REPORTE PRÁCTICA No.

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“FISIOLOGÍA Y METABOLISMO BACTERIANO.”

Centro de Ciencias Básicas.

Departamento de Microbiología.
Academia de Microbiología.
Lic. Químico Farmacéutico Biólogo.

Laboratorio de Bacteriología y Virología.

Profesor
M. en C. Vicente Curtiellas Piñol.

Alumnas
Flores Ibarra Joselyn Georgina
Palos Dueñas Dulce María
Ramos Hernández Alejandra

Fecha: 06/Marzo/2018
RESULTADOS
Nombre de la
Almidón. Caseína. Gelatina. Hemólisis. Catalasa.
bacteria.
S. Aureus - + + - +
Pseuaonomas - + + Β-hemolisis +
B. Subtilis + + + - +
Proteus - - + - +
E. Coli - + - No hemolisis. +
Tabla 1 Recopilación obtenida de los resultados se las pruebas obtenidas por todos los equipos que trabajaron
con diversas bacterias. (+) Resultado positivo a la prueba. (-) Resultado negativo a la prueba.

A nuestro equipo le toco trabajar con el Bacilius Subtilis, a continuación se presentan

resultados gráficos de las reacciones obtenidas de esta bacteria en los diferentes medios.

Ilustración 1 Cultivos de B. Subtilis en los cuales sólo creció en el medio de agar almidón y agar
caseína.
 Halo transparente alrededor de
la inoculación.

Ilustración 2 Cultivo de B. Subtilis en agar almidón, la cual es positiva ya que después de añadir
Lugol, se apreció con mucha claridad la formación de un halo transparente alrededor de la
inoculación, indicando que la bacteria tiene la enzima amilasa que degrada almidón.

Halo transparente alrededor de

la inoculación.

Ilustración 3 Cultivo de agar caseína positivo a B. Subtilis, donde se puede apreciar la formación de
un halo transparente alrededor de la inoculación, indicando que la bacteria tiene la enzima caseinasa
que degrada la caseína.
 Película blanquecina delgada,
posible contaminación.

Ilustración 4 Cultivo en agar gelatina en el que el B. Subtilis dio positivo ya que el medio se tornó
líquido lo que confirma que la batería tiene la enzima gelatinasa, en la parte superior se observa una
delgada película blanquecina, lo cual se sospecha sea contaminación.

Burbujeo que indica que el

peróxido se ha trasformado en
agua y oxígeno libre.

Ilustración 5 Prueba de la catalasa, positiva, al agregar un poco de peróxido de hidrógeno se observó

un burbujeo en el inoculo bacteriano, produciendo catalasa.
  INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Durante la práctica se realiza la identificación de diferentes microorganismos
mediante “sus propiedades fisiológicas (la producción de exoenzimas bacterianas
que son utilizadas para desdoblar sustratos metabólicos)”, los cuales se diferencian
de acuerdo a sus propiedades y la funcionalidad que tienen.
El término metabolismo se refiere al conjunto de reacciones químicas que se
producen en la célula y tiene tres funciones específicas. La primera es obtener
energía química del entorno y almacenarla, para luego usarla en diferentes
funciones celulares. La segunda es convertir los nutrientes exógenos en unidades
precursoras de los componentes macromoleculares de la célula bacteriana. Y la
tercertercera función es formar y degradar moléculas necesarias para cumplir
funciones celulares específicas, por ejemplo: movilidad y captación de nutrientes.
El metabolismo se produce por secuencias de reacciones catalizadas
enzimáticamente y se divide en anabolismo y catabolismo. El proceso por el cual la
célula bacteriana sintetiza sus propios componentes se conoce como anabolismo y
resulta en la producción de nuevo material celular; también se denomina biosíntesis.
La biosíntesis es un proceso que requiere energía, por lo tanto las bacterias deben
ser capaces de obtenerla de su entorno para crecer y, eventualmente, multiplicarse.
El conjunto de reacciones degradativas de los nutrientes para obtener energía o
para convertirlos en unidades precursoras de la biosíntesis, se conoce como
catabolismo. Así, hemos visto dos tipos de transformaciones químicas que ocurren
simultáneamente en la bacteria, por lo tanto el metabolismo es el resultado colectivo
de ambas reacciones.(. (Forbes,2002, 2002).
B.subtililis es una bacteria gram positivo,aerobio, aerobio o anaerobio
facultativo,con, con capacidad de formar endosporas.Las esporas son estructuras
termotolerantes,resistente, resistente a la sequía,radiación, radiación ultravioleta y
solventes organicos.(. (Fritze,2004, 2004).

La primera parte de la experimentación que se muestra en la Ilustración 2. Se

emplea el medio de cultivo de agar almidón por el método de siembra de estría
simple y abierta,incubándoseabierta, incubándose a 37°C durante 24 horas. .
Después, de este tiempo se adicionó 3 gotas de lugolLugol y se extendió sobre la
superficie del agar almidón dando como resultado positivo la formación de un halo
claro alrededor de la estría.Estoestría. Esto debido a que la a-amilasa (a-1,4-D-
glucan glucanohidrolasa EC 3.2.1.1, endoamilasa), está distribuido ampliamente en
los microorganismos (B. acidocaldarius, B. amyloliquefaciens, B. caldolyticus, B.
coagulanas, B. licheniformis, B. stearothermophilus, B. subtilis, B. subtilis
var.amilosachariticus, Bacillus. sp., Bacillus ssp.(alkalophilico), Bacteroides
amylophilus, Clostridium acetobulicum, Lactobacillus amylophilus, Micrococcus
halobtus), que hidrolizan enlaces a-1,4 – glicosídicos de la amilosa, amilopectina y
glicógeno, pero los enlaces a-1,6 glicosídicos de la cadena ramificada de los
polímeros del almidón no son atacados. Las propiedades y mecanismos de acción
de las a-amilasasla a-amilasa dependen del origen de las enzimas, todas ellas son
endo enzimas. La hidrólisis de la amilosa por a-amilasa causa una conversión en
glucosa, maltosa, maltotriosa y sobre todo a-dextrinas inicialmente, seguido de una
segunda reacción de la maltotriosa que es un sustrato pobre. (Walker y Whelan.
1960).

En la parte dos nos encontramos con el cultivo de B.subtilis en agar caseína por el
método de siembra de estría simple y abierta, incubándose a 37°C durante 24 horas.
. Después, de este tiempo se determinó la prueba de hidrolisis de caseína como
positiva por la aparición o formación de un halo transparente alrededor de la
inoculación.Reafirmando y confirmando así que nuestra cepa posee la capacidad
de producir enzimas proteasas, enzimas que degradan proteínas por hidrólisis de
los enlaces peptídicos(Mckee,2014).
El cultivo 3(Ilustración 4) se identifica como un cultivo agar de gelatina, esta prueba
de hidrólisis de gelatina se usa para detectar la capacidad de un organismo para
producir gelatinasa (enzima proteolítica) que licua la gelatina. La hidrólisis de
gelatina indica la presencia de gelatinasas.
Este proceso tiene lugar en dos reacciones secuenciales. En la primera reacción,
las gelatinas degradan la gelatina en polipéptidos. Entonces, los polipéptidos se
convierten adicionalmente en aminoácidos. Las células bacterianas pueden tomar
estos aminoácidos y utilizarlos en sus procesos metabólicos.
Las bacterias grampositivas, formadoras de esporas, forma de balas, aeróbicas o
anaeróbicas, tales como Bacillus anthracis, Bacillus cereus, Bacillus subtilis,
Clostridium perfringens y Clostridium tetani, también son positivas para la hidrólisis
de gelatina. La rizobacteria Bacillus subtilis ( Sonenshein y otros, 2001 ) se ha Formatted: Font: 12 pt
utilizado para estudios genéticos y bioquímicos durante varias décadas y se Formatted: Font: 12 pt
considera un paradigma de bacterias formadoras de endosporas Gram-positivas
( Moszer et al ., 2002 ). Formatted: Font: 12 pt
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En la prueba de “Hemolisis de eritrocitos de carnero por hemolisinas bacterianas”,
se utilizó un agar sangre,cabe, cabe destacar que B.Subtilis presento una
Hemólisis gamma (no hemólisis) donde el microorganismo en cuestión no es
capaz de realizar la hemólisis y por tanto no existe halo alrededor de la colonia.

En cuanto a las referencias bibliográficas se encontró que Bacillus subtilis forma

colonias, de 2 a 4 mm de diámetro, beta hemolíticas con hemólisis completa, que
pueden ser de aspecto liso, mucoide o rugoso; los bordes pueden ser ondulados o
extendidos en el medio y ocasionalmente dan la apariencia de cultivos mixtos.
(NOVA,2011, 2011).
Concluyendo que posiblemente hubo errores al momento de hacer el cultivo, ya sea
como no esterilizar bien el asa bacteriológica,obacteriológica, o no enfriar al
momento de tomar la muestra de la bacteria produciendo la muerte de esta,poresta,
por otra parte también se puede inferir que el cultivo puro proporcionado de Bacillus
subtilis no estaba en las condiciones óptimas para sembrar esta bacteria en otro
cultivo.

Por último se realizó la prueba de la catalasa(catalasa (IlustracionIlustración 5),en,

en esta prueba se pusóo en manifiesto la presencia del enzima catalasa en una
bacteria. Esta enzima es capaz de descomponer el peróxido de hidrógeno (agua
oxigenada) en agua y oxígeno, con la consiguiente aparición de burbujas.

La catalasa es una enzima que descompone al peróxido de hidrógeno en oxígeno

y agua, esta enzima es similar a la estructura de la hemoglobina. La catalasa
protege a las células frente al peróxido de hidrógeno producido por los macrófagos
a través del metabolismo del oxígeno. Cataliza la formación de agua y oxígeno a
partir del peróxido de hidrógeno. Es muy útil para distinguir
StreptococcusEstreptococos (negativa) de Staphylococcus (positiva) y Clostridium
(negativa) de Bacillus (positiva). La actividad catalasa se detecta añadiendo unas
gotas de peróxido de hidrógeno (3%) sobre colonias en medio que no sea de agar
sangre (da resultados falsos). La producción de burbujas indica la presencia del
enzima. Excluyendo al género Streptococcus, clostridium y algunos otros la mayoría
de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas tienen catalasa.Ej. E.coli,
Pseudomonas spp.
  CONCLUSIONES

1. Durante la práctica se identificaron las principales características de algunas

pruebas bioquímicas, así como sus principales diferencias, para la
identificación de microrganismos cumpliendo así con uno de los objetivos
establecidos.
2. Se realizaron las técnicas de siembra por estrías y por picaduras con la
bacteria Bacillus Subtilis, con el fin de diferenciar las características de estas
técnicas de siembra.
3. El conocimiento de la fisiología y del metabolismo bacteriano tiene algunas
aplicaciones prácticas. En principio permite conocer el modo de vida y el
hábitat de diferentes especies bacterianas. El ser humano actuando como
huésped, ofrece una variedad de nichos ecológicos que se diferencian entre
sí por aspectos físicos y químicos (temperatura, concentración de oxígeno,
pH, presión osmótica, etc.), en los cuales pueden crecer y multiplicarse
distintas especies bacterianas según sus requerimientos nutricionales,
ambientales y atmosféricos. Además, permite formular medios de cultivo
para el aislamiento e identificación de los patógenos participantes. Desde un
enfoque terapéutico, nos permite conocer y entender el modo de acción de
algunos antibióticos que bloquean una vía metabólica o la síntesis de alguna
macromolécula esencial para la bacteria.

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