Practica nº 17

“ACCIÓN DE CALOR SECO Y HÚMEDO SOBRE LOS MICROORGANISMOS”

I. INTRODUCCIÓN:

Esterilización: eliminación o muerte de todos los microorganismos que contiene

un objeto o sustancia, y que se encuentran acondicionados de tal forma que no
pueden contaminarse nuevamente.
Los métodos de esterilización: Comprende todos los procedimientos físicos,
mecánicos y preferentemente químicos que se emplean para destruir gérmenes
patógenos.
Calor: Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la acción
del calor. El calor provoca desnaturalización de proteínas, fusión y
desorganización de las membranas y/o procesos oxidativos irreversibles en los
microorganismos. La efectividad del calor como método de esterilización
depende de: Temperatura y tiempo de exposición.

Calor húmedo: produce desnaturalización y coagulación de proteínas,

principalmente por dos razones: El agua es una especie química muy reactiva
y muchas estructuras biológicas (DNA, RNA, proteínas, etc) son producidas por
reacciones que eliminan agua. Por lo tanto, reacciones inversas podrían dañar
a la célula a causa de la producción de productos tóxicos. Además, las
estructuras secundarias y terciarias de las proteínas se estabilizan mediante
uniones puente de hidrógeno intramoleculares que pueden ser reemplazadas y
rotos por el agua a altas temperaturas.
El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho más
elevado que el aire. Por lo que, los materiales húmedos conducen el calor mucho
más rápidamente que los materiales secos debido a la energía liberada durante
la condensación.

El calor seco produce desecación de la célula, efectos tóxicos por niveles

elevados de electrolitos, procesos oxidativos y fusión de membranas. Estos
efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los
microorganismos que están en contacto con éstos. El aire es mal conductor del
calor, y el aire caliente penetra más lentamente que el vapor de agua en
materiales porosos. La acción destructiva del calor sobre proteínas y lípidos
requiere mayor temperatura cuando el material está seco o la actividad de agua
del medio es baja. Esto se debe a que las proteínas se estabilizan mediante
uniones puente de hidrógeno intramoleculares que son más difíciles de romper
por el calor seco.La estufa de esterilización es el artefacto utilizado en los
laboratorios para esterilizar por calor seco. Se requiere mayor temperatura y
tiempo de exposición que el autoclave. Sirve para esterilizar material de vidrio.
El papel y el algodón no pueden ser esterilizados a más de 160°C. (J.
Vicente,2003)

 OBJETIVO:

 Determinar cuál de los métodos de esterilización es más efectivo en

cuanto la eliminación de microorganismos.
II. MARTERIALES Y MÉTODOS:

Se realizó dos métodos de esterilización de un medio de cultivo liquido:

 Calor húmedo:
 EBULLICIÓN 100ºC

Tubos de ensayo

Tubo I Tubo I Tubo III Tubo IV

Control (-) Control (+) 5” 10”

Caldo común X X X X

0.2 ml de X X X
bacillus
subtilis
Ebullición a X
100º C por 5
minutos
Ebullición a X
100º C por
10 minutos
Incubar a X X X X
37ºC por 24h

Tubos de ensayo

Tubo I Tubo I Tubo III Tubo IV

Control (-) Control (+) 5” 10”

Caldo común X X X X

0.2 ml de X X X
Staphylococcus
aureus
Ebullición a X
100ºC por 5
minutos
Ebullición a X
100º C por 10
minutos
Incubar a 37ºC X X X X
por 24h
 PASTEURIZACIÓN RAPIDA (72ºC)

Tubos de ensayo
Tubo I Tubo I Tubo III Tubo IV
Control (-) Control (+) 5” 10”

Caldo común X X X X

0.2 ml de X X X
bacillus subtilis
Pauterizar a X
72ºC por 2
minutos
Pauterizar a X
72ºC por 10
minutos
Incubar a 37ºC X X X X
por 24h

Tubos de ensayo

Tubo I Tubo I Tubo III Tubo IV

Control (-) Control (+) 5” 10”

Caldo común X X X X

0.2 ml de X X X
Staphylococcus
aureus
Pauterizar a X
72ºC por 2
minutos
Pauterizar a X
72ºC por 10
minutos
Incubar a 37ºC X X X X
por 24h
 Tubo I Tubo III Tubo IV
Control (+) 5” 10”

Caldo agar X X X
sabouraud
0.2 ml de X X X
Asperguillus
niger
Pauterizar a X
72ºC por 2
minutos
Pauterizar a X
72ºC por 10
minutos
incubar a X X X
temperatura
ambiente por 3-7
dias

 Calor seco:

Tubos de ensayo

Tubo I Tubo II Tubo III Tubo IV

Control (+) 60°C 80°C 100°C

Caldo común X X X X

0.2 ml de X X X X
bacillus subtilis

en la autoclave X
por 60°c por
una hora
en la autoclave X
por 60°c por
una hora
en la autoclave X
por 60°c por
una hora
Incubar a 37ºC X X X X
por 24h
 Tubos de ensayo
Tubo I Tubo II Tubo III Tubo IV
Control (+) 60°C 80°C 100°C

Caldo común X X X X

0.2 ml de X X X X
Staphylococcus
aureus
en la autoclave X
por 60°c por
una hora
en la autoclave X
por 60°c por
una hora
en la autoclave X
por 60°c por
una hora
Incubar a 37ºC X X X X
por 24h

III. RESULTADOS:

 Calor húmedo:

 EBULLICIÓN 100ºC

 con bacillus subtilis

TUBO RESULTADO
Tubo I No hay crecimiento
control (-) bacteriano C (-) 5” 10”
Tubo II Si hay crecimiento
control (+) bacteriano
Tubo III Si hay crecimiento
a 5 minutos bacteriano

Tubo IV No hay crecimiento

a 10 minutos bacteriano
´

A mayor tiempo que se sometió a ebullición

más elimina la cantidad de bacterias en el
cultivo.
 Con Staphylococcus aureus

TUBO RESULTADO
Tubo I No hay crecimiento C (-) C(+) 5” 10”
control (-) bacteriano
Tubo II Si hay crecimiento
control (+) bacteriano
Tubo III No hay crecimiento
a 5 minutos bacteriano

Tubo IV No hay crecimiento

a 10 minutos bacteriano

El tiempo de ebullición al cual sometimos

a la bacteria disminuyo su crecimiento.

 PASTEURIZACIÓN RAPIDA (72ºC)

 con bacillus subtilis:

TUBO RESULTADO
Tubo I No hay crecimiento
control (-) bacteriano
Tubo II Si hay crecimiento
control (+) bacteriano
Tubo III Si hay crecimiento
a 2 minutos bacteriano

Tubo IV Si hay crecimiento

a 10 minutos bacteriano

En todos los tubos hay crecimiento bacteriano, en

forma de nata, lo que indica que la pauterizacion no
es un método eficaz para esterilizar un medio líquido.

 Con Staphylococcus aureus

TUBO RESULTADO
Tubo I No hay crecimiento
control (-) bacteriano
Tubo II Si hay crecimiento
control (+) bacteriano C (-) C(+) 2” 10”
Tubo III No hay crecimiento
a 2 minutos bacteriano

Tubo IV No hay crecimiento

a 10 minutos bacteriano
  Con Asperguillus niger:
TUBO RESULTADO
Tubo II Si hay crecimiento
control (+) bacteriano
Tubo III No hay crecimiento
a 2 minutos bacteriano

Tubo IV No hay crecimiento

a 10 minutos bacteriano

La pasteurización en el caso de s. aerus y el

asperguillus impidió el crecimiento y
reproducción en el medio de cultivo.

 Calor seco:
 Con bacillus subtilis
TUBO RESULTADO
Tubo I Si hay crecimiento
Control (+) bacteriano C (+) 60º 80º 100º
Tubo II Si hay crecimiento
60°C bacteriano
Tubo III Si hay crecimiento
80°C bacteriano

Tubo IV Si hay crecimiento

100°C bacteriano

 Con Staphylococcus aureus

TUBO RESULTADO
Tubo I Si hay crecimiento
Control (+) bacteriano C (+) 60º 80º 100º
Tubo II Si hay crecimiento
60°C bacteriano
Tubo III No hay crecimiento
80°C bacteriano

Tubo IV No hay crecimiento

100°C bacteriano

En el calor seco (autoclave) se pueden eliminar bacterias siempre que

estén a temperaturas altas como mínimo a 121º, pues las bacterias
son resistentes a distintas temperaturas algunas mueren a menor
temperatura y otra pueden sobrevivir a temperaturas muy elevadas.
.
IV. DISCUSIONES:

TECNICAS DE ESTERILIZACION: Para esto contamos con procedimientos

físicos o químicos. Los procedimientos físicos se dividen en energéticos y
mecánicos. Dentro de los primeros se encuentran: el calor y las radiaciones.
DESTRUCCION DE MICROORGANISMOS MEDIANTE CALOR: La energía
térmica es la forma mas efectiva de esterilización. Esta puede utilizarse como
calor húmedo o seco.
CALOR HUMEDO: Mecanismo de Acción: Al igual que los procesos de
desinfección, la esterilización térmica destruye a los microorganismos en forma
gradual; es por esto que no hay un único mecanismo de acción, sino más bien
la suma de distintos eventos complejos que se van sucediendo a medida que
aumenta la temperatura. Este tiene diversas técnicas como:
 Pasteurización: se utiliza para la destrucción de gérmenes patógenos, con
resistencia térmica similar o inferior a M.tuberculosis, Brucella y Salmonella.
Este no es un método de esterilización sino de desinfección, donde no se
destruyen ni esporos ni virus no lipídicos
 Ebullición: consiste en mantener un objeto o sustancia en un baño a 100ºC.
Aplicado así destruye la mayoría de las formas vegetativas bacterianas, hongos
y virus lipídicos (por Ej.: Herpesvirus y HIV). En cambio, no es efectivo para la
destrucción de esporos y virus no envueltos. Citado por J. Fuller, 2007.

Al realizar la practica en calor húmedo, se observó que la pasteurización impide

el crecimiento bacteriano solo a la bacteria s. aerus y al hongo Asperguillus
niger, pues en los tubos que tenían estos microorganismos no presentan la
nata que indica crecimiento, en cambio en los tubos con caldo y la bacteria
bacillius subtilis si se observa crecimiento, lo que podría determinar que esta
última bacteria tiene resistencia térmica mayor a los otros microorganismos.
Al realizar el método de ebullición a 100ºC se comprobó que es un método que
si destruye la mayoría de formas vegetativas bacterianas, pues tanto como en
el bacillus subtilis como en el s. aerus, impidio su crecimiento cuando estuvo
en ebullición más tiempo.

V. CONCLUSION:

Al realizar la practica logramos conocer algunos métodos de esterilización,

dentro de ellos sus ventajas y desventajas que presentan y los factores influyen
en su aplicación y también se identificó el método más seguro para la eliminación
de microorganismos en nuestro medio de cultivo.

VI. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS:

 José García García Saavedra, José Carlos Vicente García, Tecnicas de

descontaminación, 1ª edición, editorial paraninfo, España, 2003.
 Joanna Kotcher Fuller, Joanna Ruth Fuller, Instrumentacion quirúrgica,
4ª edición, editorial medica panamericana, Argentina, 2007.