REACCIONES DE AMINOÁCIDOS Y  Se adicionó 1 ml de las soluciones problema en

PROTEÍNAS. distintos tubos de ensaye (Gelatina, peptona,

albumina, tirosina, fenilalanina y agua).
 Posteriormente, se agregó a cada tubo 2 gotas del
Introducción: reactivo de Millón.
 Finalmente, se calentaron los tubos hasta la
Objetivos: aparición de color rojo.
Resultados obtenidos en forma de tabla: Reacción de Biuret
Reacción de la  Se agregó 1 ml de las soluciones problema a
ninhidrina
utilizar en diferentes tubos de ensaye (Gelatina,
Gelatina +
peptona, albumina, aspartame, tirosina,
Peptona +
triptófano, fenilalanina y agua).
Albúmina +
 Posteriormente se adicionó a cada tubo 2 ml de
Tirosina +
Triptófano + NaOH y 4 gotas del reactivo de Biuret.
Fenilalanina +  Se observó en que soluciones apareció un color
Agua - violáceo.
Interpretación y conclusión de cada reacción:
Reacción de Millón
Gelatina + Reacción de la Ninhidrina: Para esta prueba, todas las
Peptona + soluciones problema dieron un resultado positivo a
Albúmina + excepción del agua, el color que denota un resultado
Tirosina + positivo es el violeta, en el caso de la gelatina, el color
Fenilalanina - violáceo fue muy tenue, lo que quiere decir que contiene
Agua - un nivel bajo de proteínas. Conclusión: La gelatina,
peptona, albumina, tirosina, triptófano y fenilalanina,
contienen en su estructura grupos amino libres.
Reacción de Biuret
Gelatina + Reacción de Millón: De las soluciones problema que se
Peptona - utilizaron para esta prueba, solo una de ellas resultó
Albúmina + negativa, el agua, que tuvo el papel de testigo. La prueba
Aspartame - fue positiva para aquellas soluciones que dieran un color
Tirosina - rojo. En el caso de la albumina, se obtuvo una mezcla de
Triptófano - colores, entre blanco y rojo, mientras que la fenilalanina
Fenilalanina + fue completamente una solución blanquecina.
Agua - Conclusión: La prueba de Millón identifica la presencia
de grupos fenólicos, las soluciones que lo contienen son
Fundamento: la gelatina, peptona, albumina y tirosina.

Reacción de la Ninhidrina Reacción de Biuret: En esta prueba de identificación, las

 Iniciamos colocando 1 ml de la soluciones
problema en un tubo de ensaye (Gelatina,
peptona, albumina, tirosina, triptofano,
fenilalanina y agua).
 A cada uno de los anteriores se agregaron 5 gotas
de solución de ninhidrina en butanol.
 Después, se calentaron los tubos en baño maría y
se observó la aparición de color azul o violeta.
soluciones de peptona, aspartame, tirosina, triptófano y
agua, resultaron ser negativas, en varias de ellas se obtuvo
una coloración distinta al violeta, que era el color
esperado en caso de ser una prueba positiva. Conclusión:
La gelatina, albumina y fenilalanina contienen una cadena
mayor a 3 unidades de aminoácidos al obtener un
resultado positivo en la prueba de Biuret.
Discusión:

Reacción de Millón Es evidente la variación de resultados en todas las

pruebas, el tubo de ensaye que contenía agua destilada fue
usado como testigo para comparar con las soluciones que
tenían una coloración muy tenue, ya que el agua en todas
las pruebas resultaría negativa al no contener aminoácidos
y proteínas. En la reacción de Millón, se observó que en
el tubo de albumina la coloración rojiza era parcial,
probablemente falto calentar un poco más en el baño
maría para que ese color fuera total, aunque es indudable
la presencia de grupos fenólicos en ella. En esa misma
prueba se observó que la solución de fenilalanina era
totalmente blanquecina, teóricamente se sabe que en ese
caso, la proteína precipitó y solo era necesario calentar un
poco más para que se volviera roja. En la reacción de
Biuret, los tubos que contenían peptona y albumina,
fueron descartados de un resultado positivo ya que aunque
presentaron cierta coloración no era la esperada, que era
el color violeta.
Conclusiones generales:
 Es posible diferenciar las proteínas debido a que
cada una contiene un grupo R específico.
PRECIPITACIÓN, SEPARACION Y PUNTO
ISOELÉCTRICO DE PROTEÍNAS
Introducción:
Objetivos:
Resultados obtenidos en forma de tabla:
Tabla 1. Resultados salting-out,

Biuret Interpretación
Filtrado 1 + La coloración que se obtuvo fue
violeta, con la acción del sulfato
de amonio, no se precipitó
completamente la proteína.
Precipitado + Coloración violeta, la sal
1 concentrada de sulfato de
amonio logro precipitar parte de
la proteína.
Filtrado 2 + Coloración violeta, las proteínas
que aun contenía la solución
lograron precipitar.
Precipitado - Coloración azul tenue, con el
2 filtrado anterior se logró la
precipitación completa de
proteínas.

Discusión:
Salting-out: En la práctica de reacciones de aminoácidos
y proteínas, se puso en manifiesto que la albumina
contiene proteínas, en esta práctica fue posible
precipitarlas al usar una sal neutra con altas fuerzas
iónicas, como lo fue una solución saturada de sulfato de
amonio, ya que este es un factor que disminuye la
solubilidad de las proteínas por ellos fue posible obtener
el primer precipitado después de un proceso de separación
como el centrifugado. Cuando a dicho precipitado se le
realiza nuevamente la reacción de Biuret, se utiliza NaOH
para evitar la formación de amoniaco, mientras que el
filtrado anterior también fue sometido a la misma prueba,
pero debido a que seguía conteniendo proteínas se agregó
nuevamente a otra muestra del filtrado, la sal neutra de
sulfato de amonio, con eso se logró saturar, se procedió a
filtrar y el resultado obtenido fue que se lograron
precipitar todas las proteínas ya que el último filtrado
resultó negativo a la prueba de Biuret.
Conclusiones:
 A mayor concentración de sales neutras, menor
solubilidad de proteínas (salting-out).
 A menor concentración de sal, mayor solubilidad
de las proteínas es alta (salting-in).