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Los metabolitos secundarios son una serie de sustancias orgánicas que se encuentran en las
plantas, los cuales tienen funciones en la parte de supervivencia, crecimiento y reproducción.
A diferencia de los metabolitos primarios como lo son los carbohidratos, proteínas y ácidos
nucleicos que juegan un papel muy importante en la respiración, asimilación y transporte. Se
sintetizan en pequeñas cantidades a partir del metabolismo primario y no de forma
generalizada, a menudo su producción está restringida a un determinado genero de plantas,
a una familia, o incluso a algunas especies. Estas a pesar de producirse en las plantas en
pequeñas cantidades, algunos de los productos que se generan en este metabolismo
secundario tienen funciones ecológicas específicas que intervienen en diversos mecanismos
como: defensa, actúan como atrayentes y repelentes de animales, le dan a la planta sabores
amargos lo que las hace indigestas o venenosas frente a diferentes patógenos; Otros
proporcionan a la planta pigmentos y producción de agentes atrayentes a insectos
polinizadores los cuales van a utilizar los frutos como fuente de alimento (contribuyendo a
la dispersión de semillas). Hoy en día para la industria, representan un importante valor
medicinal, económico, en la industria cosmética, alimentaria y farmacéutica [1].
Diferentes antecedentes teóricos han mostrado una gran variedad de compuestos que tienen
una acción antioxidantes (Capacidad de una sustancia para inhibir la degradación, de tal
manera que un antioxidante actúa, principalmente, gracias a su capacidad para reaccionar
con radicales libres y, por lo tanto, recibe el nombre de antioxidante terminador de cadena),
entre ellos, se encuentra la especie de aguacate Hass, la cual un estudio realizado por la
universidad nacional de Colombia, sobre la determinación de la actividad antioxidante en
esta especie (caracterización de metabolitos secundarios) en la cual se encontraron diferentes
tipos de glicósidos, fitosteroles, triterpenos, ácidos graos con enlaces olefinicos y
acetilénicos, ácidos furanicos, dímeros de flavonoles, proantocianidinas oligomericas,
polifenoles y antocianinas, cada uno de estos cuando se obtuvieron del extracto al tratamiento
con diversos solventes (acetona/agua/acido acético) han mostrado actividad frente al ensayo
de absorción del radical oxigeno y otros que confirman su actividad como una buena fuente
de compuestos antioxidantes.[2]
Características de la especie:
El aguacate es una fruta tropical originaria de centro américa en las partes altas del este de
México y Guatemala. La variedad Hass posee un contenido de aceite que oscila entre los 8 y
12 %. Además, la proporción de agua es baja, de apenas 60-70 %. Su contenido
de vitaminas del complejo B y vitamina E es considerable. El aguacate se encuentra un árbol
extremadamente vigoroso (tronco potente con ramificaciones vigorosas), pudiendo alcanzar
hasta 30 m de altura. Por lo general, el árbol de esta variedad florece una sola vez al año,
desde inicios a mediados de primavera y, dependiendo de la variedad y la acumulación
térmica del lugar, puede demorar entre 6 y 11 meses en madurar. La temperatura,
dependiendo de las variedades tienen un comportamiento diferente de acuerda a la raza. La
raza antillana es poco resistente al frío, mientras que las variedades de la raza guatemalteca
son más resistentes y las mejicanas las que presentan la mayor tolerancia al frío, por ende,
para generalizar la temperatura ideal para el desarrollo de esta especie es considerada a
temperaturas de 5 a 19 °C, las inferiores a 15 °C afectan su crecimiento y floración. Las
alturas para el desarrollo de su cultivo esta entre los 1.800 y 2.000 msnm. Sus hojas están
dispuestas de forma alterna. Son pedunculadas, muy brillantes, de forma lanceolada, con base
aguda, margen entero y ápice agudo.
Las flores son perfectas en racimos subterminales; sin embargo, cada flor abre en dos
momentos distintos y separados, es decir los órganos femeninos y masculinos son
funcionales en diferentes tiempos, lo que evita la autofecundación.
Los frutos son ovalados, de tamaño pequeño a mediano, tiene corteza gruesa con textura de
corcho y superficie áspera. Su coloración es verde oscuro cuando está en el árbol, al estar
maduro toma un color verde púrpura. La semilla tiene un tamaño mediano y es redondeada;
a su vez, la pulpa, a mediados y finales del proceso de maduración toma color crema amarilla.
Cuando el fruto ha alcanzado madurez fisiológica en zonas de clima frío, es permitido dejarlo
en el árbol por más tiempo. En zonas tibias a cálidas no es de gran recomendación, esto es
debido a que el fruto toma un sabor desagradable.
Codificación taxonómica:
El aguacate hass pertenece al reino vegetal, ubicado en la clase de magnoliopsida, del orden
de laureles, dentro de la familia botánica de la lauraceae, perteneciendo al género
“Persea”, especie “Persea americana” y encontrado en la variedad “Hass”.
Composición nutricional:
Se muestra la composición del aguacate, se ha determinado que el consumo de 68 g de
suministra::
Monoinsaturada 15 g Vitamina K1 14 μg
Propiedades atribuidas:
Según estudios realizados el aguacate Hass es una fruta la cual contiene ácidos grasos
furánicos y alcoholes grasos polihidroxilados que son de gran uso en productos cosméticos.
La alta ingesta de estos ácidos grasos también se ha relacionado con un menor riesgo de
enfermedades cardiovasculares. Se ha demostrado que una dieta a base de palta puede
mejorar el perfil lipídico, en personas sanas y en especial en pacientes con
hipercolesterolemia leve, mediante la reducción de colesterol total, el colesterol LDL, los
triglicéridos y el colesterol HDL aumentado. El aguacate es destacado por su alto valor
nutritivo. Posee hidratos de carbono, proteínas, grasas, vitaminas A, C, D, B-6 y E
(importante antioxidante), fibra, agua y minerales, siendo abundante en potasio y magnesio
y pobre en sodio inflamatorias crónicas. Por lo tanto, su consumo tiene una influencia
positiva en la memoria a corto plazo y reduce el riesgo de sufrir enfermedades
cardiovasculares.
JUSTIFICACIÓN:
Nuestro país Colombia, es uno de los mas biodiversos que hay en todo el planeta tierra esto
debido a la gran expansión de miles de especies encontradas. Debido a esto, es de gran
necesidad la identificación, reconocimiento y ampliación del conocimiento que tiene las
riquezas de nuestro país, esto con el fin de contribuir a la investigación y desarrollo del
mismo. El estudio de los metabolitos secundarios de la especie de “aguacate Hass” (A pesar
de ser una especie tan común en nuestro país, presenta diversas propiedades antioxidantes y
demás que no reconocemos comúnmente), permite aumentar los conocimientos que tenemos
de ella y ofrece la oportunidad de encontrar avances en diversos campos (farmacología,
Alimentario, entre otros) enfocado en un análisis de búsqueda de principios bioactivos.
MARCO REFERENCIAL:
El aguacate Hass, es un alimento común en las mesas de los colombianos, pero este contiene
a parte de grasas saludables en las dietas de las personas, tienen compuestos como la luteína,
el cual es un fitonutriente y antioxidante natural, y principalmente evita la degeneración de
la macula (deterioro de la macula, la cual es una capa amarillenta de tejido sensible a la luz,
que se encuentra en la parte central del ojo o centro de en la retina para ser más específicos):
además de contener gran cantidad de antioxidantes naturales y potasio el cual permite reducir
las enfermedades cardiovasculares y del corazón, como la presión arterial alta y los infartos.
Finalmente, el aguacate es una de las frutas que mas vitamina E contienen, esta vitamina
tiene la cualidad de neutralizar los radicales libres por lo cual se convierte en una cualidad
importante en los efectos de la reducción de envejecimiento y hasta el riesgo de desarrollar
cáncer.
Materiales y métodos:
Licuadora. Viales.
Tamiz solido-solido. Columnas para cromatografía.
Balanza analítica. Placas de vidrio [(10 x 10) cm; (10
Espátula. x 20) cm].
Montaje para sistema reflujo. Vidrio reloj.
Sistema de filtración a vacío. Estufa.
Capsula. Aspesor.
Rotaevaporador. Microondas.
Beakers (2 L, 1L, 500 mL, 100 Cabina de UV para lectura de
mL). CCD.
Bureta (100 mL). Cámara para cromatografía en
Pipetas graduadas (5 mL). placa delgada.
Pera de succión. Cromatógrafo de gases.
Reactivos:
Material vegetal macerado y seco I2 sublimado.
(aproximadamente 100 g). Reactivo de Marquis.
Solventes (cloroformo, acetato de Solución de FeCl3/Ácido
etilo, metanol, etanol). perclórico.
Silica gel para placa y columna. Solución de Vainillina/ Ácido
solucion de I/HCl. fosfórico.
Solución de I/CH3Cl. Reactivo de Borntrager.
Reactivo de Lieberman-Buchard. Solución de cloruro de aluminio.
Reactivo de Dragendorff.
Recolección:
Para la elaboración de esta investigación, se tuvo que contar con 100 g de hojas de la especie
“Persea americana” seca y macerada. Nota: fueron pesados 175,5 g de material seco y
macerado.
Al lograr el secado total de la muestra se realiza una maceración, con el fin de adicionar el
solvente (Etanol), dicho solvente debe ser rectificado anteriormente con el fin de eliminar las
trazas de metanol, logrando concentrarse mayor cantidad del extracto en él y alcanzar la
obtención de los metabolitos presentes en dicha especie. Después de ello, se procedió a
realizar filtración al vacío para obtener la muestra separada del solvente, la cual tenía el
extracto. Posteriormente se continuó con la extracción por reflujo donde tuvo una duración
de 8 horas, con el fin de evitar pérdida de disolvente y conseguir mayor concentración de la
muestra. Culminando el proceso experimental se realizó una rota evaporación para así separar
el extracto del solvente utilizado (Etanol) y posteriormente en baño maria con el fin de
eliminar todo el solvente de la muestra.
Nota: antes de comenzar con el tamizaje, es necesario la preparación de las placas de silica
gel con una relación de: por cada 100 cm2 de placa de vidrio, se deben utilizar 3,5 g de silica
para placa y disolverlas en 8 mL de agua. Estas se dejan secar por 24 h y antes de utilizarlas
se deben activar en el microondas por 20 o 25 min a (120-130) °C.
Este tamizaje es una de las etapas de la investigación fitoquímica que permite determinar
cualitativamente los principales grupos de constituyentes químicos en la “Persea americana”,
para esto cada una de las fracciones se llevó a cromatografía por capa delgada de fase liquida
y con cada uno de los solventes utilizados en columna, estos se dejan secar y se observan en
la lámpara de rayos UV (cabina), posteriormente se le aplican mediante aspersión para
diferentes reactivos a la placa de cromatografía según el metabolito secundario a detectar.
Nota: este procedimiento se realiza antes del tamizaje fitoquímico explicado anteriormente.
Se realiza una cromatografía en placa delgada para cada una de las fracciones primarias
obtenidas de la cromatografía en columna (metanol, cloroformo, acetato de etilo) y se observa
en el UV las manchas obtenidas de cada uno de estos con el fin de clasificar y reunir las
muestras con los diferentes tipos de solventes que contengan perfiles o características
similares en su corrida y coloración. Procedimiento realizado en placas de (10 x 10) cm.
Cromatografía en placa preparativa y purificación de la muestra:
Resultados
Cada uno de los ensayos que se muestran a continuación son de carácter cualitativo, estos se
realizan por medio de la técnica de cromatografía en capa delgada de fase líquida, los cuales
por medio de polaridad y el desplazamiento de las fracciones en tres solventes (cloroformo,
acetato de etilo, metanol) indican la presencia de los metabolitos por las coloraciones
obtenidas en la reacción con cada uno de los reactivos para así determinar la presencia de
estos metabolitos secundarios que estarán presentes en la especie.
Estas coloraciones son observadas mediante la lámpara de luz ultravioleta en dos longitudes
(254 nm - 366 nm) que permiten la detección de los metabolitos, comparando los resultados
obtenidos con lo reportado en literatura e identificando los cambios que presentara la placa.
ENSAYO METABOLITO FUNCIONES SOLVENTE RESULTADO
S
Antraquinona
(roja)
Anexo:
Además a partir de la cromatografía de gases (muestra 3,1 cloroformo), esta nos brinda
información que corrobora no solo las pruebas realizadas, sino que además la teoría que se
encuentra en la literatura, mostrando que hay gran cantidad y presencia en su mayoría de
ácidos grasos que generalmente en la industria tienen aplicaciones en la fabricación de
jabones, cremas y diversos cosméticos, y compuestos que pertenecen a la rama de los Omega
3 (funcionamiento en el sistema nervioso, forma las membranas celulares y ayuda en la
fabricación de hormonas y componentes antiinflamatorios) como lo son: el ácido
tetradecanoico [fig No. .](ácido graso saturado de catorce carbonos), el 9-hexadecanoato de
etilo [fig No. .], Éster etílico del ácido linoleico (pertenecen a la rama de los omega 3), 9-
octadecen-1-ol (z) [fig No. .] (alcohol graso insaturado) y el ácido octadecanoico (etil ester)
[fig No. .] el cual se deriba o es un ácido graso de 18 carbonos presente en aceites, grasas
animales y vegetales. Algunas de estas grasas presentadas anteriormente aparte de ser
utilizados en la industria son antioxidantes o aumentan la actividad de las enzimas en el
cuerpo humano (omega 3). A parte de ello, se observa la presencia de diversos tipos de
terpenos, como lo es el óxido de cariofileno [fig No. .] el cual es un sesquiterpeno bicíclico
natural que tiene funciones tanto en la parte de antifúngicos y larvicida como farmacológica
en la parte de analgésicos y antinflamatorios, además tenemos la presencia de otros dos tipos
de terpenos que son: El escualeno [fig No. .] es un hidrocarburo y un triterpeno conocida
además como un precursor de la síntesis de diversos esteroles vegetales y animales ,
incluidos el colesterol y las hormonas esteroides en el cuerpo humano, tiene actividades
como hidratante natural y Ayuda en la lucha contra los radicales libres reduciendo así los
daños por oxidación de la piel; es decir, el envejecimiento y finalizando tenemos el Phytol
[fig No. .] el cual es un alcohol diterpénico acíclico que se puede utilizar como precursor
para la fabricación de formas sintéticas de vitamina E [1] y vitamina K1.
Figura No. . Estructura molecular del Figura No. . Estructura molecular del 9-
ácido tetradecanoico, etil ester. hexhadecanoato de etilo,