Pruebas Bioquímicas 1 y 2

1. Pruebas bioquímicas 1

1.1 Pruebas bioquímicas que utilizan fuentes de carbono

Objetivo/Indicador
Resultado Resultado
Prueba Lectura /
obtenido esperado
Prueba
Objetivo: ​Detectar Se espera que
Prueba positiva la capacidad de la Pseudomonas toda la caja tome
(+): ​El medio es bacteria para aeruginosa: el color azul
de color ​café desdoblar el Prueba negativa oscuro de la
Presencia de halo almidón por medio (-) reacción del
alrededor de las de las amilasas lugol con el
Agar colonias Indicador: ​No hay. almidón.
almidón Reactivos:​ Agregar
(Amilasa) Prueba negativa lugol​ al cultivo
(-): ​El medio se crecido Bacillus
Se espera un halo
torna a un color Prueba: ​Identificar subtilis:
transparente
azul​-​morado hidrolizadores de Prueba positiva
alrededor del
No hay presencia almidón (+)
cultivo.
de halo alrededor característicos como
de las colonias Bacillus spp.
Objetivo:
Prueba positiva Determinar si un
(+): ​El medio es microorganismo es
de color​ azul​ ​(pH capaz de utilizar el
alcalino) citrato como única
fuente de carbono Escherichia
Sin cambio
Indicador: ​Azul de coli:
Citrato (medio de color
bromotimol Prueba negativa
verde).
Prueba negativa Prueba: ​Diferenciar (-)
(-): ​El medio es Klebcsiella-Enterob
de color ​verde acter​ (+) de
(pH neutro) Escherichia​ (-) y
Edwardsiella​ (-) de
Salmonella​ (+)
Lactosa + Pseudomonas
Glucosa + Objetivo: aeruginosa:
Agar hierro Pico y fondo Determinar si una
de Kliger amarillo bacteria puede: Lactosa -
Lactosa - ●Fermentar glucosa Glucosa -
Glucosa - y lactosa Gas -
Pico y fondo ​rojo ●Producir gas Pico y fondo
Lactosa - debido a la rojo
Glucosa + fermentación de
Pico ​rojo​ y fondo los carbohidratos
amarillo ●Producir acido
Lactosa + sulfhidrico ( H 2 S)
Glucosa + Indicador: ​Rojo de
Gas + fenol
Pico y fondo Prueba: ​Se utilizan
amarillo​, con para diferenciar
desplazamiento o géneros y especies
rompimiento del diversas de la
medio familia Se espera que
Lactosa + Enterobacteriaceae tanto el pico
Glucosa + como el fondo
Gas + sean rojos por
(Reversión por estar alcalinos. Y
uso de que sea negativo
peptonas) para producción
Pico de color de gas y de ácido
rojo​, fondo sulfhídrico.
amarillo​ y
desplazamiento o
rompimiento del
medio
Glucosa +
Acido
sulfhidrico (
H 2 S) +
Pico​ rojo​ y fondo
con precipitado
negro
Lactosa +
Glucosa +
Acido
sulfhidrico (
H 2 S) +
Pico de color
amarillo​ y fondo
con precipitado
negro
 Sacarosa +
Glucosa + Objetivo:
Pico y fondo de Determinar si una
color ​amarillo Pseudomonas Se espera que
bacteria puede:
aeruginosa: tanto el pico
Sacarosa - ●Fermentar
como el fondo
Glucosa + glucosa, lactosa y
Lactosa - sean rojos por
Agar TSI Pico de color sacarosa
Glucosa - estar alcalinos. Y
(Triple Sugar rojo​ y fondo ●Producir gas
Gas - que sea negativo
Iron) amarillo debido a la
Pico y fondo para producción
Sacarosa - fermentación de
rojo de gas y de ácido
Glucosa - los carbohidratos
sulfhídrico.
Pico y fondo de ●Producir ácido
color ​rojo sulfhídrico ( H 2 S)
Sacarosa -
 Glucosa + Indicador: ​Rojo de
Acido Fenol
sulfhidrico Prueba: ​Se utilizan
( H 2 S) + para diferenciar
Pico de color géneros y especies
rojo​ y fondo con diversas de la
precipitado familia
negro Enterobacteriaceae
Sacarosa +
Glucosa +
Acido
sulfhidrico
( H 2 S) +
Pico de color
amarillo​ y fondo
con precipitado
negro
Sacarosa +
Glucosa +
Gas +
Pico y fondo de
color ​amarillo
con rompimiento
o deslizamiento
del medio
Rojo de Metilo
Objetivo:
Comprobar la
producción de
ácidos mixtos Bacillus
Rojo de Metilo
estables por la subtilis:
fermentación de la
Prueba positiva
glucosa Rojo de metilo
(+): ​Medio de
Rojo de Indicador: ​Rojo de Prueba positiva
color ​rojo
Metilo-Voge metilo (+)
Tanto para rojo
s Proskauer Reactivos: ​Rojo de
Prueba negativa de metilo com
(RMPV) metilo (agregar 4-5 Voges
(-): ​Medio de
gotas) Proskauer
color ​amarillo
Prueba: Prueba positiva
Diferenciar (+)
Escherichia​ (+) de
Enterobacter-Klebsi
ella​ (-)
Voges Voges Proskauer
Proskauer Objetivo:
 Determinar la
Prueba positiva capacidad de
(+): ​Formación algunas bacterias de
de anillo ​rojo producir acetoína a
partir de la
Prueba negativa fermentación de la
(-): ​Formación glucosa
de anillo ​amarillo Indicador: ​Rojo de
metilo
Reactivos:​ Barrit (2
gotas) y KOH (1
gota)
Prueba: ​Diferenciar
Escherichia (+) de
Enterobacter-Klebsi
ella​ (-)
Caracterizar
miembros del
genero ​Bacillus spp.
Objetivo:​ Observar
la producción de
Prueba positiva ácidos orgánicos a
(+): ​El medio es partir de la
de color ​amarillo degradación de
carbohidratos
Fermentació Bacillus
Indicador: ​Rojo de
n de subtilis:
Fenol
carbohidrato
Prueba:
s en Prueba positiva
Diferenciación de
rojo de Fenol (+)
Prueba negativa las bacterias
(-): ​El medio es entéricas (también
de color ​rojo de algunos géneros
y especies de
azúcares
particulares)
Presencia de
Objetivo: ​Detección
coliformes:
de coliformes totales
Medio de color Escherichia
y la identificación
azul​-​verdoso coli:
Caldo de ​Escherichia coli
Presencia de
Fluorocult Indicador: ​No hay
E.coli:​ ​Presencia Halo ​morado
(LMX) Prueba: ​Identificar
de fluorescencia Indol +
coliformes totales y
en el medio, Fluorescencia +
E.coli p​ or
Indol + y anilllo
florescencia
vinotinto ​al
 agrgar reactivo
de Kovac
Prueba positiva
Objetivo: ​Detectar
(+): ​Presencia de
la utilización de
burbuja en la
lactosa con
Caldo Bilis campana de Salmonella
producción de gas
Verde Durham typhi:
Indicador: ​No hay
Brillante Prueba negativa Prueba negativa
Prueba: ​Para
(CBVB) (-):​ Ausencia de (-)
diferenciar bacterias
burbuja en la
coliformes de las no
campana de
coliformes
Durham

1.2 Pruebas bioquímicas que detectan la presencia de enzimas

Resultado Resultado
Prueba Lectura Objetivo/Indicador/ Prueba
obtenido esperado
Objetivo: ​Determinar la
Prueba presencia de citocromo
positiva (+): oxidasa en las bacterias Pseudomonas
Presencia de Indicador: ​No hay aeruginosa:
color ​púrpura Reactivos: ​Tiras Prueba
despues de 10 impregnadas con clorhidrato positiva (+)
segundos de
tetrametilparafenilendiamina
Oxidasa
Prueba: ​Para diferenciar
Prueba Neisseria​ y ​Moraxella​ (+) de Escherichia
negativa (-): Acinetobacter​ (-) coli:
No hay Para separar bacterias Prueba
cambio de entéricas (-) de ​Pseudomonas negativa (-)
color (+)
Para ayudar a identificar
Aeromonas​ (+)
Objetivo: ​Comprobar la
Escherichia
Prueba presencia de la enzima
coli:
positiva (+): catalasa, para descomponer
Catalasa Prueba
Formación de el peróxido de hidrógeno
positiva (+)
burbujas Indicador: ​No hay
Reactivos: ​Peróxido de
 hidrógeno (agregar 1 gota)
Prueba
Prueba: ​Diferenciar ​Bacillus
negativa (-):
(+) de ​Clostridium​ (-);
No hay
Streptococcus​ (-) de
formación de
Micrococcus
burbujas
/Staphylococcus​ (+)

1.3 Sistemas comerciales de identificación

Resultado Resultado
Prueba Lectura Objetivo/Prueba
obtenido esperado
Objetivo: ​Es un método de
identificación de
Revisar la Revisar el
microorganismos a través
imagen 1, resultado 1,
de la realización de 20
que se que se
API pruebas bioquímicas
encuentra encuentra
(20NE) Prueba:​ Permite la
adjunta al adjunto al
identificación de bacterias
final de esta final de esta
Gram –, no pertenecientes
tabla tabla
al grupo de las
enterobacterias
Objetivo: ​Es un sistema de
identificación
miniaturizados. Incluye test
Revisar la Revisar el
de fermentación, oxidación
imagen 2, resultado 2,
degradación e hidrólisis de
que se que se
Crystal diversos sustratos.
encuentra encuentra
BBL Prueba: I​ dentificación de
adjunta al adjunto al
bacterias entéricas no
final de esta final de esta
fermentadores de la familia
tabla tabla
Enterobacteriaceae y
algunos Gram - no
fermentadores.

Pruebas positivas

Pruebas negativas
 Imagen 1: ​AP1 20NE con pruebas positivas y negativas

NO TR GL AD UR ES GE PN GL
3 T U H E C L G U
1 2 4 1 2 4 1 2 4
- - + + + - - + -
4 3 2

AR MN MA NA MA GN CA AD ML CI PA OX
A E N G L T P I T T C
1 2 4 1 2 4 1 2 4 1 2
4
- - - - - - - - - - -
0 0 0 4

Resultado 1:​ Resultados obtenidos en el API 20NE

Imagen 2:​ BBL CRYSTAL con pruebas negativas y positivas, respectivamente

A B C D E F G H I J
4 + +/- + + + + + + + -
2 - +/- + + + + +/- - + -
1 - +/- - - + + + + - +
4 0 6 6 7 7 5 5 6 1

Resultado 2: ​Resultados obtenidos en el BBL CRYSTAL

2. Pruebas bioquímicas 2
2.1 Pruebas bioquímicas que utilizan fuentes de nitrógeno

Objetivo/Indicador Resultado Resultado

Prueba Lectura
/Prueba obtenido esperado
Prueba positiva
(+):​ Formación Objetivo: Proteus
de un complejo Indicador: ​No hay mirabilis:
verde​ en el pico Reactivos: F eCl3 Prueba positiva
Fenilalanina- de la flauta y al 10% (agregar 4-5 (+)
desaminasa fondo ​amarillo  gotas)
Prueba negativa Prueba: Pseudomonas
(-):​ El medio se Caracterizar el aeruginosa:
mantiene de color género ​Proteus​ (+) Prueba negativa
amarillo  (-)
Decarboxilación
de lisina +
Desaminación de
la lisina -
Fermentación de
Proteus
glucosa +
Objetivo: ​Medir la mirabilis:
Acido
sulfhidrico capacidad de un
organismo para Decarboxilación
( H 2 S) -
decarboxilar la de lisina -
Pico y fondo de
lisina, convirtiendo Desaminación de
color ​violeta
este aminoácido en la lisina -
LIA (Lisine Decarboxilación
una amina Fermentación de
Iron Agar) de lisina +
Indicador: ​Purpura glucosa +
Desaminación de Acido
de bromocresol
la lisina - sulfhidrico (
Prueba: ​Ayuda a
Fermentación de H 2 S) -
determinar el grupo
glucosa +
bacteriano entre las Pico de color
Acido
bacterias entéricas violeta​ y fondo
sulfhidrico
amarillo
( H 2 S) +
Pico de color
violeta ​y fondo
con precipitado
negro
 Decarboxilación
de lisina -
Desaminación de
la lisina -
Fermentación de
glucosa + Salmonella
Acido typhi:
sulfhidrico
( H 2 S) - Decarboxilación
Pico de color de lisina +
violeta​ y fondo Desaminación de
amarillo la lisina -
Decarboxilación Fermentación de
de lisina - glucosa +
Desaminación de Acido
la lisina + sulfhidrico (
Fermentación de H 2 S) -
glucosa + Pico y fondo de
Acido color ​violeta
sulfhidrico
( H 2 S) -
Pico de color
rojizo​ y fondo
amarillo
Objetivo:
Comprobar la
Prueba positiva capacidad de las Escherichia coli:
(+): ​El medio se bacterias de reducir Prueba positiva
tiñe de color ​rojo el nitrato a nitrito y (+)
en última instancia a
nitrógeno libre
Reducción Indicador: ​No hay
de Nitrato Reactivos:​ Reactivo
A y B (en el
Prueba negativa laboratorio fue 1 y 2, Staphylococcus
(-): ​El medio respectivamente) aureus:
permanece de Prueba: ​Ayuda a Prueba positiva
color ​amarillo identificar bacterias (+)
entéricas (por lo
común +)
Sulfuros +: Objetivo: Salmonella
SIM
Formación de H 2 S : ​Determinar la typhi:
(Sulfuros-In
precipitado producción de H 2 S
dol-Motilida
negro. Indol: ​Determinar la Sulfuros - : ​El
d)
Sulfuros - : ​El capacidad de medio mantiene
 medio mantiene desdoblar el Indol a su color natural.
su color natural partir de la molécula No hay
No hay de triptófano formación de
formación de Motilidad: precipitado negro
precipitado negro Capacidad de las
bacterias de Indol - :
moverse, es decir, se Formación anillo
evalúa la motilidad amarillo
Indol +:
Formación anillo Indicador: Motilidad +:
rojo​-​morado H 2 S : ​No hay Turbidez
Indol - : Indol: ​No hay alrededor de la
Formación anillo Motilidad:​ No hay línea de punción
amarillo
Reactivos:
H 2 S : ​No hay
Indol: ​Reactivo de Proteus
Motilidad +: Kovac mirabilis:
Turbidez Motilidad:​ No hay
alrededor de la Sulfuros +:
línea de punción Prueba: Formación de
H 2 S : Ayuda a precipitado​ negro
identificar
Salmonella, Arizona Indol - :
Edwrdsiella​ y Formación anillo
Motilidad - :​No Proteus amarillo
hay turbidez Indol: ​Distinguir
alrededor de la Escherichia (​ +) de Motilidad ¿?:
línea de punción Klebsiella-Enteroba Incierta
cter​ (-);
Edwardsiella​ (+) de
Salmonella​ (-)

2.2 Pruebas bioquímicas que detectan la presencia de enzimas

Objetivo/Indicador Resultado Resultado

Prueba Lectura
/ Prueba obtenido esperado
Objetivo: Escherichia coli:
Prueba Determinar la No se pudo
positiva (+): capacidad de un evidenciar,
Gelatinasas-Pr Licuefacción microorganismo debido a errores
oteasas del medio para producir en la ejecución
enzimas de la prueba
proteolíticas
Prueba Indicador: ​No hay Staphylococcus
 negativa (-): Prueba: ​Para aureus:
El medio se ayudar a identificar No se pudo
mantiene Serratia, evidenciar,
sólido Pesudomonas, debido a errores
Flavobacterium, en la ejecución
Clostridium de la prueba
Objetivo:
Prueba Determinar la
positiva (+): capacidad de un Proteus
Medio de organismo de mirabilis:
color ​rosado desdoblar la urea, Prueba positiva
intenso​ o formando dos (+)
morado moléculas de
amoniaco por acción
Ureasa de la enzima ureasa
Indicador: ​Rojo de
Prueba fenol Staphylococcus
negativa (-): Prueba: ​Distinguir aureus:
Medio de Klebsiella​ (+), de Prueba negativa
color ​amarillo Escherichia (​ -) (-)
o ​anaranjado Para distinguir
Proteus​ (+) de
Providencia​ (-)

Referencias

● Vanegas López, M. C., & Universidad de los Andes (Colombia). (2015). ​Guías para el
laboratorio de bacteriología.​ Bogotá: Universidad de los Andes, Facultad de Ciencias,
Departamento de Ciencias Biológicas.
● Imagen 1: S.n. (S.f.). ​Sistemas miniaturizados API.​ (online). Recuperado de:
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_SistemasAPI.p
df.
● Imagen 2: S.n. (n.d.). ​Gyors és molekuláris biológiai módszerek alkalmazása élelmiszerek
mikrobiológiai vizsgálatára - Gyakorlati kézikönyv|Digitális Tankönyvtár​. (online)
Recuperado de:
http://www.tankonyvtar.hu/hu/tartalom/tamop425/0011_2A_6_modul/1093/index.html​.
● https://www.colibri.udelar.edu.uy/bitstream/123456789/1422/1/uy24-15703.pdf
● http://www.iib.unsam.edu.ar/php/docencia/licenciatura/biotecnologia/2008/MicroBiol/Prueba
s%20Bioquimicas.pdf