Volumen 76, núm.
7, pps 3330-3337, julio de 1979
Biología celular
Endocytosis mediado en el receptor: Perspicacias de la lipoproteína
receptor system*
(lysosomes/coated hoyos y vesículas/colesterol/familiar hypercholesterolemia/hormone
acción)
MICHAEL S. BROWN Y JOSEPH L. GOLDSTEIN
Departamentos de Genética Molecular y Medicina Interna, universidad de Centro de la
Ciencia de la Salud de Texas en Dallas, 5323 Harry Hines Boulevard,
Dallas, Texas 75235
Comunicado por Harry Eagle, el 30 de abril de 1979
ABSTRAIGA El receptor de la lipoproteína de
densidad baja (LDL)
el sistema coordina el metabolismo del
colesterol, una necesidad
componente de la membrana plasma de todas
las células mamíferas.
Studcy de este sistema ha llevado a un
entendimiento realzado de
la base celular del colesterol homeostasis.
También ha traído
en foco un mecanismo importante de
regulationthe metabólico
proceso de endocytosis mediado en el receptor.
En este artículo, nosotros
primero describa endocytosis mediado en el
receptor de LDL, una secuencia
de acontecimientos en cual encuadernación del
receptor e internalization
se conectan en regiones especializadas de la
membrana plasma
hoyos cubiertos llamados. En segundo lugar,
remontamos las funciones celulares del
el colesterol se derivó de LDL interiorizado. En
tercer lugar, pruebas genéticas
se presenta para indicar que tanto la
encuadernación como internalization
de LDL son mediados por una molécula del
receptor sola
esto contiene dos sitios activos, una
encuadernación mediana y el
otro internalization. Finalmente, las
características del LDL
el sistema del receptor es usado para sugerir
modelos para sistemas del receptor
en general.
Uno de los problemas centrales en la biología
moderna es el entendimiento
del mecanismo por cual macromoléculas
extracelulares
relaciónese con receptores superficiales para
regular intracelular
acontecimientos metabólicos. Avances recientes
en el campo de biología celular
han hecho posible estudiar acontecimientos
mediados en el receptor directamente
en células mamíferas vivas. Nos hemos dado
cuenta ahora esto
los receptores de la superficie de la célula
funcionan a través de una red de subcelular
organelles. Los receptores en la membrana
plasma se comunican
con proteínas en el núcleo, endoplasmic retículo,
lysosomes,
mitochondria y otras estructuras. Cómo es esto
por toda la célula
¿la comunicación articuló? Cómo hace una
célula regulan un metabólico
el camino cuyos componentes activos residen en
el diferente
¿compartimentos subcelulares?
Las respuestas a algunas de estas preguntas
fundamentales tienen recientemente
hágase disponible a través de estudios del
receptor de la lipoproteína
sistema (1, 2). Este sistema regulador por toda la
célula coordenadas
el metabolismo del colesterol, un componente
esencial de
la membrana plasma de todas las células
mamíferas. Pero encima y
más allá de su importancia en el colesterol
homeostasis, la lipoproteína
el sistema del receptor se ha hecho reconocido
como un prototipo para
un mecanismo de regulación metabólica - el
proceso de receptor -
endocytosis mediado.
Antes de que el sistema del receptor de la
lipoproteína se describa en el
nivel celular, unos comentarios preliminares
sobre el colesterol
el metabolismo parece apropiado. Todas las
células de animal requieren el colesterol
para su plasma mrmnbranes, aún el cuerpo no
puede tolerar
el colesterol excesivo en la sangre porque sterol
insoluble deposita
en paredes de la arteria, produciendo
atherosclerosis. Así, animales
han desarrollado un mecanismo para transportar
el colesterol a través de
la sangre y entrega de ello a células, mientras al
mismo tiempo
la evitación de su acumulación excesiva. Para
este fin, colesterol
es envasado en partículas de la lipoproteína en
el hígado e intestino,
y las lipoproteínas solubles se secretan en el
plasma
y llevado a tejidos objetivo. En hombre, el más
abundante de éstos
las partículas son la lipoproteína de densidad
baja (LDL).
Las dos terceras partes del colesterol en el
plasma humano se contienen
dentro de LDL. El bulto del colesterol reside en
un apolar
el corazón en el cual cada molécula sterol es
esterified con una cadena larga
ácido graso. Este corazón de cholesteryl esters
es rodeado por a
el abrigo polar que contiene phospholipid, las
pequeñas cantidades del unesterified
el colesterol y una proteína llamaron apoprotein
B (3). En
sintetizando sus membranas, las células
requieren el colesterol unesterified.
Para usar el colesterol de LDL, las células deben
ser capaces de tomar
aparte la lipoproteína y hydrolyze el cholesteryl
esters. Esto
es donde la necesidad de organelles subcelular
múltiple entra.
La llave al proceso es un receptor de la
superficie de la célula que liga LDL
y facilita su entrada en células. La secuencia de
reacciones por
qué células usan el receptor para obtener el
colesterol se llama el
Camino del receptor de LDL.
Endocytosis mediado en el receptor de LDL:
Encuadernación
conectado a internalization vía hoyos cubiertos
Los pasos bioquímicos en el camino del receptor
LDL se inician
por la encuadernación de LDL a un receptor
específico en la célula
superficie. El receptor LDL se descubrió en 1973
a través de
estudios de piel humana fibroblasts en cultura
del tejido (4-6). El
el fondo para estos estudios está en las
observaciones de Bailey
(7) y Rothblat (8), quien en los años 1960 mostró
que cultivado
las células de animal no sintetizaron su propio
colesterol, pero mejor dicho
lo tomó de lipoproteínas que estuvieron
presentes en el suero de
el medio de la cultura.
En 1973 nuestro laboratorio observó esto
aunque humano
el suero contiene una mezcla de lipoproteínas
que llevan el colesterol,
el fibroblasts podría sacar el colesterol sólo de
LDL (4, 9).
Esto era la primera pista que las células podrían
tener un mecanismo específico
para relacionarse con una lipoproteína
específica. Entonces encontramos
que la precisión del efecto LDL fuera debido a la
existencia
de una célula revisten el receptor para LDL (6,
10).
Para estudiar el receptor, pusimos etiqueta a
LDL por 125I de modo que el
el yodo sólo se ató al componente de la proteína.
Cuando
las monocapas de fibroblasts intacto se incuban
en 4VC
con 125I-LDL, la encuadernación ocurre pero
internalization se previene
(6, 10, 11). El 1251-LDL liga a una población
sola de superficie
sitios del receptor. En 370C la encuadernación
medio máxima se consigue - en un
Concentración de LDL de aproximadamente 1
nM (6, 12). Fibroblasts humano
produzca un máximo de 20.000-50.000
receptores por célula.
La encuadernación requiere un divalent cation,
calcio o manganeso
(13). El receptor es exquisitamente sensible a
proembroma tal como
Pronase, trypsin, y chymotrypsin, pero son
resistentes a glycosidases
y otras enzimas hydrolytic (10, 13). El receptor
también es inactivated por reacciones de
modificación de la proteína, tal
como acetylation y tratamiento glutaraldehyde.
Por lo tanto creemos
que el receptor sea una proteína. El receptor liberación de heparin. El resto de las células se
reconoce el calentó entonces a 370C.
apoprotein B componente de LDL; no reconoce Después de varios tiempos, los platos
apoproteins A-I y A-II, las proteínas encontradas individuales de células se enfriaron a
en la densidad alta 40C para parar el internalization y luego se
Abreviaturas: FH, hypercholesterolemia familiar; expusieron a
LDL, lipoproteína de densidad baja (HDL), la otra heparin. Durante el período del calentamiento, la
lipoproteína principal que lleva el colesterol cantidad de LDL esto
en plasma humano (6, 14, 15). En ciertos estaba en la superficie y posteriormente
animales que son releasable por heparin
las cantidades grandes alimentadas del rehusado rápidamente, y esto fue equilibrado por
colesterol, otra lipoproteína, llamaron un aumento del
HDLC, se acumula en el plasma (16). Aunque LDL que había entrado en la célula y ya no era
HDLC no haga releasable por
contenga apoprotein B, contiene apoprotein heparin. Esto interiorizó 125I-LDL no permaneció
llamado de una proteína en la célula
E que comparte varias propiedades físicas y
químicas con durante un período largo. Después de
apoprotein B. El receptor LDL de fibroblasts
reconoce
apoprotein E y por lo tanto liga HDLC así como
LDL (16,
17).
Una propiedad importante del receptor LDL
consiste en que LDL puede
sea disociado de ello por la exposición a heparin
y otro sulfated
glycosaminoglycans (11). La capacidad de soltar
LDL del
el receptor con heparin ha proveído un
instrumento potente de cual
disecar el camino del receptor. Habiendo ligado
LDL en la célula
la superficie, cómo hace la célula extrae el
cholesteryl esters del
¿corazón de la lipoproteína? La respuesta vino
cuando las células eran
calentado a 370C y la partícula LDL entera se
encontró ser
interiorizado y degradó (10).
Fig. 1 muestra un experimento bioquímico
diseñado para seguir
el internalization de 125I-LDL ligado al receptor.
Antes de tiempo
cero, los fibroblasts se incubaron con 125I-LDL
en 4VC tan aproximadamente 30 minutos el LDL dentro de la
esa encuadernación ocurrió. Las células se célula
lavaron entonces para quitar rehusado. Al mismo tiempo, trichloroacetic ácido
LDL desatado. Un juego de células se expuso y soluble 125Ilabeled
entonces a heparin en el material apareció en el medio de la cultura.
tiempo cero. Como estas células no se habían Éstos
calentado, casi todos los productos ácidos y solubles consistieron casi
de 125I-LDL atado se soltó del receptor por completamente en el mono [125I] -
heparin. Sólo una pequeña cantidad de 125I-LDL iodotyrosine, indicando que el componente de la
era resistente a proteína del interiorizado
LDL se había digerido completamente a para ligar LDL-ferritin en 4VC y se calientan
aminoácidos entonces a 370C,
(10). Se ha mostrado que esta hidrólisis ocurre dentro de 1 minuto el LDL-ferritin se puede ver
dentro de lysosomes en hoyos cubiertos esto
(18, 19). Al mismo tiempo que la proteína de LDL tenga invaginated en la célula y han comenzado
sea hydrolyzed, a formarse cubierto
los cholesteryl esters también son hydrolyzed vesículas de endocytic (Fig. 2). Dentro de 3
(19). El minutos después de recalentamiento, éstos
el colesterol soltado dentro del lysosome entra las vesículas cubiertas separan de la membrana
en el citoplásmico y se pueden ver
el compartimento, donde se hace el regulador el transporte del LDL-ferritin en la célula. Dentro
central del colesterol de 6-8 minutos después
metabolismo (hablado abajo). calentándose, el LDL-ferritin se observa dentro
Un aspecto del experimento del calentamiento de lysosomes donde
en Fig. 1 era asombroso. el LDL se está degradando (24). El curso del
Esto era la eficacia notable del internalization. tiempo de LDL-ferritin
Los casi todos 125I-LDL ligados al receptor se el consumo en el microscopio de electrones es
interiorizaron idéntico al rápido
dentro de 15 minutos (20). Fibroblasts debe el consumo de 125I-LDL observado en los
tener un mecanismo eficiente para el enganche estudios bioquímicos. El
la encuadernación y acontecimientos agruparse de receptores LDL en hoyos cubiertos
internalization. El explica el extraordinario
la llave a este enganche resultó ser una eficacia del LDL internalization proceso. El
estructura intrigante las propiedades de hoyos cubiertos se ponen en
llamado el hoyo cubierto. Hoyos cubiertos en la una lista en la Tabla 1.
superficie de mosquito Al mismo tiempo que nosotros, juntos con
los oocytes fueron descritos en 1964 por Roth y Richard Anderson,
Porter (21), y realizaban estudios funcionales de hoyos
posteriormente estas estructuras se han cubiertos, Barbara
observado en prácticamente Pearse aislaba vesículas cubiertas del cerebro
todas las células de animal (22). Representan del cerdo. Pearse
regiones especializadas del
la superficie de la célula donde la membrana
plasma se sangra y se cubre
en su superficie citoplásmica por un material
rizado. El papel del
el hoyo cubierto en endocytosis mediado en el
receptor se reconoció en
los estudios del consumo LDL que se realizaron
en la colaboración
con Richard Anderson (23, 24).
La visualización de receptores LDL se hizo
posible
a través del uso de LDL que había sido
covalently conectado al
la proteína que contiene el hierro ferritin de modo
que la lipoproteína pudiera
véase en el microscopio de electrones (23). Los
hoyos cubiertos sólo cubren
El 2% de la superficie de la célula de fibroblasts,
aún contienen el 50-80%
de los receptores LDL (23, 25). Cuando
fibroblasts se permiten primero

mostró que el abrigo rizado se forma
predominantemente de una proteína de 180,000
peso molecular que llamó clathrin
(22, 26, 27). Pareció probable que la misma
proteína estuvo presente
en los hoyos cubiertos de fibroblasts humano. Por
lo tanto, aislamos
el clathrin del cerebro bovino cubrió vesículas,
preparó un anticuerpo
a ello, y usado este anticuerpo para manchar hoyos
cubiertos y vesículas
en fibroblasts humano (28). Por immunoperoxidase
indirecto
microscopia de electrones, el anticuerpo anti-
clathrin se observó
ligar expresamente a hoyos cubiertos en la
superficie de fibroblasts humano
y a vesículas cubiertas dentro de la célula (28). En
más
estudios microscópicos de electrones recientes
(29), Anderson se ha manifestado
esto LDL-ferritin y clathrin ambos se localiza a
los mismos hoyos cubiertos y vesículas. Estas
conclusiones levantan un crucial
pregunta: Cómo hacen los receptores LDL
encuentran su camino hacia el cubierto
¿hoyos? La respuesta ha sido sugerida por
estudios genéticos que son
hablado más tarde en el artículo.
Fig. 3 muestra una representación esquemática del
secuencial
pasos en el camino del receptor LDL ya que
surgieron del
estudios bioquímicos y ultraestructurales. Los
receptores LDL son
localizado en hoyos cubiertos. La encuadernación
de LDL es seguida de internalization
dentro de vesículas cubiertas, que rápidamente se
funden con lysosomes.
La proteína de LDL es hydrolyzed a aminoácidos, y
los cholesteryl esters son hydrolyzed por un ácido
lysosomal lipase.
El colesterol unesterified que resulta cruza el
lysosomal
la membrana y entra en el compartimento
citoplásmico, donde
realiza sus funciones celulares.
Las funciones del colesterol se derivaron del
interiorizado
LDL: papeles reguladores y estructurales
El colesterol sacado de LDL interiorizado es el
central
reactivo que media un sistema complejo de control
de la reacción esto
estabiliza la concentración de colesterol celular. Esta
estabilización
es conseguido por las tres reacciones reguladoras
ilustradas
en Fig. 3. En primer lugar, el colesterol de entrada
suprime el microsomal
enzima 3 hydroxy 3 coenzima methylglutaryl A
reductase (HMG-CoA reductase), la enzima que
controla el precio
en biosíntesis de colesterol, así apagando el
colesterol
síntesis en la célula (4, 9). En segundo lugar, el
colesterol de entrada
activa un colesterol microsomal esterifying enzima
llamada
Acyl-CoA:cholesterol acyltransferase (ACAT) de
modo que exceso
el colesterol puede ser reesterified y almacenado
como cholesteryl esters
(30, 31). Y, lo más asombroso de todos, las vueltas
de colesterol de entrada
de la síntesis del receptor LDL, previniendo entrada
adicional
de LDL y células de protección contra una de sangre. Nuestros colegas Basu et al. (13) y
sobreacumulación de Kovanen
colesterol (32). et al. (39) recientemente desarrolló un ensayo
El efecto total de este sistema es coordinar el obligatorio que mide
intracelular La actividad del receptor de LDL en membranas se
y las fuentes extracelulares del colesterol para preparó del tejido fresco
mantener homogenates. Han usado este ensayo para medir
un nivel constante de colesterol unesterified dentro el receptor
de la célula en el actividad en 16 tejidos de la vaca. Como predito de
cara de fluctuaciones en el suministro externo de la célula
lipoproteínas. estudios de la cultura, el número de afinidad alta
Fibroblasts humanos crecen en ausencia de sitios de unión de LDL
lipoproteínas porque era el más alto en las membranas de la corteza
pueden sintetizar el colesterol de acetyl-CoA. En el suprarrenal y el
otro la recopilación ovárica luteum, los dos tejidos que
la mano, cuando LDL está disponible, las células sintetizan el esteroide
preferentemente usa el las hormonas y tienen los requisitos más altos para
receptor para tomar LDL y guardar su propia el colesterol.
síntesis de colesterol En contraste, la medula suprarrenal e interstitium
suprimido. ovárico,
Además de sus papeles reguladores, colesterol que no producen cantidades grandes de esteroides,
LDL-sacado mostró mucho
realiza otros dos papeles en células cultivadas: es menos actividad vinculante LDL. La encuadernación
un componente esencial de afinidad alta también se descubrió
de membranas de la célula (33, 34) y es un en muchos otros tejidos, incluso tejido adiposo,
substrate para el myocardium,
síntesis de hormonas del esteroide (35, 36). La músculo esquelético, etc. Ninguna afinidad alta
tabla 2 pone los tipos en una lista de significativa LDL
las células cultivadas en las cuales el camino del la encuadernación se descubrió en erythrocytes
receptor LDL ha sido maduro (39).
demostrado. Estas células vienen de gente, perros, Los papeles reguladores y estructurales del
cerdos, receptor LDL en
ratones, hámsteres y vacas. En cada tipo de la células cultivadas y su distribución extendida en
célula, LDL-sacado tejidos de animal
el colesterol se usa para la síntesis de la membrana han sugerido un modelo para la función de LDL en
y para la regulación el cuerpo.
del colesterol homeostasis. Células suprarrenales
del ratón
y la vaca tiene sobre todo grandes números de
receptores LDL (35,
36). En estas células suprarrenales, el LDL-
colesterol se transfiere de
el lysosome a todavía otro compartimento - el
mitochondria,
donde la cadena del lado se hiende y el colesterol
se convierte
a hormonas del esteroide.
Como esperado de su acontecimiento extendido en
células cultivadas,
el receptor LDL desempeña un papel en una amplia
variedad de células en el
cuerpo. Ho et al. (37, 38) encontró que el camino
LDL entero El rasgo saliente de este modelo es que LDL lleva el
funciones en lymphocytes humano inmediatamente colesterol
después de su aislamiento
de sus sitios web de síntesis y absorción en el hígado edad de 15. Aunque homozygotes sean raros, su
e intestino fibroblasts
a sus sitios web de utilización en células extrahepatic. análisis genético hecho del receptor LDL posible.
Como entrega Hemos estudiado ahora fibroblasts de un gran número
colesterol a células, la partícula LDL se degrada. Así, de
el pacientes con el diagnóstico clínico de "homozygous"
El receptor de LDL sirve una función dual: permite que FH. En
células obtengan cada caso las células mostró pruebas de una
colesterol y al mismo tiempo quita LDL del plasma anormalidad primaria
(40). en el gene para el receptor LDL (42, 43). Tres clases
de
Disección genética del receptor LDL: Un el mutante alleles se ha identificado. Uno de éstos,
single Rb0, especifica
proteína que media tanto encuadernación
como internalization
Los experimentos bioquímicos y
morfológicos muestran esto
la encuadernación e internalization de LDL
es acontecimientos conectados que son
mediado a través del hoyo cubierto.
un receptor que no tiene actividad vinculante. La
Entendimiento del molecular
segunda clase de alleles,
la base de este enganche ha sido facilitada
Rb-, especifica un receptor que ha reducido, pero
por la existencia
detectable
de mutaciones humanas que ocurren
actividad vinculante. El tercer mutante allele, Rb +,
naturalmente en el gene para el
yo, especifica a
Receptor de LDL. Estas mutaciones se
el receptor fascinante que puede ligar LDL
encuentran entre pacientes quien
normalmente, pero esto
tenga hypercholesterolemia familiar llamado
no puede llevar el LDL en la célula.
de una enfermedad común
La tabla 3 muestra la distribución de estos alleles en
(FH) (41).
fibroblasts
de 50 pacientes con homozygous FH. En cada caso
FH es una enfermedad dominante autosomal que
las células
expone un gene
se encontraron mostrar pruebas para dos mutante
efecto de la dosis. Los individuos afectados muestran
alleles en el
uno de dos clínicos
lugar geométrico del receptor. Veintinueve de los
fenotipos: heterozygotes u homozygotes (41).
sujetos no muestran ninguna encuadernación
Heterozygotes
se supone que la actividad y es homozygous para
ocurra en la población en una frecuencia de cada
Rbo allele (genotipo Rbo/Rbo). Veinte del
500ma persona,
espectáculo de sujetos detectable
la colocación de FH entre las enfermedades
pero actividad vinculante marcadamente reducida.
heredadas más comunes en hombre.
Cada uno de estos sujetos
Heterozygotes tienen un 2-a la elevación de 3 pliegues
se postula tener un Rb-allele y un Rbo allele o
en el nivel plasma
segundo Rb-(genotipo Rb-/Rb0 o Rb-/Rb-). Las
de LDL y a menudo desarrollan el infarto de miocardio
células
como temprano
de un paciente tienen un defecto de internalization.
como 35 a 45 años de edad. Raramente, dos
Sus células retienen
heterozygotes se casan y
la capacidad de ligar LDL pero es incapaz de
produzca un homozygote quien hereda dos dosis del
interiorizar el receptor -
mutante
lipoproteína atada (véase abajo).
gene. Homozygotes se afectan en la infancia con
El fibroblasts de un gran número de FH
hypercholesterolemia severo
heterozygotes
con niveles de LDL plasma de 6 pliegues encima de
también se han estudiado. En cada caso, las células
normal.
muestran pruebas de
Típicamente sufren el infarto de miocardio antes el
un allele normal y uno del tres mutante alleles en el
lugar geométrico del receptor (42, 43). Así, FH, como
la mayor parte de errores innatos de
metabolismo, parece ser genéticamente heterogéneo
en esto
varias mutaciones diferentes en un lugar geométrico
solo producen un similar
síndrome clínico.
Fig. 4 ilustra las consecuencias bioquímicas del LDL
el defecto del receptor en fibroblasts de uno de los
pacientes que es
el homozygous para Rb0 allele y cuyas células
muestran el completo
encuadernación de defecto. En cada panel, las
acciones de LDL se trazan como una función de la
concentración de la lipoproteína en
el medio de la cultura. En células normales como la
concentración de
1251-LDL en el medio se aumenta, la cantidad de
LDL
ligado a los aumentos del receptor hasta que todos
los sitios se hagan
ocupado. El precio de consumo de LDL es
proporcional al
encuadernación superficial. En las células normales
los precios de hidrólisis de
tanto el apoprotein como cIolesteryl esters son
proporcionales a
la encuadernación de la superficie y consumo
celular de la lipoproteína. En
células normales, el consumo de LDL suprime la
síntesis de colesterol y
estimula el colesterol esterification.
Los resultados en células de FH negativo por el
receptor homozygote
están en el golpe del contraste. Ninguna
encuadernación superficial de 125I-LDL
se descubre en las células del mutante. Como
consiguiente, consumo de afinidad alta
de LDL no ocurre (6, 11), y el apoprotein y
cholesteryl
los componentes de ester no son hydrolyzed a
precios normales
(10, 44). Como no puede entrar en la célula, LDL no
puede suprimir
síntesis de colesterol (5, 9), y no estimula el
colesterol
esterification (30). El mensajero intracelular en el
camino LDL es el colesterol
sacado de la hidrólisis lysosomal de LDL (1, 19). A
confirme la precisión del LDL que liga el defecto en
estos FH
células de homozygote, incubamos las células con
unesterified
el colesterol se disolvió en el etanol. Este colesterol
entra en células por
la difusión a través de la membrana sin un requisito
para el
Receptor de LDL. Cuando el colesterol se añadió
en esta forma al
FH homozygote células, evitó el defecto del
receptor y
suprimido la síntesis del colesterol y estimulado el
esterification
del colesterol normalmente (9, 31, 33).
La conclusión principal de los susodichos
experimentos es esto FH
las células de homozygote tienen un defecto
primario en el receptor LDL
esto les impide degradar LDL y usar su colesterol.
Como consiguiente, el FH homozygote células debe
sintetizar su
el propio colesterol a fin de crecer.
Los estudios de FH negativo por el receptor
homozygote células
confirmado que la encuadernación de LDL a
receptores específicos es esencial
para la acción celular de LDL. ¿Pero e
internalization?
Es cualquier acción separada del receptor requerido
o es internalization
simplemente el destino inevitable de cualquier
molécula que se haga
¿ligado a la superficie de la célula? Los estudios
iniciales no dieron ningunas pruebas
para un papel para el receptor además de
encuadernación. En total normal
los sujetos, internalization encuadernación
inevitablemente seguida, y en todos los pacientes
con la encuadernación de defectos internalization
se redujeron en
proporción con la disminución en encuadernación
(42, 45). Pero entonces nosotros
encontrado un tipo de mutación que desafió esto
simple
noción. Esta mutación se observó en el fibroblasts
del
paciente único con el defecto de internalization
(iniciales J.D.). J.D.
es un muchacho de 14 años que tiene una
elevación de 6 pliegues en su plasma
Nivel de LDL y todos los otros rasgos clínicos de
homozygous
FH (20).
Fig. 5 - compara el metabolismo LDL en el
fibroblasts de J.D.
con aquellos de un sujeto normal como una función
de la concentración LDL
en el medio. En las células J.D. la encuadernación
superficial
de LDL sólo es ligeramente más bajo que en las
células normales. Sin embargo,
las células J.D. son incapaces de interiorizar LDL
atado. Como a
el resultado de este defecto del consumo, las
células J.D. no hacen hydrolyze el
proteína y cholesteryl ester componentes de
receptor-boundLDL. La síntesis de colesterol
permanece alta y colesterol esterification
no se activa. El fracaso de las células J.D. de
interiorizar
LDL es muy específico. Estas células muestran
endocytosis normal
de moléculas inertes como sacarosa y globulina
gamma
(20), y también tienen una capacidad normal de
tomar y degradar
El factor de crecimiento epidérmico 125I-marcado,
una molécula que es ligada
revestir receptores, interiorizados, y degradó en una
manera
similar a LDL (2).
El mecanismo para el defecto de internalization se
reveló
por el microscopio de electrones. Cuando J.D.'s
fibroblasts se examinaron
por la microscopia de electrones, se observó que
contenían
el mismo número de hoyos cubiertos y vesículas
como células normales y
el aspecto de los hoyos cubiertos era normal. Sin
embargo, en
contraste con fibroblasts normal en cual el 50-80%
del LDL
los receptores se localizan en los hoyos cubiertos,
prácticamente ningún LDL-ferritin
fue ligado a los hoyos cubiertos de las células J.D.
(46).
En vez de ligar a hoyos cubiertos en las células
J.D., el LDLferritin
liga a receptores LDL que se dispersan a lo largo
del no cubierto
segmentos de membrana (46). Las propiedades
obligatorias de
estos receptores son lo mismo como aquellos de
células normales. (20); ellos
están simplemente en el lugar equivocado. El
electrón asombroso microscópico
las conclusiones en las células J.D. han sido
confirmadas por Carpentier
et al. (47), quien usó la técnica de 125I-LDL
cuantitativo
autoradiografía microscópica de electrones. Está
claro que el J.D.
las células no pueden interiorizar LDL porque sus
receptores LDL no pueden
incorpórese en hoyos cubiertos.
Una explicación del defecto genético en las
células J.D. ha sido
avanzado sobre la base de estudios de fibroblasts
de padres de J.D.'s
(2, 43). Ambos padres exponen
hypercholesterolemia y otro
rasgos clínicos típicos de heterozygous FH. Sin
embargo, los dos
los padres exponen mutaciones diferentes en el
lugar geométrico del receptor. Cuando
fibroblasts de la madre se incubaron con 125I-
LDL, ellos
mitad atada de la cantidad normal de lipoproteína
(43). Estudios con
LDL-ferritin mostró que una proporción normal de
sus receptores
estaban en hoyos cubiertos (46). Cuando sus
células se calentaron a 370C,
todos 125I-LDL ligados al receptor entraron en la
célula dentro de 10
minuto (43). Así, las células de la madre eran
bioquímicamente idénticas
a aquellos de heterozygote habitual para el
negativo por el receptor
allele (genotipo +/RbO).
Una situación genética diferente era aparente en
células de J.D.'s
padre (42). Aunque tuviera el fenotipo clínico de
heterozygous
FH, sus células ligadas sobre de 1.5 pliegues más
125I-LDL que
células normales (43). La mitad de 125I-LDL
ligado al receptor era
interiorizado dentro de 10 minutos y el otro a mitad
permaneció en el
superficie durante más de 30 minutos (43).
Estudios con LDL-ferritin
confirmado que las células del padre tenían dos
poblaciones de LDL
receptores. Una de estas poblaciones se localizó
en hoyos cubiertos
y la otra población se localizó a lo largo de
segmentos no cubiertos
de membrana (46). Ligadas ambas poblaciones
de receptores
LDL-ferritin, pero cuando las células sólo se
calentaron el
LDL-ferritin que fue ligado a receptores en los
hoyos cubiertos
entrado la célula. El LDL-ferritin ligado a
receptores en el
la membrana no cubierta permaneció en la
superficie de la célula.
El descubrimiento de dos poblaciones de
receptores en el padre
las células sugirieron que también tenía un allele
normal y un mutante
allele en el lugar geométrico del receptor. Los
receptores producidos por el
allele normales se localizaron en hoyos cubiertos
y se llevaron su
LDL ligado en la célula. Los receptores
especificados por el mutante
los allele eran capaces de ligar LDL, pero eran
incapaces de hacerse incorporados
en hoyos cubiertos. Como consiguiente, el LDL
ligado a éstos
los receptores no fueron interiorizados por las
células. Este allele era
Rb designado +, j (encuadernación positivo,
internalization negativo),
y el genotipo del padre se designó +/Rb + Io
(43).
El pedigrí de la familia J.D. se muestra en Fig. 6.
Estudio de
los descendientes de este matrimonio apoyan la
noción que el Rb0
mutación en la madre y Rb +, mutación del Io en
el padre
son allelic (2, 43). El caso del índice, J.D., tiene
hypercholesterolemia severo
y el fenotipo homozygous como hablado
encima.
La hermana de J.D. es clínicamente normal. Su
fibroblasts tenía un número normal de
receptores LDL e interiorizó el atado
LDL normalmente. Probablemente heredó
allele normal de
cada padre. El hermano de J.D. tiene un
moderadamente elevado
el nivel de colesterol plasma y clínicamente
parece ser un heterozygote.
Su fibroblasts se comportó idénticamente al
padre. Ellos
ligado un algo más alto que cantidad normal de
LDL, pero
sólo la mitad de la lipoproteína atada se
interiorizó. Además, por
la microscopia de electrones, sus células, como
el padre, tenía sólo la mitad
la cantidad normal de receptores en hoyos
cubiertos. Así, el hermano
de J.D. pareció haber heredado allele normal
del
madre y Rb + Io allele del padre (Fig. 6).
Como descrito encima, las células de J.D.'s
ligaron ligeramente menos LDL que
normal. Ninguno de receptores de J.D.'s se
localizó en hoyos cubiertos y
ninguno de LDL atados se interiorizó. Este
modelo iba
explíquese si J.D. eran un compuesto genético
(genotipo
Rb/1Rb +, Io). De su madre, heredó allele
silencioso, Rbu.
De su padre, heredó allele internalization-
defectuoso,
Rb +, Io. Todos los receptores que pueden ligar
LDL son del
Rb +, 0 tipo y de ahí ninguno de LDL atados se
interioriza
(Fig. 6).
El susodicho mecanismo implica que la
mutación obligatoria y
la mutación internalization es alleles alterno en
un lugar geométrico solo
la especificación del receptor LDL. Otros
mecanismos más complejos
se podría invocar para explicar las
conclusiones en este pedigrí.
Por ejemplo, el receptor LDL podría tener
subunidades múltiples
codificado por genes independientes. La madre
podría ser heterozygous
para una mutación en el gene para la
subunidad obligatoria y
el padre podría ser heterozygous para una
mutación en otro gene
la especificación de la subunidad
internalization. En este caso J.D. iba
esté doble heterozygote; es decir, llevaría al
mutante solo
alleles en dos lugares geométricos genéticos.
Si cada receptor se formara de
una subunidad obligatoria sola y una subunidad
internalization sola,
tan doble heterozygote debería tener un
número medio normal
de sitios de unión, pero mitad de éstos debería
tener que ver con
subunidades internalization normales. Como
consiguiente, mitad del atado
LDL se debería interiorizar normalmente. Así, el
precio total
de internalization de 125I-LDL en estas células
debería ser un cuarto
esto de normal (encuadernación medio normal
de X internalization medio normales).
Sin embargo, las medidas directas muestran a
esto 125I-LDL
el internalization en células de J.D.'s es menos
del 5% del precio normal
(20, 43). Este descubrimiento tiende a excluir la
posibilidad que el
dos mutaciones implican genes para
subunidades diferentes.
Una segunda hipótesis alternativa es que el
internalization
el defecto es debido no a un defecto en el
propio receptor, pero a un defecto
en una proteína que funciona catalíticamente
para incorporar LDL
receptores en hoyos cubiertos. Por esta
hipótesis, el heterozygous
el padre tendría la mitad de la cantidad normal
de este internalization
enzima. Si esto fuera el caso, las células del
padre deberían interiorizar
todos LDL atados, pero el precio de
internalization
debería ser a mitad normal. Sin embargo, como
resumido encima, el
las células del padre se comportaron de una
moda diferente; interiorizaron
mitad de LDL atado a un precio normal y
fallado para interiorizar
la otra mitad (43). Tal descubrimiento sugiere
un stoichiometric
defecto en el receptor y no una cantidad medio
normal de un catalítico
proteína.
Sobre la base de las susodichas
consideraciones, creemos que el
la hipótesis de un lugar geométrico genético
solo con dos alleles es el más
probablemente. Su prueba requerirá el
aislamiento de la proteína del receptor
de células de J.D.'s y demostración que su
aminoácido primario
la secuencia se cambia a consecuencia de
ambas mutaciones. En vista del
pequeño número de receptores por célula, tal
prueba definitiva puede
esté lejos. Sin embargo, la hipótesis del lugar
geométrico solo es
útil en esto permite que construya un modelo
verificable para el
el mecanismo por el cual los receptores LDL se
incorporan en
hoyos cubiertos.
Nuestro modelo de trabajo se muestra en Fig.
7. Por analogía con otro
proteínas de la membrana, el receptor LDL
probablemente se sintetizará.
en polyribosomes ligado a la membrana y
glycosylated en el
Aparato de Golgi. El receptor al principio se
inserta en el
membrana plasma al azar sitios. Los datos
genéticos del
el defecto de internalization sugiere que el
receptor tiene dos activos
sitios. Uno de éstos, el sitio de unión para LDL,
debe estar en el
superficie externa de la membrana. El segundo
sitio, el internalization
sitio, permite que el receptor se reconozca
como un componente
de hoyos cubiertos. Prevemos ese este sitio
internalization
está en la superficie citoplásmica de la
membrana. Receptores esto
contenga un sitio internalization funcional
emigran lateralmente en el
avión de la membrana y racimo juntos en hoyos
cubiertos. Nuestro
la hipótesis es que esto agruparse ocurre en el
citoplásmico
superficie de la membrana a consecuencia de
una interacción específica de
el sitio internalization del receptor con la
proteína del abrigo
el clathrin o con alguna otra proteína que es
ligada a clathrin
(46). Agruparse de receptores no parece ser
inducido por la encuadernación de LDL. Todos
los datos indican esto
la secuencia entera de introducción del
receptor en el plasma
membrana, que se agrupa en hoyos cubiertos e
internalization
los beneficios continously en fibroblasts si LDL
es
presente (23, 46). Aunque los receptores LDL
probablemente sean
interiorizado cuando los hoyos cubiertos
aprietan lejos para formar vesículas cubiertas,
parecen evitar la degradación en el lysosome
(11). Cuando
la síntesis de nuevos receptores es bloqueada
por cycloheximide, fibroblasts
siga ligando e interiorizar LDL a precios
máximos
durante horas. Este descubrimiento sugiere
que los receptores se reciclan;
es decir después de que depositan su LDL en
lysosomes los receptores
vuelva a la superficie de la célula, donde ellos
otra vez racimo en el cubierto
hoyos.
El modelo en Fig. 7 puede tener la importancia
por varios motivos.
En primer lugar, explica el defecto de
internalization en J.D. Como su
los receptores anormales carecen de sitios
internalization funcionales, ellos
no son reconocidos por las proteínas
citoplásmicas esa forma cubierta
hoyos y de ahí permanecen donde al principio
se insertaron -
dispersado al azar en la superficie de la célula.
En segundo lugar, el
el modelo puede tener implicaciones para la
estructura y función de
otros receptores de la superficie de la célula
que llevan la proteína ligands en
células.
 Estas conclusiones levantan la posibilidad que
algunos receptores hormonales
El *have internalization sitios que permiten que
ellos se hagan incorporados
en hoyos cubiertos para llevar su ligands en
células. El
la pregunta entonces se levanta: lo que es la
relación entre el internalization
y degradación de una hormona y su regulador
¿acción?
Fig. 8 muestra dos modelos que se pueden
avanzar para explicar el
relación entre acción hormonal y degradación
hormonal.
El modelo primero, o secuencial, es
ejemplificado por LDL. Encuadernación
lleva internalization, que por su parte lleva a la
degradación. El
los productos de la degradación median la
acción reguladora. En
el segundo modelo, ligando al receptor es
suficiente para producir
la acción reguladora. Pero en una acción
Los modelos para otra célula revisten
paralela el receptor
sistemas del receptor
también media el internalization y degradación
En organismos multicelulares, las señales se
lysosomal de
transmiten de una célula
la hormona. El segundo modelo se diferencia
al otro en la forma de hormonas de la proteína.
desde el principio en esto
Como LDL y
la degradación no se requiere para la acción
otras proteínas de transporte plasma, las
reguladora del
hormonas de la proteína ligan a receptores
hormona. Sin embargo la degradación sirve un
en la superficie de células objetivo y sacan
fisiológico
respuestas reguladoras.
función destruyendo la hormona de modo que
Un descubrimiento reciente y sorprendente en
cada hormona
investigación del receptor
la molécula puede actuar sólo una vez. En
es esto algunas hormonas de la proteína antes
algunos casos el receptor puede
pensadas actuar
destrúyase también.
sólo en la superficie de objetivo las células de
Para la mayor parte de hormonas de la
hecho se interiorizan y
proteína, todavía no es posible elegir
degradado como las proteínas de transporte
entre estos dos modelos. Hasta ahora, ninguna
son. El más asombroso
acción reguladora de a
los ejemplos incluyen la insulina (48), factor de
se ha mostrado que la hormona de la proteína
crecimiento epidérmico (49),
requiere la degradación hormonal.
y chorionic gonadotropin (50). En cada caso el
Sin embargo, sólo unos estudios se han
consumo y
dirigido expresamente
la degradación de la hormona en las células
este punto. Es posible que una hormona con
objetivo se media por
acciones múltiples
el mismo receptor que media la acción de la
puede actuar a través de ambos de los
hormona. En cada uno
mecanismos mostrados en Fig. 8, unos
la degradación del caso ocurre dentro de
acciones reguladoras que requieren
lysosomes. En caso de epidérmico
degradación hormonal y otros
factor de crecimiento, el consumo ocurre a
ser independiente.
través de hoyos cubiertos
En el sistema del receptor LDL, el primer
esto es lo mismo como aquellos que llevan LDL
modelo en Fig. 8 era
en células (51, 52).
documentado a través del uso de varios
instrumentos experimentales. En primer lugar,
había un sistema, fibroblast humano cultivado,
en cual el
"encuadernación del acontecimiento inicial y" la
regulación de la enzima del acontecimiento
final -
se podría estudiar simultáneamente en células
enteras. En segundo lugar,
había mutantes con bloques en cada paso en
el camino y
estaba claro que un bloque en cualquiera de
estos pasos causó un fracaso
de regulación. Aunque sólo la encuadernación
e internalization
son interiorizados por endocytosis mediado en el
receptor y
degradado dentro de lysosomes nos devuelve a
nuestra inicial
el tema a saber, que la regulación metabólica se
debe considerar ahora
un problema en biología celular así como en
bioquímica clásica.
El trabajo resumido aquí no se podía haber
realizado sin
la ayuda de varios colegas capaces y fieles.
Somos sobre todo
agradecido al doctor Richard G. W. Anderson que
ha sido un inestimable
colaborador en muchos aspectos de estos
estudios. Este trabajo se apoyó
por una investigación conceden de los Institutos
Nacionales de la Salud (HL
20948).

han hablado de mutaciones, también hemos

estudiado fibroblasts
de pacientes que tienen un bloque genético en la
degradación LDL.
Estas células del mutante carecen del ácido
lysosomal lipase y así
no puede responder a LDL aunque puedan ligar e
interiorizar
esto normalmente (19). Finalmente, una vez que
estaba claro esto unesterified
el colesterol era el mensajero intracelular,
exogenous
el colesterol se podría añadir a las células del
mutante para reproducirse el
acciones de LDL y así evitar los bloques
metabólicos, confirmando
su precisión. Todos estos instrumentos todavía no
están disponibles
para cualquier sistema de la hormona de la
proteína solo. Sin embargo, imaginativo
los estudios se están realizando en muchos
laboratorios para ver
si cualquiera de estos modelos se aplica a alguno
del
hormonas de la proteína.
En un sentido más amplio, la observación que
algunas hormonas de la proteína