ejercicio profesional futura.

1.7.METODOLOGÍA Y MEDIOS
1.7.1. Metodología
 Procesamiento de muestras de agua
 Método de filtración por membrana para los miembros de bacterias
coliformes totales y coliformes termo tolerantes; método aplicado
principalmente en aguas tratadas para consumo humano.
 Determinación de características físicas y químicas del agua para consumo
humano.

1.8.MEDIOS
 Caldo Lauril Sulfato.
 Caldo Ecoli.

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 Solución salina peptonada.


 PCA (Plate Count Agar).
 Agar m-FC.
 Agar Endo-Les.
 Agar Levine.
 Agar Violet red bile.
 Agar glucosa oxitetraciclina (OGA).
 Agar base OGYE.
 Agua triptona.
 Agua peptonada baferada.
 Caldo EC.
 Cloruro de Sodio.
 Agar Salmonella-Shigella (agar SS).
 Agar XLD.
 Tiosulfato de Sodio.
 Fosfato de Potasio.
 Dihodrogeno fosfato de sodio dodecahidratado.
 Ácido rosólico.
 Ácido nítrico.
 Ácido sulfúrico.
 Hidróxido de sodio.
 Agua destilada.
 Alcohol (70°, 96°).
 Aceite de inmersión.
 Lugol.

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1.9.MATERIALES Y EQUIPOS
1.9.1. Materiales
 Matraz de Erlenmeyer
 Vasos de precipitado
 Embudos
 Balones
 Frascos de vidrio boca ancha (250 ml ,500 ml, 11t.),
 Frascos de plástico (1lt.)
 Pipetas (1ml, 5ml, 10ml).
 Micropipetas
 Probetas (50ml a 1lt.)
 Placas Petri (100 x 15 mm y 60 x 15 mm)
 Filtros de membrana de nitrocelulosa (0.45 µ) para microbiología
 Hisopos
 Cartulinas (10 x 10 cm).
 Ice-pack.
 Cooler.
 Rejillas.
 Láminas portaobjetos.
 Laminillas cubreobjetos.
 Espátulas descartables.
 Mechero.
 Pinzas.
 Termómetro.
 Papel de esterilización.
 Cintas de PH.
 Gradillas.
 Bolsas estériles.

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 Fósforo.
 Imanes.
 Hilos de pabilo.
 Algodón.
 Gasa.
 Jabón.
 Detergente.
 Desinfectante (Tegol, biozim, etc.).
 Escobillas.
 Esponjas.
 Papel absorbente (papel toalla, papel higiénico).
 Depósitos de plástico.
 Plumón de tinta indeleble de delgada y gruesa punta, lapiceros, lápiz,
tableros, tajador, borrador, perforador, grapadora, clips, archivadores,
tijeras, etc.
 Hojas bond, cuadernos, libretas de apuntes, fólderes, separatas y libros de
laboratorio, manuales de equipos.

1.9.2. Equipos para el laboratorio


 Calentador y agitador magnético de medios
 Balanza analítica
 Incubadora capacidad 111 lt.
 Incubadora capacidad 53 lt.
 Estufa
 Autoclaves horizontales (medio y material limpio)
 Autoclave vertical (cultivos y material biocontaminado)
 Baños maría (capacidad 45 lt.)
 Baño maría pequeño (capacidad 14 lt.)

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 Microscopio
 Contador de colonias
 Espectrofotómetro
 Destilador
 pH-metro
 Multiparámetro
 Conductímetro
 Turbidímetro
 Productores de cloro
 Campana extractora
 Lámpara UV (30w)
 Equipo de filtración al vacío:
 Bomba al vacío.
 Embudos.
 Copas.
 Matraz Kitasato.
 Computadoras

1.9.3. Para el personal


 Nasos bucales
 Gorros
 Guardapolvos
 Guantes de látex

1.10. DESCRIPCIÓN DE ACTIVIDADES

Las actividades se realizan bajo la supervisión del jefe inmediato del laboratorio

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1.10.1. Orientación al usuario para una correcta toma de muestra, conservación


y remisión al laboratorio

Cuando los usuarios son nuevos se les da una explicación cómo tomar la
muestra correctamente tanto para análisis fisicoquímico y bacteriológico.

1.10.2. Recepción y registro de las muestras de agua


Se hace recepción de las distintas muestras de aguas tratadas y no tratadas; las
cuales son registradas con un código en un cuaderno esto se hace de forma
manual, luego se pasa a un Excel para ser guardada en un computador.

1.10.3. Preparación de medios de cultivo


Los medios que se preparan tan solo sirven para el análisis microbiológico los
cuales son: los agares MFC y Endo son para el método de filtro por membrana.

1.10.4. Procesamiento de muestras de agua para consumo humano


Análisis bacteriológico,fisicoquímico y quimico del agua, haciendo uso de los
diferentes métodos de análisis y utilizando diferentes equipos de medición.

1.10.5. Determinación de características físicas y químicas del agua

Sirve para evaluar parámetros de composición, vigilancia de agua de consumo


humano y vigilancia hídrica. Así como determinar turbidez, temperatura, pH,
conductancia, sólidos totales disueltos. Presencia de aluminio, fierro, cobre,
cromo, zinc, nitratos, nitritos, sulfatos y cloro libre residual.

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1.10.6. Análisis microbiológico del agua:

Sirve para determinar la presencia de coliformes totales, termo tolerantes o


fecales y heterótrofos.

1.10.7. Lectura y registros de resultados


Las lecturas bacteriológicas de debe tener en cuenta si se han procesado en
placas. Se debe ser minucioso al momento del conteo de colonias.

Las lecturas de los análisis fisicoquímicos nos dan cada equipo a usar, solo es
cuestión de anotar datos y saber que elementos se lecturará en cada equipo.

Esta información es de suma importancia, y se bebe tener cuidado con la


transferencia de datos a la base digital. En esta etapa, se pasa los datos del
libro de registros y los datos anotados de cada lectura.

1.10.8. Lavado y esterilizado del material Biocontaminado

Una vez que se ha hecho la lectura de placas, se debe proceder a esterilizar el


material biocontaminado, pues este contiene bacterias que puede afectar la
salud del personal.

1.10.9. Entrega de resultados

Los resultados obtenidos de cada análisis son registrados en una tabla de datos
para luego ser entregados y transcristos a cada uno de los informes
correspondientes.

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1.11. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

El cronograma de actividades se puede ver en el Anexo 01.

CAPITULO II: MARCO TEORICO


2. TÉRMINOS Y DEFINICIONES
2.1.EL AGUA:
El agua es un compuesto químico estable formado por la unión de dos elementos:
Hidrógeno (H) y Oxígeno (O). Ambos existen separadamente en la naturaleza y
son fundamentales para la creación y mantenimiento de muchos de los procesos
de los que somos testigos cotidianamente desde que nacemos.
(Avellaneda,R.,Peñareto.,P y Martin, M., 2011)

2.1.1. Agua potable:


Agua para consumo humano, es la que puede ser consumida sin restricción; y
debe cumplir con las normas de calidad promulgadas en documentos oficiales
por las autoridades locales o internacionales. (La Guia Metas, 2010)

2.1.2. Características del agua potable:


El agua potable no debe contener en ningún caso microorganismo considerado
patógeno y debe estar libre de bacterias indicadoras de contaminación fecal.
No debe contener sustancias o cuerpos extraños de organismo biológico,
orgánico, inorgánico en cantidades tales que la hagan peligrosa para la salud.
Deberá presentar sabor agradable y ser prácticamente incolora, inodora,
limpia y transparente. (Orellana, 2005)

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2.2.MUESTRA:
Parte o cantidad pequeña de una cosa que se considera representativa del total y
que se toma o se separa de ella con ciertos métodos para someterla a estudio,
análisis o experimentación. (Laboratorio de DINAMA, 1996)

2.3.ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA:


Son los procedimientos de laboratorio que se efectúan a una muestra de agua para
consumo humano, para evaluar la presencia o ausencia, tipo y cantidad de
microorganismos. (Resolucion numero 2115, 2007)

2.4.MICROORGANISMOS INDICADORES DE LA CALIDAD DEL AGUA:


2.4.1. Coliformes
Varios organismos patógenos de transmisión fecal-oral pueden estar presentes
en el agua cruda (agua natural que no ha sido sometida a proceso de
tratamiento para su potabilización), entre ellos bacterias como Salmonella sp,
Shigella sp, coliformes totales y fecales, los cuales han sido encontradas en
abastecimientos de aguas.
Las bacterias coliformes, son el principal indicador de la adecuación del agua
para uso doméstico, industrial, o de otro tipo. La experiencia ha demostrado
que la densidad del grupo de los coliformes es un indicador del grado de
contaminación y, por tanto, de la calidad sanitaria.

Cabe señalar, sin embargo, que, aunque se reconoce que la determinación de


la concentración de estas bacterias en el agua es un elemento crítico para
determinar el riesgo de enfermedades relacionadas al consumo de esta, no
existe una relación simple entre el nivel de coliformes en el agua con la
presencia de patógenos en la misma y el riesgo de enfermedades. (Peralta.,
2014)

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2.4.2. Coliformes totales:


El grupo coliforme se define como todas las bacterias Gram negativas en
forma bacilar que fermentan la lactosa a temperatura de 35 a 37 °C,
produciendo ácido y gas (CO2) en 24 horas, aerobias o anaerobias
facultativas, son oxidasa negativa, no forman esporas y presentan actividad
enzimática de la Bgalactosidasa (Ministerio de salud, 1998). Entre ellos se
encuentran los diferentes Escherichia coli, Citrobacter, Enterobacter y
Klebsiella.

La prueba más relevante utilizada para la identificación del grupo Coliformes


es la hidrólisis de la lactosa. El rompimiento de este disacárido es catalizado
por la enzima B-D- Galactosidasa. Ambos monosacáridos (la galactosa
después es transformada en glucosa por reacciones bioquímicas)
posteriormente son metabolizados a través del ciclo glicolítico y ciclo del
citrato. Los productos metabólicos de estos ciclos son ácidos y/o CO2. Para la
determinación de la B-
Galactosidasa se utilizan medios cromógenos tales como chromocult. (Elisa.,
C y Aura., L., 2008)

2.4.3. Coliformes fecales:


Los coliformes fecales también denominados coliformes termotolerantes,
llamados así porque soportan temperaturas hasta de 45°C, comprenden un
grupo muy reducido de microorganismos los cuales son indicadores de
calidad, ya que son de origen fecal. En su mayoría están representados por el
microorganismo E. coli pero se pueden encontrar, entre otros menos
frecuentes, Citrobacter freundii y Klebsiella pneumoniae estos últimos hacen
parte de los coliformes termo tolerantes, pero su origen se asocia normalmente
con la vegetación y solo ocasionalmente aparecen en el intestino.

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Los coliformes fecales integran el grupo de los coliformes totales, pero se


diferencian de los demás microorganismos que hacen parte de este grupo, en
que son indol positivo, su rango de temperatura óptima de crecimiento es muy
amplio (hasta 45°C) y son mejores indicadores de higiene en alimentos y en
aguas, la presencia de estos indica presencia de contaminación fecal de origen
humano o animal, ya que las heces contienen dichos microorganismos,
presentes en la flora intestinal y de ellos entre un 90% y un 100% son E. coli
mientras que en aguas residuales y muestras de agua contaminadas este
porcentaje disminuye hasta un 59%. (Elisa., C y Aura., L., 2008)

A. Echerichia coli:
Originalmente llamada Bacterium comune, fue aislada por primera vez en 1985
a partir de heces de niños; son bacilos estrechos de 1,1 a 1,5 µm de diámetro y
de 2 a 6 µm de longitud, se encuentran solos o en parejas, Gram negativos,
móviles por flagelos perítricos o inmóviles, anoxigénicos facultativos, poseen
metabolismo espiratorio y fermentativo. (Elisa., C y Aura., L., 2008).

Perteneciente a la familia Enterobariaceae, son coliformes capaces de producir


indol a partir de triptófano, en 21 +/- 3 horas a 44 +/- 0.5°C. También poseen la
enzima B- Galactosidasa, que reacciona positivamente en el ensayo del rojo de
metilo y pueden descarboxilar el ácido L- glutámico, pero no son capaces de
utilizar citrato como única fuente de carbono o de crecer en un caldo con cianuro
de potasio (KCN). (Elisa., C y Aura., L., 2008)

E. coli es la única especie dentro de las Enterobacterias que presenta la enzima


B-D- Glucoronidasa, que degrada el sustrato 4-metilumberiferil-β-D-
glucorónico (MUG), formando 4-metilumbeliferona, este producto tiene la
propiedad de emitir fluorescencia azul/verde cuando se ilumina con luz
ultravioleta. (Elisa., C y Aura., L., 2008)

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E.coli presenta características bioquímicas importantes que permiten la


diferenciación con otros coliformes, como ser positivo para la prueba de indol.
El indol es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido
triptófano. Las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar y
desaminar el triptófano con producción de indol, ácido pirúvico y amoníaco. La
prueba de indol está basada en la formación de un complejo rojo cuando el indol
reacciona con el grupo aldehído del p-dimetilaminobenzaldehído. Este es el
principio activo del reactivo de Kovac’s descrito más adelante. El medio de
cultivo utilizado debe ser rico en triptófano. (Elisa., C y Aura., L., 2008).

B. Salmonella:
El género Salmonella pertenece a la familia Enterobacteriaceae. Son bacilos
gram negativos móviles que no fermentan la lactosa, aunque la mayoría
producen sulfuro de hidrógeno o gas por fermentación de los hidratos de
carbono. Inicialmente, se agruparon en más de 2000 especies (serotipos) en
función de sus antígenos somáticos (O) y flagelares (H) (esquema de
Kauffman-White). Actualmente se considera que esta clasificación está por
debajo del nivel de especie: en realidad sólo hay dos o tres especies
(Salmonella enterica o Salmonella choleraesuis, Salmonella bongori y
Salmonella typhi) y los serotipos se consideran subespecies. Todos los agentes
patógenos entéricos, excepto S. typhi, pertenecen a la especie S. enterica. Por
convención, las subespecies se abrevian, de modo que el serotipo S. entérica
Paratyphy A se transforma en S. Paratyphi A. (Organizacion Mundial de la
Salud, (OMS), 2002)

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2.5.TIPOS DE SISTEMA DE AGUA

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2.6.SISTEMAS DE ABASTECIMIENTO DE AGUA

2.7.MUESTREO DE AGUA
El muestreo de agua es una actividad dirigida a la recolección de una pequeña
porción del total de la masa, de manera que represente lo más fidedignamente
posible la calidad de la misma, en el lugar y en el momento de obtención de la
muestra.

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La toma de muestras no sólo involucra el proceso de la obtención física de la


muestra, sino también la caracterización del ambiente del cual la muestra fue
tomada.

2.7.1. Monitoreo de agua para análisis bacteriológico.

2.7.1.1.Agua de corriente de ríos, aguas con escaso o nulo movimiento (lagunas,


reservorios), o agua de un depósito (tanque).
Para la recolección de muestra de agua, se debe sostener el frasco por la parte
inferior y sumergirlo hasta una profundidad de 20 centímetros, con la boca
ligeramente hacia arriba. Si se trata de una corriente colocar la boca del
frasco en sentido contrario a la corriente de agua.

2.7.1.2.Agua de un grifo en un sistema de distribución de agua potable.

 Limpiar y retirar del grifo cualquier tipo de materia extraña adherida a la


boca de salida. Abrir el grifo, hasta que alcance su flujo máximo y dejar
correr el agua durante dos minutos.

 El recipiente de muestreo (vidrio) no debe llenarse completamente, el


espacio de aire es útil para la homogenización de la muestra por el
Laboratorio.

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 Tener la precaución de ajustar fuertemente la tapa del frasco.

 Si las muestras contienen cloro, debe agregarse 0,1 ml., solución de


tiosulfato de sodio al 10%, antes de la esterilización, para eliminar la acción
bactericida del cloro.

2.7.1.3.Monitoreo de agua para análisis fisicoquímico.


 El frasco; debe ser de plástico (polipropileno) de 1 litro de capacidad, de
primer uso, con tapa rosca de boca ancha.

 Enjuagar los frascos con el agua a ser recolectada tres veces con la finalidad
de eliminar posibles sustancias existentes en su interior, agitar y desechar
el agua de lavado.

 Llenar hasta el límite del frasco, luego de tomada la muestra y cerrar


herméticamente.

 Rotular la muestra.

2.8.DESCRIPCIÓN DE LA METODOLOGÍA
2.8.1. Método de filtro por membrana (FM)
A. Definición
En relación con la técnica de FM, el grupo coliforme se define como los
anaerobios facultativos, gram-negativa, no formadora de esporas, en forma de
bastoncillos que se desarrollan en colonias de color rojo con una estructura
metálica (oro) brillo dentro de 24 horas a 35 ° C en un medio de tipo Endo que
contiene lactosa. Algunos miembros del grupode coliformes totales pueden

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producir color rojo oscuro, mucoso o colonias nucleadas sin brillo metálico.
Al verificarse estos se clasifican como colonias atípicas de coliformes.
Cuando se purifica los cultivos de bacterias coliformes se ponen a prueba,
producen citocromo oxidasa negativa y p-galactosidasa positivo en las
reacciones de los ensayos. (APHA-AWWA-WEF (2012) )

En general, rosa (no mucoide), colonias de color azul, blanco o incoloro que
carecen de brillo se consideran no coliformes por esta técnica.

B. Aplicación
La Turbidez causada por la presencia de algas, partículas, u otros materiales no
puede permitir que interfieran en el análisis de una muestra de volumen
suficiente para producir resultados significativos. Bajo coliformes se estima que
puede ser causada por la presencia de un alto número de no coliformes o de
sustancias tóxicas. La técnica MF es aplicable para el examen de las aguas
salinas, pero no las aguas residuales que han recibido sólo tratamiento primario
seguido de cloración debido a la turbidez en muestras de aguas residuales de
gran volumen que contiene metales tóxicos o compuestos orgánicos tóxicos,
tales como fenoles. Para la detección de coliformes totales en agua potable o
tratada y aguas residuales clorada o efluentes secundarios o terciarios, se usa un
método diseñado para la recuperación de organismo estresado. MF técnica
modificada para coliformes fecales en las aguas residuales clorados pueden ser
utilizados si se realizan pruebas paralelas durante un período de 3 meses con la
técnica de tubos múltiples de fermentación muestra comparabilidad para cada
sitio específico tipo de muestra. (APHA-AWWA-WEF (2012) )

El volumen estándar que filtrar para muestras de agua potable es 100 ml. Esto
puede ser distribuido entre múltiples membranas si es necesario. Sin embargo,
para fines de control especiales, tales como solución de problemas de calidad

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del agua o la identificación de coliformes avances en bajas concentraciones de


barreras de tratamiento, puede ser deseable para probar muestras de 1 - L. Si las
partículas evitar el filtrado de una muestra de 1-L a través de un único filtro,
dividir muestra en cuatro porciones de 250 ml para el análisis. Los Coliformes
totales en cada membrana se reporta como número de coliformes por litro. Los
volúmenes más pequeños de la muestra, será necesario que de origen o de las
aguas de recreo y de los efluentes de aguas residuales que tienen mucho más
altas densidades de coliformes. Comparaciones estadísticas de los resultados
obtenidos por el método de tubos múltiples y la técnica de MF arrojaron que el
MF es más preciso. Los Dato de cada corrida de prueba son aproximadamente
la misma información de calidad del agua, a pesar de que los resultados
numéricos no son idénticos para agua de consumo agua. (APHA-AWWA-WEF
(2012) )

2.8.2. Tipos de filtros


2.8.2.1.Filtros de profundidad
Están elaborados por un material fibroso (papel, asbesto o fibra de vidrio)
dispuesto al azar, de manera que dentro de la estructura del filtro se crean
vías tortuosas donde pueden quedar retenidos la mayoría de los
contaminantes presentes.

Presenta ventajas como la alta capacidad de retención de partículas sobre su


superficie y a través de toda su estructura y que permiten filtrar grandes
volúmenes. Presenta desventajas en cuanto a que no presentan un tamaño de
poro uniforme y existe la liberación, hacia el material filtrado, de partículas
y microorganismos que hayan crecido dentro del filtro. (ROJAS, 2007)

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2.8.2.2.Filtros de superficie o membrana


Elaborados generalmente de acetato de celulosa o nitrato de celulosa,
contienen poros de tamaño uniforme. Se pueden saturar rápidamente y la
velocidad de filtración a través de ellos es lenta.

2.8.2.3.Membrana de nitrato de celulosa


La nitrocelulosa es un material utilizado de manera habitual para la
fabricación de filtros de membrana. Estas membranas son de naturaleza
hidrofílica, con una microestructura muy uniforme lo que permite excelentes
niveles de retención de partículas y un comportamiento perfecto en pruebas
microbiológicas. (ROJAS, 2007)

Tienen una estructura de poro muy uniforme, lo que asegura una excelente
retención y un óptimo crecimiento microbiológico en muestras de agua,
bebidas, fármacos. (ROJAS, 2007)

2.8.2.4.Membrana de acetato de celulosa


Son de naturaleza hidrofílica, presentan una excelente estabilidad térmica,
permiten gran capacidad de carga y altas velocidades de flujo, por lo que
resultan apropiados para la esterilización y clarificación de soluciones
acuosas, alcohólicas y aceites.

Las partículas más grandes que el tamaño del poro son rechazados por la
superficie de la membrana y el remanente permanecen o se concentra allí. El
volumen del fluido y otras partículas finas de menor tamaño del poro pueden
pasar a través de la membrana al sitio de filtrado. (ROJAS, 2007)

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2.8.2.5.Métodos espectrofotometría ultravioleta


Espectrofotometría ultravioleta: Cuando una molécula absorbe energía
radiante en la región visible o ultravioleta, la valencia o los enlaces
electrónicos en la molécula se elevan a órbitas de más alta energía. Algunos
cambios moleculares menores también tienen lugar, pero son usualmente
enmascarados por la excitación electrónica mencionada. El resultado es que
por lo general se observan bandas de absorción moderadamente amplias tanto
en la región visible como en la ultravioleta. Existen muchos instrumentos para
realizar mediciones en ambas regiones. La región ultravioleta es de aplicación
general más limitada, aunque es particularmente apropiada para la medición
selectiva de concentraciones bajas de compuestos orgánicos. (Londoño, 2010)

CAPITULO III
APLICACIÓN DE LA METODOLOGIA
3. DESCRIPCIÓN DE LAS ACTIVIDADES REALIZADAS
3.1.RECEPCIÓN DE MUESTRAS

Antes de proceder con el análisis respectivo de la muestra de agua, es obligatorio


registrarlo en el “Libro de Registros” con todos los datos necesarios y requeridos.

Los datos son obtenidos de la etiqueta de cada muestra, en el caso de que faltaran
datos se solicitará la información a la persona encargada.

3.2. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO


Para procesar las muestras se prepara dos tipos de medios de cultivo: Agares y
Caldos. Dentro de laboratorio realizamos análisis bacteriológicos que consta de
coliformes totales y coliformes termotolerantes (o fecales).

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3.2.1. Agares.
Consta de dos tipos: Endo agar y MFC agar.

El primero de ellos es para los coliformes totales (34.5°C) y el segundo es para


los coliformes termotolerantes (44.5°C).

Se preparan de acuerdo con la etiqueta hallada en el envase. Los agares se colocan


en placas Petri pequeñas de vidrio, un aproximado de 5 ml. Se prepara la
cantidad necesaria y suficiente para poder proceder con los análisis y mientras
aun no estén en uso se conservan a una temperatura de 4°C en refrigeradora.

3.2.2. Caldos.
Consta de tres tipos caldo Lauril, caldo brilliant y caldo E.coli además de solución
salina peptonada. Se coloca en tubos de ensayo un aproximado de 9 ml. Para
caldo lauril y solución salina 10 ml. Para caldpo brialliant y E. coli.

Además, se preparan de acuerdo con la etiqueta del envase o marca del producto.

3.3.MÉTODO DE FILTRO POR MEMBRANA FM.

3.3.1. Materiales y equipos


 Lampara UV(30w).

 Bomba de vacío.

 Embudo.

 Colectores de vacíos.

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 Pinza.

 Filtros de 0.45µm.

3.3.2. Medios.
 Agar Endo.

 Agar MFC.

3.3.3. Procedimiento

3.3.3.1.Para coliformes totales

 Esterilizar el equipo de filtración (colectores de vacío y


embudo) con ayuda de la lámpara UV durante 5 minutos.

 Colocar un filtro de nitrocelulosa estéril de 0.45 µm con la


superficie cuadriculada hacia arriba sobre la porta filtros
poroso del embudo, utilizando pinzas.

 Homogenizar la muestra mediante la agitación y filtrar 100 ml


de volumen.

 Una vez finalizado el proceso de filtración apague la bomba y


retire el embudo o vaso de filtración, quite de inmediato el filtro
de membrana con pinza estéril y colocar la membrana en la
placa con el medio agar Endo LES.

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 La placa de Petri con el filtro se coloca en la incubadora en


forma invertida por un tiempo de 24 ± 2 h a una temperatura de
35±0.5°C.

3.3.3.2.para coliformes Termotolerantes

Esterilizar el equipo de filtración (colectores de vacío y embudo)


con ayuda de la lámpara UV durante 5 minutos.

Colocar un filtro de nitrocelulosa estéril de 0.45 µm con la


superficie cuadriculada hacia arriba sobre la porta filtros poroso
del embudo, utilizando pinzas.

Filtrar 100 ml de volumen de agua de la muestra.

Retirar el filtro con pinzas estériles y colocarlo sobre la placa con


medio de cultivo M-FC.

La placa de Petri con el filtro se coloca en la incubadora en forma


invertida por un tiempo de 24 ± 2 h a una temperatura de a una
temperatura de 44.5±0.2°C.

3.3.4. Lectura
Transcurridas las 24 horas de incubación se retira las placas y se
procede a verificar la presencia o ausencia de colonias:

Para coliformes totales las colonias tienes un color característico de


rojo metálico.

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Para coliformes termotolerantes las colonias tienes un color


característico de azul metálico.

3.4.PROCESAMIENTO PARA ANÁLISIS FÍSICOS Y QUÍMICOS


3.4.1. Muestras fisicoquímicas

A. Se agita la muestra y se procede se realizar las mediciones con el


multiparámetros, turbidímetro y colorímetro (parámetros físicos).

 pH.

 Cloro.

 Turbidez.

 Conductividad.

 Sólidos Totales Disueltos.

 Temperatura.

Para realizar los análisis químicos tenemos en cuenta el manual


del equipo (Marca HACH, Modelo DR4000UV).

 Sulfato.

 Hierro.

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 Cobre.

 Cromo.

 Nitrito.

 Nitrato.

 Aluminio.
Con la ayuda de diferentes equipos de medición se obtienen los
parámetros físicos y químicos del agua para consumo humano.

CAPITULO IV
4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
4.1. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
4.1.2. CONCLUSIONES
 Se amplió los conocimientos en la realización de análisis
fisicoquímicos, bacteriológicos y parasitológicos dentro de laboratorio
dentro del laboratorio de Aguas y Alimentos de la Dirección Ejecutiva
de Salud Ambiental de la Dirección Regional de Salud Cajamarca.

 Evalué mi desenvolvimiento personal y profesional.

 Se logró conocer y aplicar las normas, D.S N° 031-2010 SA


“Reglamento de la calidad del agua para consumo humano” y el D.S

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N° 004-2017 – MINAM “Estándares nacionales de la calidad


ambiental del agua” para la evaluación de calidad del agua.

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4.2. RECOMENDACIONES

 Para un buen análisis e interpretación de las metodologías de ensayos


fisicoquímicos del agua, calibrar los equipos cada vez que se requiera.

 Tener ordenadas todas las áreas con el fin de facilitar el trabajo.

 Implementar un Plan de Gestión Ambiental.

 Buscar la acreditación con la Norma ISO 17025 - Requisitos Generales para


la Competencia de los Laboratorios de Ensayos y Calibración.

 Realizar mantenimiento periódico de la infraestructura.

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REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

APHA-AWWA-WEF (2012) . (s.f.). En “Standard Methods for the Examination of


Water and Wastewater”. (págs. 185-190). EE:UU 21thEdition.
Avellaneda,R.,Peñareto.,P y Martin, M. (noviembre de 2011). El Agua es Vida.
Obtenido de http://www.aeci.org.pe/publicaciones/store/pub.54.pdf
Elisa., C y Aura., L. (12 de 2008). Validacion Del Metodo de Deteccion de Coliformes
Totales y Fecales en Agua Potable. Obtenido de
http://javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis203.pdf
Enumeracion Bacteriana. (s.f.). Obtenido de el numero mas probable (s.f):
https://www.uprm.edu/biology/profs/massol/manual/p4-nmpenumeracion.pdf
La Guia Metas. (Enero de 2010). Obtenido de Medicion de turbidez en la calidad del
agua: http://www.metas.com.mx/guiametas/La-Guia-MetAs-10-01-Turbidez.pdf
Laboratorio de DINAMA. (1996). Obtenido de
http://imasd.fcien.edu.uy/difusion/educamb/docs/pdfs/manual_dinama.pdf
Londoño, A. G. (2010). Métodos Analíticos para la Evaluación de la Calidad
Fisicoquímica del Agua- colombia. blamecolor Ltda.
Orellana, J. A. (2005). Carcteristicas Del Agua Potable. Obtenido de
https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/civil/ing_sanitaria/Ingenieria_Sanitar
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del agua potable": www.who.int/water_sanitation_health/dwq/gdwq3_es_11.pdf
Peralta., A. P. (11 de 12 de 2014). tesis de grado. Obtenido de
http://repositorio.utp.edu.co/dspace/bitstream/handle/11059/4927/628161P227.pdf?se
quence=1
Procedimiento de analisis de coliformes por filtro por Membrana. (25 de 08 de 2008).
DIGESA, 08.

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Resolucion numero 2115. (22 de Junio de 2007). Obtenido de


http://www.minambiente.gov.co/images/GestionIntegraldelRecursoHidrico/pdf/Legis
laci%C3%B3n_del_agua/Resoluci%C3%B3n_2115.pdf
ROJAS, N. I. (2007). “Validación de la retención Microbiana en los filtros de acetato
y nitrato de celulosa empleados de la técnica de filtración por membrana para la
prueba de esterilidad”. Obtenido de (tesis doctoral en internet), Pontificia Universidad
Javeriana- BOJOTA : http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis21.pdf

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APENDICE Y ANEXOS
ANEXOS 01. TABLA DE CRONOGOGRAMA DE ACTIVIDADES

Fecha
Agosto Septiembre Octubre Noviembre
ACTIVIDADES S1 S2 S3 S4 S1 S2 S3 S4 S1 S2 S3 S4 S1 S2 S3 S4
Orientación del usuario X X X X X X X
Recepción y registro de
muestras X X X X X X X X X
Procesamientos de
muestras X X X X X X X X X X X X
Lectura y registro de
resultados X X X X X X X X X X X
Entrega de resultados X X X X X X X X X X X
Preparación de medios
de cultivo X X X X X X X X X X X X

ANEXOS 02. FORMATO: ETIQUETA PARA ROTULAR MUESTRAS

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ANEXO 03: Formato de Resultados microbiologico (Ejemplo de Reporte)

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ANEXO 04: formato de resultados fisicoquímicos

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ANEXO 05: Equipos para medir parámetros fisicoquímicos.

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