BANCO DE SANGRE

A. Determinación de grupo sanguíneo

La muestra adecuada para realizar la clasificación ABO es sangre completa con o

sin anticoagulante (EDTA, ACD). Los glóbulos rojos deben ser suspendidos en
suero o plasma autólogo, o en PBS.
1. Centrifugación de la muestra de 3500 rpm por 5 minutos y separación del
plasma de los glóbulos

2. Dilución de gota de sangre en ¾ de PBS en tubo (Tubo: 2-4%, Gel: 0,8-1%,

Microplaca: 1-3%)

3. En 7 tubos montar con 1 gota diluida + 2 suero/plasma en tubo

4. Centrifugación de lectura de 1000 rpm por 30 segundos

5. Observar en luz aglutinación o hemolisis y registrar según:

 6. Clasificación ABO y RhD: A RhD positivo; A RhD negativo; O RhD positivo
Una consideración especial corresponde a la clasificación ABO para recién
nacidos, debido a que desarrollan los anticuerpos para este sistema hasta los 3-6
meses de vida, por lo que no puede realizarse en ellos la prueba sérica,
postergando su clasificación formal después de este periodo o al primer año de
vida

B. Prueba de compatibilidad

1. Registrar numero de la tubuladura.

2. Llevar dos tubuladuras a un tubo y llenar a ¾ con PBS
3. Centrifugación 2000 x 3 minutos
4. Realizar 4 lavados en PBS
5. Realizar dilución color sandia con 1 gota del cuarto lavado diluido y montar
1 gota de GRD + 2 gotas de plasma de muestra receptora.
6. Centrifugación de lectura 1000 x 30 segundos
7. Lectura y determinación de grado de aglutinación
8. De no haber aglutinación indica compatibilidad y se incuba a 37°C por 45
minutos y de tener reactivo LIS (Solución de baja fuerza iónica) por 15
minutos.
9. Luego de la incubación centrifugar por 30 segundos a 1000 rpm de no
haber aglutinación indica compatibilidad
10. Agregar PBS al tubo hasta 3/4 y lavar 4 veces por 3 min a 2000 rpm
11. Completos los lavados eliminar el exceso de PBS girando el tubo en toalla
absorbente
12. Agregar 1 gota de SAGH y centrifugar 1000 rpm por 30 segundos
13. Registrar y de ser negativo realizar control de reactivo con células testigos.
C. Detección de Anticuerpos
Muestra: Suero o plasma obtenido a partir de sangre total sin o con
anticoagulante (EDTA, ACD), respectivamente, de acuerdo a las
especificaciones del fabricante del método o reactivo que utiliza. El uso de
plasma podría impedir la detección de anticuerpos irregulares que se revelan
solamente por la presencia de complemento adherido a los eritrocitos. Para
estudios automatizados se requiere plasma y en tests manuales es deseable el
uso de suero. Las muestras para estudio deben ser almacenadas a 4°C y las
pruebas deben ser realizadas en el menor tiempo posible, no excediendo las
72 horas desde su obtención.

1. Dos gotas de plasma receptor + 1 gota de células testigos de paneles I y II

con PA.
2. Centrifugación de lectura 30 segundos a 1000 rpm
3. De registrar resultado negativo de aglutinación agregar 1 gota de LIS e
incubar a 37°C por 15 minutos de no tener LIS por 45 minutos.
4. De registrar resultado negativo lavar con PBS 4 veces el ultimo se seca y
se agrega 1 gota de SAGH.
5. Centrifugar 30 segundos por 1000 rpm de ser negativo realizar control con
células testigo positivas.
6. Informar

D. Identificación de Anticuerpos irregulares

En caso de ser positivo, se recomienda registrar las alternativas posibles de

especificidades de los anticuerpos detectados de acuerdo al panel utilizado.
Técnica en Tubo: la lectura realizada en las tres etapas, puede permitir
diferenciar la detección de anticuerpos que actúan a temperatura ambiente, a
37°C y con SAGH. Además, la lectura y el registro de las intensidades en
cruces puede orientar a la especificidad de un solo anticuerpo o a una mezcla
de ellos.

1. Recuperar el plasma desde una muestra de EDTA

2. Montar un panel con 11 tubos khan
3. Agregar una gota de reactivo de GR y 2 gotas de plasma realizar
centrifugación de lectura

4. Resultados:
- Positivo: Posee anticuerpos (?)
 - Negativo: Sigue incubación

5. Incubación a 37°C con LIS 15 minutos sin LIS 45 minutos y centrifugación

de lectura

6. Resultados:
- Positivo: Anticuerpos IgM
- Negativo: Se continua

7. Realizar 4 lavados con PBS 2000 rpm x 3 minutos, el ultimo se seca en

papel.
8. Se agrega una gota de SAGH y centrifugación de lectura.
9. Resultados:
- Positivo: Anticuerpos IgG
- Negativo: Sin anticuerpos

10. Realizar control de SAGH con una gota y centrifugación de lectura.

11. Leer y analizar el panel.
12. En cada paso de resultados registrar los parones de aglutinación como + o
– para identificar los anticuerpos, es decir, a T° ambiente, 37°C y con
SAGH.
13. Descartar aquellas especificidades de anticuerpos para las cuales el
estudio muestra un resultado negativo (descarte por reacciones negativas)
con células de expresión homocigota.

Ejemplo:
¿Que son los anticuerpos irregulares?
Anticuerpos distintos a los anticuerpos naturales del sistema ABO, que pueden aparecer
en respuesta a la exposición a un antígeno eritrocitario extraño (transfusión o trasplante),
por incompatibilidad materno-fetal o sin un estímulo identificable

¿Cuáles son los anticuerpos mas comunes en nuestro país?

En nuestro país, los anticuerpos irregulares más frecuentemente encontrados en
donantes de sangre son: anti-Lea, anti-K y anti-E, mientras que en pacientes son: anti-D,
anti-E y anti-K. Todos estos anticuerpos son capaces de provocar hemólisis in vivo y
acortamiento en la sobrevida normal de los glóbulos rojos

¿Qué es la heterogeneidad en los anticuerpos?

Su tipo, clase de inmunoglobulina, temperatura de reacción, tipo de hemólisis asociada,
su capacidad de activar complemento

¿Aloanticuerpo?
Anticuerpo producido en un individuo que está dirigido contra antígenos eritrocitarios que
él carece, presentes en otro individuo de su misma especie.

¿Autoanticuerpo?
Anticuerpo producido en un individuo que está dirigido contra antígenos que expresan sus
propios eritrocitos.
¿Identificación básica de anticuerpos irregulares?
Procedimiento del laboratorio de inmunohematología que permite identificar la
especificidad de la mayoría de los anticuerpos eritrocitarios de importancia clínica,
detectados en el TAI. Involucra el uso de células panel de identificación básico y
técnicas con potenciadores de reacción (suero antiglobulina humana poliespecífico
y solución LISS), que permiten determinar la especificidad de anticuerpos únicos o
algunas mezclas de anticuerpos.

¿Cuándo no es posible identificar los anticuerpos en una muestra a

través del panel básico?
Se deben utilizar técnicas adicionales (fenotipo eritrocitario, panel enzimático,
elución-adsorción) o derivar a laboratorio de Referencia para completar estudio.

Anticuerpos Irregulares