TRATAMIENTO DE CÉLULAS MADRE PARA LA REDUCCIÓN DE

DEFORMIDADES DE LA DISTROFIA MUSCULAR

DIANA ALEJANDRA ARIAS PINEDA ID- U00118497

TRABAJO DIRIGIDO A
VÍCTOR ALFONSO SUARTE DAVID

PROGRAMA DE INGENIERÍA BIOMÉDICA

FACULTAD DE INGENIERÍA
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BUCARAMANGA

BUCARAMANGA
2018

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 ÍNDICE
Pag
INFORMACIÓN GENERAL DEL PROYECTO…………………………………….2
1. RESUMEN DE LA PROPUESTA……………………………………………….4
2. INTRODUCCIÓN………………………………………………………………….5
3. MARCO TEÓRICO Y ESTADO DEL ARTE………………………………….6-7
4. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN……………….8
5. JUSTIFICACIÓN………………………………………………………………….9
6. OBJETIVOS
6.1. Objetivo General……………………………………………………………10
6.2. Objetivos Específicos……………………………………………………..10
7. METODOLOGÍA…………………………………………………………………11
8. RESULTADOS ESPERADOS…………………………………………………12
9. BIBLIOGRAFÍA………………………………………………………………….13

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 INFORMACIÓN GENERAL DEL PROYECTO

Título del proyecto: Tratamiento de células madre para la reducción de deformidades de la

distrofia muscular.

Profesor: Víctor Alfonso Suarte David

Integrantes E-mail UNAB@unab.edu.co

Diana Alejandra Arias Pineda darias477@unab.edu.co

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 1. RESUMEN DE LA PROPUESTA

La investigación presente propone el desarrollo de un tratamiento que permita

reducir las deformidades o sustituir un músculo defectuoso y las células nerviosas
que se están degenerando en las personas con distrofia muscular, este tratamiento
se basa principalmente en células madre extraídas del tejido adiposo ya que se
considera que la grasa es un gran potencial para regenerar músculos, esto se debe
o se entiende de cómo se forman, ya que una persona al realizar ejercicio, al quemar
grasa, ésta es tonificada y convertida en músculo.
Entonces, al tener en cuenta que no existe hasta ahora un tratamiento específico
que pueda detener o revertir la progresión de cualquier forma de distrofia muscular,
aunque hay muchos estudios de investigación incluyendo los estudios con células
madre, este problema sólo se enfocará en las células madre del tejido adiposo.

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 2. INTRODUCCIÓN

La distrofia muscular (DM), es una enfermedad genético hereditario que consiste en

el debilitamiento progresivo y reducción muscular, está enfermedad es causada por
la ausencia de una proteína que es vital para el cuerpo: “La distrofina”, la distrofina
es una proteína que se encarga de mantener fuertes las fibras musculares y aislarla
de todas las lesiones a las que se puedan enfrentar.
Existen más de 30 enfermedades genéticas caracterizadas por debilidad
progresiva. La distrofia muscular de Duchenne es la distrofia muscular más
frecuente (1 para cada 3,500 varones que nacen), la segunda es la distrofia de
Becker (1 para cada 30,000 varones que nacen). Los otros tipos son más raros (por
ejemplo, la distrofia de cinturas ocurre en solo 1.3% de los pacientes con distrofia
muscular). El tipo oculofaringeo es más común en Francia y Canadá y el tipo de
distrofia muscular distal es más común en Suecia. No se sabe con exactitud cuántas
personas de todas las edades tienen distrofia muscular de Duchenne o Becker en
los Estados Unidos, pero se estima que sean de 1 de cada 5600 a 7700 hombres
de 5 a 24 años. Esta cifra es aproximadamente igual a la prevalencia de 1.3 a 1.8
por cada 10 000 hombres de 5 a 24 años.
El proyecto aporta la necesidad de poder caminar, levantarse y realizar la mayoría
de actividades comunes sin tener que estar depositado en una silla de ruedas.

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 3. MARCO TEÓRICO

El primer relato histórico sobre la distrofia muscular apareció en 1830, cuando Sir
Charles Bell, quien fue un anatomista, cirujano, fisiólogo y teólogo natural escocés,
escribió un ensayo sobre una enfermedad que causaba debilidad progresiva en
niños varones. Seis años más tarde, otro científico informó sobre dos hermanos que
desarrollaron debilidad generalizada, daño muscular y reemplazo del tejido
muscular dañado con grasa y tejido conjuntivo. En ese momento se pensó que los
síntomas eran signos de tuberculosis.

En la década de 1850, las descripciones de niños que se volvían progresivamente

más débiles, que perdían la capacidad de caminar y que morían a temprana edad
se hicieron más prominentes en las revistas médicas. En la década siguiente, el
neurólogo francés Guillaume Duchenne presentó un relato completo de 13 niños
con la forma más común y más grave de la enfermedad (que ahora lleva el nombre
de distrofia muscular de Duchenne). Pronto se hizo evidente que la enfermedad
tenía más de una forma, y que estas enfermedades afectaban a las personas de
ambos sexos y de todas las edades. En 1860 se da a conocer realmente la
verdadera importancia de la enfermedad de quienes la presentan.

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 4. ESTADO DEL ARTE:
La falta de la proteína distrofina, da lugar a inicio la enfermedad de Distrofia
muscular, de la cual, varios grupos de investigadores en todo el mundo están
involucrados para proponer una solución y brindar una mejor vida a quienes la
padecen. Como es el motivo de la genetista Mallana Satz, quien lucha ya hace más
de 30 años contra la distrofia muscular.
Esta genetista vislumbró en las células madre, la posibilidad de tener un tratamiento
para sustituir un músculo defectuoso, sustituir las células nerviosas que se están
degenerando y tratar esta enfermedad.
El equipo de la doctora Mallana Satz, descubrieron que la cura puede estar en una
de las partes menos deseadas de nuestro cuerpo (la grasa). Las personas que se
hacen lipoaspiración la desechan, pero se observó que esas células tienen el
potencial para formar un músculo, ya que al hacer ejercicio las células madre de
grasa son las que se convierten en músculo, al igual que cuando se depositan un
en cultivo muchas veces se terminan transformando en células musculares.
Entonces, el experimento que desarrolló este equipo en el centro de estudios del
genoma humano consistió en: la extracción de las células madre, la crianza de
linajes de ratones con distrofia muscular para que los investigadores pudieran
probar que la técnica fuese segura, e inyectarlos directamente en el músculo,
enviando las células por vía sanguínea.
Las expectativas fueron: una vez que las células fuesen inyectadas, estas sepan
que deben dirigirse al músculo como señal de ayuda, ya que el músculo distrófico
se está degenerando. Por lo tanto, se inyectaron 7 de estos ratones con las células
que fueron extraídas del tejido adiposo y durante 9 meses, los animales recibieron
aplicaciones de células madre humanas.
El resultado fue positivo, se observó claramente que, al realizar varias pruebas entre
ellas dejar el ratón suspendido en una cuerda para observar cuanto tiempo logra
mantenerse sin caerse, recordando que tiene una debilidad en las patas delanteras
al igual que en el tronco. Los ratones que fueron inyectados se mantuvieron durante
más tiempo a comparación de los que no fueron inyectados. Pero fue al observar el
músculo de los animales en el microscopio cuando la científica declaro estar en el
camino correcto. Observaron que las células llegaron hasta el músculo y formaron
proteínas humanas, denominadas distrofinas. Los anticuerpos son marcadores que
solo indican las proteínas musculares humanas y gracias a ellos se observó que el
50% de las fibras eran de proteínas humanas.
La prueba para los humanos está cada vez más cerca. Pero ahora deben probar
nuevas células madre, como de cordón umbilical, pero aún se sabe cuál de ellas es
mejor para regenerar el músculo, hasta ahora el tejido adiposo está ganando,
aparentemente son las mejores. Sin embargo, se necesita tener esa certeza antes
de comenzar a inyectarlas en los pacientes.

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 5. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN:

¿Es posible desarrollar un tratamiento efectivo con ayuda de las células

madre de grasa obtenidas de quienes se realizan la Lipoaspiración para
ayudar a las personas que presentan la enfermedad de distrofia muscular?

El problema de distrofia muscular se viene observando desde los niños, ya que a

medida que el niño crece, empieza a verse una serie de complicaciones en su
desarrollo como, por ejemplo; empieza a presentar dificultad para caminar o para
sentarse.
La enfermedad de distrofia muscular se genera por una deficiencia de distrofina, la
cual es una proteína que ayuda a fortalecer las fibras musculares y protegerlas de
las lesiones. Además, es una condición progresiva que precisa un control de por
vida para prevenir las deformidades y las complicaciones. La distrofia muscular
empieza a afectar desde una edad muy temprana, promediado en un rango de 3 a
6 años.
La distrofia muscular Duchenne también conocida como (DMD) es la distrofia más
común presente en los niños ya que, hacia los 12 años, los niños ya presentan una
discapacidad motriz, es decir, necesitan una silla de ruedas debido a que sus
músculos de las piernas se debilitan perdiendo su masa muscular, dando como
resultado el deterioro de la movilidad del cuerpo. Esta enfermedad permite abrir
nuevas complicaciones a medida que la persona crece como los problemas de
corazón o incluso problemas en los pulmones.
Las personas con distrofia muscular por lo general presentan caídas continuamente
que llega a afectar típicamente a los músculos de los hombros y la pelvis. Otros de
sus síntomas son: movimientos torpes, dificultad para subir las escaleras,
tropezones y caídas fuertes, imposibilidad de saltar o brincar normalmente, forma
de caminar de puntillas, dolor en las piernas, debilidad facial, incapacidad de cerrar
los ojos o silbar y debilidad tanto en el hombro como en el brazo. Los pacientes
pierden gradualmente movilidad y suelen fallecer por fallos cardiacos o respiratorios
hacia los 20 años.

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 6. JUSTIFICACIÓN:

La distrofia muscular se presenta en todo el mundo y también afecta a todas las

razas. Su incidencia varía, y algunas formas son más comunes que otras. La mujer
es la principal portadora de este gen afectuoso que produce las distrofias
musculares, por lo general las distrofias musculares más presentes en los niños son
la Duchenne y Becker, que de por sí solas, afectan aproximadamente 1 de cada
3,500 a 5,000 niños, la cual es responsable del 50% de todos los casos
presentados. Algunos tipos de distrofia muscular prevalecen más en ciertos países
y regiones del mundo. La mayoría de las distrofias musculares son familiares, o sea
que hay algunos antecedentes familiares de la enfermedad.
Existen varios grupos de investigación de genetistas, que cada vez se están
capacitando más sobre las células madre de grasa y progresan en la investigación
para tratar esta enfermedad, buscando la forma de poder sustituir un músculo
defectuoso o las células nerviosas que poco a poco se vienen degenerando.
Avanzar con nuevas propuestas de diferentes tratamientos viables a desarrollar en
laboratorios y dependiendo de la eficiencia del tratamiento poder autorizarlo en los
seres humanos.

Aproximadamente el 80 por ciento de los pacientes con Duchenne tiene mutaciones

en el gen de distrofina que hace que funcione incorrectamente y que deje de
producir la proteína distrofina. Al manipular el proceso de síntesis de la proteína, la
producción de un gen que "repasa" la mutación genética que detiene la producción
puede dar como resultado una distrofina funcional.

Actualmente se encuentran en estudio dos estrategias para evitar las mutaciones

de distrofina. Primero, el antibiótico gentamicina ha demostrado ser eficaz para
hacer que la maquinaria de síntesis ignore la señal de parada prematura y produzca
distrofina funcional. Esta estrategia puede ser útil en alrededor del 15 por ciento de
los pacientes con distrofia de Duchenne. Se encuentra en curso un ensayo clínico
patrocinado por NINDS que usa gentamicina en los pacientes con distrofia de
Duchenne. Segundo, un enfoque más reciente usa la tecnología de división para
saltear las mutaciones en el gen de distrofina hasta el punto donde la información
genética está completa y puede producir una proteína a funcional. Esta estrategia
ha sido prometedora en un modelo de ratón de la distrofia de Duchenne. Hasta el
80 por ciento de los pacientes podría beneficiarse con esta nueva tecnología.

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 7. OBJETIVOS

7.1 GENERALES:
Desarrollar un tratamiento con células extraídas del tejido adiposo para prevenir o
reducir al mínimo las deformidades de la enfermedad de Distrofia muscular (DMD).

7.2 ESPECÍFICOS:

1. Documentar la información sobre la enfermedad de Distrofia muscular y

células madre.
2. Extracción de células madre del tejido adiposo.
3. Criar linajes de ratones que presentan Distrofia muscular.
4. Realizar varias series de pruebas con las células madre y con los ratones en
los laboratorios.
5. Concluir los resultados del experimento.

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 8. METODOLOGÍA

Este problema de investigación tiene como objetivo principal, hacer el uso de las
células madre que son extraídas de una de las partes menos deseadas de nuestro
cuerpo (la grasa), este es un gran potenciador para regenerar músculos y es de fácil
acceso, ya que son rescatadas de quienes suelen realizarse la Lipoaspiración.
Entonces, la idea es aprovechar esa grasa, ya que por lo general suelen ser
desechadas a la basura, tras finalizar cada cirugía. Una vez obtenida la grasa, son
extraídas las células madre y son depositadas en una Placa Petri, esta placa es un
recipiente redondo, hecho de vidrio o de plástico. Esto se hace con el fin realizar un
cultivo de células madre, para poder observar el comportamiento de estas células
al proliferar y con esto, también nos daremos cuenta del tipo de tejido que estas
células terminarán convirtiéndose. Por lo general, al realizar este cultivo en varios
intentos las células de grasa siempre terminan convirtiéndose en tejido muscular.
Luego, después de esperar a que las células proliferen, se obtendrá una crianza de
linaje de ratones que presenten la enfermedad de distrofia muscular, una vez
teniendo los ratones, las células madre serán depositadas de forma intravenosa por
medio de la cola para que éstas a su vez puedan dirigirse hacia el músculo afectado.
Teniendo en cuenta de que solo se aplicará en ciertos ratones, puesto que después
de la aplicación con las células madre habrá de esperar alrededor de 20 días para
obtener los resultados haciendo que los ratones se suspendan mediante una cuerda
y se registe el tiempo que perdure el ratón con distrofia muscular como el ratón con
el tratamiento aplicado.
En conclusión, esto demostrará cuan efectivo es el tratamiento para llegar a la
aplicación en las personas.

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9. RESULADOS OBTENIDOS

1. Se comprobó que la grasa es un gran potencial para regenerar músculos.

2. Las células una vez inyectadas en la cola de los ratones fueron dirigidos
hacia los músculos para generar de nuevo la proteína distrofina.
3. Ninguno de los ratones que fueron inyectados presentaron síntomas
secundarios.
4. Al realizar el registro del tiempo de cada uno de los ratones, se percató de
que los ratones con el tratamiento efectivamente perduraron mucho más
tiempo en la cuerda que los ratones con distrofia muscular.

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 10. ANTECEDNTES DE INVESTIGACIÓN:
En el año 2006 se realizó la primera investigación sobre el uso de células madre
para curar la distrofia muscular. Para ello un equipo de científicos italianos probó la
terapia en un perro Golden Retriever afectado por la distrofia muscular.
Ahora, en el año 2007 en diciembre. La colaboración de dos equipos de
investigadores de Italia y EE. UU han llegado a la conclusión de que las células
madre modificadas genéticamente pueden contrarrestar la distrofia muscular de
Duchenne (un tipo específico que afecta sobre todo a hombros y caderas). Su
estudio se ha publicado en Science Translational Medicine, incluye tanto terapia
celular como génica. Los investigadores han cogido fibroblastos de ratones con
distrofia muscular, los han convertido en células madre inducidas, a partir de este
estado se han conseguido células precursoras del músculo. Estas son modificadas
genéticamente para eliminar la mutación de la distrofia muscular y trasplantadas en
ratones.
En el año 2008. Se investiga la posibilidad de usar células madre de la pulpa
dentaria contra la distrofia muscular. En este experimento las células provienen de
dientes de niños humanos y son implantadas en Golden Retriever y lo que se busca
es comparar el efecto que tiene al realizar inyecciones de células de forma local (en
la región afectada) y de forma sistémica (en sangre). La conclusión es que es más
eficaz una administración múltiple en sangre, posiblemente porque así las células
madre pueden migrar allí donde son más necesarias.
En el año 2010. Un estudio sobre la regeneración del músculo en vivo ayuda a
conocer más detalles de un proceso que puede ser clave para el tratamiento de la
distrofia muscular.
En el año 2012. Se repite la investigación del uso de células madre contra la
distrofia muscular de Duchenne en Bélgica, aplicando el tratamiento sobre perros
Golden Retriever. El estudio no parece haber sido muy fructífero ya que llegan a
una conclusión lógica, las células madre del mismo perro si no son tratadas
genéticamente no tienen efectos benéficos sobre el corazón del Golden Retriever.
En el año 2013. En Cuba se aplica un tratamiento de células madre (no queda claro
si estas son con IPS modificadas genéticamente u otro tipo de células madre) para
tratar a niños que tienen la enfermedad de Duchenne. Se observa una gran mejoría
a nivel muscular y motor en los niños, pero no se considera una cura definitiva.
En el año 2016, 17 de febrero. Se inicia la investigación de tratamiento con células
madre para la distrofia conocida como distrofia muscular de Duchenne. La técnica
ideada por el equipo de las científicas April Pyle, Courtney Young y Melissa
Spencer, de la Universidad de California en Los Ángeles, Estados Unidos, utiliza
una tecnología de edición genética llamada CRISPR/Cas9 para corregir las
mutaciones genéticas que causan la enfermedad.

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 7. BIBLIOGRAFÍA:
Stanford Children's Health. (2018). Distrofia muscular. Recuperado de
http://www.stanfordchildrens.org/es/topic/default?id=distrofiamuscular-90-P05882
Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health and Human Development.
(s.f.). ¿Qué tipos de distrofia muscular existen? Recuperado de
https://www1.nichd.nih.gov/espanol/salud/temas/musculardys/informacion/Pages/ti
pos.aspx
Clínica Dental Spa Hadassah. (2014, 19 mayo). Celulas madre La clave de la
regeneracion y rejuvenecimiento [Archivo de vídeo ]. Recuperado de
https://www.youtube.com/watch?v=WdUukQEO_28
Llorens, J. T. P. Joan. (s.f.). Aplicaciones células madre [Publicación en un blog].
Recuperado de http://www.aplicacionescelulasmadre.com/2014/09/distrofia-
muscular-y-las-celulas-madre.html
Distrofia Muscular de Duchenne. (2007, 1 julio). Recuperado 30 diciembre, 2016, de
https://espanol.ninds.nih.gov/trastornos/distrofia_muscular.htm

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