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LABORATORIO 3:
“MÉTODOS DE FIJACIÓN Y COLORACIÓN DE
MUESTRAS”
ALUMNA:
ERLINDA NOEMÍ PAZ VILLANUEVA
CURSO:
ESTRUCTURA Y FUNCIÓN CELULAR Y TISULAR I
DOCENTE:
Dra. VIOLETA MORÍN GARRIDO
Dr. CARLOS HOLGUÍN MAURICCI
CICLO:
II CICLO
FECHA DE ENTREGA:
MARTES 19 DE OCTUBRE
PIURA – 2017
UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
INTRODUCCIÓN
La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad
específica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia
son moléculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con
los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los ácidos
nucleicos y los polisacáridos ácidos. Ejemplos de colorantes catiónicos son el azul
de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son moléculas
cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares
cargados positivamente, tales como muchas proteínas. Esos colorantes incluyen la
eosina, la fucsina ácida y el rojo Congo.
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OBJETIVOS
Presentación para conocimiento de métodos de fijación y
coloración.
MARCO TEÓRICO
MÉTODOS DE FIJACIÓN Y COLORACIÓN DE MUESTRAS
FIJACION
Es un procedimiento cuya finalidad, al aplicarlo es Detener la vida de las células e
impedir las modificaciones postmorten que pueda sufrir la célula (procesos
autolíticos), manteniendo la estructura morfológica de células y tejidos sin que
ocurran cambios notables en ellos.
Esto se consigue inmovilizando (por coagulación o precipitación) las moléculas
proteínicas e inhibiendo principalmente las enzimáticas haciéndolas insolubles. Esta
acción garantiza la integridad de las células y tejidos; se efectúa por mediante
agentes químicos denominados fijadores.
Los fijadores se clasifican en dos grandes grupos:
TINCIÓN O COLORACIÓN
Una tinción o coloración es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para
mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio.
Los colorantes y tinturas son sustancias que usualmente se utilizan en biología y
medicina para resaltar estructuras en tejidos biológicos que van a ser observados
con la ayuda de diferentes tipos de microscopios.
Se denomina así a la tinción que se ejerce sobre células y tejidos cuando éstos se
ponen en contacto con la solución colorante, el resultado indica una verdadera
afinidad entre el tejido y el colorante. Ejemplo: la tinción de los núcleos por el azul
de metileno.
Coloración indirecta o adjetiva
En este caso los tejidos se sobrecolorean con el colorante para someterlos después
a la acción de una sustancia denominada diferenciador, éste extrae parte del
colorante y, mediante la observación al microscopio, se detiene el proceso de
diferenciación cuando los componentes alcanzan la tinción deseada.
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Coloración simple
COLORANTES
El termino colorante se da a las sustancias que se prefiere sean de origen orgánico
o de procedencia de especies vegetales o animales como la hematoxilina
procedente del “árbol mejicano”; el carmín, que se extrae de la hembra de la
cochinilla y la orceína y el tornasol que se extraen de “líquenes”; pero los hay
también de origen sintético y pueden proceder de la anilina, el alquitrán de hulla y
son derivados del benceno.
PRÁCTICA DE LABORATORIO
MATERIALES
Microscopio Alcohol
Glóbulos rojos Laminas portaobjetos
Lápiz de cera Agua destilada
Plumón o marcador de vidrio Lanceta estéril
Pinzas Hisopos estériles
Papel filtro absorbente Goteros
Algodón Palitos mondadientes
Laminas portaobjetos Colorante Wright
Frasco de enjuague Set de coloración Gram.
Colorantes
Azul de metileno 1%
Eosina 1 %
Lugol 1%
PROCEDIMIENTO
I.PREPARACIÓN DE FRONTIS SANGUÍNEO
1. Utilizar portaobjetos limpios, libres de grasa.
2. Marcar por el reverso de la lámina el número o código de la muestra, o
del grupo de trabajo.
3. Con las manos limpias o recién lavadas, limpiar con alcohol el extremo
del dedo y con ayuda de la lanceta estéril, pinchar y extraer una gota de
sangre y colocarla en el extremo del portaobjeto.
4. Con un segundo portaobjetos sostenido entre los dos dedos del pulgar e
índice, forme un ángulo de 30° con el primer portaobjetos.
5. Desplazar el segundo portaobjetos sobre el primero de derecha a
izquierda para que la sangre quede esparcida a lo largo detrás del
portaobjetos, luego levante y quite el portaobjetos.
6. Observar que al secarse quedará una capa muy delgada de sangre.
7. Introducir la lámina bien seca dentro de un frasco de enjuague para verter
sobre ella el colorante de Wright que se mantiene sobre la lámina por 2
min.
8. Agregar agua destilada suficiente para quitar la mayor parte del colorante
y dejar secar por tres minutos.
9. Eliminar el resto de colorante, introduciendo la l{amina en el frasco que
contiene agua destilada, sujetándolo cuidadosamente por los bordes por
espacio de 3 min.
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10. Extraer la lámina y escurrir el exceso de agua, puede airearse para secar
o ayudarse de papel absorbente, teniendo cuidado de no tocar la
superficie coloreada.
OBSERVACIONES
Actividad
Realizar el reconocimiento de los diferentes tipos de glóbulos
blancos y hacer un dibujo de cada uno de ellos.
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OBSERVACIONES
CONCLUSIONES
La fijación coagula las sustancias proteicas de las células, lo cual hace que
los microorganismos queden pegados al portaobjetos. Con este
procedimiento no mueren todas las bacterias.
BIBLIOGRAFÍA
http://seramix.blogs.uv.es/2013/05/08/preparacion-y-tincion-de muestras/
https://prezi.com/uio5lty6pz8s/tecnicas-de-fijacion-y-tincion/
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm
http://histologiaunam.mx/descargas/ensenanza/portal_
recursos_linea/apuntes/3_tecnica_histologica.pdf
http://acuanatura.galeon.com/cursosonline/tecnicasdetincion/tecnicasdeti
ncion.pdf
http://cdigital.dgb.uanl.mx/la/1020082552/1020082552_019.pdf