Continuación de la clase de mutagénesis (Margarita Carú).

En esta clase se vera como el daño en la célula puede ser provocado por agentes
externos

Mutágenos: Exacerban el daño celular (en la molécula de DNA) el cual puede ser
reparado o fijado en la molécula de DNA.
Mutágenos químicos: muchos mutágenos existentes

Mutágenos físicos: Radiación UV: Es un mutágeno poco penetrante, tiene poca

capacidad de ingresar por lo que no se usa en organismos superiores con varias capas
celulares, pero si se utiliza en bacterias. (Material de pocas células) el rango de energía
suficiente o longitud de onda suficiente para hacer blanco en la molécula de DNA. La
radiación que produce mayor mutagénesis es la de longitud mas alta (UV-A), la
radiación B y C son atrapadas por la capa de ozono. La radiación C es altamente
ocupada (se ocupa como germicida, ya que esta longitud de onda es la que hace mejor
blanco sobre la molécula de DNA y sobre las proteínas). Incluso uno puede ser mas
preciso y decir que la longitud de onda de 254 nm es la que hace mejor blanco sobre el
DNA.
Si uno coloca cualquier dosis ya sea de un mutágeno físico o químico la cual actúa
como función de la sobrevida. ¿Cuantos son capaces de tolerar este efecto? A medida
que aumenta la dosis menos individuos sobreviven, ya que uno aumenta el daño en la
molécula de DNA. Si se ve el número de mutantes como función de la dosis (azul), uno
ve que a mayor dosis, mayor es el número de mutantes. Aquí se tienen 2 tipos de
efectos: uno es el efecto mutagénico y el otro es el efecto letal, por lo tanto a medida
que se aumenta la dosis va a disminuir la sobrevida y va aumentar el numero de
mutantes, pero llega un momento en que mueren mas de los posibles mutantes que
puedan haber y por lo tanto la curva comienza a decaer ya que comienza a haber
muchas muertes, la cual en general para todos los mutágenos se traduce en una
muerte celular.

Cual es el efecto que tiene la radiación sobre la molécula de DNA?

Uno de los posibles daños que experimenta el DNA es la presencia de dímeros, y la

radiación UV posee distintos tipos de daños (generan muchos fotoproductos en la
molécula de DNA).
Dimeros de Pirimidina:

Fig Izquierda. Dímero de pirimidina ciclobutano (TT>TC>TC>CC).

Derecha. Dímero 6-4 (TC>CC>TT>CT).
Bases que están adyacentes en una hebra y se unen por dos enlaces covalentes
(posiciones 5-5 y 6-6) para formar el dímero de pirimidina ciclobutano.
Dímero 6-4: que se da entre la posición 6 y la posición 4 de una pirimidina adyacente.
La vías que tienen para repararse estos dimeros son distintas. Por lo tanto la célula a
evolucionado para reconocer los distintos daños que se producen en la célula.
Este tipo de daño en la molécula de DNA debe ser reparado:
- se puede desdobla la dimerización y volver a la condición original
- que se produzca el reemplazo de una base por otra
Estos tipos de reparaciones van a ocurrir a nivel de la replicación, este dimero
puede informar a un templado que esta dañado, Si se lee mal, en ese momento se
tiene que la mutación se va a expresar, se va a transformar en una mutación.

En condiciones fisiológicas normales estos dimeros no se presentan, es producido

netamente por el mutágeno.
Los mutágenos presentados a continuación aumentan el daño de una molécula de
DNA que se produce en condiciones normales.

Radiación ionizante: Es mucho mas compleja.

Es más compleja ya que afecta al DNA y a las proteínas de forma directa. Se forma
radicales libres ya que se produce excitación de los electrones pasan a orbitales
superiores.
¿Que es lo que encuentra normalmente en su camino la radiación ionizante en nuestro
cuerpo?= Agua, por lo tanto va a producir radicales libres que van a producir daño
oxidativo. El daño oxidativo se produce en condiciones normales de la célula, ya que
tenemos daño oxidativo y se va a exacerbar con la radiación ionizante y la mutación va
a aumentar con la dosis y va a llegar un momento en que el daño es tan intenso que va
a generar muertes que generación de mutaciones. Todas las moléculas de la tabla son
análogos de bases, que quedan insertos en el DNA y eso es un daño para e DNA porque
tiene ya sea que remplazar esa base, y cuado se reemplaza…( no se entiende esta
parte)
Todo va a depender de la magnitud y de la intensidad de daño que tenga la molécula.
Se puede reparar el daño en condiciones normales pero el mutágeno va a producir
mayor número de sitios dañados en la célula, superando la tasa de reparación. En ese
momento se van a producir mecanismos de reparacion inducibles que van a generar ya
sea sustituciones, deleciones…etc.

Mutágenos químicos:

Acido nitroso: se usa como germicida, para evitar el crecimiento bacteriano

El acido nitroso produce desaminación Ej se tiene adenina la cual se desamina por la

presencia del acido nitroso, y como resultado se transforma en un análogo de base, la
hipoxantina. La hipoxantina posee mayor especificidad por citosina en vez de por
timina, trae como consecuencia una posterior sustitución. El mecanismo de la mayoría
de los mutágenos es generar análogos de bases y alterar la regla de apareamiento.
La desaminación ocurre normalmente pero el mutágeno exacerba la mutación.
La función como germicida del acido nitroso es producir daño en la molécula de DNA
por desaminación.
5 metilcitosina se transforma en timina, es la unica que por desaminación genera un
nucleotido que se presenta normalmente a nivel del DNA.
Ej: la hipoxantina se aparea con citosina y no con timina y si esto queda en el DNA en
este caso en la próxima ronda de replicación se produce una sustitución en una de las
hebras. Excepcionalmente, la guanina cuando se desamina y se convierte en xantina,
esta sigue apareándose con citosina, uno esperaria que ese efecto daña una de las
moléculas que se va a reparar, pero ese daño no va a ser leído como una mutación.

25.-Otros análogos de base nitrogenada.

A) 5-bromouracilo( forma ceto) analogo de la timina. Este puede aparearse con

adenina, pero también sufre tautomerismo y en su forma enol aparea con guanina.
Producen mutaciones del tipo sustitución. Este caso es diferente al caso de la
desaminación ya que este es un análogo que se incorpora a la molécula de DNA, no
esta presente en la molécula cundo se produce el cambio de metilo por bromo. El
sistema lo va a incorporar siguiendo las reglas de apareamiento y dependiendo de la
forma en que se encuentre, ceto o enol, lo va a aparear con adenina o con guanina
respectivamente.

S tiene la pareja adenina-timina, la mutación se va a producir cuando cambie esta

pareja. El Bu s incorpora frente a adenina. La hebra de adenina va a replicar y va a unir
timina, y el Bu va unir en la replicación de la otra hebra timina por que sufre cambio
tautomérico, es en ese momento donde se puede producir la mutación , ya que en al
siguiente ronda de replicación esa guanina va a servir como templado y se va a unir a
citosina , cambiando el par original A-T. La hebra podria repararse y quitar el Bu o
podria volver a generarse el ciclo con Bu incorporado

27.- Las bases poseen muchos grupos reactivos, grupos que potencialmente pueden
ser sustituidos.
Agentes alquilantes: grupos alquilos que se incorporan en la base, incluso se pueden
unir grupos más grandes que la misma base como sustituyentes.
O-6 etilguanina, O-4-etiltimina: ambas bases metiladas cambian sus especificidad de
apareamiento.

28.-

Grupos potencialmente reactivos en las 4 bases nitrogenadas. Muchas de estas bases

pueden ser cambiadas de varias maneras: muchas de ellas por alquilación y la mayoría
por metilación. En condiciones naturales, muchos procesos requieren metilación.
Agentes metilantes y metilasas existentes en la célula va a unir grupos metilos al DNA.
Uno puede exacerbar el efecto de metilación si uno pone metilmetanol sulfonato o
etilmetanolsulfonato, colocando con este último reactivo grupos etilo. Si ocurre
metilación en puntos que no son claves para la célula, como cuando se coloca un
agente metilante, la célula reconoce esa metilación como un daño en el DNA.
TODOS LOS CAMBIOS QUE SE PRODUCEN EN EL DNA TAMBIEN SON SECUENCIA
DEPENDIENTES. Las metilaciones, por ejemplo, van a adquirir valor para la replicación
en cuanto estén en un contexto de secuencia.

29.-
 Cuando uno esta expuesto a mutágenos? Existencia de hidrocarburos aromático
policíclicos (PAH) en Santiago, que son agentes potencialmente mutagénicos. Son
compuestos orgánicos derivados del benceno. No todos tienen el mismo potencial
mutagénico.
El benzopireno es un agente importante del material particulado de Santiago,
presente en cualquier combustión incompleta de materia orgánica, por lo que la
combustión de combustible fósil genera estos hidrocarburos aromáticos policíclicos.
Los organismos tienen vías de detoxificacion.

El benzo[a]pireno, asi como se ve en la figura no posee efecto mutagénico, ya

que es un compuesto insoluble en agua. El metabolismo debe eliminarlo, el
metabolismo lo hace más polar, amas soluble, agregándole grupos polares, con lo cual
se convierte en un grupo más fácil de detoxificar. Cada enzima que coopera en los
distintos pasos de detoxificacion van a poseer distintas velocidades de operación
(realizan su función a distintas velocidades). Si se diese un caso por ejemplo, que uno
de estos pasos fuese mas lento que los demás, se va a acumular uno de los
compuestos el cual puede ser un compuesto más mutagénico que el benzo[a]pireno.
El reactivo que posee un grupo epóxido es mas reactivo con las bases
nitrogenadas y va a generar un …..(no se entiende). Y este puede generar un daño en la
molécula que puede llevar a una mutación. La dosis que uno adquiera de estos
compuestos es relativa ya que no siempre uno va a adquirir la misma dosis. Es mas
peligrosos inhalarlos que digerirlos. Las poblaciones responden de manera
heterogénea a estos mutágenos (metabolismo diferencial). El cáncer a la vejiga se
produce por acumulación de estos compuesto poliaromaticos en la vejiga. Se crean
protocolos de detoxificacion, para saber, en un cierto grupo de individuos expuestos en
una zona en que halla mayor cantidad de estos agentes mutagénicos, cuales están mas
en riesgo. No existen dosis a la cual el mutageno produzca mayor daño, basta con que
haga blanco en el DNA para ser potencialmente mutagenico.
El (PAH) que se une al DNA , modificando alguna base , no tan solo cambiara la
especificidad de apareamiento, sino que también va a producir efecto estérico que va a
modificar la estructura del DNA, y esa modificación es la que la célula reconoce como
un daño .
30.-

La mayoría de los mutágenos mostrados anterior mente funcionan via la

sustitución de pares de bases
Agentes intercalantes: Son compuestos aromáticos (muchos son colorantes)
tienen una forma de interactuar con el DNA, la cual es intercalarse entre las bases del
DNA. El agente intercalante produce un desplazamiento de la molécula y eso es
favorecido cuando hay zonas que tienen una base repetida.

31.-
Cuando se produce el desplazamiento, esto hace que el sistema “lea demás”, en el
ejemplo de la figura, se ve la incorporación de una molécula de Adenina con lo cual en
la siguiente ronda de replicación se genera un par de mas A-T, o en el otro caso, se
retira una timina, por lo cual en la siguiente ronda de replicación se ve que se repita un
par A-T. (Mutaciones del tipo frameshift)

32.-

¿Que efecto tienen las mutaciones en el individuo, luego que esta se fija en el DNA?
Uno puede seguir una mutación a distintos niveles. A nivel de proteínas, a nivel de
metabolismo (proteínas mutadas insertas en rutas metabólicas) Como afecta esta
mutación a mecanismos genéticos básicos en los cuales puede tener un efecto
potenciador.Se puede ver el efecto a nivel fenotipico.

Anemia falciforme: ocurre una mutación en una de las globinas, cambia la

conformación de la proteína, tiene menos eficiencia en el transporte de oxigeno, y el
individuo presenta ciertas alteraciones en los órganos que uno reconoce como anemia
No todas las mutaciones son visibles en las proteínas. Existen proteínas mutantes que
funcionan normalmente en un cierto estado (las mutaciones no están asociadas a un
efecto deletéreo en todos los casos.
Mutaciones a nivel de producto génico:
Ejemplo de mutaciones termosensibles (figura) al subir la temperatura cambia la
conformación de la proteína. Existen aminoácidos que son claves para la mantención
de esta estructura.

33.-

Mutaciones silenciosas: se encuentra la misma codificación aunque halla la sustitución

de una base por otra.Solo se pueden ver estas mutaciones cuando se ve la secuencia
del DNA.

Mutaciones neutras: genera cambio en la codificación, el sustituyente puede tener el

mismo efecto en la actividad de la enzima, no se produce cambio funcional.

Mutaciones de sentido errado (missense): hay un cambio en la codificación, y este

cambio es drástico Ej que se cambie un aminoácido acido por uno básico. Se visualiza
en la función.
Mutaciones sin sentido (Nonsense): el cambio de una base por otra genera un codón
de término.

Nueve codones pueden resultar del cambio de una base en un codón de tirosina UAU
36.-

Camino clásico para búsqueda de mutantes:

Uno detecta un cambio fenotípico y busca si ese cambio fenotípico es heredable, y uno
puede buscar el gen que esta dañado.
Uno puede hacer esta al revés, pero es más difícil, ya que un gen no es una unidad
independiente, sino que interacciona con muchas cosas para generar un efecto
fenotipico.
Mutación mutadora: Una vez que ocurre, favorece la generación de mutaciones.
Incrementa la tasa basal de mutación (3 a 4 ordenes de magnitud) Uno puede tener
una mutación mutadora en los mecanismos de reparación (en la polimerasa). La
polimerasa puede perder la capacidad de discriminar entre lo normal y los daños.

Un gen cuando muta, esa mutación funciona dentro de un contexto fenotipico, y esa
mutación puede ser afectada por el medio.
Individuos en una población con gen “A”, entre ellos aparece individuo con gen “a”
mutante. Esto se puede revertir al fenotipo normal, en muy baja frecuencia. A esto se
le llama reversión ya que la mutación revierte por el mismo camino.
Supresion: genotipo sigue siendo mutante pero el fenotipo es normal. Hay otra
mutación que actúa sobre el fenotipo y provoca la generacion de fenotipo normal por
la supresión del fenotipo mutante.

(La profe explica esto sin nombres por lo que tendre que averiguar en la semana a que
se refiere).

Si se hace cruce entre gen que revertió y gen silvestre se ve que toda la descendencia
es silvestre.
Cuando se hace cruce entre doble mutante (supresor) y silvestre, se va a generar los
parentales (m-s; + - +) y las combinaciones (m - +; + - s) las combinaciones, al menos
una de ellas dará mutante.

Como funcionan estas mutaciones?

Mutación supresora intragénicas: en la cual se agrega una base y se tiene una mutación
de tipo frameshift, pero si se pierde una base en un triplete más allá se tiene que se
vuelve a al condición normal, se tienen 2 mutaciones

Mutación supresora intergénicas: son las más estudiadas. Estas mutaciones afectan al
mecanismo de síntesis de proteínas.
- mutaciones sin sentido y mutaciones missense: La segunda mutación afecta al
anticodón del tRNA el cual es capaz de reconocer a la 1º mutación en un codón sin
sentido o a un codón distinto, y lo va a leer, suprimiendo la segunda mutación el efecto
de la primera mutación.
Supresores fisiológicos: (indirectos) hay una mutación y se abre un bypass por la
segunda mutación para llevar a cabo la misma reacción ( ambiguo).

Se tiene el mensajero, la proteína que esta truncada por mutación sinsentido.

Esa es la primera mutación. En el anticodón ocurre 2º mutación y ahora esta es capaz
de leer el codón de termino generado, como resultado de eso la síntesis sigue y se
puede completar la proteína, se dice que ocurre en 2 genes, uno que genera la
proteína y otra en la que genera el anticodón.
 Pregunta ¿Entonces esto afectaría a todas las proteínas? Ya que si el anticodón
mutado se une a codón de stop y permite que la proteína siga traduciéndose, ¿no se
podría unir a otras proteínas e impedir el stop? R= Solo se une a proteínas truncadas
por mutación, ya que estas solo van a poseer el codón de stop para no traducirse,
mientras que las proteínas que normalmente tienen un codón de stop van a poseer
todo un ambiente( proteínas, moduladores..) que van a permitir que estas terminen de
traducir. Por lo que la unión del anticodón modificado no las afecta.

40.-

Mutación supresora descrita en hongos

Están marcados los productos génicos que controlan la síntesis de aminoácidos
aromáticos.
(De nuevo la profe explico las cosas sin nombres). Se rescarta de esto que en si las
mutaciones supresoras van a actuar de la misma manera, es decir, si se tiene una
mutación, se va a generar un a segunda mutación la cual va a suprimir la hacino de la
primera, recuperando el fenotipo normal.