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INTRODUCCION
La radiación de absorción ultravioleta o visible proviene de la excitación de los
electrones enlazantes y como consecuencia, las longitudes de onda de los
picos de absorción pueden correlacionarse con los tipos de enlaces que existen
en las especies en estudio. La espectroscopia de absorción molecular es por
tanto valiosa para la identificación de los grupos funcionales de una molécula.
Sin embargo, son más importantes las aplicaciones de la espectroscopia de
absorción ultravioleta y visible para la determinación cuantitativa de
compuestos que contienen grupos absorbentes o también llamados cromoforos
de hecho la aplicación más generalizada de relevancia biología es la medida de
concentración de proteínas, NADH y ácidos nucleicos, porqué en la mayoría de
los casos hay una relación directa y simple entre el número de moléculas
presentes y la absorción.
El espectro UV / V de un biopolímero es una huella dactilar y como tal puede
usarse en ocasiones para identificarlo. La gran utilidad de tales medidas radica
en la alta sensibilidad, la sencillez de la medida y el hecho de hacerse en
disolución; aunque no es posible estas medidas en sistemas biológicos
intactos, es decir en vivo, tales como tejidos debido a que estas radiaciones es
fuertemente dispersada.}

OBJETIVO:
determinar la cantidad de proteínas en una muestra de gelatina comercial,
aplicando el método espectrofotométrico en la región ultravioleta.

MATERIALES Y METODOS:
 Muestra de gelatina comercial (rojo y amarrillo zuko)
 Suero albumina bobina
 Tubos de ensayo de 10ml
 Balanza analítica
 Espectrofotómetro
 Pipetas automáticas
 Matraces aforados de 10 ml
 Vasos de precipitación
 Tubos de ensayos
 Pipetas graduadas
REACTIVOS: agua destilada
PREPARACION DE LA MUESTRA:
 Pesar aproximadamente 0,5 g de una gelatina comercial
 Disolver en un mínimo volumen
 Dejar enfriar y llevar a 100 ml con agua destilada
 Toma una muestra y medir la absorbancia de dicha solución a λ: 280 nm
en un espectrofotómetro UV- visible
 Calcular la concentración de proteína en la muestra expresada en ppm a
partir de la curva de calibración determinada.

FUNDAMENTO TEORICO:
Las proteínas poseen una banda de absorción en la UV entre 190 y 290 nm
debida fundamentalmente a la presencia de aminoácidos aromáticos (tirosina,
triptófano y fenilalanina).
El método se basa en la medición de absorbancia a 280 nm. Es un método
simple, rápido y no destructivo.

PROCEDIMIENTO:
 Preparar un padrón de SAB (1000pm (100 mg/l)
 Tomar 2; 4; 6; 8 de la solución de proteína estándar (1000 ppm)
 Colocar cada volumen en distintos tubos de ensayo aforado de 10 ml
 Llevar a volumen cada matraz con agua destilada
 Tomar 2 ml de las soluciones finales y medir la absorbancia de dichas
soluciones a λ: 280 nm en un espectrofotómetro UV-VISIBLE
 Construir una curva de calibración graficando las absorbancias leídas a
280 nm vs. La concentración de proteína.

CALCULOS:

CONCENTRACION ABSORVANCIA
0.2 0.1271
0.4 0.2412
0.6 0.3617
0.8 0.4833
1 0.6063
0.7

0.6

0.5
Absorvancia

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
Concentracion
W de la gelatina= 0.5019 g  501.9 mg

Y= a + bx 4.63 𝑚𝑔
PPm= 𝑥106
𝑦−𝑎 501.9 𝑚𝑔
X= 𝑏
0,2826−0,00377
PPm= 9224.95 mg/ kg
X= = 0,4628 𝑚𝑔
0.60025

X= 0,4628 𝑚𝑔 → 501,9𝑚𝑔
X -> 100
X= 0.0922%