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MARCO TEÒRICO
I.1. BIOREACTORES
Las exigencias de equipo son Sólo sirve para muestras con cargas
mínimas superiores a 10.000 por mL.
I.6. FERMENTACIÓN
1 botella de vidrio de 2 L
2 reductores de tubos de 4” a 2”
1 Piedra difusora
Manguera fina
Equipo de venoclisis
Llave de plástico pequeña
Bomba de aire para acuario
Poroflex y microporoso
Chicha de jora
Placa petri
Mechero
Asa de siembra
Conteo de Levaduras
MÉTODOS
Unir con silicona los reductores de tubo por su diámetro más pequeño y
pegarlos en el cuello de la botella, evitando que la botella quede torcida hacia
un lado, esto servirá como soporte para el biorreactor.
Usar parte del poroflex para hacer la tapa del biorreactor, tomando como
medidas el diámetro interno de la botella para que quede justa y no permita que
el cultivo se contamine, usar otra pequeña parte de poroflex como tapón, a
modo de corcho en el cuello de la botella, a esta corcho le hacemos un
pequeño orificio (del mismo diámetro de la manguera que usaremos) en el
centro para introducir la manguera y la piedra difusora
Luego de haber pegado bien todas las piezas y de haber tapado con silicona
las grietas y los lugares donde puede haber contaminación se deja secar bien
para poder hacer las pruebas de funcionamiento respectivas.
AISLAMIENTO E INOCULACIÓN DE SACCHAROMYCES
Sembramos sobre una placa petri con Agar Sabouraud preparada previamente.
N/4 * 20* 10
CONTROL 1:
14 15 30 10
27 22 23 4
21 20 23 11
26 12 15 8
= N/4 * 20* 10
= 1124/4 * 20 * 10
= 56200 levaduras/mm3
CONTROL 2:
30 38 35 27
38 34 31 15
47 36 39 37
43 39 42 43
= N/4 * 20* 10
= 2296/4 * 20 * 10
= 114800 levaduras/mm3
CONTROL 3:
48 5 26 5
37 59 24 13
45 50 59 62
30 48 62 40
°BRIX: 12
= N/4 * 20* 10
= 2452/4 * 20 * 10
= 122600 levaduras/mm3
CONTROL 4:
25 26 17 15
33 29 25 28
33 35 25 26
35 18 22 28
°BRIX: 11.2
= N/4 * 20* 10
= 1680/4 * 20 * 10
= 84000 levaduras/mm3
CONTROL 5:
14 10 5 13
22 20 13 4
21 33 23 11
26 12 15 18
°BRIX: 4.9
= N/4 * 20* 10
= 1040/4 * 20 * 10
= 52000 levaduras/mm3
CONTROL 6:
12 5 3 18
12 4 - 21
4 - 12 9
8 10 5 4
°BRIX: 4.5
= N/4 * 20* 10
= 508/4 * 20 * 10
12
10
6 NUMERO DE CONTROL
NUMERO DE LEVADURAS
4
0
0 2 4 6 8 10 12
Como observamos con los resultados de los controles hemos podido crear la
curva de crecimiento de levaduras donde pudimos observar las fases,
Exponencial que comprende desde el Control 1 hasta el Control 2, la
Estacionaria que está comprendida entre el Control 2 y el Control 3 y por último
la de Muerte que comprende desde el Control 3 hasta el Control 6 donde
notamos una notable disminución del número de levaduras, no existe la fase
Lag debido a que la levadura ya se encontraba activa desde que se inoculó.
La asepsia del biorreactor y de las tuberías asociadas a él, garantiza que los
procesos de bioconversión se lleven a cabo sin contaminación por
microorganismos extraños. Los microorganismos contaminantes pueden
competir con el microorganismo cultivado por el sustrato o pueden desplazarlo
al tener una velocidad de crecimiento mayor, incluso pueden producir
sustancias que dañen al microorganismo cultivado o inactiven a las enzimas.
Vázquez, 2007
Álvarez, 2007
Si bien se hizo una fermentación a escala en el cual se siguió con los pasos
correspondientes se pudo observar que con el tiempo disminuía los
nutrientes y las levaduras se morían hasta llegar un punto de constancia.
Novoa, 2010
Hernández, 2003
V. CONCLUSIONES