Práctica No.

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

Facultad De Estudios Superiores – Iztacala.

Medios de cultivo y Tinción de Gram

“Mtra Nadia Yael Morales Rodriguez”.

Materia: Microbiología Aplicada
Nombre de las alumnas:
Rubí Denzel Nava Clemente
Período Escolar:
2018-2
 Facultad de Estudios Superiores Iztacala.

Carrera de Optometría
Microbiología Aplicada

Práctica No. 1
Medios de cultivo, Tinción de Gram y Toma
de muestra
Y
Objetivos
 Aprender y realizar correctamente exudado Faríngeo y conjuntival
 Iniciación en las técnicas del estudio de microorganismos: cultivo, tinción y morfología.
 Comprender los pasos necesarios para realizar la tinción deG ram
 Reconocer los microorganismos Gram positivos y negativos, al igual de la aplicabilidad clínica de
la tinción.
 Identificar bacterias en los medios de cultivo.
 Realizar correctamente la siembra en el medio de cultivo

INTRODUCCIÓN:
Toma de muestra: Los exudados abarcan una amplia variedad de muestras según su
procedencia. Los microorganismos que se encuentran en los exudados van a estar condicionados, en
bastantes ocasiones, por el lugar donde se presente la lesión o la patología y el área adyacente a la
misma. Si se produce una herida en la piel y se infecta, es posible que la colonización proceda de la
microbiota bacteriana de la piel actuando de forma oportunista. Lo mismo puede ocurrir ante un
desequilibrio en la microbiota bacteriana de lugares como la faringe, boca o vagina.

Exudado faríngeo: Bajo visión directa y ayudándonos de un depresor lingual, se tomará la muestra
haciendo rodar el hisopo sobre las criptas tonsilares y la faringe posterior, tocando en todas las zonas
con exudado, membranas o inflamación. Debe evitarse tocar la mucosa oral, lengua o úvula para evitar
la contaminación de la muestra.

Exudado conjuntival:

La muestra debe tomarse antes de la instilación de anestésicos locales, colirios o antibióticos. La

torunda se humedecerá con suero fisiológico y se frotará con ella la conjuntiva tarsal inferior, desde el
ángulo lateral al interno. En caso de obstrucción del canal lacrimal, presionar sobre éste y recoger
exudado. Se debe utilizar un hisopo para cada ojo, marcando “derecho” e “izquierdo” en cada uno de
los medios de transporte

Tinción de gram:
De gran importancia en Microbiología porque permite diferenciar dos grandes grupos de bacterias
(Gram+ y Gram-), según se comporten ante esta tinción. El fundamento radica en la diferente
estructura de la pared celular de ambos grupos: las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de
peptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias Gram- tienen una capa de peptidoglicano
 más fina y una capa lipopolisacarídica externa. La tinción de Gram fue creada por Hans Christian
Gram a fines del siglo XIX y puede utilizarse para separar la mayoría de las especies bacterianas en
dos grandes grupos, a saber, las que captan el colorante básico, cristal violeta (es decir las bacterias
gran positivas),y las que pierden ese colorante por el lavado con el de colorante alcohol o acetona
(es decir las bacterias gram negativas).

Medios de cultivo: El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el

crecimiento de los microorganismos. La composición precisa dependerá de la especie que se quiera
cultivar, porque las necesidades nutricionales varían considerablemente. Hay microorganismos muy
poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes
que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.

Materiales

Cubre bocas Varillas de vidrio (soporte)

Lentes de protección Pizeta
Paquete de sanitas Agua destilada
Jabón para manos
Hisopos estériles
Asa bacteriológica
Portaobjetos

Reactivos Agares:
 Agar chocolate
 Agar sal y manitol

 Cristal violeta
 Solución lugol
 Alcohol acetona
 Safranina
 Metodología

Medios de cultivo:
Después de haber obtenido las muestras, realizamos siembra de cultivos:
• Técnica A

1. Consiste en cargar el asa con la muestra y hacer estrías paralelas en la cuarta parte de la superficie de la placa

2. Se quema el asa bacteriológica, se enfría, se gira la placa a 90°

3. Se vuelve a estriar tocando 3 o 4 veces el área sembrada inicialmente y cubriendo otro cuarto de la placa.

4. Por último, sin quemar el ansa, se estría el resto de la superficie sin sembrar.

Técnica B

1. Con el asa cargada se hacen 3 o 4 estrías

2. Se quema el asa, se hacen 3 o 4 estrías perpendiculares a las anteriores

3. Se quema el asa y se repite el procedimiento hasta agotar la superficie de la placa.

Tinción de Gram:
1. Coloca la muestra en el portaobjetos.

2. Fijación con calor

3. Colocar el portaobjetos en el soporte
4. Colocar cristal violeta durante un minuto

5. Enjuagar con agua destilada

6. Colocar lugol durante un minuto

7. Agregar descolorante alcohol acetona durante 30 segundos

8. Colocar colorante safranina

Análisis de resultados:

El crecimiento bacteriano realizando la siembra por estría fue claramente

observable, presentando una forma de desarrollo en colonias separadas.
Con colonias blanquecinas amarillas y grises.

Con la tinción de Gram y la observación microscópica obtuvimos como resultados que se

observó Bacterias Estreptococos Gram positivos.

En la prueba de catalasa los resultaron que las bacterias son Catalasa Positivo.
 OBSERVACIONES.
Se observó en el cultivo de agar chocolate, una siembra
contaminada.

Las colonias estaban muy aisladas y muy notadas.

Al igual que también se observó que las bacterias eran

Catalasa positivo.

Se observaron Bacterias Gram positivas

 COMPARACIÓN.
Nuestro equipo no noto aspectos diferentes en los
cultivos,comparándolos con los de otros compañeros,
ya que que las características eran muy similares.
También en la observación microscópica, la mayoría
observó Bacterias Gram positivas.
 CONCLUSIONES
En esta experiencia pudimos observar que con la de tinción de Gram
( diferencial) facilita la diferencia de una bacteria gran positiva y
Gram negativa realizando cada uno de los pasos fundamentales que
nos facilitan tener un buen resultad teniendo en cuenta que para que
se de este tipo de tinción, la pared bacteriana de peptidoglucano de
las bacterias juega un papel importante ya que esta nos permite
diferenciar el tipo de bacteria al momento de teñir la célula utilizadas
en el laboratorio ya que en el momento de teñir su estructura gruesa
o delgada de la pared permite que la célula quede incolora o con
color.