BCM 18 CHI GuiaPracticas

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
FILIAL NORTE
Guía de prácticas
BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR
2018-II
Responsable Blgo Lezama Vigo, Hélmer, MSc
Profesores Blgo. Murrugarra Bringas, Victoria, Mg. (Coordinador)
Blgo. Jerí Apaza, César.
Ing.Quím. Quiñonez Chapoñán,Liliana.
Blgo. Morales Ramos, Jorge, Mg.
Blgo. Chávez Pasco, Gaudhy, Mg.
Blgo, Siaden Ortega, Max, Mg.
Blgo. Chinén Miyashiro, Alejandro, MSc.
Quím. Pumachagua Huertas, Rodolfo
Quím. Alvino De La Sota, Nora
Méd. Gordillo Carbonel, Johnny
APELLIDOS, NOMBRES:_________________________________________
GRUPO:___________ DIA:____________ PROFESOR:______________
1
INTRODUCCIÓN
La biología es la ciencia de la vida que estudia la estructura y función de los organismos vivos y sus
componentes. Las aplicaciones de la investigación básica en biología molecular son numerosas, desde la
tecnología para trasplantar corazones, manipular genes, diseñar fármacos contra microorganismos
patógenos hasta actividades como incrementar la producción mundial de alimentos.
La guía de prácticas del curso de Biología Celular y Molecular tiene como objetivo entrenar al
estudiante en los procedimientos de laboratorio y desarrollar su pensamiento científico, de manera que lo
lleve a comprender los términos básicos de la Biología Molecular.
El estudiante debe emplear esta guía en cada práctica de laboratorio y estar informado sobre la
práctica que se llevará a cabo en cada sesión, anticipadamente.
La guía se ha dividido en tres partes de acuerdo a cada evaluación parcial. La primera parte
comprende la célula y componentes celulares. La segunda parte incluye procesos celulares como
respiración, permeabilidad, división celular y la visualización de organelas. En la tercera parte se analizara
el proceso de meiosis, comprensión del código genético y técnicas de manipulación de ácidos nucleicos.
El alumno debe cumplir con los objetivos planteados al final de cada práctica. Así mismo debe
presentar su guía de práctica terminada la misma, con las actividades requeridas en la sesión de práctica,
debidamente desarrolladas.
PROGRAMACIÓN DE CONTENIDO
SE FECHA CONTENIDO DOCENTE

PRACTICAS DE LABORATORIO V. Murrugarra
1 VI-03-08 1. Introducción y organización de grupos. Bioseguridad. C. Jerí
2 VI-10-08 2. Microscopía. L. Quiñones
3 VI-17-08 3. Técnicas de coloración. Preparación de muestras. J. Morales
4 VI-24-08 4. Observación de Células. G. Chávez
5 VI-31-08 1. Permeabilidad celular M. Siadem
6 VI-07-09 2. Ciclosis. Cilios y Flagelos. Mitocondrias. Vacuolas, cloroplastos. A. Chinén
7 VI-14-09 1. Actividad enzimática
8 VI-21-09 2. Fermentación
PRIMERA EVALUACION CONTINUA
9 VI-28-09 SEMANA DE EVALUACIONES PARCIALES
10 VI-05-10 SEMANA DE LA MEDICINA
11 VI-12-10 3. Fecundación
12 VI-19-10 4. Mitosis y meiosis
13 VI-26-10 1. Extracción de DNA. Electroforesis
14 VI-02-11 2. Código genético y traducción de proteínas.
15 VI-09-11 3. Rasgos genéticos
16 VI-16-11 SEGUNDA EVALUACION CONTINUA
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PRÁCTICA Nº I.1
(SEMANA 1)
BIOSEGURIDAD
El trabajo en el Laboratorio requiere de la observación de una serie de normas de seguridad que
eviten posibles accidentes debido al desconocimiento de lo que se está haciendo o a una posible
negligencia de los alumnos que estén en un momento dado, trabajando en el Laboratorio.
A continuación se enumeran una serie de medidas e indicaciones de seguridad que deben tomarse
durante las prácticas de laboratorio.
NORMAS PERSONALES
1. Lea con atención, antes de cada práctica, las indicaciones de su guía. Siga todas las instrucciones a
menos que el profesor realice alguna modificación.
2. Cada grupo de prácticas se responsabilizará de su zona de trabajo y de su material. Se trabajará con
cuidado y de manera organizada. Así mismo se mantendrá cada mesa de trabajo limpia, seca y
ordenada.
3. Es obligatorio la utilización de mandil que le cubra brazos, piernas, torso y pies. Están prohibidos el
uso de sandalias, pantalones cortos, faldas, polos cortos, etc. en el laboratorio. La persona
inapropiadamente vestida para trabajar en el laboratorio no podrá ingresar.
4. No se debe llevar las manos a la boca ni a la cara pues pueden estar contaminadas.
5. Si tienes el pelo largo, deberá estar recogido.
6. Está terminantemente prohibido fumar, tomar bebidas y comer.
7. En caso de derrame, accidente o daño avise inmediatamente al profesor.
8. Al término de cada práctica limpiar el área de trabajo y lavar los materiales utilizados con agua de
caño. Lavarse las manos meticulosamente con agua y jabón. Finalmente cerciorarse que las llaves de
gas y agua estén cerradas.
REACTIVOS QUIMICOS
1. Usar lentes de seguridad cuando trabaje con reactivos químicos peligrosos que puedan salpicar o
derramarse.
2. Antes de utilizar un compuesto, asegurarse bien de su necesidad, fijarse bien en el rótulo.
3. Como regla general, no coger ningún producto químico. El profesor o profesora te lo proporcionará.
4. Nunca devuelva los sobrantes de los productos a los frascos de origen sin consultar con el profesor.
5. Es muy importante que cuando los productos químicos de desecho se viertan en la pila de desagüe,
aunque estén debidamente neutralizados, debe dejarse que circule por la misma, abundante agua.
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6. No tocar con las manos y menos con la boca, los productos químicos.
7. No pipetear con la boca. Utilizar una bombilla de succión.
8. Los ácidos requieren un cuidado especial. Cuando queramos diluirlos, siempre echaremos el ácido
sobre agua.
9. Los productos inflamables (gases, alcohol, éter, etc.) deben estar lejos de fuentes de calor. Si hay
que calentar tubos con estos productos, se hará al baño María, nunca directamente a la llama.
10. Manipule con precaución los solventes volátiles e inflamables como el éter, acetona y metanol.
Nunca evapore estos solventes en una hornilla al abierto. Utilice siempre un sistema de condensación
eficiente.
11. Si se vierte sobre ti cualquier ácido o producto corrosivo, lávate inmediatamente con mucha agua y
avisa al profesor.
12. Al preparar cualquier disolución se colocará en un frasco limpio y rotulado convenientemente.
13. Encienda fuego en el laboratorio solo si no existen solventes inflamables en la vecindad. La persona
que encienda el fuego debe primero verificar que no exista otra persona que este trabajando con
solventes inflamables en el laboratorio.
MATERIAL DE VIDRIO
1 Use material de vidrio limpio y no rajado.

2 El vidrio caliente no se diferencia a simple vista del vidrio frío. Para evitar quemaduras use guantes o
trapos.
3 Si tienes que calentar a la llama el contenido de un tubo de ensayo, observa cuidadosamente estas
dos normas:
-Ten sumo cuidado y cerciórate que la boca del tubo de ensayo no apunte a ningún compañero.
Puede hervir el líquido y salir disparado, por lo que podrías ocasionar un accidente.
-Calienta por la pared lateral del tubo de ensayo, nunca por el fondo; agita suavemente (mira la
figura).
EQUIPOS ELÉCTRICOS
1 Manipule cualquier equipo eléctrico con las manos secas y asegúrese que el área de trabajo también
este seca.
2 Ningún cordón eléctrico debe colgar fuera de la mesa de trabajo.
3 Cuando desconecte algún equipo del tomacorriente, jálelo por el enchufe y no por el cordón.
UTILIZACION DE BALANZAS
1 Cuando se determinan masas de productos químicos con balanza, se colocará papel sobre los platos
de la misma y si el producto fuera corrosivo, se utilizará una luna de reloj.
2 Se debe evitar cualquier perturbación que conduzca a un error, como vibraciones debidas a golpes,
4
aparatos en funcionamiento, soplar sobre los platos de la balanza, etc.
MANIPULACIÓN DE ESPECÍMENES
1 Manipule los microorganismos crecidos en una placa petri o tubo de cultivo con cuidado extremo.
Siempre utilice técnicas de esterilidad (a la llama del mechero, guantes, palillos estériles, etc.).
2 Nunca llevar a la boca plantas o partes de ellas como semillas, frutos y hojas.
NIVELES DE RIESGO BIOLOGICO EN UN LABORATORIO

Clasificación de microorganismos por grupos de riesgo para el trabajo de laboratorio:
Grupo de riesgo 1 (riesgo individual y poblacional escaso o nulo)

Microorganismos que tienen pocas probabilidades de provocar enfermedades en el ser humano o los
animales.
Grupo de riesgo 2 (riesgo individual moderado, riesgo poblacional bajo)

Agentes patógenos que pueden provocar enfermedades humanas o animales pero que tienen pocas
probabilidades de entrañar un riesgo grave para el personal de laboratorio, la población, el ganado o el
medio ambiente. La exposición en el laboratorio puede provocar una infección grave, pero existen
medidas preventivas y terapéuticas eficaces y el riesgo de propagación es limitado.
Grupo de riesgo 3 (riesgo individual elevado, riesgo poblacional bajo)

Agentes patógenos que suelen provocar enfermedades humanas o animales graves, pero que de
ordinario no se propagan de un individuo a otro. Existen medidas preventivas y terapéuticas eficaces.
Grupo de riesgo 4 (riesgo individual y poblacional elevado)

Agentes patógenos que suelen provocar enfermedades graves en el ser humano o los animales y que se
transmiten fácilmente de un individuo a otro, directa o indirectamente. Normalmente no existen medidas
preventivas y terapéuticas eficaces.
BARRERAS DE CONTENCION
Los laboratorios presentan diversas barreras de contención que previenen el escape y dispersión
de agentes biológicos de riesgo.
Barrera primaria: Es aquella que protege al personal y al ambiente inmediato del agente de riesgo
(vestimenta de uso exclusivo, cabina de bioseguridad y equipos provistos de dispositivos de seguridad).
Barrera secundaria: Es aquella que protege el ambiente externo contra los agentes de riesgo (diseño del
laboratorio e implementación de equipos de seguridad de acuerdo al nivel de Bioseguridad).
Barrera microbiológica: Es un dispositivo o sistema que evita o limita la migración de microorganismos

entre los espacios situados a ambos lados del mismo y permite controlar la concentración de
microorganismos en el ambiente, dentro de límites prefijados. Tiene como objetivo proteger al operador o
al operador y al proceso.
Barrera microbiológica parcial: Es un dispositivo o sistema que limita la migración de microorganismos

entre los ambientes situados a ambos lados del mismo. En este tipo de barrera se recomiendan prefiltros,
Filtros HEPA (Filtros de alta eficiencia para el control de partículas en suspensión) así como cabinas de
bioseguridad clase I o II, lo cual dependerá del tipo de trabajo que se efectúa en un determinado
laboratorio.
Barrera microbiológica absoluta: Es un dispositivo o sistema hermético, a prueba de filtraciones de aire

o gas, que evita en forma total la migración de microorganismos entre el ambiente confinado por la
barrera y el ambiente exterior de la misma. La barrera microbiológica absoluta puede confinar al producto
o proceso, dejando al operador fuera de la misma o viceversa. En este caso se recomienda una cabina de
bioseguridad de tipo III.
5
Barrera química: Son dispositivos o sistemas que protegen al operador del contacto con substancias
irritantes, nocivas, tóxicas, corrosivas, líquidos inflamables, sustancias productoras de fuego, agentes
oxidantes y sustancias explosivas. En este caso se recomiendan una cabina de seguridad química.
Barrera física: Son dispositivos o sistemas de protección individual o colectiva que protegen contra las
radiaciones ionizantes, no ionizantes, ruidos, carga calórica, quemaduras y vibraciones excesivas.
NIVELES DE BIOSEGURIDAD
De acuerdo con el nivel de riesgo, el tipo de laboratorio, la barrera de contención requerida, los
procedimientos y técnicas a usar, se han establecido los siguientes niveles de Bioseguridad.
Nivel de Bioseguridad I: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en un laboratorio

básico, por personal adiestrado en los procedimientos que se ejecutan en él. En este nivel se trabaja con
agentes clasificados en el Grupo de riesgo I por presentar un peligro mínimo para el personal del
laboratorio y para el ambiente. En el nivel de Bioseguridad I no se requiere equipo especial ni un diseño
específico de las instalaciones. El personal de estos laboratorios es generalmente supervisado por un
científico con entrenamiento en microbiología.
Nivel de Bioseguridad II: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en un laboratorio
básico, por personal adiestrado en el manejo de agentes de riesgo del grupo II. Es similar al nivel I y en él
se manejan agentes de peligro moderado hacia el personal y el ambiente, pero difiere del nivel I en las
siguientes características:
1. El personal de laboratorio tiene entrenamiento específico en el manejo de agentes patógenos.
2. El acceso al laboratorio es restringido cuando se está realizando algún trabajo.
3. Se toman precauciones extremas con instrumentos punzo cortantes contaminados.
4. Ciertos procedimientos en los cuales pueden salpicar los agentes o aerosoles se llevan a cabo en
cabinas de trabajo microbiológico.
Nivel de Bioseguridad III: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en el laboratorio de
contención. El personal debe contar con adiestramiento específico para el manejo de agentes de alto
riesgo clasificados en el grupo de riesgo III. En el laboratorio se realiza trabajo con agentes que pueden
causar un daño serio y potencialmente mortal como resultado de la inhalación o exposición a los mismos.
El laboratorio cuenta con un diseño y características especiales tendientes a proteger al operador y al
ambiente. Todos los materiales son manipulados utilizando vestimenta y equipo de protección siguiendo
protocolos rigurosos. Los laboratorios se mantienen con una presión de aire negativa, lo cual ayuda a
impedir que los agentes nocivos escapen al ambiente.
Nivel de Bioseguridad IV: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en el laboratorio de
contención máxima. Este nivel es el que se utiliza para trabajar con agentes biológicos clasificados en el
grupo de riesgo IV por representar un alto riesgo individual de contagio y que además son un riesgo para
la vida. Los agentes nuevos que presentan características antigénicas, patogénicas u otras similares a
agentes de nivel III y IV son confinados a nivel IV hasta que exista suficiente información científica para
establecer a cual grupo de riesgo pertenecen.
El personal que trabaja en los laboratorios de nivel IV tiene entrenamiento específico y extensivo en el
manejo de agentes infecciosos, y cuenta con entrenamiento para trabajar en el ambiente estéril y
controlado. El laboratorio cuenta con un diseño y características especiales tendientes a proteger al
operador y al ambiente. Todos los materiales son manipulados utilizando vestimenta y equipo de
protección de características superiores a las exigidas para el trabajo en un laboratorio de nivel III. Los
trajes están diseñados para cubrir la totalidad del cuerpo, presentan un sistema de respiración individual
asociado y una leve sobrepresión interna para evitar así la entrada accidental de partículas infecciosas.
Los laboratorios se mantienen con una presión de aire negativa, lo cual ayuda a impedir que los agentes
nocivos escapen al ambiente.

TIPOS DE LABORATORIOS

En relación con el grado de riesgo los laboratorios combinan las características de diseño,
construcción, medios de contención, equipo, prácticas y procedimientos de operación necesarios para
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trabajar con agentes patógenos de los distintos grupos de riesgo. De esta manera los laboratorios se
clasifican en 3 categorías:
Laboratorio básico: Dividido en dos grupos, el de nivel de bioseguridad 1;y el de nivel de bioseguridad 2;
Laboratorio de contención: con nivel de bioseguridad 3, y
Laboratorio de contención máxima: con nivel de bioseguridad 4.
TRABAJO GUIADO
1.-Complete los nombres de los distintos símbolos de bioseguridad que se presentan a continuación.
1.- complete el recuadro :
NIVEL DE CARACTERISTICAS EJEMPLOS DE

BIOSEGURIDAD PATOGENOS
7
FIRMA/ SELLO
FECHA ACTITUDINAL MATERIAL PARTICIPACIÓN
PROFESOR
8
PRACTICA N° I.2
(SEMANA 2)
MICROSCOPÍA Y ENFOQUE DE
MUESTRAS
I. FUNDAMENTO
La invención del microscopio se atribuye a Johannes y Zacharias Jansen (1590) y el

descubrimiento de la estructura celular de los organismos a Robert Hooke (1665). Posteriormente, en
1683 y con un microscopio muy rudimentario Leeuwenhoek descubrió un universo enmarcado sólo por
decenas de micrómetros. Desde aquel entonces, el perfeccionamiento continuo al microscopio ha
permitido a la Ciencia profundizar cada vez más en el conocimiento de la ultraestructura celular y de las
relaciones intercelulares.
MICROSCOPIO COMPUESTO
El microscopio es un instrumento óptico que se compone de una serie de lentes para conseguir
imágenes aumentadas de objetos diminutos que por su extrema pequeñez no son visibles al ojo humano.
El microscopio compuesto está constituido de un SISTEMA OPTICO destinado a obtener una

imagen aumentada del objeto, un SISTEMA MECANICO que sostiene los distintos elementos ópticos y los
objetos que se van a examinar y un SISTEMA DE ILUMINACIÓN.
CARACTERISTICAS DEL MICROSCOPIO
Dado que la imagen del microscopio no es real sino virtual, se han determinado algunos términos
de medida microscópica:
En cualquier microscopio el poder de resolución define su rendimiento óptico, porque es su

capacidad para ver como separados dos puntos que realmente lo están pero que nuestro ojo sólo puede
ver como una entidad única (es decir es su capacidad de entregar imágenes bien nítidas).
El máximo poder de resolución del microscopio óptico es de 0,2 micrómetros (0,2 µm), debido a
que la longitud de onda de la luz utilizada (400-700 µm) es un factor limitante. El ojo humano tiene un
poder de resolución de aproximadamente 100 micrómetros.
El límite de resolución puede definirse como la distancia mínima que debe existir entre dos puntos
para que se puedan distinguir como separados. El límite de resolución se puede calcular a partir de la
siguiente ecuación:
Kλ
L.R. = --------------- K = constante = 0.61
A.N
λ = longitud de onda de luz AN = apertura numérica de cada lente
objetivo es su capacidad para captar la máxima cantidad de la luz
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difractada por el objeto. Depende del índice de refracción del medio.
Recuerda: A menor límite de resolución mayor será el poder de resolución
Resolución y magnificación Máximas
Instrumento óptico Resolución Magnificación

Ojo humano 0,1 mm
Microscopio óptico 0,2 u 2500
Microscopio electrónico 0,1 nm 1000 000
II. OBJETIVOS
Ø Reconocer las partes del microscopio óptico.

Ø -Conocer su utilización para la observación de distintas muestras biológicas.
III. MATERIALES Y MÉTODOS
En el laboratorio encontrarás:
- Microscopio compuesto
- Aceite de inmersión
- muestras fijadas
IV. PROCEDIMIENTO.
Se reconocerán las partes de un microscopio óptico. Señalar las partes del mismo en el dibujo adjunto.
1. SISTEMA OPTICO. El sistema óptico está constituido por:
Objetivos: sistema de lentes convergentes que actúa como una lente que se encuentran montados en el
revolver. Lo usual es que cada microscopio tenga cuatro objetivos de diferentes aumentos ( 4x,
10x, 40x, 100x) los que se clasifican en:
Ø Objetivos en seco: en los que el aire se interpone entre la lente y la preparación.
Ø Objetivos de inmersión: en el cual un líquido (aceite) se interpone entre la lente y la preparación.
Ocular: El ocular es una lente convergente que recoge la imagen intermedia producida por el objetivo y
forma una nueva imagen virtual, derecha, y amplificada un cierto número de veces (X veces,
según se indica en el propio ocular). Los aumentos más comunes son 10X y 16X.
2.-SISTEMA DE ILUMINACIÓN.
Condensador: Sistemas de lentes convergentes que concentra el haz de luz sobre la preparación.
Diafragma: Sirve para regular la cantidad de luz que llega a la preparación.
Fuente de luz: Puede ser natural o artificial (ampolleta).
Portafiltro: Opcional, sirve para colocar filtro de distintos colores para mejorar el contraste.
3.-SISTEMA MECANICO
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Tubo óptico: Cilíndrico ahuecado destinado a llevar el ocular en su extremo superior y los objetivos
montados en el revólver en su extremo inferior. La longitud del tubo debe ser siempre precisa.
Revólver: Pieza metálica situada en la parte inferior del tubo que por rotación sitúa los diferentes
objetivos en posición de trabajo.
Platina: Superficie plana con una perforación central para permitir el paso de la luz hacia preparación.
Posee un carro que sostiene la preparación y que puede desplazarla hacia delante y hacia el
lado izquierdo o hacia el lado derecho.
Tornillo Macrométrico: Mecanismo de enfoque de avance rápido.
Tornillo Micrométrico: Mecanismo de enfoque con precisión o ajuste fino.
Base o Pie: Estructura sólida y pesada que sostiene y da estabilidad a todo el instrumento.
Columna: Vástago vertical que se articula con la base y con el tubo del microscopio y lleva el mecanismo
de movimiento del mismo.
NOTA IMPORTANTE. Presta mucha atención al manejo del microscopio que tienes a tu cargo. Debes
hacerlo cuidadosamente porque son aparatos muy delicados y dejarás a consigna tu documento de
identificación.
MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO
1 Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente.

2 Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
3 Comenzar la observación con objetivo de menor aumento. Si la preparación es de bacterias emplear el
objetivo de mayor aumento (objetivo de inmersión, ver punto 6).
4 Para realizar el enfoque:
a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico. Esto
debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el
objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación
con el macrométrico y, cuando se observe algo nítido la muestra, girar el micrométrico hasta obtener
un enfoque fino.
5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover
un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino.
6 El empleo del objetivo de inmersión es siempre utilizando aceite de inmersión.
TRABAJO GUIADO
1.- Indique todas
las partes del microscopio
11
FIRMA/ SELLO
PROFESOR
12
PRACTICA Nº I.3
(SEMANA 3)
PRIMERA PARTE: TECNICAS DE

COLORACION. PREPARACION DE
MUESTRAS
I. FUNDAMENTOS
La coloración implica la penetración del colorante por fenómeno osmótico y su fijación se debe a
fenómenos de absorción de partículas o iones. Químicamente la coloración es la unión de las moléculas
del colorante con los elementos constituyentes de la célula. Algunas regiones celulares tienen pH alcalino
y se tiñen con los colorantes ácidos; otros tienen pH ácido y se tiñen con colorantes básicos. Sin embargo
es necesario señalar que tanto el núcleo como el citoplasma tienen características anfótericas de manera
que se pueden teñir, el núcleo con algunos colorantes ácidos y el citoplasma con algunos colorantes
básicos.
El mecanismo de coloración de las muestras biológicas pueden ser afectados por:

Ø Pureza del colorante
Ø Concentración del colorante
Ø pH de la solución del colorante
Ø Temperatura del medio ambiente
Ø Sustancias adicionales (mordientes)
Ø Tiempo de coloración.
Los preparados microscópicos, constituyen una serie de preparados rutinarios de laboratorios que
tienen por objeto identificar en forma rápida el contenido de un determinado tipo de muestra, con la con la
finalidad de resolver algún problema de interés particular. Los preparados microscópicos más frecuentes
en Biología son:
Preparados “en fresco”

Preparados “en seco”
Los preparados “en Fresco” son preparaciones microscópicas acuosas, que se caracterizan por que
la sustancia examen, no está adherida de un modo fijo a la superficie de la lámina portaobjeto y por lo
tanto, al ser manipulada ésta en diferentes posiciones se corre el riesgo de perder u estropear el
preparado.
Los preparados “en seco” son aquellos que sufren un procesamiento previo (extensión, fijación y
coloración), y se caracterizan porque la sustancia examen se halla adherida a la superficie de la lámina
portaobjeto y por lo tanto, al ser manipulada ésta en diferentes posiciones no se estropea o pierde la
muestra.
Es importante ejercitar al estudiante en el manejo y aplicación de estos factores que inciden

básicamente en la complementación del aprendizaje del estudio de estructuras celulares, identificación
de tejidos y microorganismo.
II. OBJETIVO.
1. Diferenciar y explicar el fundamento de las distintas coloraciones
13
2. Realizar coloraciones con muestras biológicas
III. MATERIALES
Encontrarás en el laboratorio.
- Microscopio óptico - Safranina
- Pipetas pasteur - Eosina
- Goteros - Violeta de genciana
- Agua destilada - Wright
- Mechero - Fucsina
- Azul de metileno - Verde de Janus
- Giemsa - Hematoxilina
IV. PROCEDIMIENTO
PREPARADOS EN FRESCO
1. Colocar una gota de agua estancada en una lamina
2. colocar una laminilla cubreobjetos
3. observar
PREPARADOS EN SECO
1. Colocar la muestra en la lamina
2. Realizar la coloración respectiva
3. Secar al medio ambiente
4. observa la microscopio
PARTE 2: OBSERVACIÓN Y
RECONOCIMIENTO DE CÉLULAS
PROCARIOTES
I. FUNDAMENTO
La principal característica de la célula procariota es que carece de núcleo celular. Las bacterias,
los organismos procariotes más representativos, comprenden
por una parte, especies de importancia médica puesto que
producen una serie de infecciones y padecimientos en el
hombre y en los animales pero, por otra parte, una gran
mayoría representa beneficios para la agricultura, la industria y
la salud humana y animal.
Para observar este tipo de células se utiliza la Tinción

Gram, técnica diseñada por el médico danés Hans Christian
Gram. Esta consiste en poner en contacto las células
bacterianas con colorantes básicos como violeta de genciana,
utilizando la solución de lugol como mordiente. Esto forma un
compuesto yodado que se fija fuertemente en determinadas
bacterias. Según la coloración que adquieran, las bacterias se
clasifican en:
14
GRAM POSITIVAS: se tiñen fuertemente con violeta de genciana y adquieren una coloración violeta.
GRAM NEGATIVAS: se tiñen muy superficialmente por lo que fácilmente se decoloran con solventes
orgánicos. Se utiliza adicionalmente la safranina o fucsina, que se emplea como colorante de contraste,
adquiriendo una coloración rosada.
La diferente tinción de bacterias se debe a la composición diferencial de sus paredes bacterianas.

Las bacterias Gram positivas poseen una pared celular con mureina y ácido teitoico. En cambio, las Gram
negativas tienen una pared mucho más compleja que contiene, además del peptidoglucano, una
asociación de proteínas lípidos y lipopolisacáridos
Además de la coloración esta técnica nos permite distinguir en las bacterias: a) morfología: cocos, bacilos,
espirilos, cocobacilos, vibrios, etc) b) agrupación: pares, cadenas tétradas, racimos, sarcina
A: forma de caña o bacilos
B: Redondos en líneas: estreptococos
C: redondos en cúmulos: estafilococos
D: Redondos en pares: diplococos
E: Forma de espirales: espirilos
F: En forma de coma: vibrios
II. OBJETIVOS
Ø Reconocer los distintos tipos de bacterias según se tiñan o no con la Tinción Gram.
III. MATERIALES
Encontrarás en el laboratorio:
Ø Microscopio óptico - Alcohol acetona
Ø Soluciones para la tinción: - Fucsina o safranina
- Violeta de genciana
- Aceite de inmersión
- Lugol
- Mechero de alcohol
IV. PROCEDIMIENTO
La tinción Gram se realizará sobre las muestras de yogur, sarro dentario y vinagre que los alumnos
traerán.
Bacterias del yogurt
El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche. A escala industrial se
realiza la fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociación de dos cepas bacterianas:
el Streptococcus termophilus, poco productor de ácido, pero muy aromático, y el Lactobacillus bulgaricus,
muy acidificante. En esta preparación se podrán, por tanto, observar dos morfologías bacterianas distintas
(cocos y bacilos) y un tipo de agrupación (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Además, el
tamaño del lactobacilo (unos 30µm de longitud) facilita la observación aunque no se tenga mucha práctica
con el enfoque del microscopio.
Bacterias del vinagre
El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético resultante de la fermentación espontánea del
vino o de bebidas alcohólicas de baja graduación. La acetificación del vino es producida por bacterias
aeróbicas del ácido acético, principalmente Acetobacter aceti, aunque también Gluconobacter. Se trata de
bacilos rectos con flagelos polares.
Bacterias del sarro dental
15
El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. Está
constituido principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos
metabólicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones que
se den en el momento de hacer la preparación, pero suelen abundar bacterias saprófitas, pudiéndose
observar gran variedad de morfologías: espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.
Realizar los siguientes pasos para la tinción Gram de cada una de las 3 muestras indicadas.
1 Realizar una extensión de la muestra de cultivo bacteriano sobre un portaobjetos

2 Secar ante un mechero.
3 Cubrir el preparado con violeta de genciana por 1 minuto.
4 Enjuagar la lámina con agua destilada
5 Añadir lugol por 1 minuto.
6 Lavar con agua destilada y decolorar con alcohol acetona.
7 Añadir fucsina o safranina y dejar que actúe por 1 minuto.
8 Lavar con agua corriente, secar
9 Coloque una gota de aceite de inmersión encima de la lámina cubreobjetos y observar al
microscopio con el objetivo de inmersión.
PARTE PRACTICA
1.- completar el grafico
16
2.-Dibuje todas las muestras observadas en la práctica
Muestra:_________ Muestra:_________
Coloración:_______ Coloración:_______
Aumento:________ Aumento:________
FIRMA/ SELLO
PROFESOR
17
PRACTICA Nº I.4
(SEMANA 4)
OBSERVACIÓN DE
CÉLULAS EUCARIOTES
I. FUNDAMENTO
En 1939, en base a observaciones realizadas por los científicos alemanes Schleiden y Schwan, se
plasmó la teoría celular, la cual produjo un cambio radical en las ciencias biológicas. Esta teoría postula
que los “cuerpos de todos los animales y vegetales están formados de células y que solo pueden
aparecer nuevas células por división de las células preexistentes”. De ahí que los organismos por muy
sencillos que sean están constituidos por unidades vivas denominadas células.
La célula eucariota es más compleja que la célula procariota y contiene, a diferencia de esta
última, núcleo celular. Los organismos más simples (protozoarios) están constituidos de una sola célula
eucariota mientras que los más complejos o multicelulares están formados por un gran número de células
eucariota que se hallan organizadas en tejidos, órganos y sistemas.
II. OBJETIVOS
Ø Observar y caracterizar células eucariotas de tipo vegetal (epidermis de cebolla y mucosa bucal).
Ø Observar y caracterizar células eucariotas de tipo animal (epitelio bucal, tejido adiposo y sangre).
III. MATERIALES
Encontrarás en el laboratorio
Ø Microscopio óptico Ø Formol
Ø Cubeta de tinción Ø Eosina
Ø Lugol Ø Sudan III
Ø Frasco lavador
Ø Mechero de Alcohol Ø Cubeta de tinción
Ø Alcohol absoluto
Ø Lanceta estéril
Ø Hematoxilina
Ø Láminas portaobjeto y cubreobjeto
Ø Cebolla Ø Gotero
Ø Hisopos Ø Bisturí u hoja de afeitar
Ø Tocino Ø Levadura de pan
Ø Agua estancada en frasco oscuro
Ø Materiales de disección: tijera, pinza, estilete.
IV. PROCEDIMIENTO
4.1. Observación de células vegetales (Células epiteliales de Allium cepa)

Las células de la epidermis de las hojas internas del bulbo de la cebolla, son de forma alargada y
bastante grande. La pared celular celulósica se destaca muy clara teñida por el colorante. Los núcleos
son grandes y muy visibles. En el citoplasma se distinguen algunas vacuolas grandes débilmente
18
coloreadas.
1 Separe una de las capas del bulbo de la cebolla. Con ayuda de una pinza desprenda la membrana
epidérmica que cubre la parte interna de la cebolla y extiéndala en el portaobjetos.
2 Utilizando una hoja de afeitar obtenga una porción de medio centímetro cuadrado, cúbrala con una
gota de lugol, coloque cuidadosamente el cubreobjeto y observe en el microscopio.
3 Reconozca las partes de la célula vegetal.
4.2. Observación de organismos unicelulares
1 Coloque una gota de agua estancada sobre un porta objeto y cubran con una laminilla.
2 Observe con el objetivo de menor aumento.
3 Ajuste el diafragma para incrementar el contraste.
4 Observe la forma, tamaño y movimiento de los organismos unicelulares (ver figura adjunta).
4.3. Observación de levaduras del pan
1 Diluya un trocito de levadura de pan (Saccharomyces cerevisiae) con agua destilada, en un tubo
de ensayo.
2 Observe con el objetivo de mayor aumento.
3 Ajuste el diafragma para incrementar el contraste.
4 Observe la forma y tamaño de estos organismos.
4.4. Observación de células animales (Epitelio bucal)
El azul de metileno tiñe intensamente el núcleo y con menos color el citoplasma de las células. Éste
suele ser algo granuloso.
1 Con un hisopo limpio extraiga suavemente la mucosidad de la cavidad bucal.

2 Deposite la mucosidad extraída en el centro de una lámina portaobjetos y extiéndalo con un frotis.
3 Agregue unas gotas de AZUL de metileno y espere 3 minutos.
4 Elimine el exceso de colorante utilizando agua y coloque un cubreobjetos.
5 Observe la muestra a menor aumento y localice: células asociadas y dobladas.
6 Luego visualice a mayor aumento y reconozca los componentes celulares.
4.5. Observación de células animales (Tejido adiposo)
El Sudan III es un compuesto que tiñe lípidos de color rojo intenso. En el tejido adiposo, que contiene
gran cantidad de grasas, se observarán los adipocitos teñidos por el Sudan III.
1 Con ayuda de un bisturí, cortar una fina capa de grasa de tocino

2 Colocarla en un portaobjetos y cubrirla con unas gotas de formol. Dejar actuar 4 minutos.
3 Lavar la muestra con agua y cubrirla con unas gotas de Sudán III. Dejar actuar unos 5 minutos.
4 Volver a lavar la preparación con agua, cubrirla con un cubreobjetos
5 Observar al microscopio.
4.6. Observación de células animales (Sangre)
Al microscopio las células sanguíneas se verán

predominantemente los glóbulos rojos, hematíes o eritrocitos
teñidos de color rojo por la eosina. No tienen núcleo y son más
delgados por el centro que por los bordes. Los glóbulos blancos o
leucocitos se identifican fácilmente por la presencia de núcleo,
teñido de morado por la hematoxilina. Hay varias clases de
leucocitos:
Ø Linfocitos: de tamaño aproximado al de los glóbulos rojos, tienen
19
un solo núcleo que ocupa casi todo el glóbulo. -Monocitos: son los leucocitos mayores, poco frecuentes
normalmente, núcleo grande, redondo, son los más móviles y su función principal es la fagocitosis. -
Polimorfonucleares: núcleo fragmentado o arrosariado. Pueden ser eosinófilos, con abundantes
granulaciones teñidas de rojo por la eosina, neutrófilos y basófilos.
Ø Los eosinófilos, con granulaciones abundantes de color rojizo y el núcleo teñido de color azul marino.
Estos glóbulos aumentan su número en caso de parasitosis o procesos alérgicos.
Ø Los basófilos presentan un núcleo teñido de rojo y las granulaciones del citoplasma de color muy
oscuro. -Las plaquetas no son visibles ya que precisan una técnica especial de tinción.
Efectúa los siguientes pasos para ambas coloraciones, Wright y Hematoxilina-Eosina:
1 Con ayuda de una lanceta desechable, realice una punción del pulpejo del dedo anular de la mano
izquierda, previa desinfección con algodón y alcohol.
2 Tome una gota de sangre y haga un frotis fino sobre el portaobjeto
3 Colocar el frotis extendido ya seco, sobre una base plana en posición totalmente horizontal.
Para la coloración de Wright:
1 Coloree con unas gotas de colorante Wright, inmediatamente agregar sobre el colorante el mismo
número de gotas de agua destilada y mezclar rápidamente, soplando suavemente hasta que se
forme una capa plateada.
2 Dejar reposar la mezcla por 8 - 10 minutos, observando la intensidad de color.
3 Lave con agua corriente y dejar secar al medio ambiente, si es posible con la lamina en forma
vertical.
4 Observe al microscopio. Utilice el objetivo de 100X para la observación de las células y núcleos.
5 Diferencie las diferentes formas de núcleo en los neutrófilos, basófilos eosinófilos, monocitos y
linfocitos.
6 Dibuje cada forma de núcleo.
Para la coloración de Hematoxilina-Eosina:
1 Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tinción y añadir unas gotas de alcohol absoluto y
dejar que el alcohol se evapore para fijar la preparación.
2 Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar la desecación del
colorante agregando más líquido.
3 Lavar la preparación y añadir unas gotas de eosina dejándola actuar 1 minuto.
4 Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante.
5 Dejar secar aireando el porta o bien al calor muy lento de la llama del mechero.
6 Observar al microscopio. Utilice el objetivo de 100X para la observación de las células y núcleos.
DESARROLLO
1.- ¿Por qué los eritrocitos se tiñen con Eosina y los Leucocitos con Hematoxilina?
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________
2.-¿para qué sirve el FORMOL en la coloración de adipocitos?

______________________________________________________________________
____________________________________
20
3. Dibuje las distintas muestras observadas en la práctica
FIRMA/ SELLO
PROFESOR
21
PRACTICA Nº II.1
(SEMANA 5)
OBSERVACIÓN DE
PERMEABILIDAD CELULAR
I. FUNDAMENTO
La membrana celular permite el transporte de sustancias de manera selectiva. Muchas sustancias,

además del agua, entran a la célula y salen de ella por efecto de los gradientes de concentración, aunque
sólo unas cuantas (CO2 y O2) puedan hacerlo tan fácilmente como el agua. Si una membrana celular se
deja atravesar por una sustancia, se dice que es permeable a dicha sustancia.
El volumen celular cambia cuando el agua penetra o sale de la célula por un proceso denominado
osmosis.
En términos osmóticos las soluciones o medios separados por una membrana se pueden clasificar
como hipertónicas, isotónicas e hipotónicas; se dice que un medio es hipertónico, cuando la concentración
del soluto en la solución es mayor en relación con otro medio de solución. Por ejemplo, si tenemos dos
soluciones, la solución 1 con agua destilada y la solución 2 con una solución de azúcar al 10%, se dice
que la solución 2 de azúcar es hipertónica en relación a la solución 1. Por el contrario, la solución 1 es
hipotónica en relación a la solución 2 azucarada, es decir que la concentración del soluto es menor en
relación con el otro medio. Y una solución isotónica, se cuando la concentración de soluto es igual a la
concentración de soluto de la otra solución.
II. OBJETIVO.
2.1 Observar y describir los fenómenos de difusión y ósmosis y su importancia en el intercambio de

sustancias en la célula.
III. MATERIALES
22
- Microscopio óptico - Agua destilada
- Tubos de ensayo - Algodón
- Gradillas - Marcador de vidrio
- Solución hipotónica NaCl 0.065 M - Ligadura
- Solución hipertónica NaCl al 2% - Alcohol corriente
-Azul de metileno
- Solución isotónica de NaCl al 0.9% (suero fisiológico)
IV. PROCEDIMIENTO
Parte A
1 En tres tubos de ensayo numerados coloque:

-1 ml. de solución hipotónica NaCl 0.01 %
-1 ml. de solución isotónica de NaCl al 0.9% (suero fisiológico)
-1 ml. de solución de hipertónica NaCl al 2%.
2 Obtener 2ml de sangre venosa con la lanceta hematológica en un tubo limpio con heparina
3 Dejar caer 5 gotas de sangre en cada uno de los tubos con un gotero.
4 Agite los tubos y dejar en reposo durante 2 ó 3 minutos.
5 Con un gotero coloque en una lámina portaobjeto una gota de cada uno de los tres tubos.
6 Luego examine en el microscopio su aspecto. Observar qué efecto ha tenido las distintas soluciones
sobre la morfología del eritrocito y explicar por qué.
Parte B
1. Colocar los tres huevos en un vaso de precipitación de 1 litro y verter el vinagre hasta cubrir
completamente los huevos. Debe realizarse este proceso 48 horas antes de la práctica.
2. Al momento de la práctica lavar con mucho cuidado con agua de caño.
3. Frotar cuidadosamente con los dedos para sacar la cáscara por el lado de cámara de aire. Realizar
este proceso hasta tener casi un tercio del huevo libre de cáscara.
4. Coloquen agua de caño en uno de los vasos de precipitación de 100ml y ubiquen allí uno de los
huevos. El agua debe cubrir al huevo.
5. En otro vaso de precipitación colocar un huevo en la mezcla muy concentrada de sal en agua y colocar
allí otro de los huevos.
6. Llenar el tercer vaso con agua destilada y poner allí el tercer huevo.
7. en cada frasco se adicionó unas gotas de agua de metileno
8. Dejar por una hora y observar membrana y el contenido interno del huevo.
NOTA: En todos los vasos de precipitación, los huevos deben quedar sumergidos en el líquido.
DESARROLLO
1. Mencione y dibuje las diferencias encontradas en cada uno de los huevos sometidos a cada proceso.
TABLA: Observación de resultados
23
Solución de Sal Agua de caño Agua destilada
Huevo
2. Dibujar todas muestras observadas en la práctica

Muestra:_________
Coloración:_______
Aumento:________
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24
PRACTICA N° II.2
(SEMANA 6)
PRIMERA PARTE: OBSERVACIÓN

DE MOVIMIENTO CELULAR.
CICLOSIS
I. FUNDAMENTO
El citoplasma celular esta formado por el hialoplasma y el morfoplasma. El hialoplasma es un medio

acuoso, con un 85% de agua en el cual esta disuelta gran cantidad de moléculas formando una solución
coloidal; prótidos (AA, enzimas, proteínas estructurales), lípidos, glúcidos (polisacáridos, metabolitos),
ácidos nucleicos (nucleótidos, nucleósidos, ADN, ARN, ARNt, ARNr) sales e iones.
El hialoplasma es un medio dinámico, ya que puede pasar del estado de sol a gel acumulando
moléculas que establecen enlaces entre si y aumentando la viscosidad; pueden invertirse el proceso
pasando el hialoplasma a sol al diluirse hasta que se separan las moléculas, esto permite la creación de
corrientes internas o Ciclosis y algunas células pueden emitir prolongaciones del citoplasma o
SEUDOPODOS como órganos de desplazamiento.
II. OBJETIVOS
2.1. Explicar los movimientos citoplasmáticos
III. MATERIALES
Encontraras en el laboratorio
- microscopio compuesto
- Lugol
- Hoja de Elodea
IV. PROCEDIMIENTO
4.1. Movimientos Citoplasmáticos: Ciclosis
1. Colocar una hoja de Elodea sobre una lamina portaobjetos

2. Agregar una gota de agua y colocar la laminilla
3. A menor y mayor aumento observar las células e identificar los cloroplastos
4. Con abundante luz observar los desplazamientos del citoplasma conjuntamente con los
Cloroplastos
SEGUNDA PARTE: OBSERVACIÓN

DE ORGANELAS E INCLUSIONES
CITOPLASMATICAS
25
I. FUNDAMENTO
Todas las funciones intracelulares (síntesis de proteínas, replicación de DNA y rutas metabólicas
en general) son realizadas gracias una compleja organización de las organelas. Una célula eucariota
típica contiene organelas membranosas (retículo endoplasmático, aparato de golgi, peroxisomas,
mitocondrias, etc.) y organelas no membranosas (ribosomas, proteosomas, etc.). Todas ellas efectúan
una función puntual en la célula que le permite su supervivencia y replicación.
La supervivencia de la célula depende, entre otros factores, de la obtención de energía neta.

Dicho proceso está a cargo de las mitocondrias y/o de los cloroplastos. Las mitocondrias se encuentran
en mayor número en células animales pero también pueden presentarse en células vegetales, mientras
que los cloroplastos son exclusivos de células vegetales y algunas bacterias fotosintéticas. Las
mitocondrias oxidan moléculas orgánicas utilizando oxígeno del aire como aceptor de electrones y forman
ATP. Los cloroplastos capturan energía de la luz y la transforman en ATP mediante el proceso
denominado fotosíntesis.
II. OBJETIVOS
2.1Observar y diferenciar orgánulos de células vegetales: cromoplastos y cloroplastos. -

Reconocer y diferenciar mitocondrias.
III. MATERIALES
- Microscopio óptico
- Verde de Janus
- Agua destilada
- Lugol
- Gotero
IV. PROCEDIMIENTO
4.1. Observación de cromoplastos en células de pulpa de tomate
La pulpa del tomate nos muestra las células generalmente bastante sueltas unas de otras. En el
citoplasma se percibe una serie de gránulos rojizos-anaranjados que son los cromoplastos. El núcleo
puede llegar a observarse por su típico aspecto y tamaño. Es frecuente la presencia de gránulos de
almidón de forma arriñonada. En las células menos alteradas por la compresión se ven grandes
vacuolas incoloras.
1 Cortar con el bisturí un pequeño trozo de uno o dos milímetros de grosor, de la parte pulposa del
tomate.
2 Llevarlo sobre un portaobjetos, sin poner agua.
3 Poner el cubre-objeto y comprimir suavemente la preparación.
4 Observar al microscopio
4.2. Observación de cloroplastos en células de Elodea
1 En un portaobjetos coloque una porción pequeña de hoja de Elodea y agregue una gota de agua.
2 Cubrir la muestra con una lámina portaobjetos.
3 Aprecie la forma de los cloroplastos y el movimiento de estos.
4.3. Observación de mitocondrias en células epiteliales humanas
26
1 Preparar un frotis de epitelio bucal con un hisopo.
2 Secar al medio ambiente.
3 Agregar unas gotas de Verde de Janus y dejar reposar por 3 minutos.
4 Elimine el exceso del colorante con agua destilada.
5 Observe al microscopio y describa la forma de las mitocondrias en la célula.
PARTE PRACTICA
1. Dibuje y coloree las distintas muestras observadas en la práctica. Mencionando el aumento total.




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27
PRACTICA Nº III.1
(SEMANA 7)
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
PRIMERA PARTE: CATALASA

I. FUNDAMENTO
Las enzimas son proteínas cuya función es acelerar (catalizar) reacciones químicas que ocurren
dentro de la célula y que en ausencia de ellas no se llevarían a cabo o de lo contrario tomarían
muchísimo tiempo. Como se aprecia en la siguiente figura, las enzimas son específicas para sus
sustratos, los cuales quedan unidos complementariamente al sitio de unión de la enzima donde son
modificados enzimáticamente, liberándose al final de la reacción los productos respectivos.
La catalasa es una enzima que se encuentra en las células de los tejidos animales y vegetales. La
función de esta enzima en los tejidos es necesaria porque durante el metabolismo celular, se forma una
molécula tóxica que es el peróxido de hidrógeno, H2O2 (agua oxigenada). Esta enzima, la catalasa, lo
descompone en agua y oxígeno, por lo que se soluciona el problema. La reacción de la catalasa sobre el
H2O2, es la siguiente:
La existencia de catalasa en los tejidos animales, se aprovecha para utilizar el agua

oxigenada como desinfectante cuando se echa sobre una herida. Como muchas de las bacterias
patógenas son anaerobias (no pueden vivir con oxígeno), mueren con el desprendimiento de
oxígeno que se produce cuando la catalasa de los tejidos actúa sobre el agua oxigenada.
II. OBJETIVO.
2.1 Detectar la presencia de la enzima catalasa en un tejido animal.
III. MATERIALES
- Gradillas
28
- Pipetas-tubos de ensayo
Deberás traer de casa
- Hígado de pollo
- Agua oxigenada
IV. MÉTODOS
1 Colocar en un tubo de ensayo unos trocitos de hígado.

2 Añadir 5 mililitros de agua oxigenada.
3 Se observará un intenso burbujeo debido al desprendimiento de oxígeno.
4 Discutir la formación de burbujas en distintas mesas, relacionándolo con la concentración de catalasa.
SEGUNDA PARTE: HIDROLISIS

DE LA AMILASA
I. FUNDAMENTO
Mediante esta experiencia vamos a ver la actividad de otra enzima, la amilasa o ptialina, presente
en la saliva. Esta enzima actúa sobre el polisacárido almidón, hidrolizando el enlace O-glicosídico, por lo
que el almidón se terminará por transformar en unidades de glucosa. Es importante que recuerdes las
reacciones características de glúcidos para comprender esta experiencia.
II. OBJETIVOS. Comprobar que sólo bajo ciertas condiciones las enzimas funcionan
óptimamente catalizando una reacción enzimática con su sustrato.
III. MATERIALES
- tubos de ensayo - Baño maría
-gradillas - Vaso de precipitados
-solución diluida de almidón y sacarosa - Lugol
IV. MÉTODOS
1. Poner en una gradilla cuatro tubos de ensayo, numerados del 1 al 4.

2. Proceder a llenar los tubos como lo indica la figura.
3. Agregar 3 gotas de lugol a cada tubo
4. Aparecerán diferencias entre los 4 tubos dependiendo de si hay o no almidón en el medio.
Recuerda: reacción positiva, color violeta, hay almidón. Reacción negativa, no cambia color, no
hay almidón.
Nota: Para ayudarte y formar más saliva, piensa en un limón o en algo que te apetezca mucho comer...
Así favoreces que se forme más saliva.
DESARROLLO
29
1.-¿En qué parte de las células encontramos la enzima catalasa y cuál es la función de dicha enzima?.
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
2.- ¿Qué factores, además de la temperatura, podrían afectar la actividad de una enzima?.
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
5. Dibuje las reacciones observadas en la práctica. e incluya alguna observación a sus resultados
________________________
________________________
________________________
________________________
__________________________
__________________________
__________________________
__________________________
FIRMA/ SELLO
PROFESOR
30
PRACTICA Nº III.2
(SEMANA 8)
METABOLISMO
ANAEROBIO:
FERMENTACIÓN ALCOHÓLICA
I. FUNDAMENTO
La respiración celular es el proceso mediante el cual se oxidan moléculas energéticas (glucosa,

principalmente), empleando al oxígeno como aceptor final de electrones, y obteniendo gran cantidad de
energía para la realización de las funciones celulares básicas.
La fermentación, por el contrario, es un proceso anaerobio que implica la ruptura de alimentos por
un proceso de degradación química que no requiere oxígeno. Los alimentos no son degradados
completamente hasta CO2 y H2O (como ocurre en la respiración), sino hasta compuestos intermedios
tales como ácido láctico (fermentación láctica) o alcohol (fermentación alcohólica). Esta ruptura
incompleta de los alimentos significa que menos energía es disponible durante la fermentación que el
liberado durante la respiración.
Ambos procesos pueden tomar lugar en las células a la vez. Además, los primeros pasos en la
ruptura de la glucosa en la respiración, son anaeróbicos.
Anaeróbica
Glucosa Ácido láctico
Aeróbica
Glucosa CO2 + H2O
Ciertas bacterias y hongos derivan todo sino parte de su energía de la fermentación y los
productos finales son frecuentemente el alcohol y CO2, el proceso en este caso es denominado
fermentación alcohólica. Las levaduras y bacterias, las cuales conducen a la fermentación son capaces
de emplear sus sistemas enzimáticos para liberar energía anaeróbicamente a partir de carbohidratos,
particularmente almidón y azúcar.
DESTINO DE LA GLUCOSA EN CONDICIONES AEROBIAS (RESPIRACIÓN) O

ANAERÓBIAS (FERMENTACIÓN)
ADP ADP ATP

+ P P ATP
GLUCOSA
31
1 ETANOL
II. OBJETIVOS
2.1 Comprobar que ante la presencia de oxígeno, el azúcar es oxidado hasta CO2 y agua.
2.2 Comprobar que en ausencia de oxígeno, el azúcar es convertido en etanol y CO2 por las
levaduras, mediante el proceso de fermentación alcohólica.
2.3 Comparar cualitativamente un proceso fermentativo vs. Respiración.
III. MATERIALES
-Tubos de ensayos -Reactivo de Fehling A y B
- Gradillas - Baño Maria
- Probetas -Algodón -Tiras de medidas de pH -Dicromato de potasio
-Soluciones al 2% de fructosa, glucosa, almidón y sacarosa
-Acido sulfúrico diluido
IV. MÉTODOS
Fermentación alcohólica
1. Preparar los tubos como lo indica la tabla:
REACTIVO 1 2 3 4 5 6
Agua Destilada .... .... .... ..... .... ....

Sol. de levadura 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL
Solución de Glucosa 2mL
Sol. Sacarosa 2mL
Sol. Almidón 2mL
Sol. Fructosa 2mL
Sol. Glucosa 2mL
2. La muestra con glucosa sola nos servirá para realizar la reacción de Fehling y comprobar que es
glucosa por su poder reductor.
3. Para colocar la levadura en el tubo, previamente se tiene que disolver una punta de espátula de
la cepa de panificación de Sacharomyces cerevisae en un poco de agua.
4. Llenar los tubos cuidando que no queden burbujas de aire, para conseguir un ambiente de
anaerobiosis. Colocar un globo en la boca de los tubos para que el sistema quede cerrado
herméticamente.
5. Llevar todos los tubos a 37ºC por 30 min.
6. Anotar la formación de CO2 para cada tubo (La fermentación se evidenciará por la presencia de
burbujas en el tubo y el globo hinchando, debido a la producción de CO2.
7. Detectar la presencia de glucosa aplicando reactivo de Fehling A y B, llevando a Baño Maria por
32
8 minutos
8. Medir el pH del medio.
9. Opcionalmente, el profesor del grupo detectará cuidadosamente la presencia de etanol en las
muestras. Hay que tener mucho cuidado porque hay que manipular Ácido sulfúrico y puede ser
peligroso el manejarlo. Se tomarán 2 ml. de la solución del tubo herméticamente cerrado y la
ponemos en otro tubo de ensayo. Añadimos unos cristalitos de dicromato potásico y a
continuación 2 ml. de acido sulfúrico diluido. Al calentar al baño María debe formarse un
compuesto aromático característico, y se pone de manifiesto porque cambia de color de
amarillento a verdoso. Es una reacción que nos indica que existe etanol.
10. Observar, comparar y discutir los resultados de los experimentos planteados.
DESARROLLO
1.- Complete el dibujo y la tabla.
.
CO2
glucosa
pH
etanol
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________
FIRMA/ SELLO
PROFESOR
33
SEMANA DE EVALUACIONES
(SEMANA 9)
SEMANA DE LA MEDICINA
(SEMANA 10)
PRÁCTICA N° III.3
(SEMANA 11)
FECUNDACIÓN

I. FUNDAMENTO

La fecundación es el proceso de unión del óvulo y el espermatozoide, y en virtud de la cual se
origina el cigoto o célula huevo. La fecundación en la especie humana es interna, pues se lleva a cabo
en el interior del aparato reproductor de la hembra, concretamente en las trompas de Falopio.
34
En esta práctica se observará el proceso de fecundación entre un gameto masculino
(espermatozoides) y un gameto femenino (ovulo), en erizo de mar. Se podrán observar los gametos o
Células reproductoras masculina y femenina, cuyo núcleo sólo contiene un cromosoma de cada par.
El óvulo es una célula redonda de gran tamaño. Posee un núcleo donde se alojan los
cromosomas portadores de la información genética materna, y un citoplasma que posee sustancias
nutritivas para alimentar al embrión en sus primeras etapas, en el caso de que ocurra la fecundación.
El espermatozoide, o gameto masculino, es una célula pequeña con capacidad de movimiento

para poder alcanzar al óvulo.
Según donde se encuentren el espermatozoide y el óvulo, existen dos tipos de fecundación:

a) Fecundación EXTERNA, cuando tanto el macho como la hembra liberan sus gametos al medio
externo, que es el agua, de manera que los espermatozoides nadan en el agua hasta encontrar a los
óvulos. Es lo típico de todos los animales invertebrados acuáticos, y en los vertebrados se da en los
peces y en los anfibios.
b) Fecundación INTERNA, cuando el macho deposita sus espermatozoides en el interior de la hembra, y

se mueven por el organismo de la hembra hasta encontrar al óvulo. En el erizo de mar no hay
dimorfismo sexual de modo que externamente no se les puede diferenciar a las hembras de los
machos. Las gónadas femeninas son de color rojo vinoso y las gónadas masculinas son de color
amarillo grisáceo. En ambos casos se encuentran en las zonas interambulacrales (celoma) ubicado
en el interior del hemisferio superior. A través de las glándulas genitales (5), las gónadas se
comunican al exterior mediante el poro genital, por donde son derramados los huevos. La
fecundación es externa porque los gametos se encuentran fuera de la cavidad genital y el óvulo se
fecunda externamente.

35

II. OBJETIVOS

- Identificar gametos masculinos y femeninos en erizo de mar.
- Evidenciar el proceso de la fecundación.
III. MATERIALES

- Microscopio
- Placa Petri
- Pipeta
- Bagueta
Traer el alumno
- Portaobjetos
- Cubreobjetos
- Goteros
- Materiales de disección: tijera, pinza, estilete.
- Erizos de mar VIVOS en baldes con tapa y con agua de mar
IV. PROCEDIMIENTO

4.1. Obtención de Óvulos y Espermatozoides
1. Usando el material de disección, cortar las púas del erizo a nivel del ecuador todo el contorno radial e
introducir la punta de la tijera para perforar y cortar transversalmente el caparazón por la zona
cortical, obteniendo 2 mitades: el aboral y el ventral; en el aboral (lado superior) en las placas
interradiales (5) del celoma es donde se encuentra las gónadas en sus respectivas masas genitales
de color crema para los MACHOS y rojo vinoso para las HEMBRAS.
2. Luego echar las gónadas en un petri con agua de mar y con la ayuda de una bagueta se trozan los
ovarios para liberar los óvulos. En otro cristalizador, se hacen exactamente lo mismo con los
testículos

4.2. Montaje y observación de gametos

1. Colocar en un portaobjeto, una gota de la muestra con óvulos y observar su forma y color
2. Colocar en un portaobjeto, una gota de la muestra con espermatozoides y observar su forma, tamaño,
flagelo, etc.
3. Después de observar esta preparación coloque una gota del colorante cristal violeta sobre los
gametos masculinos y observe nuevamente
4. Observar a mayor aumento ambos gametos.

36

4.3 Fecundación

1. De las muestras obtenidas, coloque en un portaobjeto una gota con óvulos y otra con
espermatozoides y mezclar.
2. Observar a mayor y menor aumento
3. Observar con detenimiento los cambios que sufre el óvulo una vez fecundado.
DESARROLLO
1. Dibuje y coloree las distintas muestras observadas en la práctica. Mencionando el aumento total.



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PROFESOR

37
PRACTICA Nº III.4
(SEMANA 12)
DIVISIÓN CELULAR:
MITOSIS y MEIOSIS
PARTE I MITOSIS
I. FUNDAMENTO
El ciclo celular es un proceso que consiste en la replicación de material genético y formación de

células hijas. Compromete dos etapas: La primera llamada interfase, donde no ocurre división celular
propiamente dicha y la segunda de división celular (ver figura). Dependiendo del tipo de células donde se
lleve a cabo, la división celular toma el nombre de Mitosis (si ocurre en células somáticas) o Meiosis (si
ocurre en células germinales).
La mitosis implica cuatro etapas: Profase, Metafase, Anafase y Telofase.

En las dos primeras ocurre la condensación y ordenamiento de los
cromosomas y en las dos últimas se lleva a cabo la distribución de los
cromosomas. El resultado final son dos células hijas diploides (2n).
II. OBJETIVOS
Reconocer las distintas fases del ciclo celular en células somáticas de raíz de cebolla.
38
III. MATERIALES
- Placa Petri
- Orceína acética
- Pinza de madera
- Microscopio
- Acido Acético
- Etanol
IV. PROCEDIMIENTO
Con 8 días de anticipación a la práctica preparar el cultivo de cebolla de la siguiente manera: En

un vaso con agua, de preferencia de borde oscuro, colocar una cebolla mediana de tal manera que haga
contacto la parte terminal de la cebolla con el agua y dejar en lugar semioscuro.
Preparación de la Muestra
1 Disponer de gran número de raíces de cebolla, haciendo cortes de la parte terminal
(aproximadamente de 0.5cm.) y depositar en una placa Petri.
2 Colorear con orceína por 10 minutos: contiene orceína A que interrumpe el proceso si se está dando
en ese momento y reblandece la unión de las células muertas, así como orceína B que tiñe la
cromatina o material hereditario.
3 Luego calentar la muestra sólo hasta que emane vapores por 2 veces consecutivas con intervalos de
enfriamiento.
4 Trasladar las raíces a diferentes portaobjetos, separar solo el ápice (parte terminal de la raíz) y
agregar una gotita de orceína y cubrir con el cubreobjeto.
5 Apretar la muestra suavemente con la yema de los dedos.
6 Secar el exceso de colorante con papel secante y llevar al microscopio para su observación a menor
y mayor aumento.
7
Interfase Profase Temprana Profase Tardía Metafase Anafase Temprana
39
Anafase Tardía Telofase Temprana Telofase Tardía Citocinesis
DESARROLLO
1.- dibuje las muestras observadas.



40
PARTE II. MEIOSIS
I. INTRODUCCIÓN
La meiosis es un proceso celular, ligado a la reproducción sexual, por el cual, la célula madre de
naturaleza diploide, da origen a los gametos de naturaleza haploide, de tal manera que en la
fecundación se reestablece el número diploide de cromosomas. Así, mientras la mitosis es un proceso
de división celular con formación de dos núcleos hijos con el mismo número de cromosomas que la
célula original, en la meiosis en cambio hay dos divisiones celulares con reducción del número de
cromosomas a la mitad.
La meiosis es un proceso citológico que comprende dos divisiones celulares. En la primera división
meiótica ocurre una serie de intercambios de material genético entre los cromosomas homólogos. Este
fenómeno es un proceso complejo que comprende una larga profase en la que, para su mejor estudio y
comprensión, se distinguen los estadios: Leptoteno, Cigoteno, Paquiteno, Diploteno y Diacinesis. Entre
la telofase I y el comienzo de la segunda división meiótica, a diferencia con la mitosis, no hay un período
de síntesis y duplicación del ADN, por lo demás la división meiótica II, tiene lugar como la mitosis normal
en cada una de las células haploides (meiocitos de segundo orden), resultantes de la división meiótica
I.
II. OBJETIVOS: Al finalizar la presente práctica los alumnos estarán capacitados para:
2.1 Reconocer y diferenciar los estados fisiológicos por los que atraviesan los cromosomas
durante el proceso meiótico en células animales.
III. MATERIALES Y METODOS

Un excelente material para la observación de los procesos de división celular lo constituyen insectos
de la especie Grillos asimilis “grillo doméstico” y Laplatacris sp “langosta”. En los individuos machos
debe recuperarse el testículo después de la disección en el que se estudiará la meiosis en células de
maduración (espermatocitos) de la zona proximal al canal deferente. El material a usar en el presente
ejercicio es el siguiente:
- Microscopio
- Cloroformo
- Carmín acético
- Carnoy
- Solución salina 0.7%
- Placas petri
- Laminas, laminilla
- Algodón
- Papel filtro
- Estilete de punta fina
IV: PROCEDIMIENTO
- Anesteciar los animales en las placas petri, colocando dentro de un pedazo de algodón
embebido en cloroformo.
- Disecar el animal con la ayuda del estereomicroscopio o lupas, colocándolo en posición dorsal.
Separar los testículos adicionándoles la solución salina procurando no exponer los órganos al
aire para evitar posibles desecaciones.
- Seccionar los testículos en partes pequeñas de 2 a 3 mm y colocarlos en un vial con fijador
carnoy por espacio de 30 min.
- Traspasar los fragmentos a una luna de reloj que contiene carmín acético y lleve al calor del
mechero hasta que entre en ebullición por espacio de 15 segundos de 5 a 7 veces.
- Retire el fragmento del testículo con una pinza de punta fina y colóquela sobre un portaobjetos y
agréguela una gota de carmín acético.
- Tape la preparación con una laminilla cubre objetos y sobre esta ponga un papel absorbente.
Presione el cubre objetos con la yema del dedo pulgar y luego con la extremidad plana de un
41
lápiz presionar un poco más fuerte hasta convertir el material del porta objetos en una capa
delgada (squash). Al realizar esta operación, tenga cuidado para no romper el cubre objetos.
- Limpie el exceso de colorante del portaobjetos con papel higiénico y lleve el preparado al
microscopio para su observación a menor y mayor aumento.
- Observar y esquematizar.
42
1.- Dibuje las muestras observadas.

43




FIRMA/ SELLO
PROFESOR
44
PRACTICA Nº IV.1
(SEMANA 13)
PRIMERA PARTE: EXTRACCIÓN

DE ADN
I. FUNDAMENTO
El ADN es un polímero de desoxiribonucleótidos, que en eucariotes es el componente de la

cromatina o material genético. En la cromatina el ADN se encuentra asociado a proteínas conocidas
como nucleoproteínas de tipo histonas, protaminas y en menor proporción con proteínas de tipo ácidas.
Para extraer el ADN sin arrastrar sus proteínas asociadas se podría emplear soluciones ácidas. Sin
embargo, éstas soluciones podrían dañar la estructura de la hebra, de modo que se prefiere emplear
solventes orgánicos como cloroformo, el cual extrae proteínas dejando insoluble al ADN.
La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son
atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la
célula. Se empieza por lisar (romper) las células mediante un detergente, vaciándose su contenido
molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampón contiene
ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor
proporción.
Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas más
pequeñas y separadas de él por acción del detergente. Sólo queda, por tanto, extraer el ADN de esa
mezcla de tampón y detergente.
La secuencia general de extracción es la siguiente:
1 Liberación del ADN en forma soluble por medio de la destrucción de los sistemas membranosos de
los tejidos (membrana celular y nuclear).
2 Separación de los complejos de nucleoproteína por denaturación de la parte proteica.
3 Separación del ADN de las otras macromoléculas por solubilidad diferencial.
45
4 Precipitación del ADN por insolubilidad en alcohol y bajas temperaturas.
II. OBJETIVOS
1 El objetivo fundamental de esta práctica es utilizar unas sencillas técnicas para poder extraer el ADN
de un tejido animal y por el aspecto que presenta, confirmar su estructura fibrilar.
2 A partir de la longitud enorme de las fibras también se confirma que en el núcleo el ADN se encuentra
replegado.
III. MATERIALES
! - 2 Tubos de prueba de 20 ml - Vaso de precipitación de 500ml.
! - 5 Baguetas
! - 1 embudo - Medio de homogenización:
! - Etanol helado - Lauril Sulfato de Sodio (SDS o -Hielo SLS) 50 g
! - 5 Pipetas de 10ml - Cloruro de Sodio 8. 770 g
! - Baño María - Citrato de Sodio 4.110 g
- Mortero con pilón - EDTA 0.292 g
- Gasa estéril
IV. PROCEDIMIENTO
Para la extracción DE ADN del manto de choro, con etanol, seguiremos los siguientes pasos.
4.1. Homogenización del Tejido
El método para desintegrar el tejido debe estar adaptado a las características de éste. Para
grandes volúmenes de tejidos blandos, suelen usarse licuadoras esencialmente iguales a las licuadoras
domésticas. Para volúmenes menores, en general es suficiente un MORTERO y un pilón.
Tejidos más resistentes, como por ejemplo hueso o diente, necesitan tratamientos mecánicos
especiales. Aquellos tejidos con células cuya pared celular es resistente, como por ejemplo vegetales,
hongos o bacterias, requieren también condiciones drásticas. Uno de los métodos más utilizados
consiste en congelar la muestra en nitrógeno líquido y, manteniéndola congelada, pulverizarla con un
mortero. Así, además de desintegrar la muestra, se logra que ésta se mantenga a muy baja temperatura
durante el tratamiento, con lo cual se evita la acción de enzimas endógenas que pudieran degradar el
material de interés.
En esta práctica se empleará un método de ruptura con mortero (sin congelamiento). La principal
ventaja de este método es que se adapta bastante bien a tejidos muy diversos. Asimismo, dado que se
opera a temperatura ambiente, las ribonucleasas celulares pueden degradar parcialmente las moléculas
de ARN. Para ayudar a la solubilización de los componentes celulares, a la ruptura de membranas y de
complejos protéicos, la solución de lisis contendrá un detergente iónico (dodecilsulfato de sodio, SDS).
Este detergente dispersa los componentes de las membranas y desnaturaliza las proteínas.
La solución de lisis contiene además el agente quelante de cationes divalentes, EDTA. Esto
2+
impide la acción de las ADNasas (dependientes de Mg ), aunque no tiene efectos sobre la mayor parte
de las ribonucleasas.
Seguir los siguientes pasos:
1 Las células se homogenizarán en un mortero empleando el medio de homogenización. ES

OBLIGATORIO el uso de guantes en todo momento para evitar la contaminación de la muestra con
DNAasa proveniente del sudor de las manos que pueda degradar nuestras muestras de ADN.
2 Se lisarán las células agregando 10 ml de la solución de homogenización por cada gramo de tejido
con que se inició el proceso. Los componentes como el SDS, permitirá por una parte la separación de
46
las proteínas asociadas a la cromatina y por otra parte la ruptura de membranas. El NaCl produce el
estallido de los núcleos para liberar así las fibras de cromatina. El EDTA es un agente quelante que
inactiva a las DNAasas.
3 Incubar la mezcla en un Baño María a 60°C por 15 minutos exactos. El calor ablandará el tejido
permitiendo que los componentes de la solución homogenizadora ingrese a la célula. Además, esta
temperatura denatura muchas enzimas que interfieren con el procedimiento.
4 Filtrar el homogenizado empleando la gasa estéril
5 Enfriar rápidamente la preparación filtrada en una cubeta con hielo, por 10 minutos a fin de detener
cualquier proceso degradativo del ADN.
4.2. Precipitación del ADN
La precipitación de los ácidos nucleicos permite su purificación y concentración. Se basa en la

simultánea neutralización de las cargas negativas y deshidratación de la molécula, lo cual posibilita su
agregación y precipitación.
La precipitación es un fenómeno reversible (mediante la resuspensión en soluciones acuosas) y

no debe ser confundido ni con la desnaturalización (potencialmente reversible) ni con la degradación
(irreversible) de los mismos.
Efectuar los siguientes pasos:
1 Lentamente, agregar etanol helado por el borde interno del recipiente hasta que comience a aparecer
una consistencia blanca que significa que el ADN ha precipitado.
2 Suavemente, a medida que se agrega el etanol helado, girar enrollando a la vez con una bagueta de
vidrio.
3 Reconoce 3 fases en tu solución: la del alcohol (que flota en agua), la de tu tejido triturado (abajo del
todo) y la interfase entre los 2 que contiene ADN precipitado.
4 Poco a poco haciendo estos movimientos en una sola dirección, se logrará apreciar el ADN en la
bagueta, asemejando una madeja de un hilo sumamente fino o como copos de algodón.
Nota importante. El producto filamentoso obtenido de esta extracción no es ADN puro ya que,
entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se realiza añadiendo
enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN (protocolos de
PURIFICACIÓN de ADN).
SEGUNTA PARTE:
ELECTROFORESIS
I. FUNDAMENTO
El problema de realizar separaciones de biomoléculas grandes es enfrentado frecuentemente en

las ciencias de la vida, tanto para análisis cuali- como cuantitativos de mezclas o de preparaciones
individuales. En la mayoría de casos es deseable causar el mínimo de daño a las moléculas de manera
que sus propiedades no cambien de manera significativa. Los métodos actuales para la separación de
biomoléculas descansan por lo tanto en procesos físicos que causan el mínimo de desnaturalización, lo
cual resulta en la máxima retención de cualquier actividad biológica. Un gran grupo de métodos de
separación están basados en algunas propiedades químicas o biológicas, o en interacciones de la
molécula que se investiga, y algunas otras están basadas en diferencias en pesos moleculares o cargas
netas, o a veces una combinación de las dos propiedades. Los métodos electroforéticos pueden diseñar
se para explotar cualquiera de los dos, o ambos parámetros, aunque las diferencias en tamaño son las
principales en el caso de las separaciones de ácidos nucleicos.
47
La electroforesis en geles de agarosa es una técnica común en los laboratorios de Biología
Molecular. El proceso consiste en la aplicación de una diferencia de voltaje a una muestra de ADN que
se encuentra inmersa en un gel de agarosa, y esta a su vez en bañada por un buffer determinado. La
generación de polos opuestos provoca la migración del ADN del polo cargado negativamente (Cátodo) al
polo cargado positivamente (Anodo), debido a que el ADN tiene una carga neta negativa.
Los geles de agarosa son el medio más popular para separaciones electroforéticas de ácidos
nucleicos de mediano y gran tamaño. Las concentraciones más típicas de agarosa van de 0.3 hasta 2.5
%, y esta concentración depende de los tamaños de los ácidos nucleicos a separar. Aunque los geles de
agarosa carecen de fuerza mecánica (especialmente los más diluidos), la manipulación se facilita por el
uso de geles horizontales, los cuales pueden ser soportados por lámina de vidrio o de plástico
El gel resultante es fotografiado en un aparato llamado transiluminador, presencia de bromuro de

etidio, para poner en evidencia los fragmentos de ADN en el gel. En la presente práctica analizaremos la
fotografía de un gel de agarosa y observaremos las distintas bandas de ADN que en él aparecen,
discutiendo la razón por las que unas aparecen más arriba que otras. Realizaremos un análisis como el
que se hace en ensayos de diagnóstico molecular y de clonación.
II. OBJETIVOS
-Comprobar la movilidad del ADN en un gel de agarosa

-Analizar la utilidad de esta técnica en ensayos de biología molecular aplicada
III. MATERIALES Y MÉTODOS
Analizaremos la siguiente Lámina de un gel de agarosa y discutiremos cuál es el significado y la

interpretación de esas bandas en el gel.
DESARROLLO
1.- Dibuje sus resultados
2.-Discuta y resuelva los siguientes enunciados
48
M 1 2
En el gel aparecen 3 carriles o calles, cada uno con una muestra distinta (M, 1 y 2). Los pocillos son
hechos en el gel para introducir ahí la muestra de ADN.
1 ¿Qué hay en el primer carril?

____________________________________________________________________________________
2 En la muestra 1, ¿qué tamaño aproximado tienen las bandas de ADN?
_______________________________________________________________________________
3 ¿Por qué aparece RNA en algunas nuestras y por qué aparece tan abajo, comparado al ADN?
_______________________________________________________________________________
4 ¿Qué significado tiene que algunas bandas sean más gruesas que otras?
_______________________________________________________________________________
5 ¿Qué hubiera esperado encontrar si corría un gel con su ADN recién extraído? Dibújelo.
______________________________________________________
FIRMA/ SELLO
PROFESOR
49
PRACTICA Nº IV.2
(SEMANA 14)
CÓDIGO GENÉTICO Y
TRADUCCIÓN DE
PROTEÍNAS
I. FUNDAMENTO
El proceso de traducción, es decir, síntesis de novo de proteínas, ocurre en el citoplasma,

específicamente en los ribosomas del retículo endoplasmático rugoso (en humanos). La síntesis de una
proteína requiere que previamente el ARNm de ese gen haya sido transcrito en el núcleo y exportado al
citoplasma. Aquí el ARNm, que contiene la información genética necesaria para codificar la proteína, se
asociará a los ribosomas del RER y con la intervención de una compleja maquinaria proteica así como
de los ARNt específicos para cada aminoácido, se llevará a cabo la traducción.
El ARNm porta los codones, tripletes de nucleótidos, que codifican para un aminoácido. Mientras
que los ARNt portan los anticodones, que le indican qué aminoácido van a portar y llevar hasta el
complejo ARNm-ribosomas-enzimas. El código genético es la combinación de tripletes que tienen la
información necesaria para codificar un aminoácido. Existen 64 codones en el código genético, que
50
codifican para los 20 aminoácidos que forman las proteínas y que además contiene 1 codón de inicio de
la traducción y 3 codones de finalización de la misma.
En esta práctica analizaremos la degeneración del código genético, discutiremos por qué no es
realmente universal y realizaremos la traducción de algunos genes en sus respectivas secuencias de
aminoácidos.
II. OBJETIVOS

- Reconocer los codones y anticodones posibles para los aminoácidos que forman las proteínas.
- Analizar posibles mutaciones en los codones que alteren la secuencia de una proteína y con ello su
función.

III. MATERIALES
- Lámina de la tabla del Código Genético

- Lámina de la tabla de las alteraciones del Código Genético en mitocondrias y otros organismos.

51

IV. MÉTODOS

4.1. Antes de solucionar los problemas planteados, determine:
a. número de codones de inicio ____________________________
b. número de codones de finalización _______________________
c. aminoácidos codificados por 1 sólo codón __________________
d. aminoácidos codificados por 2 codones ____________________
e. aminoácidos codificados por más de 3 codones ____________________________
f. ¿qué cambios se han producido en el código genético de mitocondrias en humanos?
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
g. Lista de aminoácidos esenciales y no esenciales
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________

4.2. Discuta con su profesor y responda:
¿Por qué algunos aminoácidos son codificados por 1 sólo codón mientras que otros son codificados por
2 o más codones?
____________________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________

4.3. Los siguientes problemas deberán ser solucionados en clase con ayuda del profesor:

Primer problema: Transcripción y traducción
Se tiene la siguiente secuencia de ADN (cadena codante) que es parte del gen de
transferrina.
5´ ATGGCATCCTACGATCAGTATCCTATACGC 3´ ……… (EL GEN CONTINÚA)
Determine:
1. la secuencia no codante del respectivo trozo del gen

___________________________________________________________________________________
2. la secuencia del ARNm respectivo, transcrito a partir del trozo de dicho gen
___________________________________________________________________________________
52
3. Utilizando la tabla del código genético, deduzca la secuencia de aminoácidos que codificará dicha
cadena (considerando que se incubó el ADN en un extracto crudo de células de reticulocitos de
conejo que contenía los respectivo ARNt, enzimas, ATP, GTP, etc.)
___________________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________________

Segundo problema. Mutaciones en la secuencia de nucleótidos
La secuencia de ADN del gen de transferrina, del problema 1, ha sufrido mutaciones por el efecto
de radiaciones UV. Se secuenció el gen mutado y la secuencia obtenida fue la siguiente:
5´ ATGGCATCGTACGAACAGTAGCCTATACGC 3´ ………..(EL GEN CONTINÚA)
Determine:
1. La secuencia del ARNm respectivo, transcrito a partir del trozo de dicho gen
____________________________________________________________________________________
2. La secuencia de aminoácidos que, tras esas mutaciones, se codifica

____________________________________________________________________________________
3. ¿Qué mutaciones han sido conservativas y cuáles no?.

____________________________________________________________________________________

Tercer problema. Traducción en mitocondrias

Se cuenta con parte de la secuencia del gen de la proteína de Fe-S, que participa en la cadena
transportadora de electrones en la mitocondria, y que es codificada dentro de la misma. La secuencia es
de la cadena de ADN codante:
……. 5´ CCGTCAGAACTCGAAGCTCCGGACTTAGCT 3´ ……
Determine:
1. la secuencia de aminoácidos codificada en la mitocondria, a partir de dicha cadena nucleotídica

__________________________________________________________________
2. ¿cuál serían los aminoácidos cambiados si dicho gen se codificara en el citoplasma?

__________________________________________________________________
FIRMA/ SELLO
PROFESOR
53
PRACTICA Nº IV.3
(SEMANA 15)
ESTUDIO DE RASGOS
GENÉTICOS EN EL
HOMBRE
I. FUNDAMENTO
Las características de un organismo son el resultado de la herencia y de la interacción de los

genes. Los principios de la genética establecidos por Mendel y Morgan y otros investigadores se aplican
a todos los organismos vivientes, incluido el hombre.
De la misma manera que en otros, algunos rasgos humanos son determinados por genes
dominantes y otros por genes recesivos. Lo rasgos dominantes generalmente se encuentran con mayor
frecuencia que los que se deben a genes recesivos. En la transmisión de la mayoría de los caracteres
hereditarios, están involucrados varios genes, pero a menudo la variación de un solo gen, produce la
variación de una sola característica lo que da lugar a dos formas distintas de expresión.
Algunos genes (y su manifestación) están ligados al sexo, es decir que la característica respectiva
sólo se expresa en uno de los sexos. Frecuentemente el masculino (hemofilia por ejemplo). En este caso
el gen en cuestión se encuentra localizado en el cromosoma X (el cromosoma Y se considera
“genéticamente vacío”). En otros casos la manifestación genotípica es influenciada por el otro sexo (p.e.
calvicie, es dominante en el varón y recesivo en la mujer).
En este caso los genes respectivos están localizados en un cromosoma autosómico, pero su
expresión está condicionada a la acción secundaria de genes ubicados en el cromosoma X.
II. OBJETIVOS
1. Determinar el fenotipo (expresión de las características) y su probable genotipo (Información genética

en el cromosoma respectivo) tanto como sea posible.
2. Estimar la distribución de los genes dominantes y recesivos para cada rasgo genético observado en el
grupo.
III. MATERIAL
Deberás traer de casa.
-Espejo
-Lupa
IV. PROCEDIMIENTO
1. Con la ayuda de un espejo o de un compañero determine un fenotipo para cada uno de los rasgos
genéticos descritos a continuación. Haga sus anotaciones en su cuaderno de trabajo.
2. Cuando se trata de una característica dominante, no es posible determinar con certeza el genotipo,
pues pueden estar presentes dos genes dominantes para esta característica (homocigosis) o un gen
54
dominante y uno recesivo (heterocigosis). En consecuencia utilizaremos un guión (-) para representar
el alelo desconocido. En cuanto al carácter recesivo, no hay dificultad en establecer el genotipo, los
dos genes alelomórficos son recesivos. Anote su genotipo en la hoja de trabajo.
3. Tabule en la hoja de trabajo el número de alumnos con cada rasgo genético estudiado DONDE SE
INCLUYA: rasgo estudiado, genes involucrados, dominancia o recesión, estado del gen expresado
(homocigoto o heterocigoto), etc.
RASGOS GENETICOS A SER ESTUDIADOS
INDEPENDIENTES DEL SEXO
1. Enrollar la lengua: algunas personas tienen la aptitud de enrollar la lengua en forma de U. Esto es
causado por un gen dominante (E). La gente que no posee este gen sólo puede curvar la lengua
ligeramente hacia abajo.
2. Lóbulos separados: un gen dominante (L) determina que los lóbulos de la oreja estén separados, es
decir que no estén adheridos directamente a la cabeza. En otras personas los lóbulos de las orejas
están adheridos directamente al costado de la cabeza.
3. Pico de viuda: algunas personas muestran la característica de que la línea de pelo baja hasta un
punto definido en la mitad de la frente. Esto se conoce como “pico de viuda”, este rasgo resulta de un
gen dominante (V). El gen recesivo determina la característica de una línea continúa en el pelo.
4. Meñique doblado hacia adentro: Un gen dominante (B) hace que la última falange del meñique se
flexione hacia el dedo anular. Descanse ambas manos tendidas sobre la mesa, relaje los músculos y
observe si su meñique está flexionado o recto.
5. Iris pigmentado: Cuando una persona es homocigota para cierto gen recesivo (p) no hay pigmento en
la parte anterior de los ojos y en cambio se muestra una capa azul detrás del iris. Esto determina que
los ojos sean azules. Un alelo dominante de este gen (P) hace que el pigmento se deposite en la
capa anterior del iris y enmascara el color azul en grado variable. Otros genes determinan la
naturaleza y densidad exactas de este pigmento, originando los ojos pardos, violeta, verde y otros
colores. Nota: Algunas veces la capa detrás del iris es gris y esto deberá considerarse como no
pigmentado.
6. Pelo de la falange media: algunas personas tienen pelo en la segunda falange de la mano mientras
otras personas no. La ausencia completa del pelo en todo, se debe a un gen recesivo (m) y su
presencia se debe a su alelo dominante (M). Parece que hay un número variable de estos alelos que
determinan si el pelo debe crecer en uno, dos, tres o cuatro dedos. Este pelo puede ser muy fino y
será necesario usar una lupa y mirar cuidadosamente en todos los dedos, antes de decidir si está
ausente en alguno de los dedos.
7. Músculo palmar largo: Cuando una persona es homocigota para cierto gen recesivo (l), presenta un
músculo palmar largo, el cual puede ser detectado examinando los tendones que corren en la cara
interna del antebrazo (altura de la muñeca) cierre el puño fuertemente y doble la mano hacia delante.
Palpe los tendones. Si hay tres, usted tiene el músculo palmar largo. Si solo hay dos (el medial más
grande no existe) usted no tiene este músculo. Examine ambas muñecas pues a veces está presente
en un brazo y no en el otro, a causa de las variaciones en la expresión de los genes. Si lo encuentra
en uno o ambos brazos, posee dos genes recesivos. Si no está presente en ambas muñecas tiene el
gen dominante (L).
8. Forma del cabello: la forma natural del cabello de una persona puede ser lacia, ondulada o crespa,
con variantes intermedias. El mecanismo por el cual se origina la forma del cabello es algo complejo,
pero puede asumirse que los responsables de esta característica son un par de genes con
dominancia incompleta. Asumiendo que la forma de su cabello no ha sido modificada por tratamiento
artificial, anote el genotipo respectivo según el siguiente código:
CC= cabello crespo

Cc= cabello ondulado
55
cc= cabello lacio.
9. Pulgar desarticulable: algunas personas tienen la habilidad de desarticular las falanges de sus dedos
pulgares, a causa de que los ligamentos de esta articulación son sumamente flojos, característica que
es dominante sobre ligamentos firmes. Esta circunstancia permite retirar el dedo pulgar hacia atrás
sacándolo de su articulación. Ensaye la posibilidad de desarticular el pulgar de cualquiera de sus
manos SIN ayuda de la otra mano e identifique su genotipo respectivo así: JJ o Jj = pulgar
desarticulable jj = pulgar no desarticulable.
10. Color del cabello: el color del cabello es determinado por la interacción de un gran número de
factores; sin embargo, si consideramos solo las mayores categorías de color capilar, estas pueden
explicarse por la interacción de dos pares de genes (herencia dihibrida): (D_) pigmento pardo
presente, (dd) pigmento pardo ausente, (rr) pigmento rojo presente. De acuerdo con la ley de la
distribución independiente, un individuo cualquiera puede tener alguna de las siguientes
combinaciones de genes y color:
DDRR, DDRr, DdRR : cabello oscuro (negro)

DdRr, Ddrr, DDrr : cabello castaño u oscuro con tintes rojizos
ddRr : cabello rubio
Dr. : cabello claro (color arena)
INFLUENCIADOS POR EL SEXO
11. Segundo dedo más corto que el cuarto: mantenga sus dedos juntos y ponga sus manos sobre una
hoja de papel, de modo que sus dedos descansen en ángulo recto con una línea horizontal, que
usted ha trazado antes sobre el papel. Mueva su mano hacia arriba o hacia abajo hasta que el
extremo del cuarto dedo (anular) toque escasamente la línea. Mire su segundo dedo (índice) y vea si
toca la línea si no lo hace el segundo dedo es más corto que el cuarto. Se cree que este segundo
dedo más corto es el resultado de un gen influenciado por el sexo del individuo. Según esto el gen es
dominante en lo varones y recesivo en las mujeres. Sc para el gen correspondiente al segundo dedo
corto Sl para el gen correspondiente para el segundo dedo largo.
12. Voz para el canto: el tono de la voz para el canto es determinado por un solo par de alelos V y v que
muestran dominancia incompleta y están influenciados por el sexo. Clasifique su voz par el canto
según el siguiente cuadro:
Genotipos Fenotipos
Varón Mujer
VV Bajo Contraalto
Vv Barítono Meso soprano
vv Tenor Soprano
13. Calvicie: esta es otra característica influenciada por el sexo y es controlada también por un par de
alelos. Aunque esta característica no suele manifestarse antes de los 30 años, sus posibilidades
personales de calvicie pueden presumirse por la presencia o ausencia de esta característica entre los
miembros mayores de su familia tanto por la línea materna o paterna. Establezca su probable
genotipo guiándose por el siguiente cuadro:
Genotipos Fenotipos
Varón Mujer
HH calvo calva
Hh calvo normal
hh normal normal
LIGADOS AL SEXO
56
14. Ceguera para el color (daltonismo): tipo más común de daltonismo es heredado como carácter
recesivo ligado al sexo. Puesto que el gen es portado solamente por el cromosoma X es necesario
indicar el cromosoma al especificar el genotipo. Son posibles genotipos y fenotipos:
Fenotipos Genotipos
Mujer Varón
N n N
Normal X X X Y
n n n
Daltónico XX XY
DESARROLLO
NOMBRE:______________________________
GRUPO:___________ MESA:___________ FECHA:_________
PROFESOR:_____________________________
1.- Anote su genotipo y fenotipo de cada característica evaluada.
SEGUNDA EVALUACION CONTINUA
(SEMANA 16)
57

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FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

BIOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR

GRUPO:___________ DIA:____________ PROFESOR:______________

SE FECHA CONTENIDO DOCENTE

1 Use material de vidrio limpio y no rajado.

NIVELES DE RIESGO BIOLOGICO EN UN LABORATORIO

Grupo de riesgo 1 (riesgo individual y poblacional escaso o nulo)

Grupo de riesgo 2 (riesgo individual moderado, riesgo poblacional bajo)

Grupo de riesgo 3 (riesgo individual elevado, riesgo poblacional bajo)

Grupo de riesgo 4 (riesgo individual y poblacional elevado)

Barrera microbiológica: Es un dispositivo o sistema que evita o limita la migración de microorganismos

Barrera microbiológica parcial: Es un dispositivo o sistema que limita la migración de microorganismos

Barrera microbiológica absoluta: Es un dispositivo o sistema hermético, a prueba de filtraciones de aire

Nivel de Bioseguridad I: Es aquel que corresponde a las actividades desarrolladas en un laboratorio

1.- complete el recuadro :

NIVEL DE CARACTERISTICAS EJEMPLOS DE

La invención del microscopio se atribuye a Johannes y Zacharias Jansen (1590) y el

El microscopio compuesto está constituido de un SISTEMA OPTICO destinado a obtener una

CARACTERISTICAS DEL MICROSCOPIO

En cualquier microscopio el poder de resolución define su rendimiento óptico, porque es su

Instrumento óptico Resolución Magnificación

Ø Reconocer las partes del microscopio óptico.

III. MATERIALES Y MÉTODOS

1. SISTEMA OPTICO. El sistema óptico está constituido por:

Ø Objetivos en seco: en los que el aire se interpone entre la lente y la preparación.

Ø Objetivos de inmersión: en el cual un líquido (aceite) se interpone entre la lente y la preparación.

Diafragma: Sirve para regular la cantidad de luz que llega a la preparación.

Fuente de luz: Puede ser natural o artificial (ampolleta).

Tornillo Macrométrico: Mecanismo de enfoque de avance rápido.

Tornillo Micrométrico: Mecanismo de enfoque con precisión o ajuste fino.

MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

1 Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente.

PRIMERA PARTE: TECNICAS DE

El mecanismo de coloración de las muestras biológicas pueden ser afectados por:

Preparados “en fresco”

Es importante ejercitar al estudiante en el manejo y aplicación de estos factores que inciden

1. Diferenciar y explicar el fundamento de las distintas coloraciones

Para observar este tipo de células se utiliza la Tinción

La diferente tinción de bacterias se debe a la composición diferencial de sus paredes bacterianas.

Bacterias del yogurt

Bacterias del vinagre

Bacterias del sarro dental

1 Realizar una extensión de la muestra de cultivo bacteriano sobre un portaobjetos

4.1. Observación de células vegetales (Células epiteliales de Allium cepa)

4.2. Observación de organismos unicelulares

4.3. Observación de levaduras del pan

4.4. Observación de células animales (Epitelio bucal)

1 Con un hisopo limpio extraiga suavemente la mucosidad de la cavidad bucal.

4.5. Observación de células animales (Tejido adiposo)

1 Con ayuda de un bisturí, cortar una fina capa de grasa de tocino

4.6. Observación de células animales (Sangre)

Al microscopio las células sanguíneas se verán

Para la coloración de Wright:

Para la coloración de Hematoxilina-Eosina:

2.-¿para qué sirve el FORMOL en la coloración de adipocitos?

La membrana celular permite el transporte de sustancias de manera selectiva. Muchas sustancias,

2.1 Observar y describir los fenómenos de difusión y ósmosis y su importancia en el intercambio de

1 En tres tubos de ensayo numerados coloque:

2. Dibujar todas muestras observadas en la práctica

PRIMERA PARTE: OBSERVACIÓN

El citoplasma celular esta formado por el hialoplasma y el morfoplasma. El hialoplasma es un medio

2.1. Explicar los movimientos citoplasmáticos

GRUPO:_ DIA: PROFESOR:____