NUTRICION

MICROBIANA
BIOTECNOLOGÍA

Ing. José M. Reynoso

 NUTRICION MICROBIANA

Para crecer los microorganismos deben tomar

del ambiente todas las sustancias necesarias
BIOTECNOLOGÍA

para la síntesis de sus materiales celulares y para

la generación de energía.

Estas sustancias se denominan nutrientes.

En definitiva, los nutrientes se requieren para:

 Fines energéticos

 Fines biosintéticos
 NUTRICION MICROBIANA
Metabolismo:
Metabolismo
conjunto de reacciones
bioquímicas y procesos físico-químicos que
ocurren a nivel celular. Se divide en dos procesos
BIOTECNOLOGÍA

conjugados:
Catabolismo: es un proceso de degradación de compuestos (ej.:
La glucosa), resultando en la liberación de la energía retenida
en sus enlaces químicos.

Anabolismo: utilizan esta energía liberada para recomponer

enlaces químicos y construir componentes de las células como
lo son las proteínas y los ácidos nucleicos.

El catabolismo y el anabolismo son procesos acoplados que

hacen al metabolismo en conjunto, puesto que cada uno
depende del otro, permitiendo así desarrollar diversas
actividades a la célula.
 NUTRICION MICROBIANA
Metabolismo
El proceso por el cual una célula se construye a
partir de nutrientes simples tomados del exterior
se denomina anabolismo
BIOTECNOLOGÍA

Debido a que el anabolismo da como resultado

la biosíntesis bioquímica de nuevo material
celular, se lo suele denominar biosíntesis.

La biosíntesis es un proceso que requiere energía

y por consiguiente la célula debe generarla.

Al conjunto de reacciones bioquímicas que

conducen a la producción de energía utilizable
(como ATP), se denominan catabolismo.
 CLASIFICACIÓN DE NUTRIENTES

Según el destino:
BIOTECNOLOGÍA

Alimentos Constitutivos: suministran los elementos

necesarios para la síntesis de constituyentes
celulares.

Según la proporción en que intervengan se los

clasifica en:

Macronutrientes: C, H, O, H, S, P, Mg, K

Micronutrientes: Fe, Zn, Cu, Co, Ni, Mo, etc.

 CLASIFICACIÓN DE NUTRIENTES

Macronutrientes: C, H, O, H, S, P, Ca, Fe, Mg, K

 Constituyen > 95% del peso seco celular
 C, H, O, N, P, S, Ca++, Mg++, K+, Fe++
BIOTECNOLOGÍA

 C, H, O, N, P, S son componentes de CH,

proteínas, lípidos, ácidos nucleicos
 K+ : actividad de algunas enzimas
 Ca++: termorresistencia a esporas
 Mg++: Cofactor de enzimas, forma
complejos con el ATP, estabiliza ribosomas y
membrana plasmática
 Fe++ y Fe+++: forma parte de los citocromos y
es cofactor de enzimas y proteínas
 CLASIFICACIÓN DE NUTRIENTES

Micronutrientes: Fe, Zn, Cu, Co, Ni, Mo, etc.

 Se denominan también microelementos
Mn, Zn, Co, Cu, Mo, Ni
BIOTECNOLOGÍA


 Forman parte de enzimas y cofactores y
facilitan la catálisis de las reacciones y el
mantenimiento de la estructura de las
proteínas, Ej
◦ Zn: centro activo de algunas enzimas
◦ Mn: facilita la transferencia de grupos
fosfato
◦ Co: componente de la vitamina B12
 CLASIFICACIÓN DE NUTRIENTES

Según el destino:

Alimentos Energéticos: su degradación provee la

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energía necesaria para la síntesis de

constituyentes celulares.
De acuerdo a su forma de utilización, se
clasifican en:

Fototrofos (foto: luz; trofo: alimentarse) o

Fotosintéticos: utilizan la luz como fuente de
energía.

Quimiorganótrofo: utilizan compuestos orgánicos

como fuente de energía.
 CLASIFICACIÓN DE NUTRIENTES

Según el destino:

Alimentos específicos: algunos compuestos no

BIOTECNOLOGÍA

pueden sintetizarse, sino que se deben hallar

preformados. Se los denomina factores de
crecimiento (aminoácidos, bases purínicas,
pirimidínicas y vitaminas).
Los factores de crecimiento son moléculas orgánicas específicas que, en muy pequeña cantidad, algunas
bacterias necesitan para crecer. Salvo excepciones no tienen función plástica (no son sillares de
macromoléculas) ni sirven como fuente de energía. Suelen ser coenzimas o sus precursores, vitaminas, que
determinadas bacterias no pueden fabricar por sí mismas, al carecer de parte o toda de una ruta biosintética.

Ejemplos:
 Las bacterias del género Brucella requieren como factores de crecimiento en sus medios de cultivo la
biotina, niacina, tiamina y ácido pantoténico.
 Haemophilus necesita suplementos de grupos hemo y piridín-nucleótidos.
 CLASIFICACIÓN DE NUTRIENTES
Factor o vitamina Funciones principales
p-aminobenzoico (PABA) Precursor del ácido fólico
Acido fólico Metabolismo de compuestos C1,
transferencia de grupos metilo.
Biotina Biosíntesis de ácidos grasos; fijación de
BIOTECNOLOGÍA

CO2
Cobalamina (vitamina Reducción y transferencia de
B12) compuestos C1; síntesis de desoxirribosa
Niacina (ácido nicotínico) Precursor del NAD; transferencia de
electrones en reacciones redox
Riboflavina Precursor de FAD y FMN
Ácido pantoténico Precursor de la CoA
Tiamina (vitamina B1) Descarboxilaciones; transcetolasas.
Complejo B6 (piridoxal, Transformaciones de aminoácidos y
piridoxamina) cetoácidos
Hidroxamatos Compuestos que unen hierro,
solubilización y transporte del hierro al
interior celular
Grupo Vitamina K, Transportadores de electrones
BIOTECNOLOGÍA
 COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA
CÉLULA
El agua representa el 80-90 % del peso total de la
célula.
En la tabla 1 se muestra la composición elemental aproximada de la
BIOTECNOLOGÍA

Elemento
célula Porcentaje
microbiana. Funciones fisiológicas
del Peso
seco
Carbono 50 Constituyente del material celular orgánico.
Oxígeno 20 Aceptor de electrones, constituyente del agua y
compuestos orgánicos
Nitrógeno 14 Constituyente de proteínas, ácidos nucleicos,
coenzimas.
Hidrógeno 8 Constituyente del agua y de compuestos orgánicos
Fósforo 3 Constituyente de fosfolípidos, ácidos nucleicos y
coenzimas.
Azufre 1 Constituyente de aminoácidos y coenzimas
Potasio 1 Cofactor de enzimas
Sodio 1 Asociado a la presión osmótica.
Calcio 0.5 Estabilizador de la pared celular
Magnesio 0.5 Cofactor de reacciones enzimáticas.
Cloro 0.5
Hierro 0.2 Componente de los citocromos
 ESTEQUIOMETRÍA GLOBAL DE
CRECIMIENTO

El crecimiento en términos estrictamente

macroscópicos, requiere que el ambiente celular
BIOTECNOLOGÍA

contenga los elementos necesarios para formar

biomasa, como así también que la energía libre
de los sustratos consumidos exceda la energía
libre de las células y los productos.

Los compuestos suministrados como nutrientes

deben ser compatibles con la maquinaria
metabólica de la célula.
 ESTEQUIOMETRÍA GLOBAL DE
CRECIMIENTO

Una visión macroscópica del crecimiento sería

como el descrito en la siguiente figura:
BIOTECNOLOGÍA
 ESTEQUIOMETRÍA GLOBAL DE
CRECIMIENTO

Las restricciones más simples en la formulación de

un medio serían las siguientes: si queremos que la
biomasa alcance un valor X, y si además las
BIOTECNOLOGÍA

células contienen una cantidad wi (fracción en

peso del elemento i), luego los sustratos deben
proveer como mínimo wi(X) de todos los
nutrientes. Generalmente, este cálculo es más
convenientemente hecho en base al peso seco
de la célula
 ESTEQUIOMETRÍA GLOBAL DE
CRECIMIENTO
Para estos cálculos, se dispone de tablas que
aportan la composición química porcentual de
las diferentes bacterias y levaduras.
BIOTECNOLOGÍA

En general la composición química promedio de

las bacterias tiene la siguiente forma:
CH1.666N0.20O0.27 de peso fórmula: 20.7 y
composición porcentual: C:53 %; N:12 %; H: 8%;
O:19% y cenizas: 8%.
 ESTEQUIOMETRÍA GLOBAL DE
CRECIMIENTO

La formulación de medios se complica por varias

razones:
BIOTECNOLOGÍA

•Algunos sustratos se liberan como productos y no se

asimilan como material celular.

•Deben considerarse tanto las limitaciones cinéticas

como estequiométricas
 ESTEQUIOMETRÍA GLOBAL DE
CRECIMIENTO
•Nutrientes específicos pueden ser los limitantes o
productos específicos pueden ser inhibitorios, debido
a las propiedades metabólicas particulares para el
BIOTECNOLOGÍA

microorganismo.
Ejemplo:
 ESTEQUIOMETRÍA GLOBAL DE
CRECIMIENTO
El número de nutrientes es muy grande para
considerarlos a todos, por lo tanto la descripción
del sistema se hace basándose en componentes
BIOTECNOLOGÍA

claves, componentes o elementos limitantes.

Podemos encontrar componentes

limitantes estequiométricamente, es decir
que el crecimiento continúa hasta que
algún nutriente se agota
 ESTEQUIOMETRÍA GLOBAL DE
CRECIMIENTO
Otro tipo de componente limitante puede
identificarse basándose en el efecto que la
composición del medio ejerce sobre la velocidad
BIOTECNOLOGÍA

de crecimiento celular.

El componente limitante a la velocidad de

crecimiento puede identificarse para una cepa
en particular y ambiente determinado (T, pH,
conocimiento de los nutrientes, etc).

Suponemos que las células están

creciendo en un medio dado, en las
condiciones antes prescriptas
 ESTEQUIOMETRÍA GLOBAL DE
CRECIMIENTO

¿Si la concentración de un componente en

particular del medio se incrementa
BIOTECNOLOGÍA

súbitamente, se incrementará la velocidad

de la misma forma?

A menudo el medio de crecimiento se diseña para

que un simple componente sea el limitante; el
cambio en la concentración de los restantes no
alterará la velocidad de crecimiento de las
células.
 ESTEQUIOMETRÍA GLOBAL DE
CRECIMIENTO

La cantidad de masa celular formada por

células en crecimiento es proporcional a la
masa de sustrato utilizada (casi siempre
BIOTECNOLOGÍA

fuente de carbono y energía, u oxígeno).

El factor de rendimiento es la relación

definida como: (X ) Por ej: para obtener 30 g/l de
YX / S  levadura para panificación, se
(S ) consumen 60 g/l de fuente
carbonada, o sea que YX/S = 0,50
 ESTEQUIOMETRÍA GLOBAL DE
CRECIMIENTO

Si el factor de rendimiento es
aproximadamente constante para una
BIOTECNOLOGÍA

célula cultivada en un medio particular, el

conocimiento del mismo es de gran
utilidad para determinar los cambios que
se producirán en la biomasa al modificar el
sustrato.

No hay garantía acerca de la constancia

del factor de rendimiento
 ESTEQUIOMETRÍA GLOBAL DE
CRECIMIENTO
BIOTECNOLOGÍA
 ESTEQUIOMETRÍA GLOBAL DE
CRECIMIENTO
Para los quimioheterótrofos, un simple
sustrato sirve tanto de fuente carbonada
como de energía, y la utilización total del
BIOTECNOLOGÍA

sustrato puede ser escrita como:

Dividiendo la ecuación anterior por (X),

se obtiene
 ESTEQUIOMETRÍA GLOBAL DE
CRECIMIENTO
Mientras el verdadero factor de rendimiento del
crecimiento (X)/(S)asimilación es relativamente
constante, definido estequiométricamente, el
BIOTECNOLOGÍA

coeficiente de rendimiento global no lo es.

La distribución del sustrato en los tres componentes es

variable. Una población en crecimiento rápido usa más
sustrato para asimilación y energía, mientras una población
en fase estacionaria consume sustrato para mantenimiento,
sin consumo para crecimiento.
 ESTEQUIOMETRÍA GLOBAL DE
CRECIMIENTO
Es común expresar la 1 (S ) asimilación (S )energ.crecimiento (S )energ.mtto
  
ecuación YX / S (X ) (X ) (X )

de la siguiente forma:1 1 mS
 
BIOTECNOLOGÍA

( YX / S )exp o medido ( Y' X / S )teórico 

siendo mS el coeficiente de
mantenimiento y se utiliza para describir la
velocidad específica de consumo de
sustrato para el mantenimiento y la
expresión para el cálculo es la siguiente:
 dS 
 dt 
 m
mS :
X
 NUTRICIÓN MICROBIANA

El conocimiento de la nutrición microbiana permite el

cultivo de los microorganismos en el laboratorio.
BIOTECNOLOGÍA

En general, todos los microorganismos

tienen parecidos requerimientos de macro y
micronutrientes, aunque ha quedado claro
que la forma en que cada nutriente es
captado puede variar mucho entre unas
bacterias y otras, así como la cantidad
relativa de cada nutriente.
 MEDIO DE CULTIVO

Es una solución acuosa (bien

BIOTECNOLOGÍA

como tal, o bien incorporada a

un coloide en estado de gel)
en la que están presentes
todas las sustancias necesarias
para el crecimiento de un(os)
determinado(s)
microorganismo(s)
 CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO
Proporcionar una mezcla equilibrada de
OBJETIVO: los nutrientes requeridos, a
concentraciones que permitan un buen
desarrollo
BIOTECNOLOGÍA

Podría parecer razonable a primera vista el agregado en exceso

de los nutrientes. Sin embargo, al elevar su concentración,
muchos de los nutrientes resultan inhibitorios al crecimiento o
tóxicos. Los nutrientes además de estar presentes, deben estar
disponibles para ser usados por la célula
 CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO

OBJETIVO:
BIOTECNOLOGÍA

Los componentes empleados en la industria fermentativa

son complejos, siendo importante considerar diferentes
aspectos como el costo de los mismos, la disponibilidad y
la estabilidad de su composición química. Debido a que
el costo de los nutrientes representa entre el 10 al 60 %
del costo total de muchos productos obtenidos por
fermentación, se hace prioritario disminuir el costo.
 CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO
A nivel industrial, se deben usar fuentes de nutrientes
para preparar un medio que reúnan la mayoría de los
siguientes criterios:
BIOTECNOLOGÍA

1. Debe producir el máximo rendimiento de producto o biomasa

por gramo de substrato usado.
2. Debe producir la máxima concentración de producto o
biomasa.
3. Debe permitir la máxima velocidad de formación de producto.
4. Deberá tener el mínimo rendimiento en productos no deseados.
5. Deberá mantener una calidad consistente y deberá poder
conseguirse fácilmente durante todo el año.
6. Se deberán causar los mínimos problemas posibles durante la
preparación y la esterilización.
7. Se causarán los mínimos problemas posibles en otros problemas
del proceso productivo, particularmente en la aireación y
agitación, extracción, purificación y tratamiento de los desechos
 CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO

FUENTES DE CARBONO:

HIDRATOS DE CARBONO: Melazas de caña o de remolacha, granos de

BIOTECNOLOGÍA

cereales, almidón, sacarosa y lactosa.

ALCOHOLES: glicerol, manitol
HIDROCARBUROS: hexadecano, octadecano y otros

FUENTES DE NITRÓGENO:
Sales de amonio, urea, nitratos, macerado de maíz, harina de soja,
desechos de mataderos y residuos de fermentaciones,

Estas fuentes satisfacen los criterios mencionados y son muy

baratas. Sin embargo, se pueden elegir otros substratos puros más
caros si se puede reducir el costo total del proceso completo por la
el empleo de procedimientos más simples
 CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO
TENER EN CUENTA:
El medio seleccionado afectará el diseño del fermentador. Debe
considerarse el problema del cambio de escala desde laboratorio a planta
BIOTECNOLOGÍA

piloto y de allí a escala industrial

Un medio de laboratorio Un medio de alta viscosidad,

puede no ser el ideal en un necesitará también de una elevada
fermentador grande con potencia para una agitación
una baja transferencia de efectiva.
gases

Además de reunir los requerimientos para el crecimiento y la formación de

productos, el medio puede también influir en la variación del pH, la formación de
espumas, el potencial redox y la morfología del microorganismo.
Por otra parte, puede resultar necesario la provisión de precursores o
inhibidores metabólicos.
El medio también podrá afectar la recuperación de productos y el tratamiento
de efluentes
 CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO
Históricamente, se han usado en les fermentaciones materiales
naturales complejos y muchas veces indefinidos, debido a que
resultan mucho más baratos que los componentes puros. Sin
embargo, se encuentran con frecuencia variaciones entre los
BIOTECNOLOGÍA

diferentes lotes debido a las variaciones en las concentraciones de

los componentes y las impurezas de los materiales naturales, lo que
causa rendimientos impredecibles de biomasas o productos.
Como consecuencia de estas variaciones, resulta muy difícil
detectar cualquier pequeña mejora en los rendimientos. Estos
medios indefinidos, hacen con frecuencia muy problemática la
recuperación de productos y el tratamiento de los efluentes ya que
los microorganismos no consumen todos los componentes de una
fuente compleja de nutrientes. Estos componentes residuales
pueden interferir en la recuperación de productos y contribuyen al
aumento de la DBO en los efluentes. De allí que algunas industrias
se han inclinado a usar medios definidos ya que, a pesar de ser mas
costosos, permiten predecir los rendimientos de las distintas
partidas, simplificar la recuperación y purificación de productos y
los tratamientos de efluentes, por lo que el proceso global resulta
 CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO
BIOTECNOLOGÍA
 CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO
Las materias primas más importantes corresponden a la fuente de carbono y
de nitrógeno.

Las fuentes de carbono pueden ser:

BIOTECNOLOGÍA

 Hidratos de carbono como la glucosa, lactosa, sacarosa, almidón, dextrinas.

 Alcoholes como el glicerol y el manitol
 Hidrocarburos como hexadecano, octadecano y otros.

Es una práctica común, emplear polisacáridos como fuente de carbono en los

procesos fermentativos industriales. El polisacárido más disponible es el
almidón obtenido de los granos de maíz. También se obtiene de otros cereales
y de la papa.

El almidón puede separarse en las dos fracciones más importantes con agua
caliente. El componente insoluble (10 al 25 %) es la amilosa, en tanto que el
componente soluble es (75 al 90 %) es la amilopectina. La amilopectina, es
amilosa altamente ramificada mediante enlaces  (1-6) glucosídicos.
 CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO
El jarabe de maíz, un subproducto de la extracción del almidón de maíz,
es empleado principalmente como fuente de nitrógeno, no obstante
contiene ácido láctico, pequeñas cantidades de azúcares reductores y
polisacáridos complejos.
BIOTECNOLOGÍA

Dentro de los disacáridos, la sacarosa se obtiene de la caña o

remolacha azucarera. Es común emplear en los medios de
fermentación, melazas las cuales son los residuos que quedan después
de la cristalización en el proceso de azúcar refinada. El costo de las
melazas compite con los azúcares refinados, no obstante en algunos
procesos no puede emplearse la melaza pues dificulta los procesos de
extracción y purificación de los productos. La sacarosa es un disacárido
no reductor, ya que el grupo aldehído de la glucosa se une al grupo
cetona de la fructosa.

La lactosa, es el azúcar presente en la leche, es un dímero de la

galactosa y glucosa. Es un disacárido reductor. La maltosa, es la unidad
repetitiva en el almidón y la hidrólisis de la misma da dos moléculas de
glucosa. La celobiosa, es un esteroisómero de la maltosa y se obtiene
por hidrólisis de la celulosa. La maltosa y celobiosa son disacáridos
redutores.
 CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO

FUENTES DE NITRÓGENO

• Inorgánicas: amoníaco o sales de amonio: El sulfato de amonio

BIOTECNOLOGÍA

usualmente produce condiciones ácidas. Por su parte, los

nitratos normalmente tienden a alcalinizar los medios cuando
son metabolizados.

• Orgánicas:
1) Hidrolizados de Proteínas (Peptonas) de carne de diferentes
órganos y animales, pescado, caseína, harina de soja, algodón,
girasol, etc. Además de aportar nitrógeno, aportan
aminoácidos, vitaminas, fosfatos y micronutrientes como el Ca,
Zn, Fe y Cu.
2) Extracto de carne
3) Extracto de levadura: Es una mezcla de aminoácidos, péptidos,
vitaminas hidrosolubles y carbohidratos.
4) Extracto de malta: el extracto soluble en agua de la malta de la
cebada.
 CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO
PRECAUCIONES EN EL USO DE CARBOHIDRATOS
 El calentamiento de soluciones concentradas puede causar:
BIOTECNOLOGÍA

 Hidrólisis de los azúcares formación de productos

de oxidación

 Descomposición es favorecida a pH > 7

 Complejarse con fosfatos formación pigmentos

amarronados

 REACCIÓN DE MAILLARD: aldehídos, cetonas y azúcares

reductores se combinan con aminoácidos, péptidos y
proteínas para dar melanoidinas marrones

Puede causar la pérdida de aminoácidos esenciales y no estar éstos

disponibles para el metabolismo. Las condiciones óptimas para la
ocurrencia de Maillard son: pH entre 7 y 10 y altas temperaturas
 CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO

GRASAS y ACEITES
BIOTECNOLOGÍA

Son usados como antiespumantes en el proceso de

producción de antibióticos.
Los aceites vegetales de oliva, maíz, soja, algodón
son empleados por su contenido en ácidos grasos:
oleico, linoleico y linolénico.
 CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO
Además de los nutrientes antes mencionados, se debe formular una
base mineral, que aporte el resto de los ingredientes

ELEMENTOS FORMA NORMAL DEL NUTRIENTE EN EL FORMA SUMINISTRADA EN EL

BIOTECNOLOGÍA

AMBIENTE MEDIO DE CULTIVO

Glucosa, malato, acetato,
Carbono CO2, compuestos orgánicos piruvato, aminoácidos, cientos de
otros compuestos o mezclas
complejas (extracto de levadura,
peptona, etc.)
Hidrógeno H2O, compuestos orgánicos H2O, compuestos orgánicos
Oxígeno H2O, O2, compuestos orgánicos H2O, O2, compuestos orgánicos
Inorgánicos: NH4Cl, (NH4)2SO4,
Nitrógeno NH3, NO3-, N2, compuestos inorgánicos KNO3, N2
nitrogenados Orgánicos: aminoácidos, bases
nitrogenadas de nucleótidos
Fósforo PO4-3 KH2PO4, Na2HPO4
Azufre H2S, SO4 , compuestos orgánicos con S, Na2SO4, Na2S2O3, Na2S, cisteína u
-2

sulfuros metálicos otros compuestos orgánicos

azufrados
Potasio K+ en solución o como varias sales con K KCl, KH2PO4
Magnesio Mg en solución o como varias sales con Mg
+2 MgCl 2, MgSO4
Sodio Na+ en solución, NaCl o como otras sales con NaCl
Na
Calcio Ca+2 en solución, CaSO4 o como otras sales CaCl 2
con Ca
Hierro Fe+2 o Fe+3 en solución, FeS, Fe(OH)3, o como FeCl 3, FeSO4, varias soluciones de
otras sales con Fe hierro
 CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO

CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Los medios según la composición se clasifican de la siguiente forma:

Medio sintético: es un medio compuesto por nutrientes

químicamente definidos.
BIOTECNOLOGÍA

Medio complejo: Composición química exacta desconocida. Se

adicionan sustancias puras (extracto levadura, peptona o ext.
carne) o complejas de menor costo (lactosuero, melazas ,ext. soja).

Medios Enriquecidos: Son medios complejos que tienen el agregado

de sustancias muy ricas nutricionalmente como yema de huevo
(agar yema de huevo), agar sangre (medio base como agar
nutritivo con el agregado de sangre humana o animal).

Medios selectivos: pueden ser sintéticos o complejos, pero se

preparan de forma de hacerlo selectivo para un determinado
microrganismo. Es aquel al que se le agrega algún componente que
inhiba el desarrollo de algunos microorganismos pero no de todos.
Los medios selectivos a su vez pueden ser: de
• Aislamiento Directo
 CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO
CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO
Medios diferenciales: se leagregan indicadores, generalmente
colorantes que permite diferenciar durante el crecimiento a las
distintas especies
BIOTECNOLOGÍA

Por ejemplo, el agar eosina azul de metileno (EMB), es utilizado

para aislar las bacterias G(-) de las bacterias entéricas.
La eosina, es un colorante que responde a los cambios de pH,
cambiando de incoloro a negro en condiciones acídicas. El EMB,
contiene lactosa y sacarosa, pero no glucosa, como fuente de
energía, y las colonias de las bacterias entéricas, fermentadoras de
lactosa, tales como E. coli, Klebsiella y Enterobacter, acidifican el
medio y las colonias tienen el centro negro y los bordes verdosos.
En cambio, las colonias no fermentadoras de lactosa, tales como
Salmonella, Shigella o Pseudomonas, son translúcidas.
 CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO
CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO
Medios diferenciales: Algunos medios son simultáneamente selectivos y
diferenciales. Por ejemplo, el agar MacConkey: se trata de un medio de
color rosado y transparente, que posee, entre otras sustancias, lactosa,
peptonas, el colorante vital rojo neutro, sales biliares y violeta cristal.
BIOTECNOLOGÍA

Este medio es selectivo contra muchas bacterias Gram(+) debido al violeta

cristal, y también contraselecciona muchas Gram(-) debido a las sales
biliares (que son agentes tensioactivos que desorganizan muchas
membranas externas). En cambio, las Enterobacterias están evolutivamente
adaptadas a soportar sales biliares en su hábitat natural (el intestino de
vertebrados superiores), y pueden crecer en este medio.
En su faceta de medio diferencial, el agar MacConkey permite visualizar
dos tipos de Enterobacterias según que puedan o no fermentar la lactosa,
con producción de ácidos. Las bacterias fermentadoras de lactosa (Lac+),
excretan al medio gran cantidad de ácidos orgánicos, lo que provoca que
sus colonias, y sus alrededores aparezcan de color rojo intenso, debido al
viraje del rojo neutro; además, se forma un halo turbio a cierta distancia de
estas colonias, fenómeno ocasionado por la precipitación de las sales
biliares inducida por la acidez. En cambio, las bacterias Lac-, al no poder
usar la lactosa, recurren como fuente de C a las peptonas, a las que
desaminan: incorporan el esqueleto carbonado, excretando iones NH4+,
 CONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO
BIOTECNOLOGÍA
 CONTROL DE pH EN MEDIOS DE CULTIVO

Para evitar cambios excesivos en la [H+] se

añade:
Buffers a base de fosfatos: mezclas de KH2PO4 (débilmente ácida)
BIOTECNOLOGÍA

y K2HPO4 (alcalino). Solución equimolar próxima a la neutralidad.

Ventajas: acción amortiguadora y fuente de fósforo esencial
para crecimiento.

Producción de ácidos → Carbonatos ,como álcalis de reserva:

• ác. carbónico es extremadamente débil, se descompone

dando CO2, que se va a la atmósfera la adición de
carbonatos impide el acúmulo de iones hidrógeno

• Se utiliza Carbonato de Ca. Debido a la insolubilidad de los

 PRECIPITACIÓN DE MINERALES

Un problema que se encuentra con frecuencia en la

preparación de medios sintéticos, es la formación de un
precipitado después de la esterilización, especialmente
si el medio tiene una alta concentración de fosfatos,
BIOTECNOLOGÍA

debido a la formación de complejos insolubles entre los

fosfatos y ciertos cationes como el hierro y el calcio.

Aunque generalmente no afectan el valor nutritivo del

medio, pueden hacer difícil la observación y valoración
del desarrollo microbiano.

Este problema puede solucionarse, esterilizando por

separado las sales de calcio y de hierro, en solución
concentrada y agregarlas al medio esterilizado y frío.
Alternativamente puede agregarse un agente
acomplejante como EDTA
 ADICIÓN DE PRECURSORES Y REGULADORES METABÓLICOS

Algunos de los componentes de los medios de fermentación sirven para

regular la formación del producto mas que favorecer el desarrollo de los
microorganismos. Tales aditivos incluyen precursores, inhibidores e
inductores, los cuales se pueden usar para manipular el progreso de la
fermentación
BIOTECNOLOGÍA

Precursores: Compuestos que se incorporan directamente a los

productos deseados. Ejemplo: ácidofenil-acético como precursor de
cadenas laterales en síntesis de la penicilina.

Inhibidores: Adición para generar más cantidad de un producto

específico. Ejemplo: La producción de glicerol por vía microbiana.
Remoción del acetaldehído en la fermentación alcohólica. Adición
de bisulfito de sodio forma un compuesto de adición aldehido-
bisulfito.

Inductores: Compuestos que estimulan la síntesis de enzimas

requerida en un proceso industrial. Ejemplo: almidón o dextrina para
la amilasa, maltosa para la pululanasa, pectina para la pectinasa o
lactosa para la β-galactosidasa.
 FORMULACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

La formulación tiene que ver con los aspectos cuantitativos de los

medios, es decir debe establecer las concentraciones de cada
componente a ser utilizadas
Una primera aproximación con respecto a las cantidades a utilizar de las
diversas fuentes lo da el conocimiento de la composición de biomasa del
microorganismo a ser empleado. Una composición elemental y típica de la
biomasa es (en % de peso seco): Carbono, 46-48; Nitrógeno, 7-12; Fósforo, 1-3;
BIOTECNOLOGÍA

Azufre, 0.5-1.0; Mg, 0.5-1. Es decir, que si queremos formular un medio para
producir una determinada cantidad de biomasa debemos proveer las
distintas fuentes que aseguren como mínimo las cantidades de elementos
que deben ser suministrados. La composición de un medio mínimo basado en
este principio, que además tiene en cuenta los requerimientos de las fuentes
de energía, ha sido calculada por Pirt para
la producción de 10 g/l de Klebsiella aerogenes.
 OPTIMIZACIÓN

Pueden ocurrir situaciones en las cuales sea imperativo la

optimización de los medios de cultivo. Entre ellas podemos
mencionar las siguientes:

1)No existencia de información respecto a coeficientes de

BIOTECNOLOGÍA

rendimiento de macro y micro elementos para el cultivo del

microorganismo determinado.

2) Existencia de limitaciones nutricionales ocultas, especialmente de

microelementos y factores de crecimiento.

3) Uso de medios de cultivo conteniendo elementos en exceso

respecto de los requerimientos nutricionales del microorganismo en
cuestión, que pueden causar inhibición del crecimiento.

4) Ensayo de sustancias estimulantes, activadoras e inhibidoras del

crecimiento y formación del producto.

5) Empleo de fuentes nutricionales no convencionales.

 OPTIMIZACIÓN

La metodología mas elemental consiste en realizar experimentos, en

los cuales se varia la concentración del componente a ensayar
manteniéndose constante las concentraciones de los demás
ingredientes. Para organismos aerobios generalmente se utiliza como
sistema de cultivo erlenmeyers agitados.
BIOTECNOLOGÍA

En este caso, se analiza el efecto de la variable escogida sobre la

velocidad de crecimiento y la concentración de biomasa obtenida.

Si bien el procedimiento anterior es simple, es evidente que hace falta

una gran cantidad de trabajo preliminar ya que el operador no conoce
de antemano que nutriente es el limitante del crecimiento. Cuando son
varios los posibles nutrientes limitantes el método resulta poco
practico. Por otra parte puede ocurrir que la respuesta obtenida al
variar la concentración de un componente dependa de los niveles de
los otros, o sea, se produzca interacción entre componentes. Se puede
mejorar mucho la optimización en batch empleando técnicas
estadísticas o utilizando sistemas continuos con pulsos de componentes
 TIPOS O SISTEMAS DE

CULTIVO
El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las
condiciones físicas, químicas y nutritivas adecuadas para que
puedan multiplicarse de forma controlada.
 En general, podemos distinguir cultivos líquidos y sólidos en
función de las características del medio y cultivos discontinuos
y continuos en función de la disponibilidad de nutrientes en el
medio
 Sistemas de cultivo
Para un componente cualquiera del cultivo, incluida la
biomasa, se puede plantear el siguiente balance de materia
en el biorreactor
BIOTECNOLOGÍA

Acumulación = Ingreso – Salida + Formación – Consumo

(1)

donde V es el volumen de cultivo, F1 el caudal de

alimentación, F2 el de salida, Ci1 la concentración del
componente i en la alimentación y C la concentración en
el caudal de salida, la que, si el cultivo está bien
mezclado, se puede asumir idéntica a la que hay en el
biorreactor. Los restantes términos rfi y rci se refieren a la
velocidad de formación y consumo del componente i,
respectivamente.
 Sistemas de cultivo
Por otra parte, el volumen de cultivo variará en el tiempo,
según sean F1 y F2.

Suponiendo que la densidad del cultivo y de la alimentación

BIOTECNOLOGÍA

son iguales, resulta:

(2)

De acuerdo a como son F1 y F2, puede haber, básicamente

tres sistemas de cultivo
 SISTEMA DE CULTIVO EN
DISCONTINUO (Cultivo BATCH)
 Estos tipos de reactores operan con una baja concentración
celular, sobretodo en el instante inicial donde los
microorganismos permanecen en fase latente. Y por este
motivo se ha de controlar la concentración de nutrientes en el
sustrato ya que sino se podía ralentizar el proceso de
fermentación.

 Además el proceso global es más lento que si se operase de

forma continua ya que al no haber retirada de producto ni
aporte de nutrientes, en los instantes finales del proceso las
condiciones del medio son hostiles, alta concentración de
producto y baja concentración de nutrientes. Al darse
fenómenos de inhibición la fermentación tarda en
completarse
 SISTEMA DE CULTIVO EN
DISCONTINUO (Cultivo BATCH)
 El reactor se mezclará de forma completa siendo así la
concentración de cada componente en un determinado
tiempo es constante con la posición dentro del reactor. Al
finalizar el proceso, cuando se ha llegado a una conversión
fijada, la concentración a la salida de cada componente
será la misma en el interior del reactor.

 Se emplea usualmente en la industria farmacéutica,

alimentaria y biotecnológica.

 Al ser el tiempo de operación corto en relación con el

continuo, se puede asegurar de forma fácil las condiciones
asépticas durante todo el proceso de reacción.
SISTEMA DE CULTIVO EN
DISCONTINUO (Cultivo BATCH)

 El reactor se mezclará de forma completa siendo así la

concentración de cada componente en un determinado tiempo es
constante con la posición dentro del reactor. Al finalizar el
proceso, cuando se ha llegado a una conversión fijada, la
concentración a la salida de cada componente será la misma
en el interior del reactor.
SISTEMA DE CULTIVO EN
DISCONTINUO (Cultivo BATCH)
La evolución del cultivo en el tiempo, sigue una
curva típica la cual recibe el nombre de “curva de
crecimiento en batch”.

Los sucesos que tienen lugar durante la misma

pueden separarse en cuatro fases perfectamente
diferenciables: En primer lugar, existe una fase
donde prácticamente no hay división celular pero sí
aumento de la masa individual de los
microorganismos (fase “lag” o fase de retardo). Le
sigue una etapa donde el crecimiento ocurre a
velocidad específica () máxima y constante = m
(fase exponencial). Al final de esta fase se alcanza
la máxima concentración microbiana.
SISTEMA DE CULTIVO EN
DISCONTINUO (Cultivo BATCH)
Posteriormente hay un rápido período de desaceleración donde   0 y se entra en la fase
estacionaria la cual es causada por agotamiento de algún nutriente (el sustrato limitante) o
bien por acumulación de inhibidores. Durante esta fase la concentración microbiana (o de
biomasa) permanece constante. Finalmente se llega a una última etapa donde la
concentración de biomasa disminuye por autolisis o como consecuencia del metabolismo
endógeno (fase de decaimiento).

L
n
Xf
LnX

µ
m
ax

L
n
X0

t
L t
i
emp
o
SISTEMA DE CULTIVO EN
DISCONTINUO (Cultivo BATCH)
La fase lag depende además de la fase de crecimiento en que
se encuentran las células en el momento de ser sembradas y
de la composición del medio de cultivo en que fueron
crecidas. Si éste es igual a la composición del medio en que se
van a sembrar y las células están en fase exponencial, la
duración de la fase lag, en general se acorta y puede llegar a
desaparecer, lo cual es deseable ya que constituye tiempo
perdido.
La descripción matemática (modelado) de las cuatro fases
descriptas es sumamente compleja por lo que sólo veremos
una más simple que sólo contempla la fase exponencial y la
estacionaria.

De la definición de  obtenemos X = conc. de biomasa

rx =  . X
 SISTEMA DE CULTIVO EN
DISCONTINUO (Cultivo BATCH)
Hemos visto que  varía durante el cultivo, siendo un valor constante y máximo en la fase
exponencial (m) y nulo en la estacionaria. Monod ha propuesto una relación muy simple
entre el valor de  y la concentración de sustrato limitante, S, entendiéndose por éste al
componente del medio de cultivo que esté en menor proporción respecto de las necesidades
del microorganismo. Por tanto S puede ser la fuente de N, de C, algún aminoácido, etc. La
ecuación es:

 = m S
KS  S

A KS se la conoce como Constante de Saturación, y da una idea de la afinidad que tiene el

microorganismo por el sustrato en cuestión. A menor KS mayor afinidad.
Normalmente KS tiene valores muy pequeños (10-2 - 10-3 g/l) por lo que concentraciones
relativamente pequeñas de S son suficientes para hacer que:

 = m
SISTEMA DE CULTIVO EN
DISCONTINUO (Cultivo BATCH)
S
 = m rx =  . X
KS  S

Al principio del cultivo todos los nutrientes estarán en exceso, y en particular el sustrato
limitante también, por lo que la ec. se reduce a (fase exponencial)
 SISTEMA DE CULTIVO EN
DISCONTINUO (Cultivo BATCH)

en esta fase la concentración de biomasa aumenta exponencialmente

A medida que transcurre el tiempo de cultivo, S va disminuyendo (y por tanto rx) hasta
que finalmente S = 0 (fase estacionaria), y

rx = 0

lo que implica: x = cte = xf

SISTEMA DE CULTIVO EN
DISCONTINUO (Cultivo BATCH)
En
definitiva:
 Batch

El cultivo tipo "batch", si bien es quizás el más difundido, es el que

menos posibilidades de control ofrece. Una vez sembrado el medio
de cultivo y fijada la temperatura, las células quedan "libradas a su
BIOTECNOLOGÍA

propia suerte" o, dicho de otro modo, a su propia potencialidad,

que se manifiesta creciendo a la máxima velocidad que le permite
el medio de cultivo empleado, siendo el operador un mero
espectador de los acontecimientos.

En este aspecto tanto el cultivo continuo como el “batch

alimentado” superan ampliamente al "batch".
SISTEMA DE CULTIVO EN
DISCONTINUO (Cultivo BATCH)
Ventajas
 menor riesgo de
contaminación
 flexibilidad operacional
cuando los fermentadores se
utilizan para distintos
productos
 control más cercano de la
estabilidad genética del
organismo (<número de
replicaciones)
 una mejor coordinación con
estadios del proceso entre
lotes previos y posteriores
Desventajas
 Improductividad en la
operación del fermentador
 Los fermentadores deben
ser vaciados, limpiados,
esterilizados y recargados
antes de cada fermentación,
operaciones todas
esenciales, pero no
productivas.
• Existe inhibición por altas
concentraciones de sustrato
SISTEMA DE CULTIVO EN CONTINUO

Por sus características especiales permite controlar el

proceso a un valor de velocidad específica de crecimiento
() prefijado de manera muy simple. Este punto es de suma
importancia ya que el comportamiento de la mayoría de
los microorganismos se ve afectado por el valor de  al que
están creciendo. Por ejemplo, es común que a altos valores
(cercanos a m) formen diversos productos, siendo la
naturaleza de estos dependiente del microorganismo,
mientras que a bajos valores de  no los formen.

Mediante el cultivo continuo es posible estudiar el efecto

sobre el proceso de variables como pH, temperatura,
concentración de nutrientes, etc., manteniendo constante
el valor de , o bien, fijadas las anteriores, analizar el efecto
de  sobre el proceso. De este modo es posible separar los
distintos efectos y obtener información valiosa para la
mejora del proceso
SISTEMA DE CULTIVO EN CONTINUO

Para poner en marcha un cultivo continuo, se

realiza previamente un cultivo batch y en un
momento dado, normalmente cuando se agota
el substrato limitante, se comienza a alimentar
el biorreactor con medio de cultivo fresco a un
caudal F

Mediante un rebalse se logra que el volumen del cultivo permanezca constante.

El caudal de salida contendrá células, mientras que la concentración de
nutrientes será menor que en el caudal de entrada debido a que en parte fueron
consumidos por los microorganismos. Eventualmente se encontrará también
algún producto(s) proveniente de la actividad metabólica de los microorganismos
 Cultivo continuo
En el estado estacionario, las concentraciones dentro del
biorreactor permanecerán constantes en el tiempo
BIOTECNOLOGÍA

Teniendo en cuenta
que rx = µ X

D = velocidad de dilución
SISTEMA DE CULTIVO EN CONTINUO

Variable de operación
fundamental en este tipo de
F cultivos es la velocidad de
D dilución, D, la que se define como
V la relación entre el caudal de
alimentación, F, y el volumen de
cultivo, V

El valor de D corresponde a las veces que se renueva el volumen del biorreactor por unidad de tiempo, así un valor
de D= 0.25 h-1 indica que en una hora se renovó un 25 % del volumen de cultivo, o bien que al cabo de 16 hs. se habrá
renovado cuatro veces el volumen de cultivo
 SISTEMA DE CULTIVO EN CONTINUO

El valor de D corresponde a las veces que se renueva el volumen del biorreactor

F por unidad de tiempo, así un valor de D= 0.25 h-1 indica que en una hora se renovó
D un 25 % del volumen de cultivo, o bien que al cabo de 16 hs. se habrá renovado
V cuatro veces el volumen de cultivo

Podría pensarse que a estas alturas prácticamente ya no quedan microorganismos dentro del biorreactor, pero
no es así; debe tenerse en cuenta que estos se están multiplicando activamente lo cual compensa las
“perdidas” debidas a los microorganismos que son arrastrados fuera del biorreactor por el caudal de salida. Bajo
ciertas condiciones, ambos procesos se compensan de modo tal que la concentración de microorganismos se
mantiene constante en el tiempo, es decir que se habrá alcanzado un estado estacionario. En estas condiciones
también se mantendrán constantes en el tiempo las concentraciones de nutrientes, en particular la del substrato
limitante del crecimiento, y la de producto(s).
 SISTEMA DE CULTIVO EN CONTINUO
Para poner en marcha un cultivo continuo se realiza previamente
uno batch y en un momento dado se comienza a alimentar con
medio fresco con un caudal F y por un rebalse se mantiene el
volumen constante.

El caudal de salida contendrá células, medio de cultivo

BIOTECNOLOGÍA

parcialmente agotado y, eventualmente, algún producto. Si

alimentamos con medio fresco y estéril significa que X1=0 y P1=0,
por lo que sólo debemos considerar la concentración de
substrato limitante del crecimiento, S1, en la alimentación.

Balances de
masa para
X, S y P

X = biomasa
S = subs limitante
P = producto
 Cultivo continuo
BIOTECNOLOGÍA

La Fig. 16 muestra como varían la concentración de sustrato en estado estacionario

en función de la velocidad de dilución. La curva superior corresponden a distintas
ecuaciones, pudiéndose observar en la curva de abajo el efecto del mantenimiento
celular se hace notable a bajas velocidades de dilución. En ambos casos puede
apreciarse que existe un valor de D por encima del cual es X = 0. Se obtiene la
velocidad de dilución crítica Dc .
BIOTECNOLOGÍA Cultivo continuo

Si como ocurre normalmente Sl » Ks se tiene que Dc = µm, lo cual es

un criterio muy útil en el momento de seleccionar un valor de D
apropiado, ya que deberá cumplirse que D <µm. En caso
contrario ocurrirá el "lavado" del cultivo, debido a que la
velocidad de salida de las células del biorreactor será mayor que
la de crecimiento.
Debe tenerse en cuenta que la Fig. 16 se representa en caso que
µ está dado por la ecuación de Monod, pero si en medio del
cultivo hay sustancias inhibidoras del crecimiento (o son formados
por microorganismos) o el sustrato limitante es el inhibidor,
deberán emplearse las expresiones de µ correspondientes a la
presencia de este inhibidor
SISTEMA DE CULTIVO EN CONTINUO

En estado estacionario es  = D, la pregunta

que surge inmediatamente es: ¿cuánto
tiempo demora el sistema en alcanzar este
estado?. En rigor, la respuesta surge de la
misma definición de estado estacionario, es
decir cuando todas las variables del cultivo
(X, S, P, concentración de O2 disuelto y
composición de la biomasa) no varían en el
tiempo. El criterio práctico que se suele
seguir es que, una vez fijado el valor de D,
debe esperarse al menos 4.tR, donde tR se
conoce como tiempo de retención medio y
puede demostrarse que :

tR = 1 / D

Por tanto si se fija un valor de D= 0.15 h-1, habrá que esperar 26,7 hs. para suponer que se ha
alcanzado el estado estacionario, lo que deberá ser corroborado experimentalmente midiendo las
concentraciones de X, S, P hasta observar que no varían con el tiempo. Usualmente con 4.tR es
suficiente
SISTEMAS DE CULTIVO DISCONTINUO
ALIMENTADO (BATCH ALIMENTADO)

En algunos procesos industriales, tales como la producción de

levaduras para panadería y antibióticos, el reactor puede
operarse de manera semicontinua, con una corriente de
entrada de alimentación pero sin una corriente de salida; este
tipo de operación permite que la concentración de sustrato se
pueda mantener en algún valor predeterminado.

En los reactores semi-continuos el sustrato es alimentado en

cargas sucesivas y el producto no se retira hasta finalizar el
proceso. Esto indica que el volumen del medio de reacción va
variando conforme avanza el proceso.
 SISTEMAS DE CULTIVO DISCONTINUO
ALIMENTADO (BATCH ALIMENTADO)

Otro modo de operar se define como un cultivo en batch donde se

un biorreactor es alimenta continuamente medio nutritivo fresco o
alguno de sus componentes. Si el nutriente que se
empleando la técnica alimenta es el limitante del crecimiento, esta
de batch alimentado técnica permite controlar la velocidad de
(BA) o fed batch. crecimiento () del microorganismo

El BA es particularmente útil en procesos en los que el crecimiento celular y/o la

formación de producto son sensibles a la concentración del sustrato limitante,
es decir cuando el rendimiento celular o la productividad de la biomasa o del
metabolito buscado se ven afectados. Así, este método se emplea cuando se
quieren evitar fenómenos de inhibición por sustrato y se requiere alcanzar una
alta concentración de biomasa
 Batch alimentado
F(t)
Vo, Xo y So son las condiciones
SR(t) finales de dicho batch.

Es posible elegir distintas

Vf, Xf
condiciones de alimentación, ya
VR = Vf - V0 sea mediante el empleo de
V0, X0, S0 caudales variables (F = F(t)), o bien
mediante la variación de la
concentración de sustrato limitante
RESERVORIO BOMBA
BIORREACTOR (Sr=Sr(t)).

Donde
F(t): caudal de alimentación
Sr(t):concentración de sustrato de la alimentación
Vf: volumen final de trabajo
Vo: volumen al inicio de la alimentación
Xo: concentración de biomasa al inicio de la alimentación
So: concentración de sustrato limitante al inicio de la
alimentación
GRÁFICAMENTE

S0'
X.V = X0.V0 + F.SR.YX/S.t
X0.V0
X.V µ < µmax

µ = µmax

X0'.V0' S0 = 0

BATCH t = t0 BATCH ALIMENTADO t

 Batch alimentado

Para iniciar un batch alimentado valen las mismas consideraciones

que se hicieron para iniciar un cultivo continuo, salvo que en este
BIOTECNOLOGÍA

caso supondremos que se inicia la alimentación del cultivo

cuando el substrato limitante se ha agotado.

Si bien este no es un requisito indispensable, permite simplificar el

tratamiento matemático y además es un bien punto de partida
con respecto al objetivo del batch alimentado que controlar la
velocidad de crecimiento mediante la velocidad de
alimentación.
También supondremos que alimentamos con medio de cultivo
fresco y estéril, es decir que X1 = 0 y P1 = 0
 Batch alimentado

Se observa claramente que cuanto mayor es mS,

menor es la cantidad de biomasa obtenida
Diferencias entre cultivo discontinuo y
continuo

Las principales diferencias entre estos dos tipos de cultivo pueden

resumirse de la forma siguiente:

1. El cultivo continuo opera bajo condiciones de un estado de equilibrio

ya que las concentraciones de todos los componentes del cultivo son
constantes.
2. El cultivo continuo opera bajo condiciones limitantes de sustratos,
mientras que el cultivo discontinuo, en la fase exponencial, funciona
en presencia de exceso de sustrato.

3. La velocidad de crecimiento en el cultivo continuo está controlada por

la velocidad de dilución (y por bajo el control del operario) y su valor
es siempre menor que el de la velocidad especifica de crecimiento
máxima, (µmax). Por el contrario, la velocidad específica de crecimiento
en la fase exponencial de un cultivo discontinuo alcanzará la
µmax correspondiente a las condiciones que prevalezcan en el cultivo
 PRODUCTIVIDAD

La productividad volumétrica está expresada como gramos de

producto (o células) por litro y por hora y es una medida de la
perfomance del proceso.
BIOTECNOLOGÍA

En un proceso batch es necesario calcular la productividad sobre el

tiempo total del proceso, el cual incluye no solo el tiempo de
fermentación sino también el tiempo requerido para vaciar el
fermentador después de la corrida anterior, limpieza del recipiente y
llenar y esterilizar nuevamente el medio.

La productividad total está dada por la pendiente de una línea desde

el origen hasta el punto de terminación de la fermentación. La
productividad máxima está dada por una línea similar a través del
origen pero tangente a la curva de crecimiento; esto sucede a una
concentración de producto (o células) menor que el máximo.
 PRODUCTIVIDAD

El tiempo total para el proceso puede ser calculado como:

BIOTECNOLOGÍA

(47)

Donde td involucra los tiempos improductivos.

De esta forma, obtenemos la ecuación de productividad

(48)
 PRODUCTIVIDAD

En un cultivo continuo, la productividad P (g/lh) está definida por:

BIOTECNOLOGÍA

(49)

Sustituyendo la ec. 49 en la ec 13, nos queda:

(50)
 PRODUCTIVIDAD

La productividad P puede expresarse ahora como una función de la velocidad de

BIOTECNOLOGÍA

dilución.

La D necesaria para obtener máxima productividad puede calcularse derivando la ec

con respecto a D e igualando a cero

Obtenemos velocidad de dilución óptima Dopt

(51)
 PRODUCTIVIDAD (Batch vs Continuo)

Se puede comparar la productividad para la producción de masa celular, en

fermentadores batch y fermentadores continuos, examinando la relación de la ec 48
con el producto DM XM donde XM es la concentración celular que se obtiene la
BIOTECNOLOGÍA

velocidad de dilución óptima .

(52)

Y la relación entre la productividad en reactores continuos y la productividad en

reactores batch es:

(53)