UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN MARTIN

FACULTAD DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL_SEDE TARAPOTO

DEPARTAMENTO ACADEMICO DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

AREA ACADEMICA DE CIENCIA Y TECNOLOGIA DE ALIMENTOS

CURSO: QUIMICA DE PRODUCTOS NATURALES NO ALIMENTARIOS

INFORME DE PRACTICA N° 02

TITULO : “MARCHA FITOQUIMICA PRELIMINAR EN LA DETERMINACION

DE LOS CONSTITUYENTES QUIMICOS DE UNA PLANTA POR PRUEBAS DE
COLORACION.”

 ALUMNOS : Erika Malú Flores García.

Elmer Eduardo Fernández Ramos.

 DOCENTE : In. Alejandro A. Cruz Rengifo.

 CICLO : VI

 FECHA DE EJECUCION : 04/05/18.

 FECHA PRESENTACION : 11/05/18.

TARAPOTO – PERU
2018
 I. INTRODUCCION:

El hombre utiliza las plantas con propósitos medicinales desde tiempos

prehistóricos y aún hoy tienen un papel clave en el mantenimiento de la salud de la
mayor parte de la población mundial, pese a los avances de la medicina moderna.
Esto si se tienen en cuenta las diversas formas en que se utilizan, que van desde la
preparación de decocciones e infusiones en zonas rurales y países pobres,
pasando por los productos Fito terapéuticos, hasta la obtención de principios activos
en países desarrollados para la elaboración de medicamentos. Se estima que en el
mundo se utilizan cerca de 10000 especies vegetales con fines medicinales, la
mayor parte en sistemas de medicina tradicional. El estudio de los productos
naturales de los vegetales comprende: los estudios etnobotánico, fitoquímico y de
bioactividad. La etnobotánica es el estudio de las relaciones entre plantas y
hombres. En la etnobotánica se trata el cultivo, la cosecha y el uso posible y
efectivo de las plantas, los cultos que refieren a esos y el papel de las plantas en la
visión del mundo y en la lengua. La fitoquímica estudia las propiedades y
estructuras químicas de los productos naturales (de las plantas). A través de lo que
se conoce como marcha fitoquímica (serie de pasos donde se observan reacciones
como cambio de color, fluorescencia, etc.) se determina la existencia de un tipo de
compuesto químico. La bioactividad trata de descubrir qué parte de la planta es
responsable de la actividad biológica importante y propiedades útiles para ser
estudiada. Hay tres razones por las cuales el análisis fitoquímico preliminar de los
productos naturales vegetales es necesario para establecer:

La identidad y fuente correcta de la droga (variación bioquímica).

La pureza, ausencia y límites de materias extrañas (adulteración).
La calidad y cantidad de componentes activos (deterioro)

II. OBJETIVOS:

2.1. OBJETIVO GENERAL

-Determinación fotoquímica preliminar de la hoja de la planta de cacao por pruebas de

coloración en hojas fresca y seca.

2.2. OBJETIVO ESPECIFCO

-Determinación preliminar de coloración en hojas frescas

-Determinación preliminar de coloración en hojas secas

 III. REVISION BIBLIOGRAFICA:

HISTORIA

Se sabe que los primeros árboles del cacao crecían de forma natural a la sombra de
las selvas tropicales en las cuencas del Amazonas y del Orinoco, hace miles de años.
Los mayas empezaron a cultivarlo hace más de 2500 años.

El cacao simbolizaba para los mayas vigor físico y longevidad, lo usaban como
medicina siendo recetado por sus médicos como relajante, como estimulante y como
reconstituyente. La manteca del cacao se usaba como pomada para curar heridas.

En 1502 Cristóbal Colón recibió, como ofrenda de bienvenida, armas, telas y sacos de
unas habas oscuras que, en la sociedad azteca, servían a la vez de moneda y de
producto de consumo. Aunque fue Hernán Cortés quien envió el primer cargamento de
cacao a España en 1524.

ACERCA

El árbol de cacao es una planta de tipo tropical que crece en climas cálidos y húmedos,
por lo general es un árbol pequeño, entre 4 y 8 metros de alto, aunque si recibe sombra
de árboles grandes, puede alcanzar hasta los 10 metros de alto. La madera es de
color claro, casi blanco, y la corteza es delgada, de color café.

El cacao pertenece al género Theobroma que en griego significa “Alimento de los

Dioses” de la familia de las bitneriaceas.

El grano del cacao, es una semilla encerrada en su fruto, similar al pepino. El cacaotero
tiene una longevidad de 40 años. Una mazorca de cacao siempre contiene un número
par de semillas o habas.

LA RAÍZ

Donde inicia el crecimiento del tronco y se forma o desarrolla el sistema radicular,

existe una zona de transición bien definida conocida como cuello de la raíz. En plantas
reproducidas por semillas el sistema radicular está compuesto por una raíz principal
denominada raíz pivotante o raíz primaria, la cual crece hacia abajo de forma recta.

A partir de la raíz pivotante, inmediatamente debajo del cuello, se desarrollan la

mayoría de las raíces secundarias a unos 15 a 20 cm de profundidad en la porción
superior de la capa de humus. Éstas se extienden en forma horizontal a 5 y 6 metros
del tronco del árbol, con raíces laterales que se dividen repetidamente. Las raíces
secundarias que se encuentran en la parte inferior de la raíz pivotante, tienen un
crecimiento hacia abajo en dirección a la roca madre o hacia la capa freática.

Las plantas que son reproducidas por medios vegetativos oasexuales no desarrollan
raíz pivotante, pero sí raíces primarias y secundarias, de crecimiento horizontal, según
se describe en el párrafo anterior.
La forma y desarrollo de las raíces del cacao dependen principalmente de la textura,
estructura y consistencia del suelo asícomo del modo de reproducción. En suelos
profundos bien aireados su crecimiento puede alcanzar hasta 2 metros de profundidad;
en suelos pedregosos su crecimiento es tortuoso. Cuando el suelo es de una estructura
granular uniforme y detextura arcillosa, la raíz crece erecta o derecha.

TALLO Y RAMAS

Las ramas del árbol de cacao, al igual que las de otras especies del género
Theobroma, son dimórficas:

Unas son de crecimiento vertical hacia arriba, denominadas ramas de crecimiento

ortotrópico, y constituyen el tallo y/o los chupones;

Otras son de crecimiento oblícuo hacia fuera, denominadas ramas de crecimiento

plagiotrópico.

Las plantas de cacao, reproducidas por semillas, desarrollan un tallo principal de

crecimiento vertical que puede alcanzar 1 a 2 metros de altura a la edad de 12 a 18
meses. A partir de ese momento la yema apical detiene su crecimiento y del mismo
nivel emergen de 3 a 5 ramas laterales. A este conjunto de ramas se le llama
comúnmente verticilio u horqueta.

El cacao tipo Criollo normalmente desarrolla un verticilio de 3 a 5 ramas laterales, las

cuales presentan un espacio bien marcado entre sus puntos de origen. En el cacao
Forastero las ramas laterales del verticilio salen de un mismo punto. En ambos casos,
cuando el árbol llega a adulto, las bases de las ramas laterales forman un solo anillo.
Las ramas laterales se desarrollan formando un ángulo de 45º.

La formación de chupones ocurre con frecuencia, emergiendo inmediatamente por

debajo del verticilio, formando una nueva horqueta, la cual se repite en esta misma
forma unas 4 veces.

Los troncos o tallos en su parte inferior solo producen hijos, llamados chupones
basales, los cuales pueden producir en la base raíces verdaderas con el mismo hábito
de crecimiento de las del tallo principal.

LA HOJA

Durante su formación, crecimiento y estado adulto, las hojas exhiben pigmentaciones

diferentes, cuya coloración varía desde muy pigmentadas hasta poca pigmentación.
Generalmente, los tipos de cacao Criollo y Trinitario tienen pigmentación mas
coloreadas que los del tipo Forastero, los que son de muy poca pigmentación. En todos
casos las hojas adultas son completamente verdes, de lamina simple, entera, de forma
que va desde lanceolada a casi ovalada, margen entero, nervadura pinada, y ambas
superficies glabras. El nervio central es prominente y el ápice de la hoja es agudo. Las
hojas están unidas al tronco o a las ramas por medio a los pecíolos, siendo los del
tronco más largos que los de las ramas. Las hojas tienen, tanto en la base como en la
parte superior, una estructura abultada constituida por un tejido parenquimatoso,
cargado de gránulos de almidón, denominada pulvino que, a consecuencia de
estímulos de los rayos de luz solar, orientan las hojas mediante movimientos de
rotación, buscando posición en relación con sus necesidades de luz.

El tamaño de las hojas es variable; lo cual depende de caracteres genéticos y de su

posición en el árbol. Las hojas de la periferia que están muy expuestas a la luz solar
son más pequeñas que las que están ubicadas en el interior del árbol. Las hojas
adultas del cacao Criollo son más grandes que las del cacao Forastero.

INFLORESCENCIA

Desde el punto de vista botánico, la inflorescencia del cacao es una cima decasiforme,
la cual se forma directamente en la madera más vieja del tronco y de las ramas adultas
del árbol y, de manera muy específica, en la base de una hoja, alrededor de la cicatriz y
de la yema axilar que queda al caer la hoja. La inflorescencia, en su proceso de
formación y crecimiento, se transforma en una masa densa que conforme se desarrolla
forma un cojín que agrupa entre 40 a 60 flores. Existe una marcada diferencia en el
número de flores presentes en diferentes cojines de diferentes árboles, lo cual obedece
a caracteres genéticos.

LA FLOR

La flor del cacao es hermafrodita, pentámera, de ovario súpero, cuya fórmula floral es:
S5, P5, E5+5, + G(5). Esto indica que la flor del cacao está constituida en su estructura
floral por 5 sépalos, 5 pétalos; el androceo conformado por 10 filamentos de los cuales
5 son fértiles (estambres) y los otros 5 son infértiles (estaminoides); el gineceo (pistilo)
está formado por un ovario súpero con 5 lóculos fusionado desde la base donde cada
uno puede contener de 5 a 15 óvulos, dependiendo del genotipo.

La polinización del cacao es estrictamente entomófila, para lo cual la flor inicia su

proceso de apertura con el agrietamiento del botón floral en horas de la tarde. El día
siguiente, en horas de la mañana, la flor está completamente abierta. Las anteras
cargadas de polen abren y están viables (disponibles; funcionales) casi inmediatamente
por un período aproximado de 48 horas. Esta es la única etapa disponible para la
polinización.

EL FRUTO

El fruto del cacao es el resultado de la maduración del ovario de la flor fecundada. En

esta descripción es apropiado indicar que hay frutos que nunca maduran por falta de
semillas y abortan; son llamados frutos partenocárpicos. Dentro de su clasificación
botánica el fruto de cacao es una drupa normalmente conocido como mazorca. Tanto el
tamaño como la forma de los frutos varían ampliamente dependiendo de sus
características genéticas, el medio ambiente donde crece y se desarrolla el árbol, así
como el manejo en la plantación. Las mazorcas de cacao por sus formas están
clasificadas como: Amelonado, Calabacillo, Angoleta y Cundeamor, variando según el
tipo o la especie.

El color también varía con muchas tonalidades, pero en realidad existen dos colores
básicos, el verde y el color rojo. El color verde es específico del cacao Forastero,
mientras que los colores rojo y verde estan presentes en el Criollo y Trinitario.

Las superficies de las mazorcas se presentan desde lisas hasta fuertemente rugosas,
con surcos superficiales o profundos y lomos individuales o pareados.

Dependiendo de la variedad, los Amelonados y Calabacillos son de formas

características del cacao Forastero, mientras que las formas Angoleta y Cundeamor
son representativas de los tipos Criollo y Trinitario en sus estados puros. Producto de la
polinización cruzada ya se encuentra cualquier forma de mazorca en cualquiera de los
tipos genéticos mencionados.

LA SEMILLA

El fruto del cacao puede contener entre 20 a 60 semillas o almendras, cuyo tamaño y
forma varían según el tipo genético. La semilla del cacao es más bien un óvulo del
interior del ovario de la flor fecundado y desarrollado, que luego de su desarrollo y
maduración constituye la mazorca.

En el cacao tipo Criollo las semillas tienen de 3 a 4 cm de largo, casi ovaladas,

alargadas, de color blanco o rosado más bien violeta pálido. En el cacao Forastero, las
semillas tienen de 2 a 3 cm de largo con formas aplanadas, redondeadas y de color
violeta púrpura. La semilla del cacao está constituida por dos cotiledones y un embrión
que está protegido por ambos cotiledones. El endosperma es sumamente reducido y
toma la forma de una membrana conocida como testa, la cual es delgada y coriácea
envuelta en su periferia por una pulpa ácida y azucarada que se llama mucílago.

Las semillas frescas con mucílago o solamente lavadas, si se almacenan pierden su

poder germinativo.

La semilla del cacao no necesita un período de reposo para su germinación, que puede
ocurrir inmediatamente el fruto alcanza su madurez y el mucílago que la cubre
desaparece. Éste tiene sustancias inhibidoras, por lo que no se puede almacenar
fresco ni ser sometido a temperaturas extremas que provocarían la muerte del embrión
por fermentación o deshidratación. En condiciones óptimas, las semillas inician la
germinación en 4 días.

LOCALIZACIÓN

El cacao crece espontáneamente en la América tropical, desde México hasta

Paraguay, aunque su cultivo se ha extendido a otras zonas tropicales del globo, como
la isla de Java y en África Occidental.
PRINCIPIOS ACTIVOS

La semilla contiene un alcaloide característico, la teobromina. Además, es rica en

materias grasas y albúmina. La teobromina, junto con otras sustancias, forma un
pigmento rojo que se conoce como rojo de cacao.

Los principales principios activos del Cacao son los alcaloides derivados de la xantina
con un contenido total entre 3 y 4%.

El cacao contiene además muchos principios activos importantes (se estima unos 300)
como la anandamida, arginina, dopamina (neurotransmisor), epicatequina
(antioxidante), histamina, magnesio, serotonina (neurotransmisor), triptófano (esencial
para suscitar la liberación del neurotransmisor serotonina), polifenoles (antioxidantes),
salsolinol y flavonoides.

El descubrimiento del contenido de epicatequina en el Cacao provocó gran sensación,

pues a este principio activo se le atribuyen beneficios en la disminución del riesgo
(hasta un 10%) de sufrir dolencias como derrame cerebral, ataque cardíaco, cáncer y
diabetes, según estudios realizados por el profesor Norman Hollenberg, de la Escuela
de Medicina de Harvard.

 Las xantinas

Las Xantinas son consideradas alcaloides ya que son

sustancias fisiológicamente activas, contienen nitrógeno
y se encuentran en plantas; sin embargo, llegan a diferir
de las bases alcaloideas en que son ligeramente
solubles en agua. Desde el punto de vista médico y
farmacológico existen tres xantinas de importancia: la
cafeína, la teobromina y la teofilina. Estas sonlas
xantinas metiladas por lo que también se les conoce
como metilxantinas. La importancia concedida a estos
compuestos deriva de la interpretación de su nombre:
teobromina, "comida divina"; teofilina, "hoja de dioses" y
cafeína que viene de la palabra árabe para designar el
vino.Los principales principios activos del Cacao son los
alcaloides derivados de la xantina con un contenido
total entre 3 y 4%.

El compuesto más abundante es la teobromina (2,8 – 3,5%) y en menor cantidad la

cafeína (0,1 a 0,4%).
Grasas (50%): Ácidos grasos oleico (33 a 39%), esteárico (30 a 37%) y palmítico (24 a
31%).

Sustancias proteicas (10 a 16%),

Almidón (5 a 9%)

Azúcares (2 a 4%): sacarosa, glucosa y fructosa.

Aminas biogénicas: incluyen feniletilamina, tiramina, triptamina, serotonina.

Taninos catéquicos un 10%.

El cacao contiene además muchos principios activos importantes (se estima unos 300)
como la anandamida, arginina, dopamina (neurotransmisor), epicatequina
(antioxidante), histamina, magnesio, serotonina (neurotransmisor), triptófano (esencial
para suscitar la liberación del neurotransmisor serotonina), polifenoles (antioxidantes),
salsolinol y flavonoides.
El descubrimiento del contenido de epicatequina en el Cacao provocó gran sensación,
pues a este principio activo se le atribuyen beneficios en la disminución del riesgo
(hasta un 10%) de sufrir dolencias como derrame cerebral, ataque cardíaco, cáncer y
diabetes.

PROPIEDADES MEDICINALES

La teobromina es un verdadero medicamento diurético, y excita el sistema nervioso.

RECOLECCIÓN

Varía según las zonas, pues en unos casos se van recogiendo los frutos durante todo
el año, mientras en otros la recolección se hace dos veces al año. En México se
efectúa entre marzo y abril; y en Madagascar, en noviembre y diciembre.

USOS Y APLICACIONES

El cacao es utilizado tanto por la industria farmacéutica como por la alimentaria. La

primera extrae la teobromina para elaborar preparados comerciales diuréticos y
estimulantes del sistema nervioso; también extrae la manteca de cacao de las semillas
(parte grasa) para su aplicación en pomadas o supositorios. Las semillas, desecadas,
torrefactadas y molidas constituyen el polvo de cacao, base del chocolate. Hay dos
formas de prepararlo: el cacao enterrado (México y Colombia) se obtiene colocando las
semillas cubiertas con tierra arcillosa. Así fermenta la pulpa que acompaña la semilla y
puede separarse fácilmente. El cacao resultante es muy aromático. Para elaborar el
cacao no enterrado (Antillas y Brasil), se colocan las semillas en recipientes de madera
hasta que la pulpa fermente, se licúe y pueda separarse.
 IV. MATERIALES Y METODOS:

Materiales:

 Tubos de ensayo
 Vaso precipitado
 Reactivo Wagner y Mayer
 HCl
 Mg
 FeCl
 Tabla de picar
 Cuchillo
 Balanza
 Papel filtro

Métodos:

El método realizado es a través de la extracción de hojas de cacao en fresco y seco lo

cual será detallado en los próximos pasos.

V. RESULTADOS Y DISCUSIONES:

Determinación fotoquímica preliminar de la hoja de la planta de cacao por pruebas de

coloración en hojas frescas:

1. Tomar la muestra y convertir a partículas pequeñas y pesar aproximado a tres

gramos de ellas y colocar en un vaso mayor a 100 ml. Y agregar 30 ml. De
solvente.
2. Macerar por 10 min. Dejar en reposo y luego filtrar.
3. Tomar el extracto en solución y dividir en partes iguales en 6 tubos de prueba.
4. Dos tubos de prueba será asignados para la determinación de alcaloides. Un
tubo de prueba para la determinación de saponinas, un tubo de prueba para la
prueba de fenoles y un tubo de prueba para la determinación de flavonoides.
5. Para la determinación de alcaloides se determinara los reactivos Wagner y
Mayer haciendo la prueba por separado, en cada tubo de prueba que tendrán
previamente una gota de ácido clorhídrico al 1%.

La determinación de saponinas se agregara agua (obteniendo doble volumen) y

sacudir por 30 segundos, si hay espuma y mantiene este tiempo hay presencia de
saponinas (las espumas pueden variar de lo más mínimo a lo más abundante según
la muestra)

6. Para la determinación de flavonoides, se empleará la prueba de shinoda que

consiste en obtener la coloración por efecto de la siguiente reacción:

2𝐻𝐶𝐿(𝐶𝑜𝑛𝑐.) + 𝑀𝑔(𝑠) ° → 𝑀𝑔𝐶𝑙2 + 𝐻2

 Donde el HCL concentrado en gotas reaccionara con una o dos limaduras de Mg
para dar el resultado.

7. Para la determinación de fenoles bastara agregar una, dos o tres gotas de

FeCL3 al extracto de tubo de prueba para observar la presencia de este
metabolito.

Tabla Nº1: muestra fresca de hojas de Cacao

ALCALOIDES Tobo 1 Agregamos dos gota de Hubo cambio de color

Mayer quiere decir que si hay
Tubo 2 Agregamos dos gota de presencia de alcaloides
Wagner (color verde pera)
SAPONINAS Tubo 3 Volumen de agua agitar Se formó espumas
por 1 min y dejamos por quiere decir q si hubo
30 s. presencia de saponinas,
coloración verde caña.
FLAVONOIDES Tubo 4 Agregamos una lámina de Hay cambio de
magnesio coloración de la solución
presencia de flavonoides
FENOLES Tubo 5 Se agregó una gota de Se obtuvo un cambio
fecl3 brusco a color intenso
de solución presencia de
fenoles (color verde
alga)
TESTIGO Tubo 6 Muestra patrón Color verde trébol

Determinación fotoquímica preliminar de la hoja de la planta de cacao por

pruebas de coloración en hojas secas:

1. Tomar la muestra y convertir a partículas pequeñas y pesar aproximado a tres

gramos de ellas y colocar en un vaso mayor a 100 ml. Y agregar 30 ml. De
solvente.
2. Macerar por 10 min. Dejar en reposo y luego filtrar.
3. Tomar el extracto en solución y dividir en partes iguales en 6 tubos de prueba.
4. Dos tubos de prueba será asignados para la determinación de alcaloides. UN
tubo de prueba para la determinación de saponinas, un tubo de prueba para la
prueba de fenoles y un tubo de prueba para la determinación de flavonoides.
5. Para la determinación de alcaloides se determinara los reactivos Wagner y
Mayer haciendo la prueba por separado, en cada tubo de prueba que tendrán
previamente una gota de ácido clorhídrico al 1%.
6. La determinación de saponinas se agregara agua (obteniendo doble volumen) y
sacudir por 30 segundos, si hay espuma y mantiene este tiempo hay presencia
de saponinas (las espumas pueden variar de lo más mínimo a lo más abundante
según la muestra)
7. Para la determinación de flavonoides, se empleará la prueba de shinoda que
consiste en obtener la coloración por efecto de la siguiente reacción:
 2𝐻𝐶𝐿(𝐶𝑜𝑛𝑐.) + 𝑀𝑔(𝑠) ° → 𝑀𝑔𝐶𝑙2 + 𝐻2

Donde el HCL concentrado en gotas reaccionara con una o dos limaduras de Mg

para dar el resultado.

8. Para la determinación de fenoles bastara agregar una, dos o tres gotas de

FeCL3 al extracto de tubo de prueba para observar la presencia de este
metabolito.

Tabla Nº2: muestra seca de hojas de Cacao

ALCALOIDES Tobo 1 Agregamos dos gota de Hubo cambio de color

Mayer quiere decir que si hay
Tubo 2 Agregamos dos gota de presencia de alcaloides
Wagner
SAPONINAS Tubo 3 Volumen de agua agitar Se formó espumas
por 1 min y dejamos por quiere decir que si hubo
30 s. presencia de saponinas,
coloración verde caña
FLAVONOIDES Tubo 4 Agregamos dos lámina de Hay cambio de
magnesio y 5 gotas de coloración y reacción de
HCL la solución presencia de
flavonoides
FENOLES Tubo 5 Se agregó una gota de Se obtuvo un cambio
fecl3 brusco a color intenso
de solución presencia de
fenoles (color verde
petróleo)
TESTIGO Tubo 6 Muestra patrón Verde caña

VI. RECOMENDACIONES:

 Para estas pruebas se recomienda esterilizar todo los materiales de práctica a

realizar por lo contrario obtendríamos reacciones secundarias en el proceso de
cada una de las pruebas la cual sería dificultoso determinar el resultado de cada
muestra.
VII. CONCLUSIONES:

 Los resultados del análisis fitoquímico preliminar efectuado sobre la muestra de

hojas de cacao evidencian la presencia de alcaloides, flavonoides, saponinas,
fenoles.
 Finalizando dicha práctica llegamos a obtener resultados favorables para la
identificación de todas estas pruebas realizadas.

VIII. BIBLIOGRAFIA:

 Alvarado, M. R y Bullard, E. T. 1961. Variation of bean characteristic in

hybrid cacao progenies, proceeding of the Caribbean Region, America
Society Horticultural Sciences 5. 105 p.
 Álvarez, C..; Pinto, J. y Pérez, E. 2001. Caracterización físico-química de granos
(tostados) y mucílago de cacao (Theobroma cacao L.) de la región
de Cumboto, Memorias del primer Congreso Venezolano del Cacao y
su Industria, disponible en www.Cacao.sian.info.ve/memorias/html/18html
 Armijos, A. 2002. Caracterización de acidez como parámetro químico
de calidad en muestras de cacao (Theobroma cacao L.) fino y ordinario
de producción Nacional durante la fermentación, Tesis Lic. en Química, Quito,
Ecuador, Pontificia Universidad Católica 103 p.
IX. ANEXOS: HOJAS FRESCAS
HOJAS SECAS