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CARACTERIZACIÓN Y DETERMINACIÓN DE LA
ESTABILIDAD DURANTE EL
ALMACENAMIENTO DE LAS PROTEÍNAS DE
HARINA DE QUINUA ORGÁNICA SIN PULIR Y
PULIDA PROVENIENTE DE LA VI REGIÓN DE
CHILE
Santiago, Chile
2005
A mis amados padres
Lina y Rodrigo
Esta memoria fue realizada en el Laboratorio de Procesos
de Alimentos del Departamento de Ciencias y Tecnología
Química, ubicado en la Facultad de Ciencias Químicas y
Farmacéuticas de la Universidad de Chile.
Página
DEDICATORIA……………………………………………………………………… ii
AGRADECIMIENTOS……………………………………………………………… iv
ÍNDICE GENERAL…………………………………………………………………. v
RESUMEN…………………………………………………………………….......... xiii
SUMMARY………………………………………………………………………….. xiv
ABREVIATURAS…………………………………………………………………... xv
I. INTRODUCCIÓN………………………………………………………………… 1
1.4 La saponina……………………………………………………………………. 4
1.6 Industria………………………………………………………………………… 5
1.8 Proteínas……………………..………………………………………………… 7
1.9 Propiedades funcionales de las proteínas…………………………………. 9
II. HIPÓTESIS……………………………………………………………………… 10
III. OBJETIVOS……………………………………………………………………. 11
4.1 Materiales….…………………………………………………………………… 12
4.2 Métodos………………………………………………………………………… 15
4.2.2.7.2 Solubilidad…………………………………………… 19
4.2.2.9 Fluorescencia…………………………………………………… 20
V. RESULTADOS Y DISCUSIONES…………………………………………….. 21
5.7.2 Solubilidad……………………..………….…………………………….. 37
5.9 Fluorescencia…………….……………………………………….……………. 42
VI. CONCLUSIONES……………………………………………………………… 45
VII. BIBLIOGRAFÍA……………………………………………………………….. 47
ANEXOS……………………….……………………………………………..…….. 53
8. Preparación de reactivos……………….……………………………………… 66
74
Página
25
29
Página
A: absorbancia
g: gramo
M: molar
mg: miligramos
min.: minuto
ml: mililitros
mM: milimolar
N: normalidad
nm: nanómetro
p/p: peso/peso
TEMED: N,N,N’,N’-Tetramethiletilendiamina
UV: ultravioleta
V: volumen
µ: micro
I. INTRODUCCIÓN
Antecedentes generales
Su cultivo es posible desde el nivel del mar hasta los 4000 metros de altura. Su
adaptación climática es alta, incluso en ambientes desfavorables, desde climas cálidos
(35ºC) hasta climas fríos (-8ºC), con precipitaciones que oscilan desde los 250 mm
hasta los 2000 mm al año, en suelos francos, arenosos, arcillosos, con pH alcalinos (9)
hasta suelos ácidos (4,5). Su amplia variabilidad fenotípica y genética, le otorga una
mayor capacidad de sobrevivencia a la especie frente a las drásticas adversidades
climáticas donde pueda ser cultivada, otorgándole una mayor seguridad al momento de
la cosecha. Existen 3000 variedades conservadas de quinua, mostrando variabilidad en
el color de la semilla, planta, tallos, tipos de inflorescencia, contenido de saponina,
proteína, betacianinas, contenido de oxalatos de calcio, adaptación a diferentes
condiciones agroecológicas, etc. (Sepúlveda y col., 2004).
Las variedades de quinua chilena presentan escasa información sobre las características
y potencialidades del grano. Estas variedades poseen una gran diversidad de genotipos,
sin embargo, se estima que se ha producido una desaparición importante de genotipos
durante los últimos 50 años. Descriptores de interés para la caracterización de las
variedades son el color de la panoja y del grano, días de siembra y cosecha, tamaño del
grano, densidad de la panoja, valor nutritivo y aptitud de usos (Sepúlveda y col., 2004).
La semilla esta envuelta por el epispermo en forma de una membrana delgada (Tapia y
col., 1979). La proteína se encuentra principalmente en el embrión y en el endospermo
de la semilla de quinua (Prego y col., 1998).
El embrión está formado por un eje radícula hipocotiledónea (H) y dos cotiledones (C)
y constituye la mayor parte de la semilla que envuelve al perisperma como un anillo. El
perisperma es almidonoso y normalmente de color blanco (Tapia y col., 1979).
Figura 2: Semilla de quinua entera (izquierda) y con corte sección media longitudinal
(derecha).
La figura 3 muestra una sección del endospermo donde se visualizan las proteínas de
reserva (globulinas) en el interior de los cuerpos proteicos (PB) en un micro diagrama
(Cheftel y col. 1989; Prego y col., 1998).
Figura 3: Sección del endospermo mostrando cuerpos proteicos (PB).
Por otra parte, la saponina le brinda una protección natural a la semilla que recubre al
grano por completo, evitando de esta forma el ataque de polillas, gorgojos y otras plagas
de almacén y, en el ámbito alimenticio, experiencias desarrolladas en el Perú indican
que el consumo de quinua con residuos de saponina contribuiría a impedir la
acumulación de colesterol en el cuerpo, por lo que habría una menor incidencia de
problemas cardiacos (Sepúlveda y col., 2004; Jara, 2004).
Producción orgánica
El cultivo orgánico de la quinua ofrece granos de alta calidad, es decir, con cualidades
nutricionales, de sanidad (sin plaguicidas ni elementos nocivos), de apariencia física y
sabor que hacen que la quinua sea apreciada comercialmente (Proyecto Sica, 2001).
Se le incorpora al suelo materia orgánica y mineral para que los microorganismos allí
presentes asimilen los nutrientes y de esta manera puedan ser absorbidos por las raíces
de la quinua, para propiciar su desarrollo y fructificación (Proyecto Sica, 2001).
Industria
La capacidad que poseen los ácidos fuertes para hidrolizar las proteínas,
transformándolas en aminoácidos y péptidos hidrosolubles de cadena corta, es
aprovechada en la industria alimenticia para la preparación de hidrolizados de proteína a
partir de materia vegetal. En este proceso se hidrolizan proteínas de varias fuentes
vegetales mediante el agregado de ácido clorídrico concentrado, por lo general en
equipos de revestimiento de vidrio, y el producto es luego neutralizado mediante el
agregado de álcali. La mezcla resultante de péptidos y aminoácidos es luego
concentrada y comercializada en esta forma como hidrolizado de proteína. Estos
productos se utilizan ampliamente en sopas y otros preparados alimenticios de
naturaleza similar (Braverman y Berk, 1980).
Por otra parte, la digestión y absorción de la proteína de los granos enteros es muy
difícil para los niños menores de dos años, incluso cuando han sido sometidos a la
cocción, sin embargo se ha visto que la digestibilidad mejora notablemente con su
ingestión en forma de harinas, en papillas o bebidas (FAO, 1992).
Por último, se encontró que como subproducto del cultivo de la quinua, esta el forraje
para el ganado y la leña (Diario Pyme, 2003).
Mercado nacional e internacional
Por otro lado, en Chile existe un mercado creciente del cereal en vías de un amplio
mercado exportable. Es así como en julio del 2002, se realizó la primera exportación de
quinua a Estados Unidos, ese mismo año, la empresa ofreció el volumen productivo de
febrero del año 2003 a supermercadistas de Canadá, Australia, Inglaterra, España,
México y Japón, y desde comienzos de abril del año pasado, la misma Cooperativa de
Producción Agrícola Las Nieves, de la Sexta Región, suscribió un acuerdo comercial y
de marketing con la Sociedad Francesa ABCD, mediante el cual se efectúa una serie de
acciones y estrategias destinadas a introducir el uso de quinua chilena en el mercado del
Viejo Continente. El acuerdo permite adquirir los medios comerciales y de marketing
para llegar directamente a los consumidores europeos y específicamente a los franceses,
junto con potenciar los envíos no tradicionales (Diario Pyme, 2003).
Son sustancias orgánicas cuyo nombre proviene del griego que significa “lo más
importante”. Se componen de carbono, hidrógeno, oxigeno, nitrógeno y a menudo
azufre y fósforo, la presencia de nitrógeno imparte muchas de las propiedades
específicas de las proteínas. Se componen básicamente de 20 aminoácidos y se dividen
en simples (aquellas que solo producen aminoácidos por hidrólisis) y conjugadas (las
que contienen otros grupos no proteicos como azucares, lípidos, ácido fosfórico, ácidos
nucleicos y otros). Los aminoácidos están unidos mediante enlaces peptídicos (-CO-
NH-), es decir, el grupo carboxilo de un aminoácido forma un enlace con el grupo
amino de un segundo aminoácido con eliminación de H2O, formándose así una amida
del segundo ácido (Braverman y Berk, 1980).
Las proteínas puras generalmente carecen de color, sabor y olor, cuando los alimentos
ricos en proteínas sufren descomposición, las características organolépticas cambian
debido a impurezas o a grupos prostéticos que contienen nitrógeno y/o azufre
(Braverman y Berk, 1980).
Como es sabido, las proteínas ingeridas con los alimentos se desdoblan, por la
digestión, en sus aminoácidos integrantes, los que son aprovechados por el organismo
después de la absorción, para construir sus proteínas. Una proteína ideal suministraría al
organismo, todos los aminoácidos en las proporciones más adecuadas para sus
necesidades, de manera que podría ser utilizada con muy pocas pérdidas. Es por ello que
es más importante el suministro de los aminoácidos en cantidades y proporciones
requeridas, que el aumento total de las proteínas ingeridas (Schmidt-Hebbel, 1981).
La distribución de las proteínas entre los diversos tejidos que constituyen el grano no es
uniforme, las concentraciones mayores se encuentran en las capas más externas del
endospermo, en la aleurona y en el germen. Tampoco se distribuyen uniformemente los
diferentes tipos de proteínas, las prolaminas y las glutelinas se encuentran localizadas
principalmente en el endospermo; las albúminas y globulinas están en las cubiertas
exteriores y en el germen (Primo, 1979).
A las proteínas de origen vegetal se las halla en gran concentración en los cotiledones
de las semillas (Braverman y Berk, 1980). Están compuestas principalmente por
albúminas (metabolismo) y globulinas (de reserva). Las proteínas globulares adsorben
agua y aumentan de tamaño considerablemente, el sitio principal de adsorción es la
unión peptídica (Braverman y Berk, 1980).
Las propiedades funcionales son todas aquellas propiedades no nutricionales que son
capaces de impartir una característica específica deseable a un alimento, influyendo, ya
sea en el carácter sensorial, como también en el comportamiento físico de los alimentos
durante su preparación, transformación o almacenamiento (Cheftel y col., 1989).
• Almacenar las harinas a tres temperaturas distintas: 20º, 30º y 40°C para estudiar la
estabilidad de las propiedades químicas, bioquímicas y funcionales durante siete
meses, realizando mensualmente los análisis mencionados en los puntos siguientes.
Materia prima:
Reactivos químicos:
Equipos e instrumentos:
• Agitador Heavy Duty KitchenAid Inc. St. Joseph, model K5SS, Michigan USA
• Campana de extracción
• Desecador
• Novasina Thermoconstanter
• Refrigerador Mademsa
• Sistema HPLC Merck Hitachi bomba ternaria L6200 con inyector Rheodyne 7725i;
loop de 20 µl, Detector espectrofotométrico UV-Visible modelo 484 a 280 nm,
Integrador D-2500; Columna Nova Pack RP18 (30 cm x 4 µm de diámetro interno)
Waters
• Termómetro
Se lavó el grano mediante frotación para sacar la saponina; para ello se colocó
aproximadamente 1500 g de quinua, previamente mojada, en un agitador mecánico a
baja potencia (figura 4 derecha), para sacar la espuma que se va soltando al agitar
(saponina), se enjuagó con agua fría (Ogungbenle, 2003). Intercalando con esto, se
realizó un lavado manual (con frotación), para así disminuir el tiempo de agitación
(figura 4 izquierda). La necesidad de remover rápidamente el contenido de saponina es a
fin de minimizar el riesgo de que se difunda en el endospermo (Tapia y col., 1979). Este
procedimiento se realizó hasta que la quinua ya no suelte espuma, lo cual indica que
está libre de saponina, (en el caso de la quinua pulida el procedimiento demoró una hora
y en el caso de la quinua sin pulir cuatro horas).
La medición se realizó solo una vez, al comienzo del estudio, mediante el método de
HPLC en el Laboratorio de Química de Alimentos y Materias Grasas de la Facultad de
Ciencias Químicas y Farmacéuticas de la Universidad de Chile.
Donde:
4.2.2.7.2 Solubilidad:
4.2.2.9 Fluorescencia:
Este método se efectuó para realizar una comparación entre harinas en el transcurso del
tiempo visualizando si existen o no cambios en la conformación proteica (Mathews y
col., 2002). Se usó el mismo sobrenadante obtenido en solubilidad, pero en este caso se
midió en el espectrofotómetro de fluorescencia con una excitación de 270 nm para
obtener el espectro de emisión en el rango de 310 a 500 nm a una velocidad de barrido
de 300 nm/min y con ello se obtuvieron las curvas de fluorescencia (ver fotos anexo 9 y
fundamento del método en anexo 10).
Análisis estadístico:
Este análisis se realizó al inicio y al final del estudio, para determinar y controlar la
cantidad total de proteínas existente.
a: Igual letra indica que no hay diferencias significativas entre tiempos de estudio
(P<0,05).
α: Igual letra indica que no hay diferencias significativas entre temperaturas (P<0,05).
Al comparar los valores con otros estudios realizados para medir el contenido proteico
de la quinua, se tiene: 13% (Schmidt y col., 1992); 13,81% (Tapia y col., 1979); 13,5%
(Ogungbenle, 2003); 13,7% (Chauhan, 1992); 13,4-18,5% (Pino, 1998); 11-13% (en
quinua Chilena), 12-14% (en quinua peruana) (Cárcamo, 1960), entonces, se observa
que la cantidad de proteína encontrada para la harina de quinua esta dentro de lo
esperado. La cantidad de proteína varía de acuerdo a la localidad en que se desarrolla el
cultivo, fecha en que se realiza la siembra y variedad del grano (Pino, 1998).
Al realizar una comparación entre harinas (ver tabla 3), se visualiza que los valores de
aminoácidos entre ellas son similares, siendo en casi todos los casos algo superior el
contenido de aminoácidos en la harina LPP. Al comparar con bibliografía también se
obtienen valores similares (ver anexo 11), teniendo claro que los datos difieren según la
variedad de quinua de la cual se trate y según la cantidad total de proteína calculada
(Tapia y col., 1979).
Al realizar una comparación con otros cereales (ver anexo 11 y 12) se encuentra que la
harina de quinua es altamente superior en lisina (aminoácido principal en legumbres)
(Chauhan, 1992), importante en el desarrollo de las células vegetales y en el
crecimiento, se asocia al desarrollo de la inteligencia, memoria y aprendizaje. La lisina
es uno de los aminoácidos más escasos en los alimentos de origen vegetal y la quinua
duplica el contenido al compararlo con otros cereales. Esta sirve de base para considerar
la suplementación de las harinas de trigo con quinua (Tapia y col., 1979). También la
quinua es rica en metionina (aminoácido principal en cereales) (Chauhan, 1992) fuente
principal de azufre y necesaria para el metabolismo de la insulina. Además es alta en
arginina y ácido glutámico y tiene niveles adecuados de histidina, isoleusina, valina y
treonina (Drzewiecki, 2003; Rapid Comunication, 1996; Valenzuela, 1997). La quinua
ofrece mayor cantidad de aminoácidos esenciales (treonina, metionina, lisina) que los
cereales más importantes del mundo (Chauhan, 1992; Tapia y col., 1979), supera la
cantidad de aminoácidos de la leche, e incluso en algunos casos, como arginina,
treonina y glicina, llega a competir con las cantidades de aminoácidos de las legumbres
y carne (Olivares y col., 1993; Tapia y col., 1979) y en cuanto a la arginina duplica el
contenido de los cereales. La calidad de los aminoácidos de la harina de quinua es tan
alta que es posible usarla para mejorar el valor nutritivo de algunos alimentos (Chauhan,
1992; Wahli, 1990).
Sin β-mercapto etanol: En la figura 8 se observan los perfiles proteicos obtenidos para
la harina de quinua LPP30. En todas las muestras se obtuvo el mismo tipo de bandas
(ubicadas en la misma zona), para las distintas temperaturas y tiempos estudiados.
Mientras más intensa es la banda mayor es la cantidad de proteínas de esa masa
molecular presente en la harina. Las masas moleculares de las principales bandas,
fueron similares entre las harinas a las diferentes temperaturas y tiempos de
almacenamiento, se aprecia que existen bandas tanto de alta como de baja masa
molecular.
Figura 10: PAGE-SDS de extracto soluble de harina de quinua LPP, LPSP y Pared a
todos los tiempos de estudio almacenada a 30ºC
Figura 11: PAGE-SDS de extracto soluble de harina de quinua LPP, LPSP y Pared a
todos los tiempos de estudio almacenada a 40ºC
Con β-mercapto etanol: En la figura 12 se observan las bandas proteicas para la harina
de quinua LPP30. Se calcularon las masas moleculares de las principales bandas siendo
estas similares entre tiempos y temperaturas estudiadas.
Figura 12: PAGE-SDS con β-mercapto etanol de extracto soluble de harina de quinua
pulida de La Palmilla almacenada a 30ºC (LPP30)
Al igual que en PAGE-SDS sin β-mercapto etanol, en las figuras 13, 14 y 15 se aprecia
la semejanza entre los perfiles proteicos desnaturantes para las distintas harinas a las
temperaturas estudiadas.
Figura 13: PAGE-SDS con β-mercapto etanol de extracto soluble de harina de quinua
LPP, LPSP y Pared a todos los tiempos de estudio almacenada a 20ºC
Figura 14: PAGE-SDS con β-mercapto etanol de extracto soluble de harina de quinua
LPP, LPSP y Pared a todos los tiempos de estudio almacenada a 30ºC
Figura 15: PAGE-SDS con β-mercapto etanol de extracto soluble de harina de quinua
LPP, LPSP y Pared a todos los tiempos de estudio almacenada a 40ºC
Al realizar los geles en condiciones reductoras, se aprecia que éstos son distintos a los
sin el agente reductor, esto indica la existencia de grupos disulfuro en la cadena
polipeptídica, puesto que al agregar β-mercapto etanol estos puentes que ayudan a
estabilizar la estructura terciaria y cuaternaria de la proteína intra e intermolecular se
rompen y es por ello que el perfil electroforético cambia, esto se nota en el cambio de
las masas moleculares, por ejemplo, en el gel sin β-mercapto etanol (figura 8) la banda
más intensa, con masa molecular 61,92 kDa desaparece en el gel con β-mercapto etanol
(figura 12) y aparecen nuevas bandas que no se hallaban en la figura 8, esto es debido a
que la proteína con masa molecular 61,92 kDa se rompe formando nuevas cadenas de
masas moleculares menores.
Para una mayor diferenciación de las proteínas más importantes presentes en la quinua
como son las globulinas y albúminas, se podría realizar un extracto proteico de ellas,
con el buffer adecuado, y hacer un perfil electroforético. Un estudio realizado con
extractos de globulinas y albúminas (Albarran, 1993), demostró que las bandas
presentes están situadas en todo el carril en posiciones similares (ver anexo 14), por lo
tanto, los diversos tipos de globulinas y de albúminas tienen semejantes masas
moleculares, no siendo posible su identificación si se hiciesen corren ambos extractos
en un mismo carril.
Los análisis realizados tienen importancia en el ámbito industrial para saber si existe o
no degradación de las proteínas con el tiempo y la temperatura y además son
importantes puesto que, al conocer las masas moleculares proteicas, es posible dar a los
alimentos diversas propiedades funcionales.
5.4 Actividad de agua
0,6
0,5
0,4
LPP20
0,3 LPP30
aw
LPP40
0,2
0,1
0
0 1 2 3 4 5
Tie mpo (me s)
Figura 16: Actividad de agua harina de quinua LPP a 20º, 30º y 40ºC
0,6
0,5
0,4
LPSP20
0,3 LPSP30
aw
LPSP40
0,2
0,1
0
0 1 2 3 4 5
Tiempo (mes)
Figura 17: Actividad de agua harina de quinua LPSP a 20º, 30º y 40ºC
0,6
0,5
0,4
Pared20
0,3 Pared30
aw
Pared40
0,2
0,1
0
0 1 2 3 4 5
Tiempo (mes)
Figura 18: Actividad de agua harina de quinua Pared a 20º, 30º y 40ºC
Los resultados obtenidos se muestran en las figuras 16, 17 y 18, donde se visualiza que,
en general, la actividad de agua disminuye al pasar el tiempo de estudio y al aumentar la
temperatura de almacenamiento, lo cual es lo que se esperaría al tener las harinas
sometidas a calor, debido a la disminución de la humedad. La actividad de agua está
relacionada con la humedad relativa en equilibrio (HRE), la que se refiere estrictamente
a la atmósfera en equilibrio con una solución o alimento y constituye una expresión para
medir el agua disponible. La HRE, como la actividad de agua, es la relación entre la
presión de vapor del alimento y la del agua pura, pero en este caso, expresada en
porcentaje.
A medida que la harina se seca, la presión de vapor del agua del alimento disminuye y
la actividad de agua desciende a partir de un valor máximo de 1 para el agua pura. Esta
disminución es beneficiosa en cuanto al contenido de microorganismos, puesto que
permite retardar el deterioro microbiológico (Braverman y Berk, 1980), los
microorganismos no se multiplican por debajo de una actividad de agua de 0,60 ya que
las moléculas de agua presentan una movilidad restringida. Además, la actividad de
agua da cuenta del agua disponible para que ocurran las reacciones metabólicas, por lo
tanto, al disminuir los valores, ocurrirán menos reacciones que deterioren la harina de
quinua.
La excepción del descenso en la actividad de agua solo ocurrió en los últimos dos
meses, en los cuales tendió a estabilizarse a valores cercanos a 0,3 donde la harina es
más estable.
Según el análisis estadístico, no hay diferencias significativas entre las distintas harinas.
En cuanto a la temperatura, la harina almacenada a 20ºC difiere de las almacenadas a
30ºC y 40ºC no habiendo diferencias significativas entre estas dos temperaturas más
altas de almacenamiento con un nivel del 95% de confianza. En los tiempos estudiados
(ver tabla anexo 15) son similares los tiempos 1 y 2 y el 3 y 4 ambos difieren del tiempo
inicial y del último tiempo de estudio.
5.5 Caracterización térmica de las proteínas
La calorimetría diferencial de barrido (DSC) es una técnica empleada para estudiar los
cambios conformacionales de plegamiento-desplegamiento de la proteína cuando se
calienta, es decir, se registra en forma continua el incremento de temperatura debido a
un calor suministrado, esto es lo que se llama capacidad calorífica. Así se obtiene un
termograma caracterizado por un pick de absorción de calor correspondiente a un
proceso endotérmico, que se debe a la absorción de calor asociado con la
desnaturalización de la proteína inducida por la temperatura (Sadqi, 2000).
Los resultados que entregó el DSC son endotermas (ver anexo 16) que permitieron
conocer la temperatura de desnaturalización (Td), donde se observa que todas las Td
encontradas presentaron aproximadamente los mismos valores (ver tabla 4), nótese que
para la harina de quinua LPP la Td fue de 98,9ºC en el primer tiempo de estudio y de
98,8ºC para el último tiempo en la harina almacenada a 30ºC, es decir, la variación fue
prácticamente nula.
Ahora, al visualizar los resultados en forma gráfica (figura 19), se observan dos curvas:
la superior correspondiente al primer tiempo de estudio y la inferior realizada al final
del estudio (después de 7 meses).
Figura 19: DSC harina de quinua LPP en el tiempo inicial (tiempo 0) (curva superior) y
LPP30 en el tiempo final (tiempo 5) (curva inferior).
5.6 Actividad proteolítica
Temperatura 20ºC
Tiempo
Temperatura 30ºC
Tiempo
Tiempo
Los análisis son con el fin de determinar si hay actividad proteolítica. Esto podría ser
afectado tanto por la temperatura como por la humedad, al romperse las proteínas y
liberar enzimas, pero los resultados no muestran una correlación reproducible ya que los
valores no aumentaron ni disminuyeron constantemente ni con el tiempo, ni con la
temperatura de almacenamiento, ni con el tipo de harina.
Los análisis indican que existe presencia de actividad proteolítica, pero ella es baja y
dispersa, los valores son diversos y no siguen una tendencia clara. Hay estudios de
actividad proteolítica en los que se han detectado valores muy superiores a los
encontrados en el presente estudio (en soya hasta 500% de actividad). La existencia de
valores bajos de actividad proteolítica indica que no existe deterioro en la harina. Esto
se corrobora con las electroforesis realizadas, donde no hay aparición ni desaparición de
bandas (Molina y Wagner, 2002)
5.7 Propiedades funcionales de hidratación
4,5
3,5
3
LPP20
WHC
2,5 LPP30
LPP40
2
1,5
0,5
0
0 1 2 3 4
Tiempo (mes)
Figura 20: Capacidad de retención de agua de extracto soluble de harina de quinua LPP
almacenada a 20º, 30º y 40ºC
3,5
2,5 LPSP20
WHC
LPSP30
2 LPSP40
1,5
0,5
0
0 1 2 3 4
Tiempo (mes)
Para la harina LPSP se observa que los valores bajan, con excepción de la temperatura a
30ºC cuyo valor es de 3,54 ± 0,55 al tiempo 3 de estudio, pero el aumento que sufre es
pequeño (ver tabla anexo 17). Los valores de capacidad de retención de agua bajan
desde 4,19 ± 0,02 hasta 2,72 ± 0,82 ; 2,88 ± 0,87 y 2,90 ± 0,50 para la harina
almacenada a 20ºC, 30ºC y 40ºC respectivamente.
Pared20
WHC
3 Pared30
Pared40
0
0 1 2 3 4
Tie mpo (mes)
De los resultados obtenidos, se puede observar que las harinas son capaces de retener
entre 2,3 a 5,1 ml de agua/g de harina, en todos los estudios realizados existe una
disminución de la capacidad de retención de agua con el tiempo en las tres harinas,
especialmente al compararlos con la muestra inicial. Este descenso en la capacidad de
retención de agua, puede deberse a algún grado de desnaturalización de las proteínas en
la harina de quinua durante el almacenamiento, y por efecto de la temperatura, es
probable que los grupos que interaccionan con el agua queden menos expuestos para
interaccionar con ella (Pennacchiotti, 1998).
El análisis estadístico indica que entre la harina LPSP y LPP no hay diferencias
significativas y lo mismo ocurre entre esta última y la de Paredones. En cuanto a la
temperatura, las dos más altas temperaturas de almacenamiento no mostraron
diferencias estadísticamente significativas.
5.7.2 Solubilidad:
Los análisis fueron efectuados a la harina de quinua disuelta en buffer B, esto es debido
a la presencia de globulinas en la quinua, que según estudios (Scilingo y col.; 2002) han
resultado ser más solubles en este buffer. Los resultados encontrados se muestran en las
figuras 23, 24 y 25, donde se aprecia la variación de la solubilidad (%) con el tiempo
transcurrido, para las distintas temperaturas de almacenamiento.
18
16
14
12
solubilidad (%)
10 LPP20
LPP30
8 LPP40
0
0 1 2 3 4 5
Tiempo (me s)
Figura 23: Solubilidad extracto soluble de harina de quinua LPP almacenada a 20º, 30º
y 40ºC
La figura 23 muestra la solubilidad que presenta la harina LPP donde se aprecia que en
los tres primeros tiempos de estudio los valores son cercanos a 14% y en los tres
últimos tiempos la solubilidad disminuye a valores cercanos al 8% (ver anexo 18).
18
16
14
12
solubilidad (%)
10 LPSP20
LPSP30
8 LPSP40
0
0 1 2 3 4 5
Tiempo (mes)
Figura 24: Solubilidad de extracto soluble de harina de quinua LPSP almacenada a 20º,
30º y 40ºC
Al analizar la harina sin pulir, en la figura 24, se aprecia el mismo caso para las dos
temperaturas más altas en estudio (30ºC y 40ºC), en cambio para la harina almacenada a
20ºC el descenso en la solubilidad de la harina con el tiempo es mas leve. Para las tres
temperaturas estudiadas se encuentra un aumento de la solubilidad en el primer y
segundo tiempo de estudio al compararlo con el tiempo inicial.
14
12
10
solubilidad (%)
8 Pared20
Pared30
6 Pared40
0
0 1 2 3 4 5
Tiempo (mes)
Figura 25: Solubilidad de extracto soluble de harina de quinua Pared almacenada a 20º,
30º y 40ºC
Por último, para la harina de Paredones la solubilidad comienza con 9,41 ± 0,80 % y
desciende hasta valores cercanos al 6%, pero en este caso en el tiempo 1 y 2 los valores
aumentan a 11% aproximadamente y en el caso de la harina almacenada a 40ºC el
descenso en la solubilidad es algo mas leve, ya que en el tiempo 3 de estudio presenta
un valor de 10,15 ± 0,42 %
Según el análisis estadístico realizado, las harinas de La Palmilla son similares entre si y
difieren de Paredones. En cuanto a la temperatura se encontró sin diferencias
significativas las dos temperaturas más extremas, 20º y 40ºC. Por último, el análisis de
los tiempos (ver tabla anexo 18) indica que entre el tiempo 1 y 2 no hay diferencias
significativas ni tampoco entre el tiempo 3 con el 4, el resto de los tiempos presenta
diferencias significativas en solubilidad.
0,7
0,7
0,6 0,6
0,5 0,5
Tiempo 0 Tiempo 0
Tiempo 1 Tiempo 1
Absorbancia
0,4
Absorbancia
0,4
Tiempo 2 Tiempo 2
Tiempo 3 Tiempo 3
0,3 0,3
Tiempo 4 Tiempo 4
Tiempo 5 Tiempo 5
0,2 0,2
0,1 0,1
0,0 0,0
250 270 290 310 330 350 250 270 290 310 330 350
Longitud de Onda (nm) Longitud de Onda (nm)
0,7 0,7
0,6 0,6
0,5 0,5
Tiempo 0 Tiempo 0
Tiempo 1 Tiempo 1
Absorbancia
Absorbancia
0,4 0,4
Tiempo 2 Tiempo 2
Tiempo 3 Tiempo 3
0,3 0,3
Tiempo 4 Tiempo 4
Tiempo 5 Tiempo 5
0,2 0,2
0,1 0,1
0,0 0,0
250 270 290 310 330 350 250 270 290 310 330 350
Longitud de Onda (nm) Longitud de Onda (nm)
0,6 0,6
0,5 0,5
Tiempo 0 Tiempo 0
Tiempo 1 Tiempo 1
Absorbancia
Absorbancia
0,4 0,4
Tiempo 2 Tiempo 2
Tiempo 3 Tiempo 3
0,3 0,3
Tiempo 4 Tiempo 4
Tiempo 5 Tiempo 5
0,2 0,2
0,1 0,1
0,0 0,0
250 270 290 310 330 350 250 270 290 310 330 350
Longitud de Onda (nm) Longitud de Onda (nm)
0,7
0,7
0,6
0,6
0,5
0,5
Tiempo 0
Tiempo 0
Tiempo 1
Absorbancia
0,4 Tiempo 1
Absorbancia
Tiempo 2 0,4
Tiempo 2
Tiempo 3 Tiempo 3
0,3 0,3
Tiempo 4 Tiempo 4
Tiempo 5 Tiempo 5
0,2 0,2
0,1 0,1
0,0 0,0
250 270 290 310 330 350 250 270 290 310 330 350
Longitud de Onda (nm) Longitud de Onda (nm)
0,7
0,6
0,5
Tiempo 0
Tiempo 1
Absorbancia
0,4
Tiempo 2
Tiempo 3
0,3
Tiempo 4
Tiempo 5
0,2
0,1
0,0
250 270 290 310 330 350
Longitud de Onda (nm)
Figura 34: Espectroscopia UV
Como se visualiza en los gráficos anteriores, las curvas para las distintas harinas, a las
diversas temperaturas de estudio, tienen la misma forma. La absorción ocurre debido a
que las transiciones de energía elevada entre estados electrónicos de una molécula
conducen a la absorción en la región ultravioleta del espectro, donde las proteínas
absorben intensamente (Mathews y col., 2002).
En cuanto a los tiempos, se puede ver que la curva en el tiempo inicial se encuentra
sobre las demás y la curva en el último tiempo de estudio es la que está más abajo, esto
quiere decir que la absorbancia a toda longitud de onda disminuye al pasar el tiempo,
debido a que las harinas presentan una pequeña disminución en cuanto al porcentaje
proteico extraído. Los pick encontrados podrían ser de globulinas que son proteínas
presentes en la quinua (Tapia y col., 1979) solubles en buffer B (Scilingo y col., 2002) y
cuya absorción se encuentra en el rango de 260 a 282 nm, según estudios realizados en
guisantes (Chavan y col., 2001). Los pick que presentan los gráficos en el margen de
270 – 290 nm, son debido a la absorción de las cadenas laterales aromáticas de
fenilalanina, tirosina y triptofano (Mathews y col., 2002).
800
800
700
700
600
Intensidad de Fluorescencia
600
Intensidad de Fluorescencia
500 Tiempo 0
500 Tiempo 0
Tiempo 1
Tiempo 1
400 Tiempo 2
400 Tiempo 2
Tiempo 3
Tiempo 3
300 Tiempo 4
300 Tiempo 4
200 200
100 100
0 0
300 350 400 450 500 550 300 350 400 450 500 550
Longitud de Onda (nm) Longitud de Onda (nm)
900 800
800
700
700
600
Intensidad de Fluorescencia
Intensidad de Fluorescencia
600
Tiempo 0 500 Tiempo 0
500 Tiempo 1 Tiempo 1
Tiempo 2 400 Tiempo 2
400 Tiempo 3 Tiempo 3
Tiempo 4 300 Tiempo 4
300
200
200
100 100
0 0
300 350 400 450 500 550 300 350 400 450 500 550
Longitud de Onda (nm) Longitud de Onda (nm)
Figura 37: Fluorescencia Figura 38: Fluorescencia
800
800
700
700
600
600
Intensidad de Fluorescencia
Intensidad de Fluorescencia
500 Tiempo 0
500 Tiempo 0
Tiempo 1
Tiempo 1
400 Tiempo 2 400 Tiempo 2
Tiempo 3 Tiempo 3
300 300 Tiempo 4
Tiempo 4
200 200
100 100
0 0
300 350 400 450 500 550 300 350 400 450 500 550
Longitud de Onda (nm) Longitud de Onda (nm)
600 800
700
500
600
Intensidad de Fluorescencia
Intensidad de Fluorescencia
400
Tiempo 0 500 Tiempo 0
Tiempo 1 Tiempo 1
300 Tiempo 2 400 Tiempo 2
Tiempo 3 Tiempo 3
Tiempo 4 300 Tiempo 4
200
200
100
100
0 0
300 350 400 450 500 550 300 350 400 450 500 550
Longitud de Onda (nm) Longitud de Onda (nm)
500
Intensidad de Fluorescencia
400
Tiempo 0
Tiempo 1
300 Tiempo 2
Tiempo 3
Tiempo 4
200
100
0
300 350 400 450 500 550
Longitud de Onda (nm)
En las figuras anteriores (figuras 35 a 43), se observa el mismo tipo de curva para las
distintas harinas, temperaturas y tiempos de estudio, es decir, en todas ellas el pick
máximo aparece a similar longitud de onda. Lo anterior indica que la estructura de las
proteínas de harina de quinua permanecería estable en el tiempo y que la accesibilidad
del triptófano al solvente polar es constante (Aubourg, 2005; Khatib y col., 2005;
Mathews y col., 2002).
Ahora bien, se observa que hay una leve diferencia en la intensidad de fluorescencia con
el tiempo de estudio, lo cual es atribuible al cambio en la polaridad de la proteína la que
cambia la emisión de aminoácidos aromáticos (Aubourg, 2005; Khatib y col., 2005)
como el triptófano, la tirosina y la fenilalanina, aminoácidos presentes en la quinua y
únicos, entre todos los aminoácidos, que poseen una fluorescencia natural medible
(Cheftel y col., 1989; Mathews y col., 2002), siendo el principal, la fluorescencia del
triptófano, debido a que persiste aunque el aminoácido forme parte de la estructura
proteica (Cheftel y col., 1989).
VI. CONCLUSIONES
• Los análisis de PAGE señalaron que la quinua está compuesta por proteínas
semejantes al tipo globulinas, ampliamente difundidas en los vegetales. Los perfiles
electroforéticos, tanto en condiciones nativas como desnaturalizantes de extractos
solubles, demostraron que no hay variación en los perfiles de los polipéptidos
proteicos, con un almacenamiento de la harina entre 20º y 40ºC en todo el tiempo de
estudio (7 meses).
• Hay que tener siempre presente que en todos los intentos de industrialización de la
quinua habrá que tomar en cuenta el factor económico y además será decisiva la
calidad del producto al paladar del consumidor, es decir, sólo un preparado
completamente limpio y libre de saponinas (que dan un sabor amargo) podrá tener
éxito comercial.
• Alaiz, M.; Navarro, J.; Girón, J. y Vioque, E. “Amino acid analysis by high-
performance liquid chromatography after derivatization with diethyl
ethoxymethylenemalonate” Journal of Chromatography 591: 181-186, 1992
• Budavari, S. (1996) “The Merck Index” 12ª ed. Whitehouse Station USA.
• CIED (2004) “Quinua: Chenopodium quinoa Willdenow” [En línea] Lima, Perú.
Centro de Investigación, Educación y Desarrollo.
<http://www.ciedperu.org/productos/quinua.htm> [consulta: 25 mayo 2004]
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Santiago, Chile. Diario de la Pequeña y mediana empresa.
<http://www.diariopyme.cl/newtenberg/1550/article-56781.html> [consulta: 10
mayo 2004]
• Drzewiecki, J.; Delgado-Licon, E.; Haruenkit, R.; Pawelzik, E.; Martin-Belloso, O.;
Park, Y.; Jung, S.; Trakhtenberg, S. y Gorinstein, S. “Identification and differences
of total proteins and their soluble fractions in some pseudocereals based on
electrophoretic patterns” Agricultural and Food Chemistry 51(26): 7798-7804, 2003
• Jara, Pablo (2004) Entrevista personal a Sr. Pablo Jara Valdivia, conocido productor
de quinua de la IV región de Chile.
• Molina, Sara y Wagner, Jorge “Hydrolysates of native and modified soy protein
isolates: structural characteristics, solubility and foaming properties”, Food
Research International 35: 511 – 518, 2002
• Primo, E. (1979) “Química Agrícola III Alimentos” España. Editorial Alambra S.A.
• Proyecto Sica (2001) “Producción Orgánica de Quinua” [En línea] Quito, Ecuador.
Servicio de información Agropecuaria del Ministerio de Agricultura y Ganadería del
Ecuador. Tomado de la revista “Cultivos controlados” Agosto 2001
<http://www.sica.gov.ec/agronegocios/productos%20para%20invertir/granos%20ce
reales/quinua/produccion_organica_quinua.htm> [consulta: 15 mayo 2004]
• Schmidt Hebbel, H.; Pennacchiotti, I.; Masson, L. y Mella, M.A. (1992) “Tabla de
Composición Química de Alimentos Chilenos”, 8ª ed. Santiago, Chile. Universidad
de Chile. Departamento de Ciencia de los Alimentos y Tecnología Química.
Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas.
• Sepúlveda, J.; Thomet, M.; Palazuelos, P.; Mujica, M. (2004) “La Kinwa Mapuche.
Recuperación de un cultivo para la alimentación” Temuco, Chile.
• Tapia, M.; Gandarillas, H.; Alandia, S.; Cardozo, A.; Mujica, A.; Ortiz, R.; Otazu,
V.; Rea, J.; Salas, B. y Sanabria, E. (1979) “La Quinua y la Kañiwa: Cultivos
Andinos” Bogotá, Colombia. Editorial IICA.
• Zamudio, Teodora (2003) “Quinua” [En línea] Buenos Aires, Argentina. Programa
Panamericano de Defensa y Desarrollo de la Diversidad biológica cultural y social.
ProDiversitas. <http://www.prodiversitas.bioetica.org/quinua.htm> [consulta: 23
abril 2004]
ANEXOS
ANEXO 1
Composición Quinua
Proteínas (%) 13
Calcio (mg/100g) 94
Fuente: Schmidt Hebbel, H.; Pennacchiotti, I.; Masson, L. y Mella, M.A. (1992) “Tabla
de Composición Química de Alimentos Chilenos”, 8ª ed. Santiago, Chile. Universidad
de Chile. Departamento de Ciencia de los Alimentos y Tecnología Química. Facultad de
Ciencias Químicas y Farmacéuticas.
ANEXO 2
Se realizó un gel, el que se cargó con volúmenes iguales de extracto, donde las muestras
fueron harinas de quinua molidas en distintos molinos.
Se aprecia la semejanza entre las bandas, tanto de los perfiles proteicos desnaturantes
sin el agente reductor β-mercapto etanol (figura izquierda) como de las bandas de gel
con β-mercapto etanol (figura derecha), a excepción de la intensidad de las bandas, lo
cual indica que el tipo de molienda sí influye en la cantidad de proteínas solubles
extraídas, habiendo sido extraídas de la misma forma.
El tipo de molienda más adecuado sería donde las bandas son más intensas, con el fin de
distinguir de mejor forma las proteínas presentes. Entonces se podría usar tanto el
molino martillo (4) como el molino mixto martillo/cuchilla (5), por lo que, para realizar
la molienda de la harina de quinua orgánica, se decidió el uso de éste último debido al
mallaje más fino logrado (60 mallas), más semejante a algunas harinas comerciales
encontradas y por la obtención de una banda visiblemente adecuada de distinguir. Se
eligió entonces el molino mixto martillo/cuchilla o molino de impacto (5).
ANEXO 3
Fotografías del grano y harina de quinua de las distintas
localidades
ANEXO 4
• Pesar 1 g de muestra.
• Colocar en un tubo Kjeldahl la muestra junto con 12,6 g de mezcla catalizadora (ver
preparación de reactivos en anexo 8).
• Una vez obtenido un líquido claro, dejar enfriar hasta que no salgan vapores
blancos, si quedan residuos negros en las paredes, desprender esto agregando agua
destilada y volver al equipo digestor hasta obtener el líquido claro, el tubo debe
quedar con aproximadamente ⅓ de su volumen lo que se completa con agua
destilada.
• Hacer andar el equipo destilador Büchi solo con agua con el fin de limpiarlo, esto se
hace al comienzo, entre las muestras y al final de la destilación.
• Recolectar los vapores de NH3 a la salida del destilador con un matraz de 500 ml
que contenga 50 ml de H2SO4 0,1 N y 4 gotas de indicador rojo de metilo.
mg N = (V1 x N1 – V2 x N2) x 14
• Cuando se deseen ocupar, calentar las muestras durante 1 minuto en agua hirviendo
(esto se hace solo con las muestras desnaturantes), insertando los tubos en plumavit
para que floten.
• Lavar los vidrios para electroforesis con alcohol y secarlos con papel absorbente.
Ponerlos en el soporte.
• En una fuente con hielo, colocar 2 matraces: uno con agua destilada y el otro vacío
(donde se preparará la muestra).
• Usando guantes, preparar el gel nativo 6 % (según la siguiente tabla). Agitar antes
de agregar el PSA, luego agitar y agregar el TEMED, volver a agitar.
Gel nativo al 6% de 1 mm
2 geles
Agua destilada 11250 µl
A/BA 2250 µl
Buffer pH 8,8 4500 µl
PSA 10% 105 µl
TEMED 9 µl
• Con micropipeta llenar los vidrios con esta preparación hasta que rebalse (colocar
papel absorbente debajo del soporte).
• Usando guantes colocar el peine, debe rebalsar. Fijarse que no queden burbujas bajo
la peineta, si es así golpear el vidrio para que salgan.
• Sacar los vidrios del soporte (Nota: Si se desean guardar los geles, almacenarlos en
buffer de corrida).
• Colocarlos en la cubeta de corrida con el lado más bajo del vidrio hacia adentro.
• Colocar el buffer de corrida en la cubeta de corrida, poniendo el buffer entre los dos
vidrios dejando que rebalse hasta ⅓ del volumen de la cubeta de corrida.
• Separar los vidrios, cuidando que no se rompa el gel, lavarlo con agua destilada para
separarlo completamente del vidrio.
• Con extremo cuidado, colocar el gel estirado en un pote de plástico que contenga
solución colorante.
• Colocar en solución decolorante, hasta que la parte del gel que no contiene bandas
este completamente clara.
• Finalmente, para almacenar el gel, ponerlo entre dos plásticos con algo de solución
decolorante y sellarlo con doble sello.
C) Procedimiento para PAGE-SDS:
• Lavar los vidrios para electroforesis con alcohol y secarlos con papel absorbente.
Ponerlos en el soporte.
• En una fuente con hielo, colocar 2 matraces: uno con agua destilada y el otro vacío
(donde se preparará la muestra).
• Con micropipeta llenar los vidrios con 3500 µl de solución gel separador.
• Agregar lentamente agua saturada con butanol, con pipeta volumétrica o gotario,
hasta que rebalse (colocar papel absorbente debajo del soporte).
• Poner papel absorbente debajo del soporte y agregar la solución del gel concentrador
con micropipeta hasta que rebalse.
• Usando guantes colocar el peine, debe rebalsar. Fijarse que no queden burbujas bajo
la peineta, si es así golpear el vidrio para que salgan.
• Sacar los vidrios del soporte y continuar de igual forma que para PAGE-nativa.
D) Cálculo PAGE:
2,50
2,00
y = -1,6408x + 2,3497
R2 = 0,9747
1,50
Log PM
estándar
Linear (estándar)
1,00
0,50
0,00
0,00 0,20 0,40 0,60 0,80 1,00
RF
• Agregar buffer pH 5,92 a la muestra a tiempo cero, dejando una solución al 1%, y
agitar.
• Agregar buffer pH 5,92 al resto de los tubos Ependorf, según la cantidad que
corresponda a cada tubo dejando una solución al 1% y agitar.
• Separar el sobrenadante.
• Cada vez que se vaya a hacer una curva de calibración, comprobar la concentración
del estándar leyendo a 280 nm, usando como blanco agua destilada. El valor
obtenido en el espectrofotómetro se divide por 0,63 y este resultado da la
concentración exacta del patrón en mg/ml
Curva de Calibración:
Nº tubo Estándar BSA (µl) Agua destilada (µl) Reactivo de Bradford (µl)
1 0 50 1500
2 10 40 1500
3 20 30 1500
4 30 20 1500
5 40 10 1500
• Tomar entre muestra y solvente 50 µl, agregando en tubos Ependorf el solvente que
corresponda según el análisis a efectuar (agua destilada, buffer B, buffer pH 5,92).
Agitar después de agregar el solvente, dejar reposar 5 minutos y después agregar
1500 µl de reactivo de Bradford.
Preparación de reactivos
Buffer B (pH 8,5): Mezclar Na2HPO4 33,3 mM con NaH2PO4*H2O 1,7 mM. Para esto
pesar 4,73 g de Na2HPO4 y 0,23 g de NaH2PO4*H2O completar a 1 litro y almacenar
etiquetado.
Buffer A (pH 7,5): Mezclar Na2HPO4 32,5 mM con NaH2PO4*H2O 2,6 mM y llevar a
pH 7,5 Para esto pesar 4,61 g de Na2HPO4 y 0,36 g de NaH2PO4*H2O y ajustar con
NaCl 0,4 M (23,38 g), completar a 1 litro y almacenar etiquetado.
Buffer del gel de separación pH 8,8: Disolver 36,4 g de Tris y 0,8 g de SDS en 80 ml de
agua destilada. Ajustar el pH con HCl 4N y completar el volumen a 200 ml.
Solución desnaturante con β-mercapto etanol: 2,5 ml de buffer pH 6,8 ; 1,2 g de SDS ;
4 ml de glicerol; 2 ml de β-mercapto etanol; punta de espátula de azul de bromofenol
completar a 10 ml.
Fundamento de la fluorescencia
En la mayoría de los casos, las moléculas que pasan a un estado electrónico excitado por
la absorción de energía radiante, vuelven al estado basal por una transferencia sin
radiación de la energía de excitación a las moléculas circundantes. En pocas palabras, la
energía vuelve a aparecer como calor. Pero en ocasiones, (ver figura 46) una molécula
perderá solo parte de su energía de excitación por transferencia (flecha amarilla) y
volverá a radiar la parte más grande (flecha verde). Con ello, surge el denominado
fenómeno de fluorescencia. Dado que, el cuanto de energía remitida como fluorescencia
siempre es de menor energía que el cuanto que se absorbió inicialmente (flecha
naranja), la longitud de onda de la luz fluorescente será más larga que la longitud de
onda de la luz de excitación (Mathews y col., 2002).
Aminoácido Quinua Harina Harina Arroz Avena Maíz Cebada Poroto Carne Leche
quinua trigo
Ac. Aspártico 0,875 0,82 0,491 0,808 1,075 0,596 0,666 2,648 1,590 0,264
Ac. Glutámico 1,428 1,39 4,171 1,622 2,919 1,800 2,771 3,271 2,703 0,764
Serina 0,444 0,31 0,562 0,427 0,656 0,473 0,476 1,228 0,713 0,199
Histidina 0,288 0,29 0,248 0,197 0,292 0,258 0,248 0,627 0,603 0,092
Glicina 0,624 0,53 0,424 0,393 0,656 0,351 0,453 0,839 0,860 0,068
Treonina 0,420 0,29 0,321 0,307 0,462 0,342 0,389 0,872 0,812 0,153
Arginina 0,841 0,76 0,422 0,65 0,876 0,398 0,555 1,257 1,118 0,113
Alanina 0,564 0,41 0,367 0,474 0,633 0,716 0,464 0,927 1,033 0,119
Tirosina 0,336 0,28 0,277 0,275 0,459 0,363 0,365 0,559 0,637 0,163
Valina 0,540 0,50 0,493 0,433 0,711 0,461 0,592 1,016 0,886 0,199
Metionina 0,240 0,15 0,174 0,183 0,234 0,182 0,196 0,234 0,478 0,086
Cistina --- 0,02 0,304 0,084 0,372 0,147 0,267 0,188 0,226 0,028
Isoleucina 0,432 0,43 0,435 0,3 0,526 0,350 0,421 0,927 0,852 0,162
Leucina 0,720 0,64 0,840 0,648 1,012 1,190 0,784 1,685 1,435 0,328
Fenilalanina 0,492 0,39 0,581 0,406 0,698 0,464 0,603 1,154 0,778 0,185
Lisina 0,672 0,53 0,248 0,299 0,517 0,254 0,406 1,593 1,573 0,268
Triptofano --- 0,09 0,128 --- --- 0,067 --- --- --- ---
Prolina 0,372 0,35 1,387 0,369 0,723 0,85 1,282 0,789 0,668 0,314
1,8
1,6
0,6 Poroto
Carne
0,4 Leche
0,2
0
na
na
a
a
na
na
li n
cin
in
ni
si
ni
ni
uc
Va
eo
Li
eu
io
la
Le
et
la
Tr
ol
ni
M
Is
Fe
Temperatura 20ºC β
Harina Paredones A LPP A LPSP A
Tiempo
0 0,518d ± 0,003 0,488d ± 0,005 0,522d ± 0,007
1 0,396c ± 0,022 0,460c ± 0,076 0,339c ± 0,006
2 0,329c ± 0,001 0,418c ± 0,025 0,461c ± 0,004
3 0,228a ± 0,016 0,340a ± 0,035 0,277a ± 0,021
4 0,242a ± 0,001 0,253a ± 0,006 0,247a ± 0,001
5 0,317b ± 0,002 0,390b ± 0 0,357b ± 0,066
Temperatura 30ºC α
Harina Paredones A LPP A LPSP A
Tiempo
0 0,518d ± 0,003 0,488d ± 0,005 0,522d ± 0,007
1 0,385c ± 0,002 0,374c ± 0,009 0,367c ± 0,006
2 0,342c ± 0,034 0,457c ± 0,029 0,358c ± 0,011
3 0,204a ± 0,005 0,244a ± 0,004 0,219a ± 0,001
4 0,247a ± 0,001 0,247a ± 0,001 0,259a ± 0,011
5 0,315b ± 0,005 0,263b ± 0,002 0,310b ± 0,001
Temperatura 40ºC α
Harina Paredones A LPP A LPSP A
Tiempo
0 0,518d ± 0,003 0,488d ± 0,005 0,522d ± 0,007
1 0,395c ± 0,001 0,362c ± 0,033 0,451c ± 0,054
2 0,382c ± 0,096 0,456c ± 0,002 0,370c ± 0,009
3 0,193a ± 0,005 0,268a ± 0,003 0,204a ± 0,023
4 0,249a ± 0,002 0,236a ± 0,007 0,246a ± 0,016
5 0,309b ± 0,001 0,261b ± 0,083 0,332b ± 0,013
A: Igual letra indica que no existe diferencia significativa entre harinas (P<0,05).
Integra l - 7.89 mJ
I ntegral - 21.23 m J norma lized - 2.20 Jg ^-1
normal ized - 5.91 Jg ^-1 Onset 90.88 °C
O nset 56.67 °C Peak He ight 83.71e -03 mW
P eak Hei ght 0.33 m W Peak 98.85 °C
0.2 P eak 65.67 °C Extrapo l. Peak 98.96 °C
mW E xtrapol . Peak 65.72 °C Endset 104.22 °C
E ndset 72.97 °C Peak Wi dth 12.48 °C
P eak Wid th 9.51 ° C Left Li mit 78.59 °C
L eft Lim it 49.98 °C Right L imit 114.83 °C
R ight Li mit 78.17 °C Left bl Limit 78.59 °C
L eft bl Limit 49.98 °C Right b l Limit 114.83 °C
R ight bl Limit 78.17 °C Heating Rate 10.00 °Cmin^- 1
H eating Rate 10.00 °Cmin^- 1 Baselin e Type line
B aseline Type line Result Mode Sample Temp
R esult M ode Sample Temp Left Ar ea 59.02 %
L eft Are a 55.82 % Right A rea 40.98 %
R ight Ar ea 44.18 %
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 °C
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 m in
Universidad de Santiago de Chile: Lab. Prop. Fisicas METTLER TOLEDO STA Re System
Figura 49: DSC en el tiempo inicial, harina de quinua pulida proveniente de La Palmilla
^exo Paredones sin Pulir Seco 22.09.2004 13:12:39
Muestra: Paredones sin pulir
Peso muestra húmeda: 15.86 mg
Peso muestra seca: 3.25 mg
Rango de temperatura: 15°C a 120°C
Flujo de calor: 10°C/min
Medio Buffer B
Concentración al 20%
Integral -7.57 mJ
normalized -2.33 Jg^-1
Onset 86.20 °C
Peak Height 68.30e-03 mW
Int egral -23. 62 mJ Peak 99.20 °C
Extrapol. Peak 106.29 °C
0.5 n ormaliz ed -7.2 7 Jg^-1
Ons et 57 .15 °C Endset 112.82 °C
mW
Peak Width 19.90 °C
Pea k Heigh t 0. 36 mW
Left Limit 84.79 °C
Pea k 65 .35 °C
Right Limit 112.82 °C
Ext rapol. Peak 65 .63 °C
Left bl Limit 84.79 °C
End set 73 .39 °C
Right bl Limit 112.82 °C
Pea k Width 9. 54 °C
Heating Rate 10.00 °Cmin^-1
Lef t Limit 47 .95 °C
Baseline Type line
Rig ht Limi t 80 .60 °C
Result Mode Sample Temp
Lef t bl Li mit 47 .95 °C
Rig ht bl L imit 80 .60 °C Left Area 41.86 %
Right Area 58.14 %
Hea ting Ra te 10 .00 °Cm in^-1
Bas eline T ype li ne
Res ult Mod e Sa mple Te mp
Lef t Area 50 .86 %
Rig ht Area 49 .14 %
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 °C
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 m in
Universidad de Santiago de Chile: Lab. Prop. Fisicas METTLER TOLEDO STA Re System
Figura 50: DSC en el tiempo inicial, harina de quinua sin pulir proveniente de
Paredones
B) Resultados obtenidos al finalizar el estudio, en este
caso aumenta el número de curvas puesto que cada harina
fue almacenada a tres temperaturas: 20, 30 y 40°C
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 °C
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 m in
Universidad de Santiago de Chile: Lab. Prop. Fisicas METTLER TOLEDO STA Re System
Figura 51: DSC en el tiempo final, harina de quinua pulida proveniente de La Palmilla
almacenada a 20ºC
^exo Lo Palmilla Pulida 30 07.04.2005 17:43:03
Muestra: Lo Palmilla Pulida 30
Peso Muestra: 20,8 mg
Rango de Temperatura: 15°C a 120°C
Flujo de Calor: 10°C/min
Medio: Buffer B
LPP30, 07.04.2005 17:32:32
Concentración al 20%
LPP30, 20.0000 mg
Integral -28.41 mJ
normalized -1.42 Jg^-1
Onset 55.05 °C Integral -0.34 mJ
Peak Height 0.41 mW normalized -16.88e-03 Jg^-1
Peak 63.82 °C Onset 96.80 °C
Extrapol. Peak 63.84 °C Peak Height 19.43e-03 mW
Endset 72.79 °C Peak 98.84 °C
Peak Width 10.20 °C Extrapol. Peak 98.91 °C
Integral -0.10 mJ
0.2 Left Limit 46.78 °C
normalized -5.12e-03 Jg^-1
Onset 79.24 °C
Endset 101.87 °C
mW Right Limit 77.83 °C
Peak Height
Peak
9.53e-03 mW
81.17 °C
Peak Width 2.89 °C
Left bl Limit 46.78 °C
Extrapol. Peak 81.06 °C
Endset 82.57 °C
Left Limit 96.75 °C
Peak Width 1.69 °C
Right bl Limit 77.83 °C Left Limit 78.28 °C Right Limit 102.38 °C
Right Limit 84.33 °C
Heating Rate 10.00 °Cmin^-1 Left bl Limit 78.28 °C Left bl Limit 96.75 °C
Right bl Limit 84.33 °C
Baseline Type line Heating Rate 10.00 °Cmin^-1 Right bl Limit 102.38 °C
Baseline Type line
Result Mode Sample Temp Result Mode
Left Area
Sample Temp
64.82 %
Heating Rate 10.00 °Cmin^-1
Left Area 50.80 % Right Area 35.18 % Baseline Type line
Right Area 49.20 % Result Mode Sample Temp
Left Area 38.36 %
Right Area 61.64 %
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 °C
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 m in
Universidad de Santiago de Chile: Lab. Prop. Fisicas METTLER TOLEDO STA Re System
Figura 52: DSC en el tiempo final, harina de quinua pulida proveniente de La Palmilla
almacenada a 30ºC
^exo Lo Palmilla Pulida 40 07.04.2005 17:15:28
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 °C
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 m in
Universidad de Santiago de Chile: Lab. Prop. Fisicas METTLER TOLEDO STA Re System
Figura 53: DSC en el tiempo final, harina de quinua pulida proveniente de La Palmilla
almacenada a 40ºC
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 °C
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 m in
Universidad de Santiago de Chile: Lab. Prop. Fisicas METTLER TOLEDO STA Re System
Figura 54: DSC en el tiempo final, harina de quinua sin pulir proveniente de La Palmilla
almacenada a 20ºC
Integral -0.41 mJ
normalized -17.23e-03 Jg^-1
Onset 97.55 °C
Peak Height 20.35e-03 mW
In tegral -23 .78 mJ Peak 99.71 °C
normali zed -1. 01 Jg^- 1 Extrapol. Peak 99.82 °C
On set 5 6.23 °C Endset 103.07 °C
In teg ral -0 .50 mJ
Pe ak Heig ht 0 .39 mW nor malized -2 1.2 2e- 03 Jg^- 1 Peak Width 3.18 °C
On set 81. 68 °C
Pe ak 6 4.19 °C Pe ak Height 14. 15e -03 mW Left Limit 97.16 °C
Pe ak 84. 87 °C
Ex trapol. Peak 6 4.48 °C Ex tra pol. Pe ak 84. 73 °C Right Limit 104.26 °C
0.5 En dset 7 2.17 °C
En dse t
Pe ak Width
89. 41 °C
6.7 2 ° C Left bl Limit 97.16 °C
Le ft Limit 81. 68 °C
mW Pe ak Widt h 9 .34 °C Ri ght Limit 90. 37 °C Right bl Limit 104.26 °C
Le ft bl Limi t 81. 68 °C
Le ft Limi t 4 8.62 °C Ri ght bl Lim it 90. 37 °C
He ati ng Rate 10. 00 °Cmin^- 1
Heating Rate 10.00 °Cm in^-1
Ri ght Lim it 7 6.38 °C Ba sel ine Typ e lin e
Re sul t Mode Sam ple Temp Baseline Type line
Le ft Area 37. 74 %
Le ft bl L imit 4 8.62 °C Ri ght Area 62. 26 % Result Mode Sample Te mp
Ri ght bl Limit 7 6.38 °C Left Area 35.55 %
He ating R ate 1 0.00 °C min^-1 Right Area 64.45 %
Ba seline Type l ine
Re sult Mo de S ample T emp
Le ft Area 5 0.57 %
Ri ght Are a 4 9.43 %
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 °C
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 m in
Universidad de Santiago de Chile: Lab. Prop. Fisicas METTLER TOLEDO STA Re System
Figura 55: DSC en el tiempo final, harina de quinua sin pulir proveniente de La Palmilla
almacenada a 30ºC
^exo Lo Palmilla Sin Pulir 40 07.04.2005 17:33:28
LPSP40 , 07.04 .2005 1 6:37:03
LPSP40 , 26.00 00 mg
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 °C
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 m in
Universidad de Santiago de Chile: Lab. Prop. Fisicas METTLER TOLEDO STA Re System
Figura 56: DSC en el tiempo final, harina de quinua sin pulir proveniente de La Palmilla
almacenada a 40ºC
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 °C
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 m in
Universidad de Santiago de Chile: Lab. Prop. Fisicas METTLER TOLEDO STA Re System
Figura 57: DSC en el tiempo final, harina de quinua sin pulir proveniente de Paredones
almacenada a 30ºC
20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 °C
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 m in
Universidad de Santiago de Chile: Lab. Prop. Fisicas METTLER TOLEDO STA Re System
Figura 58: DSC en el tiempo final, harina de quinua sin pulir proveniente de Paredones
almacenada a 40ºC
ANEXO 17
Temperatura 20ºC α
Harina Paredones B LPP A, B LPSP A
Tiempo
0 5,19c ± 1,68 4,53c ± 0,21 4,19c ± 0,02
1 3,02b ± 0,33 3,46b ± 0,30 3,23b ± 0,40
2 2,81b ± 0,04 3,40b ± 0,17 3,13b ± 0,16
3 3,60b ± 1,65 2,82b ± 0,52 2,72b ± 0,003
4 2,36a ± 0,05 2,26a ± 0,17 2,72a ± 0,82
Temperatura 30ºC β
Harina Paredones B LPP A, B LPSP A
Tiempo
0 5,19c ± 1,68 4,53c ± 0,21 4,19c ± 0,02
1 3,97b ± 0,20 4,13b ± 0,02 3,41b ± 0,48
2 4,04b ± 0,28 3,67b ± 0,79 3,06b ± 0,18
3 4,26b ± 0,44 3,06b ± 0,82 3,54b ± 0,55
4 3,03a ± 0,40 2,71a ± 0,01 2,88a ± 0,87
Temperatura 40ºC β
Harina Paredones B LPP A, B LPSP A
Tiempo
0 5,19c ± 1,68 4,53c ± 0,21 4,19c ± 0,02
1 4,30b ± 0,32 3,86b ± 0,20 3,19b ± 0,13
2 3,53b ± 0,08 3,09b ± 0,30 3,19b ± 0,09
3 4,47b ± 0,08 3,75b ± 0,52 3,15b ± 0,25
4 3,31a ± 0,72 2,92a ± 0,29 2,90a ± 0,50
Temperatura 20ºC β
Harina Paredones A LPP B LPSP B
Tiempo
0 9,41c ± 0,80 13,32c ± 1,36 11,67c ± 0,40
1 11,38d ± 0,17 14,78d ± 0,13 16,24d ± 0,38
2 11,06d ± 0,27 14,91d ± 1,12 14,93d ± 0,37
3 5,58b ± 0,38 8,11b ± 0,81 11,49b ± 0,48
4 6,86b ± 0,97 8,85b ± 0,64 9,49b ± 0,76
5 6,61a ± 0,10 7,10a ± 0,12 8,65a ± 0,30
Temperatura 30ºC α
Harina Paredones A LPP B LPSP B
Tiempo
0 9,41c ± 0,80 13,32c ± 1,36 11,67c ± 0,40
1 10,56d ± 0,30 14,46d ± 1,38 15,02d ± 1,31
2 10,89d ± 0,44 13,64d ± 0,68 13,81d ± 0,62
3 5,78b ± 1,95 7,51b ± 0,15 7,90b ± 1,37
4 6,23b ± 0,51 9,53b ± 0,86 8,37b ± 0,08
5 5,08a ± 0,16 6,35a ± 0,50 6,98a ± 0,14
Temperatura 40ºC β
Harina Paredones A LPP B LPSP B
Tiempo
0 9,41c ± 0,80 13,32c ± 1,36 11,67c ± 0,40
1 10,68d ± 0,32 14,94d ± 1,00 16,29d ± 0,72
2 10,90d ± 0,90 13,41d ± 0,13 14,89d ± 0,13
3 10,15b ± 0,42 8,92b ± 1,67 8,85b ± 0,03
4 7,21b ± 0,49 8,85b ± 0,28 9,20b ± 0,42
5 6,14a ± 0,64 8,36a ± 0,30 7,87a ± 0,16