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para
Química Clínica
Microbiología
2003
La Empresa de Producción de Biológicos “Carlos J.
Finlay” produce diagnosticadores para Química Clínica y
Microbiología bajo el cumplimiento de las Buenas
Prácticas y las ISO 9001 del 2000, las que avalan la
calidad de los mismos y permite brindar un producto que
satisfaga las necesidades de nuestros clientes.
Química Clínica..........................................................4-35
JUEGOS..................................................................................4 -16
ALT-test..............................................................................................4
AST-test..............................................................................................5
Calcio en suero...................................................................................6
CK......................................................................................................7
CK-MB...............................................................................................8
Colestest.............................................................................................9
FAL-test.............................................................................................10
Hierro................................................................................................11
Juego de Reactivos para la determinación de
Cloruro en suero................................................................................12
RapiGluco-Test..................................................................................13
SalicUrea-Test...................................................................................14
Triglitest............................................................................................15
URACID............................................................................................16
MONOREACTIVOS.................................................................... 24-30
Microbiología.............................................................36-56
Antígeno VDRL..........................................................................36
Antisueros de Enterobacterias....................................................38
Antisueros Flagelares Salmonellas.............................................40
COLORANTES............................................................................ 42-46
4
Código 337.2.030004
EPB “Carlos J. Finlay” Infanta 1162 CP 10300 Teléfono: 870-6016 FAX (537) 8795734
Email: cjfimefa@infomed.sld.cu, comercial@quimefa.minbas.cu
Web: WWW.biofinlay.sld.cu
DIAGNOSTICOS
5
Código 337.2.030005
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DIAGNOSTICOS
.120 determinaciones
PREPARACION DE LOS REACTIVOS:
CONTENIDO DEL ESTUCHE: Los reactivos están listos para usar
Reactivo 1: 2, 2 Aminometilpropanol 3,5 mol/L
(2 frascos x 120 mL) Solución Reguladora NOTA:
Reactivo 2: Solución reactivo de color Dejar que los reactivos alcancen la temperatura
(2 frascos por 120 mL) ambiente y homogeneizar perfectamente ante de usar.
Reactivo 3: Calcio 2,5 mmol/L. Solución de referencia
(1 frasco por 3 mL) MUESTRA: Suero
TECNICA DE ANALISIS
APLICACIÓN: Ensayo Ensayo Ensayo
Para la determinación de Calcio en suero por método Blanco Muestra Referencia
colorimétrico de o’cresolftaleína complexona. “PARA Reactivo 3 - - 0,05 mL
USO IN VITRO” Muestra 0,05 mL - -
Reactivo 1 2,00 mL 2,00 mL 2,00 mL
MATERIALES ADICIONALES: Reactivo 2 2,00 mL 2,00 mL 2,00 mL
Agua
Espectrofotómetro o fotómetro para lecturas a 570 nm 0,05 mL - -
Purificada
Solución de Acido clorhídrico 0,5 mol/L
Leer los valores de absorbancia contra blanco a
570 nm. El color desarrollado es estable 30 min.
PRINCIPIO DEL METODO:
CALCULO DE LA CONCENTRACION DE
El Calcio forma un complejo violeta con o-
CALCIO
cresolftaleína complexona en medio alcalino que se
Am
mide por espectrofotometría a 570 nm.
Cm = ----------- x Cr
Ar
CRITERIO DE DESEMPEÑO Y Donde:
LIMITACIONES DEL METODO: Cm: Concentración de Calcio en la muestra (mmol/L)
Linealidad: El reactivo es lineal de 1,98 mmol/L a Am: Absorbancia de la muestra
3,5 mmol/L Ar: Absorbancia de la referencia
Especificidad: No se reportan interferencias con los Cr: Concentración de Calcio en la referencia (mmol/L)
compuestos siguientes: INTERVALO DE REFERENCIA:
Hemoglobina Hasta 1,5 g/L De 2,02 a 2,60 mmol/L
Bilirrubina Hasta 0,2 g/L 342 mol/L
Magnesio Hasta 0,1 g/L 4,113 mmol/L CONTROL INTERNO DE LA CALIDAD:
Fosfatos Hasta 0,2 g/L 6,458 mmol/L Suero control con valores conocidos de Calcio
Proteínas Hasta 1,5 g/L CV 5%.
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DIAGNOSTICOS
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS: 2. Kuwana, T. y Rosalki,S.B.J.Clin. Pathol.44, (1991),817.
1. Bessey,O.,Lowry, O.H. y Brock, M.J. J. Biol. Chem. 164 Vassault, A. Gafmeyer, D. et coll., Ann. Biol.. Clin., 44 (1986),686
(1946),321.
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DIAGNOSTICOS
NOTA: ALMACENAMIENTO:
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/Enzimático- Colorimétrico MUESTRA: Suero
100 determinaciones
recomienda no usarlo cuando las lecturas del blanco 2. Henry, RJ,: Cannon, D.C; Winkelman, J. W.: Química
Clínica. Bases yy Técnicas. Editorial Jims. 2da Edición. Tomo
sean superiores a 0,16 II (1980)
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Test Enzimático – Colorimétrico de Solución Reactivo Color (Reactivo 3). Mezclar
50 determinaciones suavemente por inversión.
Reactivo 1 y 4: Listos para usar
CONTENIDO DEL ESTUCHE: ADVERTENCIA:
Al preparar el reactivo de trabajo no debe agitarse pues
Reactivo 1: Urea, solución de referencia podría causar la desnaturalización de la enzima.
( 1 frasco por 2 mL)
Reactivo 2: Ureasa, liofilizada de 4 a 10 U/mL MUESTRA: Suero o plasma
(1 bulbo)
Reactivo 3: Solución reactivo color TECNICA DE ANALISIS
(1 frasco por 100 mL)
Reactivo 4: Solución reactivo alcalino Ensayo Ensayo Ensayo
( 1 frasco por 100 mL) Blanco Muestra Referencia
Agua
APLICACIÓN: 0,02 mL - -
purificada
Muestra - 0,02 mL -
Para la determinación de Urea en suero por método Reactivo 1 - - 0,02 mL
enzimático colorimétrico. “PARA USO IN VITRO”
Reactivo de
2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL
Trabajo
MATERIALES ADICIONALES:
Mezclar e incubar a 37 ºC durante 5 min.
Espectrofotómetro o fotómetro para lecturas a 620 nm, Reactivo 4 2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL
baño termostatado, pipetas.
Mezclar e incubar a 37 ºC durante 5 min. Leer los
PRINCIPIO DEL METODO: valores de absorbancia de la muestra y la referencia
contra blanco a 620 nm. Color desarrollado estable 1h.
Reacción enzimática de la Urea presente en la muestra,
según las reacciones que se describen a continuación, CALCULO DE LA CONCENTRACION DE
formándose un complejo coloreado que se cuantifica UREA
por espectrofotometría. Am
Cm = ----------- x Cr
Ureasa Ar
Urea + 2H2O Acido Carbónico + 2NH3 Donde:
37 ºC Cm: Concentración de la muestra (mmol/L)
Am: Absorbancia de la muestra
Ar: Absorbancia de la referencia
Na2Fe (CN)5NO Cr: Concentración de la referencia (mmol/L)
NH3 + NaCLO + Salicilato de sodio Indofenol
NaOH + H 2O INTERVALO DE REFERENCIA:
De 1,7 a 8,3 mmol/L
CRITERIO DE DESEMPEÑO Y
LIMITACIONES DEL METODO: CONTROL INTERNO DE LA CALIDAD:
Suero control de parámetros químicos.
Linealidad: El reactivo es lineal en un rango de 1,5 a CV < 7 %
26,0 mmol/L
ALMACENAMIENTO:
PREPARACION DE LOS REACTIVOS: De 2 a 8 ºC
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
Reactivo de trabajo: Tomar un bulbo de la enzima 1. Tabbacco. A, Melattini, F; Moda, E; Tarli, P: Clin.
(Reactivo 2) y restituir con el contenido de un frasco Chemn, 25, 336 a 337, (1979)
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2. Henry, RJ,: Cannon, D.C; Winkelman, J. W.: Química
Clínica. Bases yy Técnicas. Editorial Jims. 2da Edición. Tomo
II (1980)
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DIAGNOSTICOS
Test Enzimático – Colorimétrico PREPARACION DEL REACTIVO Y
(240 Determinaciones) ESTABILIDAD DEL MISMO:
Mezclar 20 volúmenes del Reactivo 1 con un
CONTENIDO DEL ESTUCHE volumen del Reactivo 2.
Reactivo 1: Triglicéridos/LPL Estabilidad: 1 mes de 2 a 8 °C
(4 frascos por 122 mL) MUESTRA: Suero
Reactivo 2: Triglicéridos/GPO TÉCNICA DE ANÁLISIS
(1 frasco por 26 mL) ENSAYO ENSAYO ENSAYO
Reactivo 3: Glicerol 2,28 mmol/L Blanco Muestra Referencia
Solución de referencia Reactivo de trabajo 2 mL 2 mL 2 mL
Agua purificada 20L - -
(1 frasco por 5 mL)
Solución de referencia - - 20L
APLICACIÓN PROPUESTA
Muestra - 20L -
Para la determinación de Triglicéridos en suero
Mezclar e incubar a 37ºC, durante 5 min. Leer los
por método enzimático. “PARA USO IN VITRO”
MATERIALES ADICIONALES valores de absorbancia de la muestra y la
referencia contra el blanco a 546 nm (520 a 570).
Espectrofotómetro o fotómetro para lecturas a 546
nm (520 a 570) El color desarrollado es estable 30 min
CALCULO DE LA CONCENTRACION DE
PRINCIPIO DEL METODO:
Reacción enzimática de los Triglicéridos presente en la TRIGLICERIDOS.
muestra, según las reacciones que se describen a Cm = Am x Cr/Ar
continuación, formándose un complejo coloreado que Donde:
se cuantifica por espectrofotometría. Cm: Concentración de la muestra (mmol/L)
LPL Am: Absorbancia de la muestra
Triglicéridos + H2O Glicerol + ácidos grasos Ar: Absorbancia de la referencia
GK Cr: Concentración de la referencia (mmol/L)
Glicerol + ATP Glicerol-3-fosfato +ADP
Mg + + INTERVALO DE REFERENCIA:
Hombres: de 0,68 a 1,88 mmol/L
GPO Mujeres: de 0,46 a 1,60 mmol/L
Glicerol-3-fosfato + O2 Fosfato Dehidroxiacetona CONTROL INTERNO DE LA CALIDAD:
+H2O2 Suero Control de lípidos.
POD CV 5%
2H2O2 + 4 aminoantipirina +ADPS quinonimina
MATERIALES DE REFERENCIA
roja + 4H2O
ADPS=N-Ethyl-N-sulfopropyl-n-methoxyaniline UTILIZADOS
¡
LPL = lipoprotein lipasa ELICAL. Firma Elitech Cat. No Cali-0500
GK = Glicerol Kinasa Elitrol I Cat. No CONT-0060
GPO = Glicerol-3-fosfato oxidasa Elitrol II Cat. No CONT-0160
POD = Peroxidasa
CRITERIO DE DESEMPEÑO Y ALMACENAMIENTO:
LIMITACIONES DEL METODO: Para el producto intacto: de 2 a 8 C
LINEALIDAD : El reactivo es lineal en un rango
de concentración de Triglicéridos de 0,7 a REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
15,10 mmol/L 1. Buccolo G., David M, Clin Chem., 19, (1973), 476
Limite de detección : 0,09 mmol/L 2. Werner M., Grabielson D. G., Eastman G., Clin.
Interferencias :Concentraciones de bilirrubina de Chem., 21, (1981)
150,5 mol/L o más y de 0,28 mmol/L de ácido Annoi G., Bottasso B.M., Ciaci D., Donato M.F., Tripoli A.,
ascórbico o más, disminuye la concentración de Lab J. J. Res. Lab Med., (1982), 11
triglicéridos en el suero humano.
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Código 337.2.693380
EPB “Carlos J. Finlay” Infanta 1162 CP 10300 Teléfono: 870-6016 FAX (537) 8795734
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DIAGNOSTICOS
5Test Enzimático – Colorimétrico PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE
(120 Determinaciones) TRABAJO Y ESTABILIDAD DEL MISMO:
Reactivo de trabajo: Restituir el volumen de 1 bulbo
CONTENIDO DEL ESTUCHE: de Reactivo 1 con 60 mL de Reactivo 2. Mezclar
Reactivo 1: Urato-oxidasa/POD (2 bulbos liofilizados) suavemente por inversión.
Reactivo 2: Solución reguladora HEPES 50 mmol/L Estabilidad: 10 días de 2 a 8 °C
(2 frascos por 60mL) MUESTRA: Suero
Reactivo 3: Acido úrico 297mol/L TÉCNICA DE ANÁLISIS
Solución de referencia (1 frasco por 2 mL) Ensayo Ensayo Ensayo
Blanco Muestra Referencia
APLICACIÓN : Reactivo de 1 mL 1 mL 1 mL
Para la determinación de Acido úrico en suero por
Trabajo
método enzimático. "PARA USO IN VITRO".
Agua 25 L - -
Purificada
MATERIALES ADICIONALES:
Espectrofotómetro o fotómetro para lecturas a 505 nm, Muestra - 25 L -
Micropipetas, pipetas, tubos para ensayo y cronómetro Reactivo 3 - - 25 L
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Código S/C
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DIAGNOSTICOS
3. International Federation of Clinical Chemistry-
Clin.Chim.Acta 87/3:459 F(1978)
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Código S/C
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SOLUCIONES
DE
REFERENCIA
CONTENIDO DEL ESTUCHE: soluciones de referencia y sus correspondientes
5 frascos de soluciones de referencia de Calcio de absorbancias, comprobando el valor de r2 sea > 0,98
concentraciones diferentes. para un rango de concentraciones de Calcio de 1,75 a
2,75 mmol/L
Calcio 1,75 mmol/L Solución de En el caso que se determine la concentración de una
R1 1x5 mL
referencia muestra realice los siguientes cálculos:
Calcio 2,00 mmol/L Solución de
R2 1x5 mL
referencia
Calcio 2,25 mmol/L Solución de
R3 1x5 mL 5
Ar
referencia i =1
Calcio 2,50 mmol/L Solución de Donde:
R4 1x5 mL Cr: Concentración de las soluciones de referencia en
referencia
Calcio 2,75 mmol/L Solución de mmol/L
R5 1x5 mL Ar: Absorbancia de las soluciones de referencia
referencia
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3. - K. Widman. Interpretación Clínica de las
Pruebas de Laboratorio.
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CONTENIDO DEL ESTUCHE: CALCULOS DE LOS RESULTADOS
5 frascos de soluciones de referencia de Creatinina de ANALÍTICOS:
concentraciones diferentes. Verifique la Linealidad de la curva de calibración
obtenida entre las concentraciones de cada punto de las
Creatinina 66,3 µmol/L soluciones de referencia y sus correspondientes
R1 1x10 mL absorbancias, comprobando el valor del coeficiente de
Solución de referencia
Creatinina 132,6 µmol/L determinación: éste debe ser r2> 0,98 para un rango de
R2 1x10 mL concentración es de Creatinina de 66,3 a 618,0 mol/L
Solución de referencia
En el caso que se determine la concentración de una
Creatinina 265,2 µmol/L
R3 1x10 mL muestra realice los siguientes cálculos:
Solución de referencia
Creatinina 442,0 µmol/L cot() =
R4 1x10 mL
Solución de referencia
Cr
5
Creatinina 618,0 µmol/L i 1
R5 1x10 mL 5
Solución de referencia
Ar
i 1
APLICACIÓN PROPUESTA:
Donde:
Para preparar curvas de calibración en la determinación Cr: Concentración de las soluciones de referencia en
de Creatinina, por el método de Jaffé. “PARA USO IN mol/L
VITRO” Ar: Absorbancia de las soluciones de referencia
Cm= Am x cot() = mol/L de Creatinina
MATERIALES ADICIONALES: Donde:
- Juego de reactivos para la determinación de Am: Absorbancia de la muestra
Creatinina en Suero. Cm: Concentración de Creatinina
- Reactivo 1: Acido Pícrico 0,04 mol/L. cot()= Cotangente de la curva de calibración.
- Reactivo 2: Hidróxido de Sodio 2,5 mol /L.
- Agua purificada. CONTROL INTERNO DE LA CALIDAD:
- Espectrofotómetro visible o Colorímetro Linealidad: el coeficiente de determinación debe ser
fotoeléctrico r2 > 0,98 para un rango de concentración de Creatinina
de 66,3 a 618,0 mol/L
PRINCIPIO DEL MÉTODO:
El método de Jaffé se basa en que la Creatinina forma MATERIALES DE REFERENCIA UTILIZADOS:
con el picrato alcalino un complejo de color amarillo Se asigna el valor a la solución de referencia utilizando
rojizo, que se mide espectrofotométricamente a 500 nm. un Preciset de 66,3 a 618,0 mol/L, de la firma
Para preparar la curva de calibración, realice el ensayo Boehringer Mannheim, utilizando el método analítico
de referencia con cada una de las cinco soluciones de de Jaffé para la determinación de Creatinina.
Creatinina por triplicado.
PRECAUCIONES:
PREPARACIÓN DE REACTIVOS: No introducir pipetas dentro de los frascos de
Dejar que las Soluciones de referencia alcancen la soluciones de referencia
temperatura ambiente y homogeneizar .
Tomar 1 mL de cada una de las soluciones de referencia TEMPERATURA DE ALMACENAMIENTO:
y diluir con 10 mL de agua purificada en matraz de un De 2 a 8 C.
trazo. Homogeneizar.
Desarrollar el método de Jaffé según la técnica descrita
en la Literatura interior del Juego de reactivos para la ESTABILIDAD DEL PRODUCTO EN USO:
determinación de Creatinina en suero, sustituyendo el El producto en uso es estable 4 meses.
suero por cada una de las soluciones de referencia que
componen este juego. BIBLIOGRAFÍA:
1. Henry, R. J. “Química Clínica. Bases y principios” Editoria
Hims. Barcelona, 1980
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CONTENIDO DEL ESTUCHE: soluciones de referencia y sus correspondientes
5 frascos de soluciones de referencia de Fósforo absorbancias, comprobando que el valor de r 2 > 0,98,
inorgánico de concentraciones diferentes. para un rango de concentraciones de Fósforo inorgánico
de 0,8 a 4,0 mmol/L
Fósforo inorgánico 0,8 mmol/L En el caso que se determine la concentración de una
R1 1x5 mL
Solución de referencia muestra realice los siguientes cálculos:
Fósforo inorgánico 1,6 mmol/L cot() =
R2 1x5 mL
5
Solución de referencia Cr
Fósforo inorgánico 2,4 mmol/L i 1
R3 1x5 mL
5
Solución de referencia
i 1
Ar
Fósforo inorgánico 3,2 mmol/L
R4 1x5 mL Donde:
Solución de referencia
Fósforo inorgánico 4,0 mmol/L Cr: Concentración de las soluciones de referencia en
R5 1x5 mL mmol/L
Solución de referencia
Ar: Absorbancias de las soluciones de referencia
APLICACIÓN PROPUESTA: Cm= Am x cot()=mmol/L de Fósforo inorgánico
Para preparar curvas de calibración en la determinación
de Fósforo inorgánico por el método de Fiske - Donde:
Subarow. “PARA USO IN VITRO” Cm: Concentración de Fósforo inorgánico
Am: Absorbancia de la muestra
MATERIALES ADICIONALES: cot()= Cotangente de la curva de calibración.
- Juego de reactivos para la determinación de
Fosfato (Fósforo inorgánico) en suero. CONTROL INTERNO DE LA CALIDAD:
- Agua purificada Linealidad: El coeficiente de determinación debe ser
- Espectrofotómetro visible o colorímetro r2 > 0,98, para un rango de concentraciones de Fósforo
fotoeléctrico. inorgánico de 0,8 a 4,0 mmol/L
R3
Glucosa 8,32 mmol/L
Solución de referencia
1x10 mL Ar
i 1
Glucosa 11,10 mmol/L Donde:
R4 1x10 mL
Solución de referencia. Cr: Concentración de las soluciones de referencia en
Glucosa 16,65 mmol/L mmol/L
R5 1x10 mL
Solución de referencia. Ar: Absorbancia de las soluciones de referencia
Cm = Am x cot() = mmol/L de Glucosa
APLICACIÓN PROPUESTA:
Para preparar curvas de calibración en la determinación Donde:
de Glucosa, por el método de Glucosa Oxidasa. “PARA Cm: Concentración de Glucosa
USO IN VITRO”. Am: Absorbancia de la muestra
cot() = Cotangente de la curva de calibración.
MATERIALES ADICIONALES:
- RapiGluco – Test CONTROL INTERNO DE LA CALIDAD:
- Agua purificada Linealidad: el coeficiente de determinación debe ser
- Espectrofotómetro visible o Colorímetro r2 > 0,98 para un rango de concentraciones de Glucosa
Fotoeléctrico. de 2,77 a 16,65 mmol/L.
- Baño de agua (37+1) º C
MATERIALES DE REFERENCIA UTILIZADOS:
PRINCIPIO DEL MÉTODO: Se asigna el valor a la solución de referencia, utilizando
El método de Glucosa Oxidasa es una reacción Preciset de 2,77 a 16,65 mmol/L de la Firma Boehringer
enzimática de la Glucosa en la que se forma un Mannheim, utilizando el método analítico de
complejo coloreado de color rosado, que se cuantifica Hexoquinasa para la determinación de Glucosa.
por espectrofotometría.
Para preparar la curva de calibración, realice el ensayo PRECAUCIONES:
de referencia con cada una de las cinco soluciones de No introducir pipetas dentro de los frascos de
Glucosa por triplicado. soluciones de referencia.
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CONTENIDO DEL ESTUCHE: TECNICA DE ANALISIS:
28
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3. R. J. Henry, D. C. Cannon J.W.
Winkelman. Química Clínica. Bases y Técnicas.
29
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MONOREACTIVO
S
Solución reactivo
100 determinaciones ALMACENAMIENTO:
APLICACION: De 25 a 30 °C.
TÉCNICA DE ANALISIS:
31
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Solución reactivo CALCULOS:
30 determinaciones
Cr
x
Am
APLICACION: Donde :
Cm
Ar
Cm = Concentración de la
Reactivo para la determinación cuantitativa de muestra (g/L)
proteínas en líquido cefalorraquídeo Cr = Concentración de la solución de referencia
Am = Absorbancia de la muestra
PRINCIPIO DE LA DETERMINACIÓN: Ar = Absorbancia de la solución de referencia
EL ácido sulfosalicílico provoca la precipitación de las INTERVALO DE REFERENCIA:
proteínas del líquido cefalorraquídeo, determinándose
estas por turbidemetría. 0,2 - 0,4 g/L
TÉCNICA DE ANALISIS: ALMACENAMIENTO:
Tomar un 1 mL del líquido cefalorraquídeo en un tubo A temperatura ambiente.
para ensayos, adicionar 4 mL de la solución reactivo,
dejar en reposo durante 10 min, pasado este tiempo
BIBLIOGRAFIA:
agitar y leer a 420 nm contra blanco reactivo.
Procesar de igual forma una solución de referencia de
R.J. Henry. Química Clínica. Bases y Técnicas. 1980.
albúmina de 0,3 g/L
2da Edición
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.Solución reactivo (24 determinaciones) LECTURA Y EXPLICACION DE LOS
RESULTADOS:
APLICACIÓN PROPUESTA:
Concentración
Expresión
aproximada de
Solución reactivo cualitativa para la determinación de Reacción del
glucosa (mg
sustancias reductoras en la orina. Reactivo único para Resultado
100mL)
uso in vitro.
Azul transparente o
<100
enturbiamiento verde 0
no precipitado
MATERIALES ADICIONALES:
Verde con precipitado 250
1+
- Tubo para ensayo. amarillo
- Gotero.
Amarillo verde oliva 2+ 800
PRINCIPIO DEL METODO: Marrón 3+ 1400
Naranja rojo 4+ 2000 ó más
El reactivo cualitativo de Benedict para la Glucosa
tiene Cu2+, el cual es reducido por la Glucosa y otras
sustancias reductoras y precipitado en forma de Cu 2O LEYENDA
de color amarillo a rojo.
0 Negativo
La sensibilidad de la determinación es en condiciones 1+ Ligeros indicios
óptimas de aproximadamente 50 a 80 mg/100mL de 2+ Débilmente positivo
Glucosa. 3+ Positivo
4+ Fuertemente positivo
Sustancias existentes en la orina tales como la
fructosa, lactosa, galactosa, etc pueden interferir en la En caso de resultados inesperados repita el análisis.
reacción del cobre con la glucosa.
ACCION DE SEGUIMIENTO
TECNICAS DE ANALISIS:
Si persisten resultados positivos consulte a su médico.
Solución reactivo 5.0mL
Muestra 8 gotas
PRECAUCIONES
Hervir sobre una llamada durante 2 min o colocar en
No ingerir.
un baño de agua hirviente durante 3 min. Leer
inmediatamente después.
Almacénese a una temperatura de 25 a 30C.
BIBLIOGRAFIA
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Solución reactivo
(20 determinaciones) TECNICA DE ANALISIS:
Solución de reactivo
3 mL 3 mL
MATERIALES ADICIONALES: Biuret
ALMACENAMIENTO:
PREPARACION DE REACTIVOS:
De 25 a 30 C
El reactivo está listo para usar.
BIBLIOGRAFIA:
1. Henry R. J., Cannon D. C., Winkelman
J. W. Química Clínica, bases y técnicas. Edición JIMS.
Barcelona.
2. Davidsohn J., Henry J. B. Diagnóstico
Clínico por el laboratorio. Edición Revolucionaria.
34
Código 337.5.661325 o
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Semicuantitativo Tome un tubo con crecimiento de 24 h en
(100 Determinaciones) medio de indol-motilidad del germen Gram
negativo.
CONTENIDO DEL ESTUCHE: Añada 0.5 mL de la solución reactivo de
Erlich y espere 1 min a que se produzca la
Reactivo 1: Erlich. Solución reactivo. reacción.
(1 frasco por 120 mL)
El resultado será positivo si se observa un
APLICACIÓN PROPUESTA: anillo de color rosado cereza en la superficie
del medio de cultivo inoculado previamente .
Para la determinación de la producción de Indol
de los microorganismos Gram negativos. “PARA ALMACENAMIENTO:
USO IN VITRO”
De 25 a 30 °C
PREPARACIÓN DEL REACTIVO:
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
El reactivo está listo para usar
1. Manual de Marchas Técnicas del
MUESTRA: Sangre fresca.
Laboratorio de Microbiología del Hospital
TÉCNICA DE ANÁLISIS “Hermanos Ameijeiras”.
35
Código 337.5.661330
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Semicuantitativo
(50 Determinaciones) TÉCNICA DE ANÁLISIS
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
El reactivo está listo para usar
1. Manual de técnica de laboratorios
36
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Semicuantitativo Utilizando la pipeta de glóbulos rojos, tome
sangre hasta la marca 1.
(30 Determinaciones) Introduzca la pipeta cargada con la sangre
en la solución muestra de oxalato de amonio
CONTENIDO DEL ESTUCHE:
0.0703 mol/L y absorba ésta hasta llegar a la
marca 101.
Reactivo 1: Oxalato de amonio 0,0703 mol/L
Homogeneice el contenido de la pipeta.
Solución reactivo.
frotando esta con ambas manos.
(1 frasco por 120 mL)
Déjelo en reposo durante 10 min
APLICACIÓN :
Deseche las primeras gotas y
posteriormente cargue la cámara de Neubauer.
Para el conteo de plaquetas o eritrocitos." PARA
Coloque la cámara cargada dentro de la
USO IN VITRO".
cápsula de Petri, sobre el soporte y el papel de
filtro humedecido.
MATERIALES ADICIONALES:
Déjela reposar durante 10 min
Microscopio óptico, pipeta de glóbulos rojos, Observe al microscopio que las plaquetas se
cámara de Neubauer. distingan con cierta resfringencia.
37
Código 337.5.661191
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.
COLORANTES
Reactivo para tinción
(240 Determinaciones) Déjelo secar.
39
Código 337.5.661220 o
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.Reactivo para tinción Con la lanceta haga una punción en el dedo.
(240 Determinaciones) Deseche la primera gota.
Cargue la pipeta de glóbulos blancos hasta la
CONTENIDO DEL ESTUCHE: marca 0.5 con sangre.
40
Código 337.5.661290 o
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60 Determinaciones previamente una gota de aceite de inmersión sobre la
parte de la preparación que se ve a examinar.
CONTENIDO DEL ESTUCHE:
Contar un total de 100 leucocitos.
Reactivo 1: Giemsa. Solución colorante
(1 frasco x 120 mL)
EXPRESION DE LOS RESULTADOS:
APLICACIÓN PROPUESTA:
La proporción de cada tipo de leucocito se expresa
Reactivo para la determinación de la fracción de
como una fracción decimal. La suma de todas las
número y el examen de leucocitos. “PARA USO IN
fracciones debe ser igual a 1.
VITRO”
INTERVALO DE REFERNCIA:
PRINCIPIO DE LA DETERMINACION:
Neutrófilos 0.55-0.65
Los principales tipos de leucocitos son identificados y Eosinófilos 0.02-0.04
se calcula la proporción de cada uno de ellos, esta Basófilos 0.00-0.01
proporción se denomina fracción de números del tipo Linfocitos 0.25-0.35
de leucocitos. Monocitos 0.03-0.06
41
Código 337.5.661421 o
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MICROBIOLOGÍA
CONTENIDO DEL ESTUCHE: las pruebas después de transcurrido este tiempo, habrá
Estuche por 10 ampolletas por 0,5 mL que repetir el calentamiento a 56 C pero durante 10
(2900 determinaciones) min .
44
Código 337.5.033797 o
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2. NC26-212. Buenas Prácticas de Laboratorio. Marzo.1992, 3. K. D .Piatkin, YU. S. Krivoshein. Microbiología. 2 da
Cuba. Edición. 417-423. Editorial “MIR” Moscú. 1981
45
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Antisueros monovalentes Salmonellas ( A; B; C 1 ; C2; PREPARACIÓN DEL REACTIVO:
D; E; F ).Antisuero polivalente Salmonella. Antisueros Dejar que el bulbo alcance la temperatura ambiente.
polivalentes Shigellas ( A; B; C 1 ; D ). Antisuero MUESTRAS:
polivalente Citrobacter. Antisuero “Vi” Se obtienen a partir de heces fecales, en niños menores
de 5 años por hisopo rectal, fluidos corporales (sangre,
CONTENIDO DEL ESTUCHE: orina), aguas y alimentos contaminados. Estas
Antisueros monovalentes Estuche conteniendo 4 muestras se procesan utilizando medios de cultivos
Salmonellas bulbos por 5 mL para enriquecidos, selectivos y diferenciales, se incuban a
400 determinaciones 37 °C de 18 a 24 h. Se seleccionan colonias típicas y
Antisuero polivalente Estuche conteniendo 4 se transfieren al medio kligler se incuban de 18 a 24 h
Salmonella bulbos por 10 mL para a 37 °C , identificándose el microorganismo aislado de
800 determinaciones forma presuntiva, el crecimiento bacteriano obtenido
Antisueros polivalentes Estuche conteniendo 4 es suspendido en solución de Cloruro de sodio 0,85 %
Shigellas bulbos por 5 mL para para realizar el estudio serológico con el antisuero por
400 determinaciones medio de la reacción de aglutinación en lámina que es
Antisuero polivalente Estuche conteniendo 4 la prueba confirmativa de género o grupo específico.
Citrobacter bulbos por 10 mL para
800 determinaciones Nota: En caso de cepas sospechosas de Shigellas
Antisuero “Vi” Estuche conteniendo 4 calentar la suspensión bacteriana en baño de agua a
bulbos por 5 mL para 100 °C de 15 a 30 min (para eliminar sustancias
400 determinaciones inhibitorias que puedan interferir con la aglutinación
APLICACIÓN: somática). Dejar atemperar dicha suspensión y
Antisueros monovalentes Salmonellas: Para enfrentarla al antisuero en el estudio serológico.
el diagnóstico serológico grupo específico de PROCEDIMIENTO:
Salmonella por aglutinación en lámina. Prueba cualitativa
Antisuero polivalente Salmonella: Para el 1. Deposite sobre una lámina portaobjeto una
diagnóstico serológico del género Salmonella por gota de antisuero.
aglutinación en lámina. 2. Coloque sobre la gota de antisuero una gota
de antígeno (suspensión del microorganismo
Antisueros polivalentes Shigellas: Para el
aislado en solución de Cloruro de sodio 0,85 %)
diagnóstico serológico género y grupo específico
3. Mezcle ambos con el asa de platino.
de Shigella por aglutinación en lámina.
4. Aplique a la lámina un suave movimiento
Antisueros polivalentes Citrobacter: Para el
circular para homogeneizar.
diagnóstico serológico del género Citrobacter por
5. Efectúe la lectura frente a una lámpara de
aglutinación en lámina.
iluminación tangencial durante 1 min
Antisuero “Vi”: Para la detección del
Positivo: Aglutinación con el antígeno homólogo en
antígeno Vi en Salmonella typhi por aglutinación un tiempo no mayor de 1 min con una intensidad de 3
en lámina.
a 4 cruces.
“PARA USO IN VITRO” Negativo: No se produce aglutinación en 1 min
MATERIALES ADICIONALES :
CONTROL INTERNO DE LA CALIDAD:
- Láminas portaobjeto. Asa de platino. Lámpara
Probar con cepas de referencias de los diferentes
de iluminación tangencial. Mechero. Solución de
grupos del banco de cepas de cada entidad.
Cloruro de sodio 0,85 %
TEMPERATURA DE ALMACENAMIENTO:
PRINCIPIO DEL MÉTODO : Almacénese a una temperatura de 2 a 8 ºC
El diagnóstico serológico de estas enterobacterias por
ESTABILIDAD DEL PRODUCTO EN USO:
aglutinación en lámina, está basado en la reacción
El producto en uso es estable por 3 meses
entre los anticuerpos presentes en el antisuero y los
BIBLIOGRAFÍA:
antígenos propios del microorganismo en ensayo.
1. Cowan and Steel. Identification of Bacterium.
CRITERIO DE DESEMPEÑO Y LIMITACIONES
2. Edwards and Wh-Ewinb. Identification of
DEL MÉTODO:
Enterobacterias, 1962.
Reacción de aglutinación en 1 min, con una 3. Jawetz E. Manual de Microbiología Médica,
intensidad de 3 a 4 cruces Tercera Edición, 1966.
La detección del antígeno somático específico o del 4. K. Piatkin, Microbiología, 1968.
antígeno “Vi” dependen del microorganismo aislado.
46
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Web: WWW.biofinlay.sld.cu
5. Martín Frobisher, Microbiología, 1969.
47
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CODIGOS
337.2.030825 Antisuero Polivalente de Citrobacter
337.2.031401 Antisuero Polivalente de Shigella A
337.2.031402 Antisuero Polivalente de Shigella B
337.2.031403 Antisuero Polivalente de Shigella C
337.2.031404 Antisuero Polivalente de Shigella D
337.2.031405 Antisuero Polivalente de Salmonella
337.2.031406 Antisuero Monovalente de Salmonella A
337.2.031407 Antisuero Monovalente de Salmonella B
337.2.031408 Antisuero Monovalente de Salmonella C1
337.2.031409 Antisuero Monovalente de Salmonella C2
337.2.031410 Antisuero Monovalente de Salmonella D
337.2.031411 Antisuero Monovalente de Salmonella E
337.2.031412 Antisuero Monovalente de Salmonella F
337.2.031414 Antisuero Vi
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Antisueros Flagelares Salmonellas (b; i; 1,2; En caso que la aglutinación no sea bien
1,5; c; fg; gm; eh; enx; y; lw; r; k; gms; z29; definida o esté ausente, debe estimularse el
1,7; d; lv; enz15; lz13; lz28; mt; 1,6) desarrollo de los flagelos al microorganismo,
cultivándose en medios de cultivos líquidos o
CONTENIDO DEL ESTUCHE: semilíquidos, realizándose nuevamente la
4 frascos por 2 mL para 160 determinaciones reacción, donde se observará la avidez en la
aglutinación.
APLICACIÓN PROPUESTA:
Para la serotipificación de Salmonellas por MUESTRA:
aglutinación en lámina.“PARA USO IN VITRO”. Se obtiene por heces fecales, hisopo rectal en
niños menores de 5 años, fluidos corporales, agua
MATERIALES ADICIONALES: y alimentos contaminados. Las muestras se
- Lámina portaobjeto ó de excavación procesan utilizando medios de cultivos selectivos
- Asa de platino y diferenciales, los cuales una vez sembrados son
- Lámpara de iluminación tangencial incubados a 37 C de 18 a 24 h. Colonias típicas
- Mechero son coleccionadas y cultivadas en medio Kliger y
también cuñas agarizadas incubándose a 37 C de
PRINCIPIO DEL MÉTODO: 18 a 24 h. Posteriormente se le realizan pruebas
La serotipificación de Salmonella por bioquímicas incubándose de la misma forma que
en los casos anteriores.
aglutinación en lámina está basada en la
Identifique el microorganismo aislado,
reacción antígeno – anticuerpo. confirmándose el diagnóstico específico de
género con los sueros somáticos de Salmonella.
CRITERIO DE DESEMPEÑO Y
Una vez identificado el microorganismo como
LIMITACIONES DEL MÉTODO:
Salmonella y grupo a que pertenece, se realizarán
Reacción de aglutinación en 1 min , con una
las pruebas serológicas que nos darán el tipo,
intensidad de 3 a 4 cruces.
utilizando los Antisueros Flagelares Salmonellas
Detección de antígeno específico flagelar de
tipo específicos.
Salmonella.
CONTROL INTERNO DE LA CALIDAD:
PREPARACIÓN DE REACTIVOS:
Probar con cepas de referencia de los diferentes
Dejar que el producto alcance la temperatura serotipos del banco de cepas de cada entidad.
ambiente.
MATERIALES DE REFERENCIA UTILIZADOS:
PROCEDIMIENTO: Antisueros con cepas de Salmonellas de estructura
Prueba cualitativa: antigénica homóloga a los antisueros.
Depositar una gota de Antisuero sobre
una lámina portaobjeto o excavada. CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO:
Tomar una asada del microorganismo De 2 a 8 C.
aislado. ESTABILIDAD DEL PRODUCTO EN USO:
Mezclar ambos con el asa de platino. El producto en uso es estable 30 d.
Aplicar a la lámina un suave movimiento
circular con el objetivo de homogeneizar. BIBLIOGRAFÍA:
Efectuar la lectura frente a una lámpara 1. Cowan and Steel. Identification of Bacteri.
de iluminación tangencial durante un minuto. 2. Edwards and Wh-Ewinb. Identification of
Enterobacterias, 1962.
Positivo: Aglutinación con el antígeno homólogo. 3. Jawetz E. Manual de Microbiología Médica, 3era Edición,
Negativo: No se produce aglutinación en un 1966.
minuto. 4. K. Piatkin, Microbiología, 1968.
49
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5. Martin Frobisher, Microbiología, 1969.
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CODIGOS
337.2.031420 Antisuero Flagelar Salmonella b
337.2.031421 Antisuero Flagelar Salmonella i
337.2.031422 Antisuero Flagelar Salmonella 1,2
337.2.031423 Antisuero Flagelar Salmonella 1,5
337.2.031424 Antisuero Flagelar Salmonella c
337.2.031425 Antisuero Flagelar Salmonella fg
337.2.031426 Antisuero Flagelar Salmonella gm
337.2.031427 Antisuero Flagelar Salmonella eh
337.2.031428 Antisuero Flagelar Salmonella enx
337.2.031429 Antisuero Flagelar Salmonella y
337.2.031430 Antisuero Flagelar Salmonella lw
337.2.031431 Antisuero Flagelar Salmonella r
337.2.031432 Antisuero Flagelar Salmonella k
337.2.031433 Antisuero Flagelar Salmonella gms
337.2.031434 Antisuero Flagelar Salmonella z-29
337.2.031435 Antisuero Flagelar Salmonella 1,7
307.2.001436 Antisuero Flagelar Salmonella d
337.2.031437 Antisuero Flagelar Salmonella lv
337.2.031438 Antisuero Flagelar Salmonella enz15
337.2.031439 Antisuero Flagelar Salmonella lz13
337.2.031440 Antisuero Flagelar Salmonella lz28
337.2.031441 Antisuero Flagelar Salmonella mt
337.2.031442 Antisuero Flagelar Salmonella 1,6
51
COLORANTES
Reactivo para tinción
(120 Determinaciones) TÉCNICA DE ANÁLISIS:
53
Código 337.5.661230 o
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Reactivo para tinción Con un aplicador de madera tomar una muestra
(2400 Determinaciones) de heces (en muestra con mucus y sangre elegir
esa parte para estudiarla).
CONTENIDO DEL ESTUCHE Mezclar con el Lugol concentrado procurando
hacer una suspensión y no un frotis.
Reactivo 1: Eosina 1%. Quitar de la suspensión fibras y otros
Solución colorante. elementos sólidos.
(1 frasco por 120 mL) Colocar un cubre objeto.
APLICACIÓN PROPUESTA Repetir estas operaciones con la gota
de eosina.
Para la determinación de siderositos y sideroblastos en Examinar en el microscopio con
heces fecales. “PARA USO IN VITRO” objetivo 10 x y 40 x.
El resultado es positivo si la
MATERIALES ADICIONALES sustancia crómica de los quistes se ve de un
rosado intenso
Microscopio óptico, lámina portaobjeto,
cronómetro y pipeta. ALMACENAMIENTO:
54
Código 337.5.661350 o
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Reactivo para tinción Seque la lámina.
(24 Determinaciones)
Añada el reactivo, pásele la llama del
quemador por debajo hasta que observe la emisión
CONTENIDO DEL ESTUCHE de vapores sin que hierva.
Lave con agua corriente; añada solución
Reactivo 1: Fuschina Básica de Ziehl Neelsen.
decolorante de alcohol clorhídrico para arrastrar el
Solución colorante.
exceso de la muestra y lave nuevamente con agua
(1 frasco por 120 mL)
corriente.
APLICACIÓN PROPUESTA
Cubra la lámina con solución colorante Azul de
metileno 0,1 %, déjela secar durante 2 min.
Para la tinción de Ziehl Neelsen en el diagnóstico de
Bacilos Ácido – Alcohol resistentes. “PARA USO IN
VITRO” Lave con agua corriente y deje secar la lámina.
55
Código 337.5.661410 o
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Para 100 determinaciones solución que provoca la decoloración de los Gram (-). A
continuación se utiliza la solución de Safranina como
CONTENIDO DEL ESTUCHE: colorante de contraste presentándose los gérmenes Gram
(-) de color rosado y los Gram (+) se mantienen violeta.
Reactivo 1.
APLICACIÓN: ALMACENAMIENTO:
PRECAUCIONES:
MATERIALES ADICIONALES:
Se deben utilizar portaobjetos muy limpios. La Tinción de
Gram debe hacerse sobre cultivos recientes (24 a 48 h) ya
- Portaobjetos que con el tiempo, estos se hacen mas sensibles a la
- Microscopio óptico decoloración.
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Reactivo para tinción Con un aplicador de madera tomar una
(24 Determinaciones) muestra de heces (en muestra con mucus y sangre
elegir esa parte para estudiarla).
CONTENIDO DEL ESTUCHE: Mezclar con el Lugol concentrado procurando
hacer una suspensión y no un frotis.
Reactivo 1: Lugol concentrado.
Solución colorante. Quitar de la suspensión fibras y otros
(1 frasco por 120 mL) elementos sólidos.
MATERIALES ADICIONALES:
Examinar en el microscopio con objetivo 10 x y 40
x.
Microscopio óptico. El resultado es positivo si la sustancia crómica de
los diversos quistes se destacan sobre el citoplasma
PREPARACION DEL REACTIVO: pardo amarillento.
El reactivo está listo para usar
ALMACENAMIENTO:
MUESTRA: Heces fecales.
Para el producto intacto: de 25a 30 ºC
TÉCNICA DE ANÁLISIS:
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
Ponga en un porta objeto por separado (en 1. Manual de técnicas de laboratorio clínico.
cada extremo) una gota de la solución de Eosina y Instituto Cubano del Libro, 1969.
otra de Lugol.
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Símbolo/Color Negro Rojo Verde Azul
Penicilina Colimicina 10g Estreptomicina Oxacilina
6g 10 UI 1g
_________ Eritromicina Carbenicilina 100 g Tetraciclina Cefuroxima
15 UI 30 UI 30 g
ººººººº Meticlina Ampicilina Cloranfenicol Azlocilina
5g 10 g 30 g 75 g
+++++++ Gentamicina Cefaloridina Novobiocina Cefazolina
10 UI 30 UI 30 UI 30 g
- - - - - -- - - Kanamicina Ceftriaxona Amikacina Ciprofloxacina
30 UI 30g 30 g 5g
Vancomicina 30 UI Cefotaxima Sulfametoxazol/ Ceftazidima
30 µg Trimetroprim 30 g
(23,75 g/1,25 g)
APLICACIÓN:
Para la determinación de la sensibilidad bacteriana a los agentes antimicrobianos.
“PARA USO IN VITRO”
MATERIALES ADICIONALES:
Incubadora bacteriológica (37 °C)
Nevera de 2 a 8 °C
Hisopo
Placa Petri 90 mm ó 150 mm
Pinza
Regla milimetrada Vd: 1 mm
Solución patrón de turbiedad ó Standard de Mc Farland
Agar Mueller – Hinton
Solución Cloruro de sodio 0,85 %
Caldo de cultivo
Tubos para ensayo
Mechero
Timer
Desecadora
Asa o aguja de inoculación
Caldo cultivo Triptona – Soya o Caldo corazón
Cepas controles
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antibiótico hasta que se alcanza un punto en el que el desarrollo bacteriano en la superficie del agar ya no es inhibido.
El resultado es una zona de inhibición del desarrollo del microorganismo con bordes bien delineados (halo de
inhibición), el cual permite al analista determinar si el antibiótico en cuestión es adecuado para el tratamiento de la
enfermedad infecciosa. El halo de inhibición se mide utilizando una regla milimetrada Vd: 1mm
III- Inoculación
Hisopo muy saturado cuando se inoculan las placas.
Incubación a temperaturas inferiores a la óptima.
Uso del método para bacterias anaerobias o de crecimiento lento.
Secado incorrecto de las placas (deben secarse durante 15 min a 37 °C antes de la
aplicación de los discos).
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Lecturas prematuras antes de las 16 a 18 h. de incubación
Fallas en la lectura de la zona de inhibición
Fallas en el uso de las cepas control
MUESTRA:
Inóculo.
Preparación del inóculo: Tomar 5 ó 10 colonias de morfología similar, provenientes de un cultivo puro del
microorganismo aislado, valiéndose de un asa ó aguja de inocular y transferir a un tubo para ensayo que contiene de 3
a 5 mL de un caldo de cultivo adecuado (Triptona – Soya o Caldo corazón) e incubar de 35 a 37 °C durante 2 a 5 h .
La turbiedad producida durante este tiempo corresponde al comienzo del crecimiento (Fase exponencial) del
microorganismo. Ajuste la opacidad del inóculo con caldo o solución de cloruro de sodio 0,85 %. El ajuste se realiza
contra la Solución patrón de turbiedad ó Standard de Mc Farland obtenido, añadiendo 0,5 mL de Solución de cloruro
de bario dihidratado 0,048 M (1,175 % M/V) a 99,6 mL de Acido sulfúrico 0,36 N (1 % V/V). Este patrón deberá
agitarse para una adecuada homogeneidad antes de ser usado y deberá descartarse y volver a prepararse mensualmente.
Se almacena en unos tubos bien tapados y mantenidos en la oscuridad. La suspensión bacteriana se ajusta al % de
transmitancia según microorganismo, teniendo en cuenta lo establecido en los procedimientos de laboratorio, usando
un colorímetro a una longitud de onda de 580 nm.
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PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO:
El disco para Antibiograma está listo para usar. Sacar de refrigeración y esperar a que alcance temperatura ambiente
por una o dos horas. Después de utilizar el bulbo tápelo firmemente y guárdelo nuevamente de 2 a 8 °C en un ambiente
seco. Nunca deje un bulbo que contenga discos para Antibiograma expuesto innecesariamente a la humedad ambiental
para evitar la degradación del antibiótico.
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PROCEDIMIENTO:
1- Preparación del medio de cultivo Mueller – Hinton el cual se considera el más satisfactorio
para la realización del Antibiograma por el bajo contenido de inhibidores y su elevado índice de
reproducibilidad. Preparar según indicaciones del proveedor. La calidad del agua es determinante ya
que la misma debe estar libre de iones metálicos. Variaciones de cationes divalentes, principalmente
Calcio y Magnesio, afectará los resultados con aminoglucósidos, y Tetraciclina, cuando se prueba ante
Ps. aeruginosa. Un contenido excesivo en catión, puede dar un inaceptable aumento en el tamaño de la
zona.
2- Servir el agar en placas petri de 90 ó 150 mm de diámetro interior. La temperatura del medio
antes de verterlo debe estar de 48 a 50 °C.
Volumen medio: 25 mL para placas de 90 mm de diámetro interior
Volumen medio: 60 mL para placas de 150 mm de diámetro interior
Profundidad del agar: 4 mm
3- Las placas que contienen el medio deben secarse durante 15 min. a 37 °C antes de su uso
para eliminar el exceso de humedad para no diluir el inóculo bacteriano
4- El medio Mueller – Hinton puede enriquecerse con el 5% de sangre desfibrinada cuando se
cultivan bacterias de difícil crecimiento (Streptococcus, haemophilus, Neisseria patógenas, etc)
5- No usar placas que muestren signos de deterioro en la superficie del agar
6- Las placas con el medio Agar Mueller – Hinton se inoculan utilizando un hisopo de algodón
sobre aplicador de madera de la manera siguiente:
Sumerja el hisopo en el inóculo ajustado. Elimine el exceso de líquido rotando y presionando
el hisopo sobre las paredes internas del tubo, por encima del nivel del líquido.
Estríe toda la superficie del agar en tres direcciones, girando la placa alrededor de 60 ° cada
vez para garantizar una inoculación uniforme.
Deje secar la placa durante 15 min previo a la inoculación de los discos
7- Aplicación de los discos:
Los discos se colocan con pinzas, flameando cada vez, a una distancia no menor de 15 mm
del centro del mismo al borde de la placa y una separación entre ellos no menor de 25 mm para
evitar superposición de los halos de inhibición.
Incubar a 37 °C y realizar la lectura a partir de las 16 h. de aplicado el disco hasta las 48 h.
LECTURA E INTERPRETACIÓN:
La zona de inhibición es el área que rodea al disco donde el crecimiento ha sido completamente inhibido, sin embargo
con las cepas de Proteus, la zona puede aparecer invadida aunque se define claramente. No se debe tener en cuenta esta
invasión.
Existe un sistema de lectura directa, muy fácil de reproducir, que funde la lectura e interpretación en un solo paso: Se
confeccionan láminas circulares transparentes con círculos concéntricos cuyos diámetros delimitan zonas que se
corresponden con las categorías: “Sensible”, “Intermedio” y “Resistente” que aparece en la tabla de interpretación de
Bauer – Kirby. Basta con hacer coincidir el disco cuyo halo de inhibición se debe leer con el círculo central de la
lámina de lectura. El límite de la zona de inhibición, caerá en una de las tres zonas concéntricas.
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microorganismos entéricos Gram - negativos
Ampicilina 10 g en pruebas con Estafilococos 28 ó menos - 29 ó más
Ampicilina 10 g en pruebas con enterococos 16 ó menos - 17 ó más
Ampicilina 10 g en pruebas con Streptococcus 21 ó menos 22-29 30 ó más
(no enterococos)
Ampicilina 10 g en pruebas con Listeria 19 ó menos - 20 ó más
monocytogenes
Azlocilina 75 g en pruebas con Pseudomona 17 ó menos - 18 ó más
Carbenicilina 100 g en pruebas con especies 17 ó menos 18-22 23 ó más
de Proteus y con Escherichia coli
Carbenicilina 100 g en pruebas con 13 ó menos 14-16 17 ó más
Pseudomonas aeruginosas
Cefaloridina 30 UI cuando se le registra la 14 ó menos 15 -17 18 ó más
sensibilidad a la cefaloridina, cefaclor,
cefadroxil, cefalotina, cefalexina, cefapirina,
cefazolina, cefacetrilo y cefradina
Cefazolina 30 g 14 ó menos 15-17 18 ó más
Cefotaxima 30 µg 14 ó menos 15-22 23 ó más
Ceftazidima 30 g 14 ó menos 15-17 18 ó más
Ceftriaxona 30g 13 ó menos 14-20 21 ó más
Cefuroxima 30 g 14 ó menos 15-17 18 ó más
Ciprofloxacina 5g 15 ó menos 16-20 21 ó más
Cloranfenicol 30 g 12 ó menos 13-17 18 ó más
Colimicina 10 g 8 ó menos 9-10 11 ó más
Eritromicina 15 UI 13 ó menos 14 -22 23 ó más
Estreptomicina 10 UI 11 ó menos 12-14 15 ó más
Gentamicina 10 UI cuando se registra la 12 ó menos 13-14 15 ó más
sensibilida a la gentamicina y a la sisomicina
Kanamicina 30 UI 13 ó menos 14 - 17 18 ó más
Meticilina 5 g en pruebas con Staphylococcus 9 ó menos 10-13 14 ó más
Novobiocina 30 UI 17 ó menos 18-21 22 ó más
Oxacilina 1g en pruebas con Staphylococcus y 10 ó menos 11-12 13 ó más
neumococos
Oxacilina 1g en pruebas para Penicilina G 19 ó menos - 20 ó más
susceptibles
Penicilina 6 g en pruebas con Estafilococos 10 ó menos 21-28 29 ó más
Penicilina 6 g en pruebas con otros 11 ó menos 12-21 22 ó más
microorganismos
Sulfametoxazol / Trimetroprim 10 ó menos 11-15 16 ó más
(23,75 g/1,25 g)
Tetraciclina 30 UI 14 ó menos 15-18 19 ó más
Vancomicina 30 UI en pruebas con otros 9 ó menos 10-11 12 ó más
Gram - positivos
Vancomicina 30 UI en pruebas con 14 ó menos 15-16 17 ó más
enterococos
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TEMPERATURA DE ALMACENAMIENTO:
De 2 a 8 C. Protéjase de la humedad ubicando en desecadora.
PRECAUCIONES:
Al sacar el bulbo para su uso, espere a que este alcance temperatura ambiente.
Siempre que un disco haya sido extraído del bulbo, este deberá guardarse en un desecador
que cierre perfectamente.
Los discos deben colocarse a una distancia no menor de 15 mm del centro del mismo al
borde de la placa .
Manipule las cepas aisladas utilizando las medidas de protección y Bioseguridad para evitar
que el microorganismo entre en contacto con la piel y las mucosas y provoque infección
BIBLIOGRAFÍA:
1. Informe 32 OMS Comité de expertos de la OMS en Patrones Biológicos: P 153 – 190. Serie de informes
Técnicos No. 673. Ginebra 1982
2. Gavan, T. “Prueba in vitro de susceptibilidad antimicrobiana” Clin. Med. Nort. AMER. 58:493-504, 1974
3. Ericsson, A. M. y Sherris., J. D. Acta Patkol. Microbiol. Scond. Suppl 217 (B), 1971
4. Sdigmon, S. J. Post Grad Med. J. 40 (Suppl), 1964
5. Antibiotics in Laboratory Medicine. Victor Lorian M. D. Editor Williams & Welkins. Baltimore – London.
Los Angeles. Sydney Pág 27 – 60 Second Edition 1986
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CODIGOS
337.2.032545 AMIKACINA 30 µg
337.2.032590 AMPICILINA 10 µg
337.2.034077 AZLOCILINA 75 µg
337.2.090950 CARBENICILINA 100 µg
337.2.091015 CEFALORIDINA 30 UI
337.2.154181 CEFOTAXIMA 30 µg
337.2.094223 CEFTRIAXONA 30 µg
337.2.094161 CEFAZOLINA 30 µg
337.2.094211 CEFTAZIDINA 30 µg
337.2.094232 CEFUROXIMA 30 µg
337.2.091095 CLORANFENICOL 30 µg
337.2.185900 ERITROMICINA 15 UI
337.2.186500 ESTREPTOMICINA 10 UI
337.2.242500 GENTAMICINA 10 UI
337.2.364500 KANAMICINA 30 UI
337.2.488005 NOVOBIOCINA 30 UI
337.2.544632 OXACILINA 1 µg
337.2.573990 PENICILINA 6 µg
337.2.154763 Sulfametoxasol Trimetropina 23.75 µg/1,25µg
337.2.692450 TETRACICLINA 30 UI
337.2.154864 VANCOMICINA 30 UI
65
DIAGNOSTICOS
(60 determinaciones) De acuerdo a la rapidez con que se inicia la aglutinación y
el tamaño de los agregados dentro del período de tiempo
CONTENIDO DEL ESTUCHE: señalado (2 min.) se puede efectuar un estimado de
clasificación de +,++, +++, ++++.
R1: Látex – FR. Frasco por 4 mL Para una valoración más precisa puede recurrirse a:
R2: Suero control positivo. Frasco por 0,5 mL (de origen Prueba semicuantitativa por diluciones seriadas:
humano) Colocar en una gradilla 10 tubos para ensayo (13 x
R3: Suero control negativo. Frasco por 0,5 mL (de origen 100) mm, enumerados del 1 al 10.
humano) Pipetear 1,9 mL de solución de cloruro de sodio 0,85
APLICACIÓN PROPUESTA: % en el tubo No. 1 y 1 mL en el resto de los tubos.
Para la determinación del Factor Reumatoideo en suero Añadir 0,1 mL de suero problema al tubo No. 1,
por aglutinación en lámina. “PARA USO IN VITRO” mezclar bien y transferir 1 mL de la mezcla al tubo No.
2.
MATERIALES ADICIONALES:
Láminas portaobjeto, aplicador,
Mezclar bien y transferir 1 mL de la mezcla del tubo
No. 2 al tubo No. 3 y así sucesivamente hasta el último
solución cloruro de sodio 0,85 %, gradilla, tubos tubo.
para ensayo (13x100) mm y pipetas
De cada dilución realizada en tubo se toma una gota y
PRINCIPIO DEL MÉTODO: se deposita en una lámina portaobjeto y se procede de igual
La detección del Factor Reumatoideo en suero por forma que en la prueba cualitativa.
aglutinación en lámina, es una reacción inmunoquímica Tubo No. 1 2 3 4 5
que se basa en la capacidad de unión del Factor Solución de 1,9 1 1 1 1
Reumatoideo (FR) con la Inmunoglobulina G adsorbida cloruro de
sobre un portador. Si el suero muestra es positivo al FR se sodio
debe observar la reacción de aglutinación a simple vista
antes de 2 min y si es negativo no ocurre aglutinación. Suero 0,1
CRITERIO DEL DESEMPEÑO Y LIMITACIONES Problema
DEL MÉTODO: Dilución 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320
El intervalo en que debe aparecer la aglutinación es de 2
min. y el tamaño de los agregados lo podemos clasificar Tubo No. 6 7 8 9 10
de +, ++, +++, ++++. Solución 1 1 1 1 1
Todas las pruebas de Látex para la determinación de de cloruro
Factor Reumatoideo son de gran sensibilidad, pero al de sodio
mismo tiempo pueden dar algunos falsos positivos, a pesar Suero
de la dilución inicial 1:20, por lo que deben tenerse Problema
siempre presente. Dilución 1/640 1/1280 1/2560 1/5120
MUESTRA: Interpretación :
Suero: Cuando no pueda efectuarse la prueba El título del suero es el recíproco de la más alta dilución
inmediatamente después de obtenido el suero, éste puede en la que se observa una clara aglutinación.
conservarse en refrigeración de 2 a 8 C durante 3 días Los títulos de 1/20 y 1/40 deben ser considerados como
como máximo. De lo contrario el suero debe congelarse. débilmente positivos.
CONTROL INTERNO DE LA CALIDAD: Títulos de 1/ 80 o superiores deben considerarse
Los reactivos R2 y R3 son los controles internos, donde el francamente positivos.
R1 debe aglutinar con R2 y no R3. Recomendaciones:
PROCEDIMIENTO: No utilizar suero contaminado. Cuando no puede
Prueba cualitativa: efectuarse la prueba inmediatamente después de
Diluir el suero problema 1:20 en solución de obtenido el suero, este puede conservase a una
cloruro de sodio 0,85 % (1mL de solución de cloruro temperatura de 2 a 8 C durante 3 días como máximo.
de sodio 0,85 % más una gota (0,05 mL) de suero De lo contrario el suero debe congelarse.
problema) Los controles positivo y negativo deben usarse
Depositar una gota del suero diluido sobre una directamente sin diluir
lámina portaobjeto. TEMPERATURA DE ALMACENAMIENTO:
Añadir una gota de reactivo de Látex – FR De 2 a 8 C. No congelar el reactivo R1.
Mezclar ambas gotas con un aplicador ESTABILIDAD DEL PRODUCTO EN USO:
Homogeneizar moviendo de forma circular y 30 días de 2 a 8 C. No congelar el reactivo R1.
suavemente el portaobjeto. PRECAUCIONES:
R2 y R3 son “POTENCIALMENTE INFECCIOSOS”
Efectuar la lectura frente a una lámina de BIBLIOGRAFÍA:
iluminación tangencial en un intervalo de 2 min. y
sobre una superficie negra.
1. Sonnerwirth Alex C., Jarret Leonard. Métodos y
Diagnósticos del laboratorio. Tomo 3. 1983. Editorial
Positivo: Aglutinación claramente visible Científico Técnica.
Negativo: No se produce aglutinación en el período de 2. Bernabei Dante. Seguridad Manual para el
tiempo antes mencionado. Laboratorio. Merck. Editorial E. Merck. 1994.
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