“Práctica N°2: DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD

ENZIMÁTICA DE LA AMILASA”

Introducción

Las enzimas son proteínas con capacidad biocatalítica, estas aceleran reacciones
biológicas disminuyendo la energía de activación. Las manera en como lo hacen es
convirtiendo los sustratos a productos “Entre las muchas reacciones biológicas que
son energéticamente posibles, las enzimas canalizan selectivamente los reactantes
(denominados sustratos) en vías útiles.” (A. Harvey & R. Ferrier, 2011, pág. 53)

En este informe se dará a conocer el proceso de como determinamos la actividad

enzimática de la Amilasa, que es una enzima que degrada almidón, comúnmente es
conocida como la enzima salival
.
Los objetivos a tomar son:
 Comprender la importancia de la actividad enzimática.
 Determinar la actividad enzimática.
 Comprender que es un sustrato y un producto.
 Observar los resultados finales y saber interpretarlos.

Materiales

Materiales

 Almidón bufferado (Sustrato)

 Solución de NaCl

 Agua destilada

 HCL 0.05 N

 Solución Yodada

 Reactivo de Benedict cualitativo

 Solución de alfa amilasa al 1% (Enzima)

 Tubos de ensayo

 Pipetas
 Metodología

¿Cómo es que logramos medir la actividad enzimática? La respuesta a esta pregunta es por

medio del Sustrato y el producto, para ello hemos realizado la siguiente práctica en el

laboratorio.

A. Sistema de Incubación

1. Añadimos 5ml de almidón bufferado en dos tubos de ensayo

2. Agregamos 1ml de NaCl en los dos tubos anteriores para el entorno de Ph

3. Se agregó a un tubo 4 ml de agua destilada y al otro 3ml

4. Se calentaron los tubos a una temperatura de 37°C por 5 min

5. Obtuvimos la a-amilasa enjuagando la boca y luego se receptándolo en una probeta,

filtrándolo con papel filtro.

6. Colocamos la a-amilasa solo en el tubo 2.

7. Cometimos a una incubación de 37°C por 15 min

B. Determinación de actividad enzimática de la amilasa

1. Agregamos a otros dos tubos 5ml de HCl 0.05 N

2. De los 2 tubos de la etapa “A” añadimos 0.5ml a los tubos de la etapa “B”

3. Añadimos 0.5ml de solución yodada a ambos tubos para comprobar la ausencia del

almidón

C. Determinación de los productos de la reacción (azúcares reductores)

1. De los tubos de la etapa “A” transferir 1ml a los nuevos tubos de la etapa “C”

2. Agregar 5 ml de Benedict cualitativo a los tubos de la etapa “C”

3. Calentar ambos tubos a ebullición por 10 minutos. Mezclar ambos tubos por inversión.
 Resultados

Resultados de la etapa B

Tubo 1: Color azul oscuro.

Tubo 2: Color ámbar.

Resultados de la etapa C

Tubo 1: Color celeste.

Tubo 2: Color celeste oscuro, en el precipitado color rojo ladrillo.

Discusión

Discusión de la etapa B

Al agregar la solución yodada en el 1er tubo “B”: Se tornó de coloración azul puesto que el

Iodo se coloca en el interior de la hélice que forma la amilosa (sustrato) en las regiones

hidrofóbicas, formando un complejo de color azul muy oscuro.

Al agregar la solución yodada en el 2do tubo “B”: Se mostró un color ámbar en el tubo puesto

que la a-amilasa había degradado la amilosa, había desintegrado la hélice y por tanto en

presencia de la solución yodada dio un color ámbar.

Discusión de la etapa C

Al agregar reactivo de Benedict cualitativo al 1er tubo “C”: El Reactivo Benedict contiene

cobre, al calentar el tubo de ensayo el cobre en su forma cúprica no pudo reaccionar con la

glucosa (producto), puesto que no había. Solo estaba la amilosa (sustrato), así que originó un

color celeste.

Al agregar reactivo de Benedict cualitativo al 2do tuvo “C”: El calor hizo reaccionar la forma

cúprica del cobre junto con la glucosa (producto), dando como resultado la forma cuprosa del
cobre. Es así como en el tubo de ensayo se logra apreciar que en el precipitado hay un color rojo

ladrillo

Conclusiones

 Comprendimos que la actividad enzimática es tan importante a nivel interno del

organismo, como fuera para poder sintetizar ciertas moléculas.

 Determinamos la actividad enzimática comprobando la ausencia de almidón con la

solución yodada y la reacción de la glucosa con el cobre con el reactivo de Benedict.

 Comprendimos que un sustrato es la molécula de la cual se obtendrá un producto

determinado con la ayuda de la enzima

 Observamos los resultados finales y los interpretamos, es así como pudimos

determinar la actividad enzimática.

Referencias Bibliográficas

Bibliografía

A. Harvey, R., & R. Ferrier, D. (2011). Bioquímica. New York: Wolters Kluwer.
 Anexos

Etapa “A”: Ambos tubos incoloros.

Etapa “B”:
Tubo 1 Derecha, color azul oscuro.
Tubo 2 Izquierda, color ámbar.

Etapa “C”:
Tubo 1 izquierda, color celeste.
Tubo 2 derecha, color azul oscuro, precipitado
color rojo ladrillo.