PRACTICA DE MICROBIOLOGÍA GENERAL - 2018 – UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

I. INTRODUCCIÓN
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en
condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. La composición precisa
dependerá de la especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varían
considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio
normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o
sangre para crecer.

II. OBJETIVOS

III. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA

3.1 Fundamento
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismoses observar su crecimiento en
sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los
microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han
preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un
medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y
presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe
contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante.

2.2 Tipos básicos de medios de cultivo

Atendiendo a su estado:
Naturales Constituyen únicamente de material vegetal natural
Semisinteticos complejos El componente posee 50 % natural y 50 % de sustancias químicas.
Sintéticos definidos Es químicamente definido

Atendiendo a su estado físico:

- Líquidos: también se llaman caldos de cultivo, no contienen agar.
- Semisólidos: contienen 0.5% de agar
- Sólidos: contienen de 1.5 a 2% de agar y se preparan en cajas petri (placa) o en tubos de ensayo

Atendiendo a su utilidad práctica:

Medios para aislamientos primarios: Para usos generales: no selectivos, para cultivo de una amplia variedad
de organismos difíciles de hacer crecer. Pertenecen a esta categoría las infusiones de extractos de carne y
peptone.

Selectivos: (pueden ser de moderada o de alta selectividad) se añadensustancias que inhiban el crecimiento
de ciertos grupos de bacterias,permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando la sustancia añadida, se
varía el tipo y grado de selectividad (Mac Conkey,Kanamicina-Vancomicina, caldo lactosa bilis verde brillante
o el agar SalmonellaShigella)

Enriquecidos: son aquellos medios en los cuales a un medio base se le añaden determinadas sustancias
nutritivas que son necesarias para el crecimiento de un microorganismo exigente.. Por ejemplo el caldo
selenito cistina o el caldo agar sangre.
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Medios diferenciales: incorpora determinadas sustancias que nos permiten diferenciar entre dos tipos de
microorganismos. Ej. El agar de sal y manitol: nos permite diferenciar en el caso de los staphylococos, los que
utilizan el manitol en su metabolismo de los que no.

IV. MATERIALES Y MÉTODOS

4.1 MATERIALES
4.2 MÉTODOS
Preparación de un medio solido en placa:
1. Pesar la cantidad de medio (si el preparado contiene agar debemos añadirlo a una
concentración de 15g/l) y rehidratarlo con agua destilado en una botella 2. Autoclavar la botella sin cerrar
totalmente el tapón de rosca 3. Sacar del autoclave, enroscar del todo el tapón e introducir la botella en un
baño a 40ºc al menos durante 30 minutos. 4. Distribuir el medio en las placas de petri que están estériles
dentro de una campana de flujo laminar o en las proximidades del mechero, flameando bien la boca de la
botella para evitar las contaminaciones. 5. Dejar que el medio solifique.
Preparación de medio solido en tubo (slant)
1. Pesar el medio que contenga agar y rehidratar con agua destilada en un matraz 2. Fundir el medio
en un horno microondas o en una placa caliente. el mediodebe hervir hasta que se vuelve transparente.3.
Distribuir rápidamente el medio en los tubos antes de que comience asolidificar para ello se empleara una
pipeta y los tubos no se llenaran más de untercio de su volumen.4. Autoclavar 5. Sacar de la autoclave e inclinar
los tubos sobre la poyata para obtener tubos con medio de slant.
Preparación de medio liquido en tubo (caldo)
1. Pesar y rehidratar el medio 2. Distribuirlo con una pipeta en los tubos (sin llenarlos más de
1/3 de suvolumen) 3. Autoclavar 4. Sacar del autoclave y dejar enfriar 5. Todos los medios se guardan en
nevera a 4ºc
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CUESTIONARIO

1. Diga en qué casos se hace uso de los medios líquidos, semisólidos y sólidos.
2. Mencione los agentes gelificantes, que aportan y uso.
3. Explique cuáles son las funciones y que aportan los sgtes compuestos en la preparación de medios
de cultivo: agua destilada, agar, peptona, cloruro de sodio, extractos de carne, glucosa, extracto
de levadura, lactosa, sales biliares.
4. Explique la preparación de los siguientes medios de cultivo:
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