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En la práctica habitual del laboratorio, los experimentos se realizan siempre con poblaciones
bacterianas, a menudo tomando muestras en diversos momentos de su crecimiento en un
medio de cultivo. En el resto del capítulo nos vamos a referir al crecimiento microbiano a
escala de poblaciones. Comenzaremos con algunos métodos habituales de medir ese
crecimiento poblacional, algunos de los cuales serán aprendidos “en vivo” por el alumno en
las prácticas de laboratorio.
Inconvenientes: grandes errores, debido al líquido intercelular retenido, cuya cuantía depende
a su vez de la forma y tipo de agrupaciones de la cepa, intensidad del empaquetamiento, etc.
2) Determinación del peso seco: como el anterior, pero el sedimento se seca antes de ser
pesado (105ºC, toda la noche), hasta peso constante. Las medidas de peso seco suelen
representar el 10-15% de los valores de peso húmedo.
Inconvenientes: método tedioso (requiere mucho tiempo) y con bastantes errores: es difícil
pesar menos de 1 mg con exactitud en las balanzas habituales de laboratorio. 1 mg de peso
seco equivale a unas 5 x 10 9 bacterias.
Por supuesto, hay que realizar una curva estándar para relacionar los valores de A con la
masa bacteriana en una muestra problema.
Comentarios: hay que usar suspensiones absolutamente libres de partículas extrañas (las
pequeñas serían contabilizadas erróneamente como bacterias, y las mayores pueden obturar
el orificio del aparato).
Mientras tanto, y para luego repasar esa práctica, puedes realizar un experimento on-line
sobre crecimiento bacteriano
Precauciones:
o Para minimizar los errores estadísticos de muestreo, se recomienda sembrar 5 placas de
cada dilución;
o Hay que usar pipetas nuevas en cada dilución;
o Contar las placas donde existan entre 50 y 300 colonias.
o Como no podemos garantizar que cada colonia no proceda de más de un individuo (y
esto es especialmente cierto para bacterias que forman agrupaciones de 2 o más células),
el recuento se refiere no a “células viables reales” sino a “unidades formadoras de
colonia” (UFC). Por lo tanto, una UFC corresponde, como mínimo, a una bacteria, pero
sobre todo en bacterias con agrupaciones, la medida por siembra en placa infravalora el
número real de individuos, porque cada UFC puede corresponder a dos o más individuos
que estaban juntos al ser sembrados en la placa.
Recuento de viables por siembra en placas petri
2) Recuento sobre filtros: Se usa para suspensiones diluidas de bacterias. Se hace pasar un
gran volumen de suspensión a través de una membrana de nitrocelulosa o de nylon estériles
(con un diámetro de poro que retiene las bacterias pero permite el tránsito de sustancias).
Posteriormente, el filtro se deposita sobre la superficie de un medio de cultivo sólido. Las
colonias se forman sobre el filtro a partir de las células retenidas. Dichas colonias se cuentan,
deduciéndose la concentración original de viables en función del volumen de suspensión que
se hizo pasar por el filtro.
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