 CUESTIONARIO

1. Fundamento de la coloración de Gram y de Zhiel Neelsen.

FUNDAMENTO DE LA TINCIÓN DE GRAM La afinidad gram positiva o negativa depende
de la composición química de la pared celular en la parte de su estructura física Después
de las primeros 4 pasos, al observar al microscopio todo se ve violeta. Luego del
decolorante algunas conservan su color mientras que otras se decoloran. Las violetas
son Gram positivas, las que pierden su color son Gram negativas, pues los decolorantes
orgánicos utilizados abren poros de la membrana externa de las bacterias
Gramnegativas (principalmente de lipoproteínas y lipopolisacáridos), permiten la salida
del colorante principal; al agregar el contracolor éstos quedan rojos. La técnica de Gram
se fundamenta en la diferencia existente entre los microorganismos que poseen pared
celular y los que no. Las bacterias que poseen pared celular y una gruesa capa de
peptidoglicano (Gram +), y las que no poseen pared celular, pero sí una segunda
membrana y una capa delgada de peptidoglicano (Gram -) logran teñirse de violeta, pero
sólo las Gram negativas reaccionan por la acción de un decolorante, debido a su
estructura menos rígida. Al terminar el procedimiento, se pueden identificar y
diferenciar los que son Gram + (violeta) de los Gram – (rosa) dependiendo de la
coloración que tengan los microorganismos.
Se basa en que ciertos microorganismos no son desteñidos con alcohol ácido si han sido
previamente teñidos con fucsina fenicada. A estos microorganismos se denominan
ácido-alcohol resistente. Una vez realizada la decoloración con esta mezcla se utiliza un
colorante de contraste (azul de metileno) para poder observar las células sensibles a la
decoloración con alcohol ácido. Son microorganismos ácido-alcohols resistentes las
Micobacterias, debido a la composición de su pared celular (tiene ácidos micólicos). Esta
tinción tiene interés desde el punto de vista del diagnóstico clínico puesto que algunos
microorganismos patógenos son ácido-alcohol resistentes, tales como Mycobacterium
tuberculosis (tuberculosis) o M. Leprae (lepra). La coloración clásica de Ziehl-Neelsen
requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que
contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua, provoca una nueva
solidificación de los ácidos grasos de modo que el colorante ya no puede salir de las
bacterias. Por otro lado, el calentamiento aumenta la energía cinética de las moléculas
del colorante lo cual también facilita su entrada a las bacterias. Las bacterias que
resisten la decoloración son de color rojo y la que no se ven de color azul.
Esta técnica está especialmente diseñada para bacterias acido alcohol resistente como:
* Mycobacterium tuberculosis
* Micobacterias atípicas.
* MycobacteriumLeprae.
* Mycobacterium Boris.
* Nocardiaasteroides.
* Nocardiabrasiliensis.
* Corynebacteriumamicolatum.
2. ¿Se pueden reemplazar los colorantes e contrastes en las diversas
coloraciones?
 No, ya que los exámenes están adaptados para poder observar cada microorganismo
como por ejemplo, en el examen microscópico directo de las muestras clínicas no se
utiliza ningún tipo decolorante, las muestras se extienden directamente sobre la
superficie de una porta objetos para su observación. El material que es demasiado
espeso para permitir la diferenciación de sus elementos puede diluirse con igual
volumen de solución salina fisiológica estéril.  En cambio en el examen microscópico
de las muestras clínicas levemente modificadas se utiliza un solo colorante, por lo que
todas las estructuras celulares se tiñen con la misma tonalidad (Tinta china,
AzulMetileno de Loeffler, Azul de lactofenol).  Otra técnica de tinción que permite
identificar las cápsulas bacterianas es el método de Hiss. En el cual se utilizan los mismos
reactivos que en el método de Anthony, pero que se diferencia de este último porque
en el primero es necesario fijar la muestra. Las técnicas de tinción, en general, matan los
microorganismos y no permiten apreciar la morfología de la célula viva. No permite
observar la movilidad de los microorganismos vivos, dato que en ocasiones tiene interés
analítico. Es imposible observar determinados fenómenos microscópicos, tales como
división celular (células animales, levaduras, etc.) o formación de esporas.
3. ¿Qué sucede en la coloración de esporas y en la de Zhiel Neelsen se
obvia el calentamiento por tres veces consecutivas?
La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante
atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y
enfriar con agua, provoca una nueva solidificación de los ácidos grasos de modo que el
colorante ya no puede salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento aumenta la
energía cinética de las moléculas del colorante lo cual también facilita su entrada a las
bacterias. Las bacterias que resisten la decoloración son de color rojo y las que no, se
ven de color azul ya que se utiliza azul de metileno como tinción de contraste. Si se
obviara el calentamiento en esta coloración y en la de esporas este proceso no podría
realizarse y no se observaría la presencia de bacterias que es lo que se busca con dichas
coloraciones.
4. ¿Qué sucedería si la lámina portaobjetos al término de la coloración hay
presencia de gotas de agua?
 Permite que los rayos luminosos tengan menos desviaciones cuando pasen del
portaobjetos a los lentes del microscopio. Cuando cruzan el aire se distorsiona mucho la
imagen (le llaman "aberraciones"). Los microscopios con objetivo de inmersión utilizan
una gota de aceite especial.
Al concluir el proceso de coloración, la lámina se debe colocar de canto para que se
escurra, ya que debe tenerse en cuenta que el agua y en especial el agua destilada, es
un agente decolorante, por lo que si se deja sobre el portaobjetos después de teñirlo
demasiado tiempo quita parte del colorante y esto nos perjudica al momento de ver los
resultados
5.Mencione dos maneras de cómo se realiza la fijación de la muestra
6. Explique el fundamento de la coloración gram
De gran importancia en Microbiología porque permite diferenciar dos grandes grupos
de bacterias (Gram+ y Gram-), según se comporten ante esta tinción. El fundamento
radica en la diferente estructura de la pared celular de ambos grupos: las bacterias
Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias
Gram- tienen una capa de peptidoglicano más fina y una capa lipopolisacarídica externa.
Tras la tinción con el primer colorante (Cristal violeta) se efectúa un lavado conetanol
que arrastrará al colorante sólo en las Gram (-), mientras que en las Gram (+) elcolorante
queda retenido y las células permanecerán azules. Las células Gram (-) se teñirán
después con un colorante de contraste (safranina) para que puedan observarse.
7. Explique la función del lugol y en que favorece a la coloración
8. Si.Ud, pudiera