HIGIENE Y SANEAMIENTO

“Trabajo Práctico Nº1

Análisis de Potabilidad de Agua”

Alumna: Saldivar Cintia

Turno noche

Año 2018
 Análisis de Agua

OBJETIVO
Analizar las propiedades fisicoquímicas y microbiológicas de una muestra de agua, y determinar la
potabilidad de ésta para consumo humano.

METODOLOGIA
Protocolo de análisis para agua de consumo humano.

MUESTRA ANALIZADA
Muestra Nº40

ESPECIFICACIONES SEGÚN CÓDIGO ALIMENTARIO ARGENTINO (CAA).

CAPÍTULO XII. BEBIDAS HÍDRICAS, AGUA Y AGUA GASIFICADA AGUA POTABLE.
Artículo 982: “Con las denominaciones de Agua potable de suministro público y Agua potable de
uso domiciliario, se entiende la que es apta para la alimentación y uso doméstico: no deberá
contener substancias o cuerpos extraños de origen biológico, orgánico, inorgánico o radiactivo en
tenores tales que la hagan peligrosa para la salud. Deberá presentar sabor agradable y ser
prácticamente incolora, inodora, límpida y transparente. El agua potable de uso domiciliario es el
agua proveniente de un suministro público, de un pozo o de otra fuente, ubicada en los reservorios
o depósitos domiciliarios.

CARACTERÍSTICAS MICROBIOLÓGICAS:

Análisis Microbiológico del agua

Especificación Conclusión
Parámetro Metodología Valores obtenidos
según CAA parcial
Recuento de
bacterias
Medio de cultivo TSA (12 ml) Placa 1 = 2 UFC/ml
heterótrofas
Temp. Incubación = 35 ± 2ºC  500 UFC/ml Placa 2 = 0 UFC/ml Cumple
aerobias y
Tiempo de incubación: 48hs Promedio = 1 UFC/ml
anaeróbicas
facultativas

Investigación del Caldo Mac Conkey. Sembrar Combinación de tubos

grupo de coliformes 10 ml, 1ml, 0.1ml.  3 coliformes/100 positivos: (1-0-0)
No cumple
por la técnica de Temp. Incubación = 37ºC ml de muestra equivale a
NMP Tiempo de incubación: 48hs 3,6 NMP/100ml

a) Caldo Mac Conkey para

Coliformes Fecales:
a) Viraje al amarillo sin
Determinación de la Temp Incubación: 44.5ºC a) Negativo
presencia de gas
presencia de Tiempo incubación:24hs a) Negativo b) Negativo
dentro de la campana
coliformes fecales b) Agua Triptona para ver b) Negativo
de Durham
y/o Escherichia coli Escherichia coli: Cumple
b) No se revela
Temp Incubacion:44.5ºC
Tiempo incubación:24hs
 Análisis de Agua
a) Enriquecimiento en TSB,
Temp Incubación: 37ºC
Tiempo incubación:24hs
b) Colonias Verdes
b) Aislamiento en Agar
Cetrimide,
Temp Incubacion:37ºC
Tiempo incubación:24/48hs
c) Negativo
Investigación de c) Caldo Nitrato con campana
ausencia de de Durham,
Pseudomonas Temp Incubacion:42ºC Ausencia/100 ml No Cumple
aeruginosa en Tiempo incubación:24hs
d) Positiva
100ml de muestra
d) Prueba de oxidasa,

e) Siembra en King A,
e) y f) Presencia de
Temp Incubacion:37ºC
pigmentos
Tiempo incubación:24hs
fluorescentes
f) Siembra en King B,
Incubacion:37ºC
Tiempo incubación:24hs

Metodología, Especificaciones (Según el Código Alimentario Argentino) y Resultados

Antes de tomar la muestra homogeneizar con la misma pipeta estéril con la que se va a tomar la
alícuota a fin de tomar una porción representativa de la misma.
El frasco que contiene la muestra debe abrirse en condiciones de esterilidad para evitar contaminar
la muestra con agentes externos a la misma.

Recuento de bacterias heterótrofas aerobias y anaerobias facultativas:

Colocar en las cajas de Petri 1 ml de la muestra por duplicado. Luego verter 12 ml del medio TSA
previamente fundido y a una temperatura de 44°C a 46°C. El medio y la muestra contenidos en
cada placa deben mezclarse perfectamente y distribuirse de modo uniforme en el fondo de la caja,
por rotación. Una vez solidificado el medio, incubar a 35± 2°C durante 48 horas.
El CAA establece para el recuento de bacterias heterótrofas aerobias y anaerobias facultativas un
límite de ≤500 ufc/ml.

Resultado:

Placa 1: 2 ufc/ml
Placa 2: 0 ufc/ml
Promedio: 1 ufc/ml

Investigación del grupo Coliformes por la técnica del NMP:

Sembrar 3 porciones de 0,1 ml de muestra en 3 tubos de caldo Mac Conkey simple concentración,
3 porciones de 1 ml en los otros 3 tubos de medio simple concentración, y 3 porciones de 10 ml de
muestra en los 3 tubos de medio de cultivo doble concentración. Incubar a 37°C durante 48 horas.
De acuerdo con los tubos positivos (con viraje del indicador de pH y gas en la campanita), buscar
en tablas, el NMP de bacterias coliformes presentes en 100 ml de muestra.
El CAA establece un límite de ≤3 coliformes/100 ml muestra.
 Análisis de Agua
Resultado:

Serie 1: 1-0-0
Serie 2: 0-0-0
Serie 3: 0-0-0
Lectura: 1-0-0
Valor de tabla= 3,6 coliformes/100ml

Determinación de la presencia de coliformes fecales y/o Escherichia Coli:

De los tubos positivos, proseguir con la determinación de presencia de coliformes fecales y de
Escherichia coli, realizando un repique al caldo Mac Conkey y otro en Agua triptona. Incubar 24
horas a 44 – 44,5°C. Si se observa producción de gas, revelar indol con el reactivo de Kovacs.
El CAA establece ausencia de coliformes fecales y/o Escherichia Coli en 100 ml

Resultado:

Tubo con caldo Mac Conkey: vira al amarillo, pero no se observa producción de gas.
Tubo con Agua Triptona: no se revela porque no se observa producción de gas

Investigación de ausencia de Pseudomona Aeruginosa en 100ml de muestra:

Realizar un enriquecimiento, en el frasco estéril, de 100 ml de muestra. Incubar a 37°C durante 24
horas. Luego, hacer un aislamiento en agar Cetrimide. Incubar a 37°C durante 24/48 horas.
Observar pigmentos. Realizar un repique en medio de TSA inclinado, logrando así un cultivo puro
para efectuar las siguientes pruebas:
a) Investigación de producción de nitrógeno en caldo nitrato con campanita mediante la
siembra de una ansada a partir del TSA inclinado e incubación del medio a 42°C durante
24 horas. Observar la presencia de turbidez y gas en la campanita.
b) Prueba de oxidasa: preparar una suspensión del microorganismo a partir del TSA inclinado
en el tubo de hemólisis con agua destilada. Volcar el disco de oxidasa del otro tubo y
observar la aparición inmediata de coloración (dentro del primer minuto).
c) Siembra en los medios King A y King B inclinados para observar pigmentos piocianina y
fluoresceína, respectivamente. Luego de su incubación a 37ºC durante 24 horas. Observar
el desarrollo de pigmentos azules y verdes respectivamente. Al medio de King A se le
puede realizar una extracción del pigmento piocianina con cloroformo en medio amoniacal;
mientras que la producción de fluoresceína puede observarse bajo lámpara UV.
El CAA establece ausencia de Pseudomona Aeruginosa en 100 ml de muestra.

Resultado:

Agar cetrimide: colonias, verde azuladas.

Caldo nitrato con campanita: negativo, no se observa turbidez ni producción de gas.
Prueba de oxidasa: se observa una coloración violácea.
Tubo King A: se observa coloración azul verdoso
Tubo King B: se observa coloración verde fluorescente.

CARACTERÍSTICAS FISICOQUÍMICAS

Análisis Fisicoquímico del Agua

 Análisis de Agua
Conclusión
Parámetro Metodología Especificación según CAA Valor obtenido
parcial
Aspecto Físico Color: Incoloro
Color: máx 5 escala Pt-Co
Color: Turbiedad: no se
Cualitativo Turbiedad: máx 3 NTU Cumple
Turbiedad: observan partículas
Olor: Inodora
Olor: Olor: sin olores extraños
Determinación
Indicadores de pH 6.5 - 8.5 pH = 7 Cumple
de pH

Cloruros Titulación volumétrica Máximo 350 mg/l Cumple

5 mg/l

Espectrofotométrico
0,1 mg/l
Cloro Residual Absorbancia a Mínimo 0,20 mg/ No Cumple
515 nm

Espectrofotométrico
Amoníaco Máximo 0,20 mg/L 0 mg/l Cumple
Abs 640 nm

Espectrofotométrico
Nitrito Máximo 0,10 mg/l 0,02 mg/l Cumple
Abs 543 nm

Espectrofotométrico
Nitrato Abs 220nm Máximo: 45 mg/l 0 mg/l Cumple
Abs 275nm

Espectrofotométrico
Fluoruros (0,6-0,8) mg/L 0,3 mg/l No Cumple
Abs 570nm
Espectrofotométrico
Sulfatos Máximo: 400 mg/l 85 mg/l Cumple
Abs 420nm

Dureza Titulación volumétrica Máximo: 400 mg/l 2 mg/l de CaCO3 Cumple

Alcalinidad Titulación volumétrica Máximo: 400 mg/l de CaCO3 190 mg/l de CaCO3 Cumple

1235 mg/l
Residuo Seco Pérdida por secado Máximo: 1500 mg/L Cumple

Aspecto:
Observar color, olor y sabor.
Especificación: incoloro, sin olores extraños, y debe estar libre de partículas extrañas.
Resultado: incoloro, sin olores extraños, y no se observan partículas.
 Análisis de Agua
pH:
Determinar mediante tiras indicadoras de pH.
Especificación de pH: 6,5-8,8
Resultado: 7

Cloruros:
Usar 100 ml de muestra. Titular las muestras directamente en un pH de 7-10. Ajustar la muestra en
ese rango de pH con H2SO4 o NaOH. Agregar un 1 ml de solución de cromato de potasio. Titular
con nitrato de plata estándar hasta punto final que vire del amarillo al rojizo ladrillo. Realizar un
blanco con agua destilada.

Cálculos:

Cl- (mg/l) = V x N x 35,450x103

ml muestra
Dónde:
N= normalidad del nitrato de plata
V= ml de titulante gastados en la muestra menos ml de titulante gastados en el blanco.

Especificación: máximo 350 mg/l

Resultado:

Factor: 1,00
N AgNO3: 0,0141 N
Volumen de AgNO3 gastado en el blanco: 0 ml
Volumen de AgNO3 gastado: 1,1ml
Volumen de Muestra: 100 ml
Cl- (mg/l) = 1, 1 x 0, 0141 x 35,450x103 =5,49 mg/l
ml muestra
 Análisis de Agua
Cloro Residual

1) Cloro libre: Tomar 10 ml de muestra. Agregar 0,5 ml de buffer y 0,5 ml de DPD. Mezclar y colocar
en la celda fotométrica. Leer el color inmediatamente a 515 nm e interpolar en curva patrón.
(LECTURA A).
2) Monocloramina: Continuar con adición de un pequeñísimo cristal de ioduro de potasio (aprox.
0,1 mg) y mezclar. Si se espera que la concentración de dicloramina sea elevada, en lugar del
pequeño cristal, adicional 0,1 ml (2 gotas) de una solución recientemente preparada de KI (0,1
g/100 ml). Leer el color inmediatamente. (LECTURA B).
3) Dicloramina: Continuar con adición de varios cristales de ioduro de potasio en exceso (aprox. 0,1
g) y mezclar hasta disolver. Dejar reposar dos minutos y leer el color. (LECTURA C).
4) Tricloramina: Colocar un pequeñísimo cristal de ioduro de potasio (aprox. 0,1 mg) en un tubo
limpio. Agregar 10 ml de muestra y mezclar. A un segundo tubo agregar 0,5 ml de buffer y 0,5 ml de
reactivo indicador, mezclar. Agregar el contenido del segundo tubo al primero y mezclar. Leer el
color inmediatamente. (LECTURA N).
5) Correción de color usando tioacetamida: A 10 ml de muestra, agregar 0,05 ml de la solución de
tioacetamida. Luego de mezclar, adicionar el buffer y el reactivo DPD. Leer el color
inmediatamente. Agregar varios cristales de KI (aprox. 0,1 g) y mezclar hasta disolución. Dejar
reposar por dos minutos y leer el color obtenido. Restar la primera lectura a la lectura A y la
segunda a la lectura C y usar las lecturas corregidas para los cálculos.

Lectura NCl3 Ausente NCl3 Presente

A Cl Libre Cl Libre
B-A NH2Cl NH2Cl
C-B NHCl2 NHCl2+1/2 NCl3
N - Cl Libre+1/2 NCl3
2(N-A) - NCl3
C-N - NHCl2
En caso de que la monocloramina esté presente con NCl3, será incluída en la lectura N, en cuyo
caso se obtiene NCl3 a partir de 2(N-B).

Datos crudos Lecturas corregidas

Blanco = 0,015
Lectura A = 0,018 Lectura A = 0,002
Lectura B = 0,020 Lectura B = 0,002
Lectura C = 0,026 Lectura C = 0,006
Lectura N = 0,005 Lectura N = 0,005
Corrección de color
Lectura 1 = 0,016
Lectura 2 = 0,018

Resultado

Cl- libre = 0,018

Monocloramina= 0,018
Dicloramina = 0,020
Tricloramina = 0,027

Cloro Residual = Cl- libre+ Monocloramina+ Dicloramina+ Tricloramina= 0,083 mg/l

 Análisis de Agua

Amoniaco
Colocar 10 ml de la muestra en un tubo de ensayo, agregar (mezclando completamente luego de
cada adición) 0,4 ml de fenol, 0,4 ml de nitroprusiato sódico y 1 ml de solución oxidante. Cubrir las
muestras envolviendo con parafilm. Dejar revelar el color a temperatura ambiente (22-27° C) en luz
suave durante mínimo una hora. El color es estable por 24 horas. Medir absorbancia a 640nm.
Cálculos: determinar la concentración de la muestra por interpolación de la absorbancia en la curva
patrón.
Especificación: máximo 0,2 mg/l

Resultado:
 Análisis de Agua
Absorbancia a 640nm = -0,237
Concentración por interpolación = -0,5257 mg/l
La absorbancia a 640nm dio resultado negativo. Esto puede deberse a una cantidad apreciable de
Amoníaco en el Blanco (agua bidestilada)

Nitritos
Si el pH de la muestra no está entre 5 y 9, ajustar ese rango con HCl 1N o NH 4OH. A 10 ml de la
muestra agregar 0,4 ml del reactivo de color y mezclar. Entre 10 minutos y hasta 2 horas después,
medir absorbancia a 543 nm.
Determinación por medidor multiparamétrico
Especificación: máximo 0,1 mg/L
Resultado:
0,02mg/l de Nitritos

Nitratos
Tomar 10 ml de la muestra limpia (o una dilución 1/10 de la misma en agua redestilada) y agregarle
0,2 ml de solución de HCl y mezclar completamente. Leer absorbancia contra agua bidestilada
llevando a cero la absorbancia. Usar 220 nm para obtener lecturas de nitratos y 275 nm para
determinar interferencias por materia orgánica disuelta.
Cálculos:
AbsNO3- = Abs220 – 2 Abs275
Obtener la concentración de la muestra, directamente de la curva estándar, usando la absorbancia
de la muestra corregida. Si el valor de corrección es mayor de 10 % de la lectura hecha a 220 nm,
no debe usarse este método.

Especificación: máximo 45 mg/

 Análisis de Agua
Resultado:
Absorbancia a 220nm = -0,049
Concentración por interpolación = -0,379 mg/l
La absorbancia a 220nm dio resultado negativo. Esto puede deberse a una cantidad apreciable de
Nitratos en el Blanco (agua bidestilada)

Fluoruros
Tomar 10 ml de la muestra. Ajustar la temperatura de la muestra a la utilizada en la preparación de
la curva patrón. Agregar 1 ml de solución SPADNS y 1 ml de reactivo ácido de zirconilo. Mezclar
bien y leer la absorbancia a 570 nm, llevando a cero la absorbancia con la solución de referencia
(blanco). En algunas situaciones pueden emplearse la muestra, si ésta presenta color, sin
reactivos.
Cálculos: Obtener la concentración de F directamente por interpolación en la curva patrón.

Especificación: para los fluoruros la cantidad máxima se da en función de la temperatura promedio

de la zona, teniendo en cuenta el consumo diario del agua de bebida. Para una temperatura media
de entre (21,5-26,5°C), el contenido límite recomendado de Flúor (mg/l) es de 0,7-1,0 mg/l.

Resultado:
Absorbancia de la muestra a 570nm = 0,337
Concentración por interpolación= 0,279 mg/l

Sulfatos
1) Formación de turbidez de sulfato de bario: Medir 10 ml de muestra dentro de un tubo de
ensayo. Agregar 2 ml de solución buffer y mezclar en agitador. Mientras se agita, agregar una
punta de espátula con cristales de cloruro de bario y empezar a registrar el tiempo
inmediatamente. Agitar un minuto a velocidad constante.
2) Medición de la turbidez del sulfato de bario: Una vez finalizado el período de agitación,
colocar la solución en la celda del espectrofotómetro y medir la turbidez a 420 nm durante 5 ±
0,5 minutos. Preparar un blanco de agua destilada y reactivos para establecer el cero de la
 Análisis de Agua
lectura espectrofotométrica. Corregir el color y la turbidez de la muestra mediante la corrida de
blancos a los cuales no se les agregó cloruro de bario. Estimar la concentración de sulfato en la
muestra por interpolación en la curva de calibración.

Para la curva de calibración se tomó 5 puntos, ya que si se toman más puntos da error en la determinación.

Especificación de sulfatos: máximo 400 mg/L

Resultado:
Absorbancia de la muestra a 570nm: 0,481
Absorbancia de la muestra (1:10) a 570nm: 0,037
Concentración interpolación= 8.571*10= 85,71 mg/l
*Se realizó una dilución 1/10 para poder interpolar con la curva. El resultado final está corregido por este factor.

Dureza
Tomar 25 ml de muestra y llevar a aproximadamente 50 ml con agua destilada. Agregar 1 o 2 ml de
solución buffer (generalmente 1 ml será suficiente para dar el pH 10,0 - 10,1). Agregar una pizca de
indicador negro de eriocromo T. Adicionar el titulante EDTA estándar lentamente, con agitación
continua, hasta que desaparezca el último tinte rojizo. Agregar las últimas gotas en intervalos de 3 a
5 segundos. En el punto final, la solución normalmente es azul. Trabajar por duplicado. La diferencia
entre los resultados obtenidos no debe ser mayor al 2 %.
Cálculos:
Dureza (EDTA) como CaCO3 (mg/l) = A x N x 1000
ml muestra
Dónde:
A = ml de titulante usado para la muestra.
N = normalidad del titulante empleado.
Especificación de dureza: máximo 400 mg/l

Resultado:
V1: 2,5 ml
V2: 2,5 ml
 Análisis de Agua
Vb: 0 ml
Dureza (EDTA) como CaCO3 (mg/l) = A x N x 1000/ml muestra
Dureza 1: 2,6x 0,02x1000/25=2,08 mg CaCO3/L
Dureza 2: 2,6x 0,02x1000/25=2,08 mg CaCO3/L
Promedio: 2,08 mg CaCO3/L

Alcalinidad
Agregar 100 ml de muestra en un erlenmeyer de 250 ml, incorporar 5-8 gotas del indicador de pH
anaranjado de metilo, y titular con H2SO4 0,1N hasta viraje del indicador.
Cálculos:
Alcalinidad (mg/LCaCO3) = ml de H2SO4 x N x 50000
Volumen de muestra

Vol.gastado: 1,9 ml
mg CaCO3/L = ml de H2SO4 x N x 50000/vol.muestra = 1.9 x 0,2 x 50000/100 = 190 mg CaCO3/L

Residuo Seco
Colocar en un cristalizador, 100 ml de muestra, que tiene que estar previamente tarado. Evaporar a
baño María, 2°C por debajo del punto de ebullición del agua, y luego secar el residuo en estufa a
103 – 105°C por una hora. Llevar el recipiente caliente a desecador hasta igualar temperatura
ambiente y pesar. Repetir el ciclo hasta peso constante, el cual no debe variar más de un 4% entre
valores sucesivos. Los duplicados no pueden variar en más de un 5% en sus pesos promedios.
Cálculos:
Residuo a 105° C (mg/L) = (PC - PV) x 1000
Volumen de muestra
Dónde:
PC = peso del cristalizador con el residuo
PV = peso del cristalizador vacío

Residuo Seco: Máximo 1500 mg/L

Peso de cristalizador vacío: 98.1512g
Peso de cristalizador + residuo: 98.1994g
Volumen de muestra = 39ml

Residuo=(98.1994-98.1512)x1000/39 = 1235 mg/L

CONCLUSIÓN
Con respecto a los análisis microbiológicos en la muestra de agua podemos observar que esta
contaminada con pseudomonas aeruginosa (indicador de calidad higiénica del agua, lo cual nos
indica que el agua no es segura para el consumo humano.
Con respecto a los análisis fisicoquímicos en la muestra cumple todos los valores excepto los
valores de cloro residual y fluoruros que resultaron inferiores al mínimo. Los compuestos fluorados
se adicionan con el fin de prevenir caries. Es fundamental mantener en las redes de distribución
pequeñas concentraciones de cloro libre residual, desde las potabilizadoras hasta las acometidas
de los consumidores, para asegurar que el agua ha sido convenientemente desinfectada.