TITULO DE LA PRÁCTICA

Estudiante 1 (código), Estudiante 2 (código),…, Estudiante N (código)

Curso XXXX, Grupo XXXX, Departamento de Ciencias Básicas, Universidad de Pamplona

RESUMEN Inicialmente se desea identificar los microorganismos presentes en la materia orgánica. En este caso
habitantes microscópicos de la carne, para dar inicio al estudio comenzamos preparando el agar, tomando 1.8g de
agar nutritivo se mezcló con 75ml de agua destilada esterilizada y se puso a calentar hasta donde se observó inicio
de ebullición, luego se dejó enfriar a una temperatura adecuada para verterla en tres cajas de Petri. Para poder
sembrar el inoculo se debió hacer una mezcla de 10g de carne (corazón, riñón y páncreas) en 90ml de agua
destilada, esta es una dilución de 10-1 luego se tomó 1000 micro litros de la misma y se realizó un dilución de 10-2.
El siguiente paso fue realizar la siembra de la matriz 10-1 y 10-2 en un agar nutritivo a 37°C y un agar Sabouraud a
25°C, para luego observar a las 22hrs en los cuales se observa un efecto spreader (crecimiento incontable) en
ambos cultivos, a continuación se realizó una toma de muestra de cada una de las cajas en donde se seleccionó
alguno de los microorganismos aun no identificados presentes, para tomar una cepa y realizar una siembra por
agotamiento en un agar nutritivo y un Sabouraud donde posteriormente se realiza el segundo conteo microbiano
obteniendo los mismos resultados de crecimiento incontable.
Palabras Claves: agar, cepa, dilución, matriz, esterilización
1. Introducción como las lipasas, pectinasas y proteinasas. Los
hongos pueden crecer a temperatura ambiente entre
La presente práctica busca introducir a los
22°,30°y 37°C para su crecimiento óptimo, aunque
estudiantes en la investigación microbiana, métodos
también resisten temperaturas superiores a 62°C. En
de cultivo, procedimientos adecuados para obtener
el caso de las bacterias constituyen organismos
buenos resultados y desarrollar buenos hábitos
unicelulares procariotas, suelen medir alrededor de
asépticos. En el transcurso de la práctica se aprende
un micrómetro, aunque se han encontrado algunas
que para mantener los elementos de trabajo
bacterias realmente gigantes, las cuales han llegado a
esterilizados es bueno tener un mechero cerca, ya que
medir cerca de un milímetro, Muchas de las
esto evita que al momento de poner en contacto un
autótrofas fabrican materia orgánica gracias a la
cultivo bacteriano o micotico con el ambiente cerca a
energía de la luz solar, lo que significa que son
la llama esta evita que se contamine o libere esporas
fotosintéticas, igual que las plantas. Otras obtienen la
al ambiente.
energía debido a reacciones químicas en las que
En la naturaleza, los microorganismos se encuentran intervienen sustancias inorgánicas que obtienen del
formando poblaciones mixtas con otros tipos de ambiente, estas son llamadas quimiosintéticas.
microorganismos. Los cultivos de estas mezclas se Todas las bacterias se multiplican por división, las
llaman cultivos mixtos. Sin embargo, el conocimiento bacterias generalmente poseen una pared celular y
de los microorganismos se consigue mediante el uno o varios flagelos que utilizan para desplazarse
estudio de cepas aisladas, cultivadas en el laboratorio por el entorno, esta capacidad de movilidad les otorga
en cultivos puros donde se podrá analizar la forma de un gran beneficio ya que pueden moverse hacia zonas
crecimiento, tipo de reproducción y tiempo. En el más favorables para su crecimiento, las bacterias
caso de los hongos tienen requerimientos pueden crecer óptimamente en temperaturas de 25°-
nutricionales similares al resto de los seres vivos, 37°C aunque también resisten temperaturas por
para su nutrición utiliza gran variedad de compuestos debajo de 4°C. En el análisis reproductivo se usa la
orgánicos tanto sencillos como complejos, unos curva de crecimiento en esta se diferencian cuatro
fuetes de carbono podrían ser la glucosa, la maltosa o fases, la fase de retraso o fase de latencia, la fase de
la sacarosa e incluso sustancias más complejas como crecimiento exponencial o logarítmico, la fase
la celulosa o el almidón usando enzimas hidrolíticas estacionaria y la fase de muerte celular. De las cuatro
para extraer lo necesario de los compuestos orgánicos fases de la curva de crecimiento, habitualmente la
1
fase de crecimiento exponencial o logarítmico es la
que presenta mayor interés por ser la fase en la que el
incremento del número de microorganismos es
máximo, durante esta fase el tiempo de generación de
los microorganismos se mantiene contante.
Inicialmente para el cultivo de microorganismos
presentes en la carne se realizó una dilución debido a
que no se puede sembrar el sólido directamente
porque esto dificultaría la identificación, la primera
dilución se realiza en base 10-1 y la segunda en base
10-2 con el fin de disminuir las cantidades de
microorganismos y poder llegar a un posible conteo
de colonias, cada célula viable origina
una colonia visible resultado de sucesivas divisiones
celulares. Cada colonia bacteriana tiene unas
características determinadas en cuanto a su forma,
borde, elevación, tamaño, consistencia, etc. La forma
adecuada para la siembra de la matriz es tomar
100 μL de las diluciones los cuales se vierten sobre
los agares y con un asa redonda se esparce por toda la
caja de Petri. En este caso se presentaron cultivos
spreader en el agar nutritivo y el agar Sabouraud, en
estos dos hay cultivos heterogéneos y lo que se desea
hacer es lograr un cultivo de cepas puras para realizar
su identificación por ende se tomó un inoculo o
unidad de colonia que se desea identificar y se
sembró en nuevos agares nutritivos y Sabouraud para
disminuir la carga bacteriana y posiblemente poder
realizar un conteo y así una vez que se ha logrado el
aislamiento es posible obtener la bacteria de interés
en cultivo puro.
2. Materiales y Métodos
1.1.1 PROCEDIMIENTO DEL LABORATORIO
1. Se limpió y esterilizo el lugar de trabajo con el
respectivo procedimiento: solución jabonosa hipoclorito de
sodio y alcohol, luego se recibió los respectivos materiales
como fiola de 90 ml (marca bacob) agua estéril.
Se procedió a pesar la matriz para obtener un peso de 10gy
asi diluir muy bien la muestra en el agua estéril para luego
obtener 100 micro litros luego se tomó estos 100microlitors
con la pipeta de embolo (transferpette) lo cual se aplicó en
las cajas de Petri (bacob) contenidas con un agar nutritivo y
sabouroud para luego hacer una homogenización masiva
completa para finalizar se introdujeron las 2 cajas de Petri
de agar nutritivo10-1y 10-2 envueltas en papel vinipel y
expuso a una incubación de 37° con un tiempo de uno a dos
2
días y a las 2 cajas sabouroud 10-1y 10-2a una temperatura
de incubación de 25°ccon un tiempo de 3 a 5 días. Por
último, lavo y se desinfecto lugar de trabajo y demás
materiales.
1.2: 1er recuento:
Se esterilizo el lugar de trabajo
Luego se Sacó las disoluciones de la incubadora después de
su tiempo indicado, para observar el crecimiento de
bacterias y hongos en los diferentes agares (nutritivo y
sabouroud) se encendió el mechero para asi obtener una
temperatura adecuada y evitar una contaminación del
cultivo
en la observación se tiene en cuenta el crecimiento
dependiendo de la matriz (viseras de res) se verifico si se
obtuvo un crecimiento contable o incontable (spreader)de
baterías y hongos
Cada caja se abrió atrás del mechero asi evitando una
contaminación de esta
Se identificó además color olor y tipo de crecimiento.
Se procedió a embalar de nuevo las cajas de Petri con papel
vinipel y se llevó a sus respectivas incubadoras (Bacterias
37°C, Hongos 25°C)
Por último, se realizó la respectiva Limpieza y desinfección
del área de trabajo.
1.1.2 PROCEDIMIENTO DEL LABORATORIO
1. Se limpió y esterilizo el lugar de trabajo con el
respectivo procedimiento: solución jabonosa hipoclorito de
sodio y alcohol, Luego Identificamos los diferentes medios
de cultivo por sus características químicas.
Encendimos los mecheros bunsen hasta lograr una llama
azul. Luego Sacamos las cajas de Petri utilizadas de sus
respectivas incubadoras y las desenvolvimos, colocándolas
detrás del mechero.
Del centro de medios recibimos 8 cajas de Petri, de las
cuales solo utilizamos 4 con los siguientes medios de
cultivo: Nutritivo, Sabouraud, OGY, SPC. Tomamos una
caja de agar nutritivo de 10-1 y con una tasa de punta
redonda previamente esterilizada a llama directa, tomamos
un inoculo, el cual se utilizó para realizar siembra por
agotamiento en una caja de Petri de agar nutritivo
Consecutivo Tomamos una caja de agar nutritivo de 10-2 y
con una asa de punta redonda previamente esterilizada a
llama directa, tomamos un inoculo, el cual se utilizó para
realizar siembra por agotamiento en una caja de Petri de
agar SPC para obtener muestras de aislamiento mucho
mejor Tomamos una caja de agar Sabouraud de 10-1 y con
una asa bacteriológica previamente esterilizada a llama
directa, tomamos un inoculo de levadura, el cual se utilizó
para realizar siembra agotamiento en una caja de Petri de
agar OGY luego. Tomamos una caja de agar Sabouraud de
10-2 y con un asa de punta redonda previamente esterilizada
a llama directa, tomamos un inoculo, el cual se utilizó para
realizar siembra por agotamiento en una caja de Petri de
agar Sabouraud, por siguiente, Procedimos a marcar y
envolver los medios, continuo a esos los transferimos a sus
temperaturas requeridas. Y Esterilizamos correctamente el
área de trabajo.
2do Recuento:
1. Se limpió y esterilizo el lugar de trabajo con el
respectivo procedimiento: solución jabonosa hipoclorito de
sodio y alcohol, además se encendió el mechero bunsen
para obtener temperaturas adecuadas de esterilización
luego, Retiramos las cajas de Petri de agar nutritivo y SPC
utilizadas el de su respectiva incubadora y procedimos a
quitar su envoltura de papel, detrás del mechero para evitar
contaminación Se sacaron las cajas de Petri con agares:
VRB, XLD, Salado manitol, Selectivo Bacillos céreus y
procedimos a hacer, en cada una de ellas realizamos
siembra por agotamiento pasando a cada una de las cajas un
inoculo definido y pequeño de los medios de cultivo
nutritivo 10-1 y SPC 10-2 luego, se Marco cada caja Y se
transfirió a los medios y a la temperatura requerida Para
bacterias 37 °c y se finalizó con la respectiva limpieza y
esterilización de esta área de trabajo
PROCEDIMIENTO
Se limpió y esterilizo el lugar de trabajo con el respectivo
procedimiento: solución jabonosa hipoclorito de sodio y
alcohol, además Se encendió el mechero bunsen para
obtener temperaturas adecuadas de esterilización luego,
Retiramos las cajas de Petri de VRB, XLD, Salado manitol,
Selectivo Bacillus cereus utilizadas el día de su respectiva
incubadora y procedemos a desenvolverlas detrás del
mechero Observamos cada una de las cajas de Petri y
procedimos a anotar cada una de las observaciones
pertinentes en la bitácora Volvimos a envolver las cajas de
Petri y las transferimos a la temperatura requerida. y se
finalizó con la respectiva limpieza y esterilización de esta
área de trabajo
Volvimos a envolver las cajas de Petri y las transferimos a
la temperatura requerida. y se finalizó con la respectiva
limpieza y esterilización de esta área de trabajo.
3. Resultados y Análisis
Durante el método de disolución de la matriz en bruto y
sembrado en medio liquido en tubo, la cantidad de
microorganismos fue bajada a 10−1 y 10−2 para poder
ser puesta en un agar base, tuvimos que dar una espera
para su incubación (la cinética de crecimiento que tienen
los hongos y bacterias).
En los agares nutritivos (bacterias), el cultivo 10−1 de
bacterias no tubo una buena dispersión homogénea por lo
tanto quedo spreader, con un olor putrefacto y color
amarillento. En el caso de el 10−2 si hubo una
dispersión adecuado y un crecimiento abundante, con
características natosas y amarillentas, esto es debido al mal
secado de las cajas influyendo en que el agua reposada en
el techo interior de la tapa transportando el inoculo ya
plantado o sobre exponiéndolo a sobre humedad creando
el efecto, dándonos incontable.
En los agares Sabouraud(hongos) de los cultivos 10−1 y
10−2 en las dos cajas de Petri hubo un crecimiento
levaduriforme en un tiempo de un tiempo de 22 horas,
faltando 4 días y 2 horas que es el tiempo estimado del
crecimiento de los hongos “5 días”, lo cual fue incontable
teniendo características inodoras con un amarillo pálido.
realización del repique con un inoculo de un medio
heterogéneo, para realizar el cultivo arsénico:
El uso del agar nutritivo cultivo 10−1 no fue factible su
uso ya que, al no tener una buena dispersión, no era
factible poder sacar un inoculo aislado para realizar un
cultivo axénico. Por otra parte, en la caja 2 no hubo
crecimiento por factores como insuficiencia de inoculo,
obtención del inoculo cuando estaba es aza caliente (por
error humano).

3er recuento:
Se limpió y esterilizo el lugar de trabajo con el respectivo
procedimiento: solución jabonosa hipoclorito de sodio y
alcohol, además Se encendió el mechero bunsen para
obtener temperaturas adecuadas de esterilización luego,
Retiramos las cajas de Petri de agar Sabouraud y OGY
utilizadas el de su respectiva incubadora y procedemos a
desenvolverlas detrás del mechero ,Observamos cada una
de las cajas de Petri y procedimos a anotar cada una de las
observaciones pertinentes en la bitácora c y bitácora
3
Organismos hallados en la matriz de carne
Para el Salado manitol encontramos la cepa de la especie
Staphilococcus epidermidis, gracias a que se tornan de color
rojo sin cambio del color en el medio se presenta
frecuentemente en la piel de humanos y de animales y en
membranas mucosas. Se trata de un medio selectivo por la
alta concentración salina y diferencial debido a la capacidad
de fermentación del manitol por los microorganismos. 1
En el agar S. bacillus demostró tener bacillus subtilis, con
crecimiento satisfactorio de color amarillo casi
imperceptible a simple vista una, aerobia comúnmente
encontrada en el suelo. se vuelve selectivo por su baja
cantidad de peptona y la adición de piruvato de sodio y
emulsión de yema mejoran el aislamiento y esporulación de
esta bacteria. 2
En el caso de XLD encontramos a E. coli mostrándose
como colonias planas y amarillenta; se encuentra en el
tracto gastrointestinal de humanos y animales de sangre
caliente o puede ser de XLD se encontró Enterobacter,
formando colonias amarrillas de aspecto mucoide, este
grupo forman parte del
microbiota del intestino (llamados coliformes) y de otros
órganos del ser humano y de otras especies animales. El
agar XLD como fuente de nutrientes y vitaminas utiliza el
extracto de levadura, el Desoxicolato es un agente selectivo
que inhibe los crecimientos de las bacterias Gram-positivas.
3
4
Por la parte de hongos(levaduras) se presenta la
saccharomyces cerevisiae, el alto contenido de glucosa la
presencia de cloranfenicol y el pH acido lo vuelve selectivo
inhiben el crecimiento de bacterias. 4
4.Discusión
Son bacterias y hongos que ubicuamente están en los
alimentos como cárnicos, ya que presentan sus
condiciones adecuadas para su crecimiento y desarrollo, y
que en nuestro consumir de la ingesta diarias de los
alimentos, al conseguirlo los factores de contaminación
abundan como ejemplos tomemos a la Staphylococcus
aureus ; es una de las bacterias patógenas humanas
formadoras de toxinas más resistente y puede sobrevivir
durante largos periodos de tiempo en un ambiente seco,
y son muy persistentes en alimentos con contenido alto
en sales y azúcares. Sus factores causantes:
Contaminación cruzada en las fases posteriores de
transformación de los alimentos, y en la preparación y
cocinado de los alimentos en el hogar. Los
manipuladores de alimentos pueden ser portadores de
Staphylococcus aureas, de forma que, al preparar los
alimentos, sin tener en cuenta unas buenas prácticas de
higiene y conservación, contaminan los alimentos. 5
5. Conclusiones producto.
http://www.oxoid.com/UK/blue/prod_detail/prod_d
1: Se hizo una gran observación e investigación teniendo en etail.asp?pr=CM0617&c=UK&lang=EN. Accessed
cuenta los pasos sugeridos en la práctica de cultivos siembra September 26, 2018.
y tipos de cultivos donde se pudo obtener diferentes tipos
de siembras en diferentes tipos de agar 8. PRONADISA(CONDA). Laboratorios CONDA:
Productos.
https://www.condalab.com/es/productos/. Accessed
2: Se pudo logra u gran identificación de microorganismos September 26, 2018.
gracias a las distintas formas de siembra además de esto 9. MERCK. OGY Agar for microbiology | Sigma-
también se conoció las diferentes formas de poder cultivar Aldrich.
un microorganismo en una caja de Petri con agar respectivo https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial
a cada muestra como matrices de ambiente frutas carnes /75310?lang=en&region=CO. Accessed September
queso lechuga entre otras 26, 2018.
10. THERMO SCIENTIFIC. CM0978, agar bilis rojo
3: También se logró identificar las condiciones necesarias violeta (VRBA) con TAZA | Oxoid - Detalle del
para un buen cultivo de un microrganismo en el agar como producto.
lo es su temperatura mínima y máxima su pH su tiempo de http://www.oxoid.com/UK/blue/prod_detail/prod_d
reproducción y el porqué de ellas además se logró conocer etail.asp?pr=CM0978&c=UK&lang=EN. Accessed
los diferentes nutrientes que componen los distintos agares September 26, 2018.
11. LABORATORIOS CONDA, S. www.condalab.com.
Accessed September 26, 2018.
6. Referencias Bibliográficas
1. Hoja. Manitol Salado Agar.
http://www.britanialab.com/back/public/upload/pro
ductos/upl_5a2ed6c53aed1.pdf. Accessed
September 26, 2018.
2. Britania. BACILLUS CEREUS SELECTIVE.
http://www.britanialab.com/back/public/upload/pro
ductos/upl_5a2818a041dc6.pdf. Accessed
September 26, 2018.
3. FRANCISCO SORIA MELGUIZO;S.A. XLD.
http://f-soria.es/Inform_soria/Difco Fichas
tecnicas/PLACAS DIFCO Y CROMOGENICAS
BD/FT XLD AGAR.pdf. Accessed September 26,
2018.
4. Sabouraud Glucosado Agar.
http://www.britanialab.com/back/public/upload/pro
ductos/upl_5a2971216486e.pdf. Accessed
September 26, 2018.
5. STAPHYLOCOCCUS AUREUS. www.elika.net.
Accessed September 26, 2018.
6. THERMO SCIENTIFIC. CM0469, XLD Agar |
Oxoid - Detalle del producto.
http://www.oxoid.com/UK/blue/prod_detail/prod_d
etail.asp?pr=CM0469&c=UK&lang=EN. Accessed
September 26, 2018.
7. THERMO SCIENTIFIC. CM0617, base de agar
selectiva Bacillus cereus | Oxoid - Detalle del
5