Lista de Eng Enzimática – Prova 4

Ex 1.

A hidrólise de pirofosfato a ortofosfato é uma reação acoplada importante para deslocar o

equilíbrio de reações biossintéticas, por exemplo a síntese de DNA. Esta reação de hidrólise é
catalisada por uma pirofosfatase que possui massa de 120.000 g/mol e consiste de seis
subunidades idênticas. Para esta enzima, a unidade de atividade enzimática é definida como a
quantidade de enzima necessária para hidrolisar 10 µmol de pirofosfato em 15 minutos a 370C.
A enzima purificada possui Vmax = 2800 unidades por miligrama de enzima.

a) Quantos mols de substrato são hidrolisados por segundo por miligrama de enzima
quando a concentração do substrato for muito maior do que o Km?

b) Quantos mols de sítios ativos existem em 1 mg de enzima? Assuma que cada

subunidade possui um sítio ativo.

c) Qual é o kcat da enzima?

Ex 2
Suponha que uma enzima mutante ligue-se com o substrato com uma afinidade 100x maior do
que a enzima selvagem. Qual é o efeito desta mutação sobre o turnover (kcat) considerando-se
que a interação com o estado de transição não foi afetada? (considere que a velocidade da
reação se mantem constante)

Ex 3
A cinética de uma enzima foi medida em função da concentração de substrato na presença e
ausência de 2 mM do inibidor “I”.

a) Quais são os valores de Vmax e KM na ausência e presença de inibidor?

b) Qual é o tipo de inibição?

Ex 4
A enzima urease aumenta a velocidade da hidrólise da uréia em pH 8,0 e 20º C por um fator de
1014. Uma dada quantidade de urease pode hidrolisar completamente uma certa quantidade
de uréia em 5 minutos a 20º C e pH 8,0.

a) Quanto tempo (em anos) levaria para que essa mesma quantidade de uréia
fosse hidrolisada sob as mesmas condições na ausência da urease?
b) Dois tipos de urease (A e B) foram isoladas de 2 espécies de animais
diferentes. As enzimas possuem a mesma Vmáx, mas diferentes valores de
Km. A enzima A tem Km=2 µM e a enzima B tem Km=0,5 µM. Qual destas
enzimas possui maior afinidade pelo substrato?
c) Para as duas ureases (A e B) foram realizadas experimentos cinéticos e o
gráfico resultante está mostrado abaixo. Aponte qual é a curva que
corresponde a Urease A e qual corresponde à B, e demonstre como você
chegou a esta conclusão.

Ex 5.

Explique matematicamente (a partir da equação do Km) a relação entre o aumento e

diminuição do Km e a afinidade de uma enzima ao seu substrato quando a etapa lenta
for [ES]  E + S.
𝐾1 𝐾2
E + S ⊲ 𝐾−1 ⊳ ES ⊳E+P

(Obs: Na maioria das enzimas, porém, K2 >>>> K-1. Veja que a relação entre Km e afinidade se torna
muito mais complexa. Por isso disse na aula que não podemos associar sempre Km a afinidade)

Ex 6

As propriedades de uma ATPase isolada de levedura, que cataliza a hidrólise de ATP

em ADP + Pi (produção de energia intracelular), foram medidas com várias
concentrações de ATP e uma quantidade de ATPase igual a 0,60μM. Deste
experimento obteve-se Vmax = 1.20 μM/s; KM = 40 μM.
 a) Calcule o valore de kcat e a eficiência catalítica da enzima nas condições
avaliadas.

b) Um inibidor foi adicionado em uma concentração de 0.1 mM e o experimento

repetido. O valor aparente de Vmax e KM obtidos foram 0.6 μM/s e 20 μM,
respectivamente. Qual este tipo de inibição? Justifique.

Ex 7
A enzima luciferase em vaga-lumes catalisa a modificação da luciferina, consumindo
tanto luciferina quanto ATP e produzindo luz (você provavelmente pode adivinhar a
função dessa reação). Supondo que ATP esteja em excesso, a reação segue o
mecanismo de Briggs-Haldane, com a luciferina como substrato limitante.
Uma série de experiências são realizadas em que a enzima luciferase 5 μM é misturada
com várias concentrações de substrato S0 e as taxas de reação relativas são medidas em
termos de taxas de emissão de luz, medidas usando um tubo fotomultiplicador:

S0 (μM) Unidades de Luz (RLU)

5 3554
10 6262
20 10115
40 14611
80 18786
200 22672
500 24718
1000 25484

a) Estime Vmax e KM.

b) Quando a concentração do substrato é de 1000 μM e a produção de luz é
monitorada durante um período de tempo, a taxa de reação permanece
relativamente constante por aproximadamente 5,0 minutos (300 segundos),
após o que diminui rapidamente para quase zero.
Estimar o kcat (em s-1) e a eficiência catalítica.

Ex 8
Pretendeu-se estudar a fosfatase alcalina da Escherichia coli através da hidrólise do
para-nitro-fenil-fosfato (PNPP), composto cuja massa molecular é igual a 371,15 g.mol-1.
Preparou-se uma solução mãe de PNPP com a concentração de 1,3 g.L-1. Ao fim de 1 min de
reacção quantificou-se a formação de PNP, um dos produtos da hidrólise do PNPP, por leitura
da absorvância a 410 nm. Utilizando os dados fornecidos na tabela abaixo, determine
graficamente os parâmetros cinéticos da fosfatase alcalina.

Nº tubo 0 1 2 3 4 5
Tampão (ml) 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0
PNPP (ml) 0,0 0,2 0,3 0,5 1,0 1,5
Água (ml) 2,5 2,3 2,2 2,0 1,5 1,0
 Enzima (ml) 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
Absorbância após 1 min 0 0,147 0,167 0,190 0,212 0,231

Ex 9

Calcule o tempo necessário para a conversão de 99% de uréia em amônia e dióxido de

carbono em um reator em batelada de 0,5 dm³. A concentração inicial da uréia é de 0,1
mol/dm³ e a concentração de urease é igual a 0,001 g/dm³. A reação é conduzida de
forma isotérmica. Num experimento anterior foram determinados Km e Vmax a 5g/dm³
de urease (0,0266 mol/dm³ e 1,33 mol/dm³.s, respectivamente). (Considere Vmax = k2 .
E0).

Ex 10
Para cada alternativa a seguir, indique se V ou F, justifique cada resposta:

a) a unidade de medida de km é velocidade por segundo;

b) km = (k2 + k-1)/k1 ;
c) km é igual à concentração de substrato que resulta em velocidade máxima de reação;
d) Em concentração muitas altas de substrato, a velocidade de reação é independente da
concentração do substrato;
e) A concentração do complexo ES permanece constante ao longo da reação;
f) A concentração da enzima é normalmente muito mais baixa que a concentração do
substrato;
g) A velocidade de reação é igual ao produto da concentração do complexo ES pela constante
k2, ou: Vo = [ES] x k2.

Ex 11
O estudo cinético realizado em laboratório mostrou que a hidrólise da maltose pela
glucoamilase segue uma lei de Michaelis-Menten com as seguintes constantes cinéticas: Vmax
= 10 mol de maltose/min . mg de glucoamilase; Km = 35 mmol de maltose/L.

Pretende-se construir um reator contínuo com S0 = 1,0 mol/L e vazão de 1 L/min de maltose
com hidrólise de 95%.

a) Se adicionarmos na vazão de alimentação 2,0 g/L de glucoamilase, qual o volume de

reator agitado (CSTR) necessário?
b) Determinar o volume correspondente de reator, levando em conta a inibição de
glucoamilase pela glicose, sendo a constante de inibição igual a 10 mmol de glicose /L,
Km’ = Km (1+P/Kp) e 1 Maltose  2 glicose