PRÁCTICA # 4

TEMA: TECNICA DE TINCIÓN WRIGHT

OBJETIVO: Capacitar a los estudiantes para que realicen correctamente una

tinción del Frotis de sangre, el cual es esencial para el análisis morfológico y
recuento diferencial de las células sanguíneas.

FUNDAMENTO:
Se puede observar morfología y alteraciones de células sanguíneas, cuerpos de inclusión y
algunos hematozoarios.

MATERIALES

Muestra de sangre
2 placas portaobjetos
1 pipeta Pasteur 3ml
Tinción Wright Q.P.
Agua destilada
Aceite de inmersión
Microscopio

PROCESO:

Debemos tener un frotis de sangre seco

Colocarlo sobre un vaso coplin
Agregar 1 cc de la tinción de Wright
Esperar 1 minuto
Dejar secar verticalmente

Una vez secado colocar la placa en forma horizontal e inmediatamente disolver: 0,5 ml de
tinción Wright más 0,5 ml de agua destilada en un tubo de ensayo y homogenizarlo para
aplicarlo sobre el frotis.

Esperar 3-5 minutos

Enjuagar con agua destilada
Secar al aire
Observar al microscopio con una gota de aceite de inmersión a 100x
TECNICA DE TINCIÓN WRIGHT MODIFICADO

Este método es más sencillo pero requiere de más tiempo.

Debemos tener un frotis de sangre seco

Colocarlo sobre un vaso coplin
Agregar 1 cc de la tinción de Wright
Esperar 1 minuto
Agregar 0,5 cc de agua sobre el frotis
Esperar 10 minutos
Enjuagar con agua destilada
Secar al aire
Observar al microscopio con una gota de aceite de inmersión a 100x
 PRÁCTICA # 5

TEMA: TECNICA DE TINCIÓN GUIEMSA

OBJETIVO: Capacitar a los estudiantes para que realicen correctamente una

tinción del Frotis de sangre, el cual es esencial para el análisis morfológico y
recuento diferencial de las células sanguíneas.
TÉCNICA DE TINCIÓN DE GIEMSA

Se puede observar: morfología y alteraciones de células sanguíneas, cuerpos de inclusión,

hematozoarios, Rikettsias.

MATERIALES:

Muestra de sangre
2 placas portaobjetos
1 pipeta Pasteur 3ml
1 caja de Petri
Metanol (fijador)
Tinción Giemsa Q.P.
Agua destilada
Aceite de inmersión
Microscopio

Proceso:
Fijar el frotis en alcohol metílico(metanol) en cantidad suficiente que lo cubra de 3-4
minutos.
Dejar secar por completo
Aplicar el colorante Giemsa con la placa en posición horizontal
Esperar 20 – 30 minutos
Lavar el frotis con abundante agua
Secar al aire
Observar al microscopio con lente de 100x y con una gota de aceite de inmersión.
 PRÁCTICA # 6

TEMA: OBSERVACIÒN DE LA SERIE ERITROCÍTICA

OBJETIVO: Capacitar a los estudiantes en la observación normal de la morfología

eritrocitaria.

MATERIALES
Algodón
Alcohol metílico
Tubo con muestra de sangre con anticoagulante
Tubos capilares
Guantes desechables
Placas porta objetos (placas porta soporte y porta extensor)
Toallas absorbentes
Tinción de Wright
Tinción de Giemsa
Aceite de inmersión

EQUIPOS

Microscopio

TÉCNICA

Con los dedos índice y pulgar de una mano, sujetar un extremo del porta normal (porta
soporte), a nivel de sus bordes, y situarlo sobre una mesa. También puede apoyarse,
simplemente, el porta soporte sobre el extremo del dedo corazón de la mano que lo
sujeta. De esta forma, el porta soporte forma un ángulo con la mesa.

Con un capilar cargado mediante capilaridad, depositar una pequeña gota de sangre (de
unos 5 microlitros) en la cara superior de ese porta, a no menos de 2 cm del extremo
opuesto al que sostiene la mano.

Colocar un extremo del porta esmerilado (porta difusor o extensor) un poco por delante
de la gota de sangre y formando un ángulo de 45° con el porta soporte.

Es conveniente utilizar siempre el mismo porta extensor, para adaptarlo a esta función.

Desplazar suavemente hacia atrás el porta extensor, hasta que alcance la gota de sangre.
Dejar que la gota se extienda, por capilaridad, a lo largo del extremo del porta extensor
que toca el porta soporte.

Antes de que la sangre alcance los bordes de ese extremo, deslizar el porta extensor hacia
delante, con un movimiento firme y uniforme, y a una velocidad media.

Secar rápidamente la extensión, agitándola al aire, para que sus células no se distorsionen.
 PRÁCTICA # 7

TEMA: TÉCNICA PARA LA REALIZACIÓN DEL HEMATÓCRITO

OBJETIVO:

Lograr mediante la fuerza centrífuga separar en forma acelerada los componentes de la

sangre.

INTRODUCCIÓN: La centrifugación es una técnica de sedimentación acelerada gracias al

uso de fuerza centrífuga. Se aplica al análisis o a la separación de mezclas de partículas,
células, orgánulos o moléculas.

EQUIPOS:

Microcentrífuga
Lector de hematócrito

MATERIALES:

Guantes desechables
Tubos con sangre con anticoagulante
Tubos capilares
Plastilina o macilla
Servilletas de papel

FUNDAMENTO PARA REALIZAR UN HEMATÓCRITO:

Esta prueba quiere decir literalmente separación de la sangre.

Está ideada para separar la sangre contenida en un tubo en tres capas, mediante
centrifugación.

Las partículas más pesadas, los glóbulos rojos, se depositan en el fondo, los leucocitos y
las plaquetas forman una capa sobre ellos y la capa superior está formada por el plasma.

La información que se obtiene del hematócrito es la altura relativa de la capa de glóbulos

rojos que indica el porcentaje de sangre ocupada por los hematíes, a esto se llama
volumen celular compacto (VCC).

Es una prueba rápida y simple de realizar, proporciona una gran información en la forma
de microhematócrito, se requiere una pequeña cantidad de sangre.
Nos informa sobre la proporción de sangre ocupada por los hematíes, es decir el volumen
de células compactas(VCC), leucocitos, plaquetas y plasma.

Además, el color del plasma puede indicar la presencia de ciertos estados de enfermedad.

Es importante apreciar que el volumen celular compacto comprende solamente los

glóbulos rojos y no, como puede suponerse, también los leucocitos y las plaquetas.

El hematócrito es la prueba más valiosa para el diagnóstico de la anemia.

TÉCNICA PARA REALIZAR EL MICROHEMATÓCRITO

Un tubo capilar de calibre estrecho de aproximadamente 1 mm de diámetro y de 17 mm

de longitud se llena casi completamente de sangre, se cierra en uno de sus extremos y se
centrifuga a 10.000 r.p.m. durante 5 minutos. Utiliza aproximadamente solo 0,1 ml de
sangre.

PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR UN HEMATÓCRITO

1.- Tomamos la sangre que está en el tubo con anticoagulante mediante un capilar hasta
llenarlo en un 80% -85% del total de su longitud, dejando aproximadamente 1 cm libre.

2.- Inmediatamente colocamos el extremo en la arcilla para sellarlo, repitiendo esto 2 a 3

veces hasta que quede completamente sellado sin riesgos de que se escape la sangre
durante la centrifugación.

3.- Luego llevamos el capilar hasta la Microcentrífuga y lo colocamos en el espacio

ranurado y numerado lo más cerca al centro y con el extremo sellado con la macilla hacia
afuera.

4.- Aseguramos la tapa de la Microcentrífuga y programamos la misma a 1300-1500 rpm

durante 5 minutos.

5.- Una vez transcurrido el tiempo, retiramos el capilar.

6.- Por último colocamos el tubo capilar sobre la tabla de lectura del microhematócrito y
procedemos a leer la cantidad de volumen de glóbulos rojos, la capa leucoplaquetaria y el
plasma sanguíneo. Puede obtenerse del hematócrito la siguiente información:

ALTERACIONES DEL VOLUMEN CELULAR COMPACTO (VCC)

La disminución indica anemia, un incremento del volumen celular compacto se debe casi
siempre a deshidratación.

ALTERACIONES EN EL GROSOR DE LA CAPA LEUCOPLAQUETARIA

Se refiere a las alteraciones del número de leucocitos, las plaquetas no contribuyen de

manera importante al grosor de esta capa.

Leucocitosis

Incremento en el número de leucocitos.

Leucopenia

Disminución del número de leucocitos.

Leucocitos en número normal

Esto no significa que la distribución de los leucocitos sea normal, se recomienda realizar
una fórmula leucocitaria.

Alteraciones en el color de la capa leucoplaquetaria

Puede tener un aspecto rojizo debido a la presencia de glóbulos rojos anormales o

inmaduros puesto que estas células no se apilan y por ello no sedimentan tan
rápidamente como los hematíes normales y se entremezclan también con la parte inferior
de la capa leucoplaquetaria.

Alteraciones en el color del plasma

La parte superior del plasma es generalmente transparente en la sangre de caninos y

felinos, sin embargo puede presentar alteraciones en el color.

Un aspecto lechoso es por la presencia de gotitas de grasa en la sangre (lipemia).

Una coloración rojiza debida a la hemólisis producida ya en el interior del organismo o

más generalmente por defectos en la toma de la muestra.

Una coloración amarilla debida a la presencia de bilirrubina (ictericia) por ejemplo, tras
una grave lesión hepática u obstrucción de los conductos biliares.