TALLER NÚMERO 7

ANTIMICROBIANOS
MICROBIOLOGÍA

1. Observe el siguiente video y en sus palabras explique los tres mecanismos que utilizan las bacterias para
resistir a la acción de los antibióticos.
http://www.youtube.com/watch?feature=player_embedded&v=AYvX8tnCM9s#!

2. Describa el modo de acción de los antibióticos relacionados a continuación y las preguntas consecuentes
a cada uno de los mecanismos:
 Interferencia con la síntesis de la pared celular:
I. Investigue cual es la diferencia entre el mecanismo de acción de los beta-lactamicos en
bacterias Gram positivas y Gram negativas
II. Qué función cumplen las proteínas de unión a la penicilina (PBPs)
III. Cuál es el mecanismo de acción de la polimixina
 Inhibición de la síntesis de proteínas mediante el enlace a la subunidad ribosómica 30S y 50S
I. Como actúa la Linezolida (una oxazolidinona)
 Interferencia con la síntesis de ácidos nucleícos
 Inhibición de la ruta metabólica de la síntesis del acido fólico

3. Investigue las vías de adsorción, distribución y excreción de: aminoglucosidos, macrólidos, beta-
lactamicos, glicopeptidos, fluoroquinolonas y sulfamidas.

4. Cuál es la diferencia entre un agente anitimicrobiano bacteriostático y un bactericida y como se refleja

en la curva de crecimiento microbiano?

5. Compare diferencialmente los métodos utilizados en el laboratorio para la detección de

susceptibilidades a antimicrobianos (Técnica de agar dilución, Prueba Epsilon, Técnica de difusión en
disco y Técnica de microdilución en caldo)
Universidad Antonio Nariño

6. La selección apropiada de antibióticos es una decisión hecha por cada profesional de la salud con
autoridad de formular. Existe una guía aprobada por la FDA que clasifica a los antibióticos como
antibióticos de primera y segunda línea y adicionales
a. Cuál es la función de la FDA y a quien regula?
b. Que antibióticos se consideran de primera, segunda línea y adicionales?

7. En algunas especies bacterianas la resistencia antimicrobiana es una propiedad intrínseca ó innata. Esta
resistencia podría deberse a uno o más de los mecanismos de resistencia hasta ahora conocidos
(impermeabilidad de la membrana, bombas de eflujo, etc). Las bacterias también pueden adquirir
resistencia a los agentes antimicrobianos por eventos genéticos como mutación, transformación,
transducción y transposición. Explique cada uno de ellos.
Facultad de Ciencias
Departamento de Biología
C. Moreno
 8. Que son y cómo se clasifican las beta-lactamasas y como ellas inhiben los beta-lactamicos
a. Porque se habla de beta-lactamasas constitutivas y beta-lactamasas inducibles
9. La oxacilina y la meticilina son penicilinas semi-sinteticas que son estables a la beta-lactamasa
estafilocócica gracias a la ubicación estratégica de ciertas cadenas laterales en la molécula. Estos
antibióticos fueron desarrollados específicamente para el tratamiento de infecciones causadas por
S.aureus productores de beta-lactamasa. Sin embargo, la resistencia a antibióticos del tipo meticilina
pronto apareció por la emergencia del gen mecA. Este gen codifica para una nueva proteína PBP2a que
se une a la penicilina. Esta proteína participa en la síntesis de la pared celular a pesar de la presencia de
antibióticos tipo penicilina. Inicialmente, los primeros asilamientos se denominaron S.aureus resistente
a la meticilina o MRSA, pero estas se denominan más apropiadamente S.aureus resistente a la oxacilina
u ORSA. De esta manera, en Staphylococcus spp, la resistencia a oxacilina (que aplica para todos los
beta-lactamicos) debe ser probada con el sensidisco de cefoxitin y no se requiere probar ningún otro
agente betalactamico.
a. En el reporte de antibiograma de Staphylococcus spp el cefoxitina nunca se informa al clínico,
porque?
b. Porque solo se usa el sensidisco de cefoxitin para la identificación de los MRSA?
c. Investigue a que se refiere el término MRSA o ORSA con resistencia homogénea o heterogénea

10. Investigue cuales son los perfiles de resistencia naturales a los siguientes géneros bacterianos:
a. Salmonella spp.
b. Klebsiella spp.
c. Proteus spp.
d. Pseudomonas aeruginosa
e. Enterococcus spp.

11. El único método confiable para detectar la resistencia a Vancominica en Staphylococcus spp. Es la
determinación de la CIM, bien sea por microdilución o por E-test. Las cepas resistentes o intermedias a
la Vancomicina deben ser enviadas a un laboratorio de referencia para su confirmación (Secretaria de
salud departamental e Instituto nacional de salud). Ante la frecuente aparición de cepas con una CIM
mayor a 2 ug/mL (tenga en cuenta que CIM: 8 a 16 ug/mL= Intermedio y, CIM: >16 ug/mL= Resistente),
Universidad Antonio Nariño

debe advertirse al clínico la posibilidad de falla terapéutica y la necesidad de vigilar la respuesta clínica a
la Vancominica. En infección severa o compromiso renal, pueden utilizarse otras opciones terapéuticas
como el Linezolide (si es tracto respiratorio o tejido blando) o Daptomycina si es bacteremia o
endocarditis.
a. Porque es tan importante el seguimiento de las CIM en el reporte del antibiograma para los
Staphylococcus spp.
b. Cuál es el mecanismo de acción de la Vancomicina y el Linezolide?
c. A qué tipo de Staphylococcus spp. se le conoce como VISA o VRSA?
d. Porque razón no se usa como antibiótico de elección la Vancomicina en infección por gérmenes
de Gram negativos?

Facultad de Ciencias
Departamento de Biología
C. Moreno
 12. La resistencia a los macrólidos en los microorganismos Gram positivos por lo general se debe a la
presencia de los genes erm y mrsA. Las cepas que poseen ermA, ermB ó ermC típicamente son
resistentes a la eritromicina, pero aparecen inicialmente como sensibles a la clindamicina
(especialmente las cepas ermC). En aquellos aislamientos la resistencia a la clindamicina aparece
después de la inducción con eritromicina.
a. Que codifica cada unos de estos genes (erm y mrsA) en los microorganismos Gram positivos
para producir la resistencia a los macrólidos
b. Cuando y para que se debe realizar la prueba de test D
c. Como se debe interpretar la prueba de test D en base a los diámetros de la zona de inhibición de
crecimiento del microorganismo prueba.

13. Todas las enterobacterias deben ser tamizadas con Ciprofloxacina, para predecir la susceptibilidad a
otras fluoroquinolonas: si el resultado de Ciprofloxacina a es Sensible, puede predecirse (sin probarse)
Levofloxacina y Moxifloxacina como Sensibles. Si el resultado del informe del antibiograma es Resistente
a Ciprofloxacina, el resultado no puede extrapolarse a todas las fluoroquinolonas y deben ser probadas
por separado.
a. Porque deben ser probadas por separadas las fluoroquinolonas (tenga en cuenta la
generaciones de estas)
b. Además se debe advertir al clínico que las cepas ciprofloxacina resistentes no pueden responder
al tratamiento con Levofloxacina y Moxifloxacina, aun siendo estas dos últimas sensibles in vitro.

14. Los Streptococcus no neumocócicos son clasificados en dos grupos de acuerdo a su capacidad de
hemolizar los glóbulos rojos de cordero. Los aislamientos que lisan por completo se denominan
Streptococcus beta-hemolíticos. Tomando como base las características antigénicas del carbohidrato C
ubicado en su pared celular, los Streptococcus beta-hemolíticos se clasifican además en grupos A, B,C;D,
F y G. Aquellas especies que hemolizan solo parcialmente los glóbulos rojos se denominan Streptococcus
del grupo viridans, que incluyen Streptococcus constellatus, Streptococcus intermedius, Streptococcus
mitis, Streptococcus mutans, Streptococcus oralis, Streptococcus salivarus y Streptococcus sanguis. Los
Streptococcus beta-hemolíticos no han demostrado resistencia a la penicilina, que es el medicamento de
elección para estos gérmenes. Al contrario de los Streptococcus beta-hemolíticos, algunos Streptococcus
Universidad Antonio Nariño

del grupo viridans no son susceptibles a la penicilina porque contienen proteínas de unión a la penicilina
(PBPs) alteradas. La resistencia de otros agentes antimicrobianos, como eritromicina varía de cepa en
cepa.
a. Los Streptococcus del grupo viridans están entre las principales causas de endocarditis
bacteriana. Porque la terapia generalmente incluye la penicilina y un aminoglucósido?
b. Porque es importante la interpretación de la CIM de penicilina para la correcta terapia
antibiótica de estos pacientes?

15. El mecanismo más común de resistencia que presentan las bacterias Gram-negativas clínicamente
importantes frente a los beta-lactámicos, es la hidrólisis de los antimicrobianos por enzimas
betalactamasas. El número de betalactamasas existentes excede las 890 por lo tanto se han creado
varios sistemas de clasificación. De acuerdo a uno de los sistemas, las betalactamasas se agrupan en

Facultad de Ciencias
Departamento de Biología
C. Moreno
 virtud de su estructura de aminoácidos en 4 clases moleculares, de la A a la D. Otra clasificación propone
dividir las enzimas en varios grupos funcionales de acuerdo con el perfil de su sustrato y sensibilidad a
inhibidores de las B-lactamasas como el ácido clavulánico.

Las BLEEs (Betalactamasas de espectro extendido) se caracterizan por hidrolizar penicilinas y

cefalosporinas de primera y segunda generación (cefaloridine y cefalotina), y además hidrolizan una o
más oxymino-cefalosporinas, como cefotaxime, ceftazidime y aztreonam. Las BLEEs se derivan de
sustituciones de aminoácidos de enzimas TEM-1, TEM-2, SHV-1; sin embargo, recientemente han
proliferado un nuevo grupo de enzimas CTX-M, relacionadas con betalactamasas cromosómicas
de Kluyvera.

Aunque estas enzimas son producidas por diversos géneros de bacilos Gram-negativos, la prueba para
detección de BLEEs solo ha sido estandarizada para especies de Klebsiella pneumoniae, Klebsiella
oxytoca, Escherichia coli y Proteus mirabilis.

a. Como se detecta previamente la posibilidad de la presencia de una BLEEs en el reporte de un

antibiograma para enterobacterias?
b. Como se prueba la presencia de una BLEEs en el laboratorio?
c. Cuál es la diferencia entre los métodos de tamizaje y la prueba confirmatoria para la
identificación de una BLEE, y porque se utiliza el acido clavulanico en el desarrollo de esta
ultima?
d. Como se interpreta la prueba confirmatoria de BLEEs ?
e. Que antibióticos se deben suprimir ante la presencia de una BLEEs?

16. Uno de los grupos más difundidos de beta-lactamasas es el de las enzimas AmpC también conocidas
como cefalosporinasas, las cuales son codificadas por plásmidos o por el propio cromosoma. Estas
enzimas son resistentes a la inhibición por acido clavulanico y son más activas frente a las
cefalosporinas, además pueden conducir a resistencia a carbapenems si se presentan de manera
simultánea con otros mecanismos como alteraciones de porinas.

Algunos microorganismos llamados SPICE, la expresión de AmpC cromosomal es reducida pero inducible
en exposición a algunos betalactamicos e inhibidores de de betalactamasas como acido clavulanico. Por
otro lado, algunas enterobacterias como Klebsiella spp, Salmonella spp y Proteus mirabilis, han perdido
las enzimas AmpC cromosomales y un fenotipo de resistencia asociado con presencia de
Universidad Antonio Nariño

cefalosporinasas es mediado por beta-lactamasa AmpC adquiridas, las cuales son codificadas en
plásmidos.

a. Que microorganismos hacen parte del grupo SPICE y porque en ellos no se evalúa el test de
Ampc?
b. A que bacterias se debe proba la existencia de resistencia mediada por AmpC?
c. A partir de que antibiótico se puede predecir la presencia de una AmpC
d. Para que se utiliza el acido boronico?
e. Que antibióticos se deben suprimir ante la presencia de una Ampc?

17. Las carbapenemasas representan la familia más versátil de betalactamasas, estas enzimas tienen la
habilidad de hidrolizar carbapenems y todos los betalactámicos de uso clínico. Las enzimas
carbapenemasas han sido detectadas tanto en plásmidos como en cromosomas y se calsificacan en

Facultad de Ciencias
Departamento de Biología
C. Moreno
 carbepenemasas tipo oxacilinasas, metalobetalactamasas (MBL) y carbapenemasas tipo KPC Estas
carbapenemasas se pueden difundir rápidamente debido a su localización en el plásmido, lo cual hace
que el tratamiento de las infecciones causadas por estos microorganismos sean extremadamente
difíciles debido a su multirresistencia.
a. Cuál es la diferencia entre los métodos de tamizaje y la prueba confirmatoria para la
identificación de una carbapenemasa?
b. En qué casos se sugiere la prueba del test de Hodge?
c. Como se realiza y como se interpreta?
d. Que antibióticos se deben suprimir ante la presencia de una carbapenemasa?

18. Interprete cada uno de los siguientes antibiogramas, identificando los grupos de antibióticos, las
resistencias y sensibilidades reportadas, cuales pruebas complementarias solicitaría usted al laboratorio
y de ser positiva tal prueba que antibióticos no debería utilizar,

- Tenga en cuenta que pueden reportarse errores y en algunos casos también

es necesario utilizar las MIC dadas (estas MIC son datos supuestos, no son
los puntos de cortes utilizados en el laboratorio, son un ejemplo).
- Utilice toda la información con la que resolvió este taller para la
interpretación de los antibiogramas además de sus apuntes de clase (AB)

GRAM NEGATIVOS
Antibiótico / Klebsiella Escherichia Proteus Escherichia Klebsiella Escherichia Morganella
Microorganismo pneumoniae coli mirabilis coli pneumoniae coli morganii
MIC MIC MIC MIC MIC
Inter. Inter Inter Inter Inter MIC* Inter. Inter MIC*
* * * * *
Acido nalidixico S <=2 R >6 S <=2 R >6 S <=2 S <=2 R >6
Amikacina S <=2 S <=2 S <=2 R >6 S <=2 S <=2 R >6
Ampicilina S <=2 S <=2 S <=2 R >6 S <=2 S <=2 R >6
Aztreonam R >6 S <=2 S <=2 R >6 R >6 S <=2 R >6
Cefalotina R >6 S <=2 S <=2 R >6 S <=2 S <=2 R >6
Cefotaxima R >6 S <=2 S <=2 R >6 R >6 S <=2 R >6
Cefoxitin R >6 S <=2 R >6 R >6 S <=2 I 5 R >6
Ceftazidima R >6 S <=2 S <=2 R >6 S <=2 S <=2 R >6
Universidad Antonio Nariño

Cefepima S <=2 S <=2 S <=2 R >6 S <=2 S <=2 R >6

Ceftriaxona R >6 S <=2 S <=2 R >6 S <=2 S <=2 R >6
Ciprofloxacina S <=2 S <=2 S <=2 R >6 S <=2 S <=2 R >6
Gentamicina S <=2 S <=2 S <=2 R >6 S <=2 S >6 R >6
Imipenem S <=2 S <=2 R >6 R >6 S <=2 S <=2 S <=2
Nitrofurantoina S <=2 S <=2 S <=2 R >6 S <=2 S <=2 R >6
Norfloxacina S <=2 R >6 S <=2 R >6 S <=2 S <=2 R >6
Trimeoprim
R >6 S <=2 S <=2 R >6 S <=2 R >6 R >6
sulfametoxazol

* MIC: ug/mL, S: sensible, R: resistente, I: Intermedio

Facultad de Ciencias
Departamento de Biología
C. Moreno
 GRAM POSITIVOS
Antibiótico / Staphylococcus Streptococcus Staphylococcus Streptococcus
Microorganismo aureus mutans aureus oralis
Inter. MIC* Inter. MIC* Inter. MIC* Inter. MIC*
Penicilina S <=2 R >6 S <=2 R >6
Clindamicina S <=2 S <=2 S <=2 R >6
Vancomicina R >6 S <=2 S <=2 S <=2
Linezolida S <=2 S <=2 S <=2 S <=2
Eritromicina S <=2 R >6 S <=2 R >6
Oxacilina S <=2 S <=2 R >6 R >6

* MIC: ug/mL, S: sensible, R: resistente, I: Intermedio

Universidad Antonio Nariño

Facultad de Ciencias
Departamento de Biología
C. Moreno