Agar TSI

Resultados de un agar TSI: (de izquierda a derecha) preinoculado (como control), P. aeruginosa, E.
coli, SalmonellaTyphimurium, Shigella flexneri.

Diferentes cultivos de microorganismos en agar TSI:(de izquierda a derecha) E. coli, Shigella

flexneri, Salmonella Typhimurium, P. aeruginosa
El Agar-hierro-triple azúcar es un medio de cultivo. Gracias a su composición es uno de
los medios de cultivo más empleados para la diferenciación de enterobacterias según:

1. Fermenten o no glucosa.
2. Fermenten o no lactosa o sacarosa.
3. Produzcan o no ácido sulfhídrico.
4. Produzcan o no gas.
Correspondientemente las reacciones sobre agar TSI son:

1. Si la bacteria problema fermenta la glucosa, acidificará el medio haciendo virar a

amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es fermentadora de
glucosa, el medio permanecerá de color rojo.
2. Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa, acidifica el medio en su
superficie volviéndolo de color amarillo, mientras que si no lo es, la superficie del
medio continuará de color rojo.
3. Si produce ácido sulfhídrico (debido a la reducción de las sales de hierro), se
presentará un ennegrecimiento del tubo. La producción de sulfhídrico y el
consiguiente ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentación de la glucosa
(fondo amarillo), pero este hecho implica directamente que la bacteria es
fermentadora de glucosa.
4. Si aparece rotura o desplazamiento del medio, significa que la bacteria es
productora de gas.

Composición[editar]
Peptona 159 g
Extracto de levadura 3 9.9g
Extracto de carne 3g
Sacarosa 10 g
Sulfato de hierro 0,20 g
Cloruro sódico 5g
Tiosulfato de sodio 0,30 g
Rojo fenol 0,024 g
 Medio diferencial
Un medio diferencial consiste en un medio de cultivo que es capaz de distinguir
dos microorganismos por su crecimiento diferencial en el mismo, usando las propiedades
metabólicas de ambos en presencia de un determinado nutriente y de un indicador que
evidencia por ejemplo, un pH ácido en su entorno.
Existen muchos medios diferenciales, en la práctica rutinaria se usan los siguientes:

 Agar TSI: Triple sugar iron (hierro tres azúcares)

 Agar citrato
 Agar urea
 Caldo peptonado: para prueba de indol
 Caldo MR-VP: para prueba rojo metilo y Voges Proskauer
 LIA: Lisine iron agar (lisina hierro)
 SLU: Sacarosa, lactosa y urea. Visualizaciòn de movimiento
 OF: Oxidación-fermentación. Para diferenciar metabolismo aerobio y anaerobio.

IMVIC
El IMViC es una prueba utilizada en biología para la identificación bacterias. Se compone
de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato. El resultado de este
test se expresa mediante símbolos de positivo o negativo (+ o -) según el resultado de
cada prueba, siguiendo siempre el orden establecido por las iniciales del método. Así por
ejemplo, el IMViC de la bacteria Salmonella y Citrobacter es -+-+. Para E.coli es ++-- y
para Klebsiella y Enterobacter es --++.

IMViC Results

Índice
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 1Indol (I)
 2Rojo de Metilo (M)
 3Voges-Proskauer (Vi)
 4Citrato (C)

Indol (I)[editar]
Consiste en cultivar al microorganismo en estudio en un caldo rico en triptófano; después
de 24-48 horas de crecimiento se adiciona al tubo sobre el caldo xilol, para conseguir
separar el indol producido, y tras agitar se incorpora el reactivo de Kovacs (p-dimetil animo
benzaldehido) un resultado positivo mostrará la formación de un anillo de color rojo sobre
el caldo de cultivo, lo cual pondrá de manifiesto la presencia de Indol debido a la utilización
del triptófano por el microorganismo (la molécula de tritófano se rompe y uno de esos
productos es el Indol), un resultado negativo solo mostrara un anillo de color amarillo
propio del reactivo de Kovacs.

Resultado Positivo para prueba de Indol

Rojo de Metilo (M)[editar]

El rojo de metilo es un indicador de pH. (Fórmula: C15H15N3O2). Actúa entre pH 4,2 y 6,3
variando desde rojo (pH 4,2) a amarillo (pH 6,3). Por lo tanto, permite determinar la
formación de ácidos orgánicos que se producen durante la fermentación de un
carbohidrato. El microorganismo en estudio se cultiva en un caldo de cultivo con algún
carbohidrato fermentable, el más común es la glucosa aunque se pueden utilizar otros
carbohidratos como lactosa, sacarosa, manitol, etc, adicionado con el rojo de metilo como
indicador de pH. Una reacción positiva, es decir, el viraje del medio a un color rojo, indica
que el microorganismo realiza la fermentación de la glucosa por la vía ácido-mixta y el pH
del medio se torna hasta 4.2 por la gran cantidad de ácidos orgánico producidos. Una
prueba negativa no cambia el color del medio (color amarillo)

Voges-Proskauer (Vi)[editar]
Algunos microorganismos producen acetoína o acetil metil carbinol por descarboxilación
de dos moléculas de ácido pirúvico (producto final de la glucólisis). La acetoína es un
producto intermedio de la fermentación butilén-glicólica, que conduce a la formación de 2,
3 butanodiol. Tanto la acetoína como el 2,3 butanodiol son productos neutros de la
fermentación de la glucosa que llevan el pH del medio a un valor aproximado de 6 o más, y
un aumento en la producción de dióxido de carbono, respecto a la prueba Rojo de Metilo.
La acetoína en un medio fuertemente alcalino (NaOH o KOH) y en presencia de Oxígeno
se oxida a diacetilo. El diacetilo reacciona con compuestos que contengan núcleos de
guanidina, como la arginina, presente en el medio (peptona por ejemplo), y da un
compuesto color rojo-rosado-violáceo. Se agrega α-naftol para aumentar la sensibilidad.
Esta prueba caracteriza a ciertas especies de las Enterobacteriaceae, e indicará que la
glucosa es fermentada por la vía butanodiólica.

Citrato (C)[editar]
Sirve para determinar si un microorganismo puede crecer utilizando citrato como única
fuente de carbono debido a la síntesis de la enzima citrato permeasa la cual permite la
introducción del citrato al interior de la célula, una vez dentro, el citrato es incorporado al
ciclo de los ácidos tricarboxilicos o ciclo de Krebs. Se hace crecer al microorganismo en
estudio en caldo citrato. Un resultado positivo es cuando se observa turbidez en el tubo,
debido al crecimiento bacteriano. Un resultado negativo es cuando no se observa
crecimiento. Actualmente el medio más utilizado es el Agar Citrato de Simmons un medio
sólido en tubo con pico de flauta el cual posee un indicador de pH (azul de bromotimol) si
el microorganismo es capaz de crecer con citrato como única fuente de carbono, también
será capaz de utilizar las sales de amonio como única fuente de nitrógeno; con la
liberación del amoniaco en utilización de las sales de amonio el pH aumentara y el
indicador dará un vire a azul, dando un resultado positivo. El medio sin inocular es de color
verde, de esta manera un resultado negativo no habrá crecimiento y el color seguirá
siendo verde

Utilización del citrato

Fundamento

Esta prueba nos permite diferenciar un grupo de bacterias que son capaces de crecer con citrato como única fuen
y sales amónicas inorgánicas como única fuente de nitrógeno, provocando la alcalinización del medio.
El medio a utilizar es agar Citrato de Simons, que contiene citrato de sodio, fosfato de amonio y azul de bromotim
indicador de pH.

Sólo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este medio y liberarán iones amonio lo
con el metabolismo del citrato, generará una fuerte basificación del medio que será aparente por un cambio de co
de verde a azul

Prueba Voges-Proskauer
De Wikipedia, la enciclopedia libre

Enterobacter cloacae
Proteusmyxofaciens

Dos cultivos de caldo bacteriano, que muestran un resultado positivo(lado izquierdo) y un

resultado negativo (lado derecho) para la prueba de VP.

Voges-Proskauer / f ʊ ə s p r ɒ s k aʊ . ər / o VP es una prueba utilizada para

detectar acetoína en un cultivo de caldo bacteriano . La prueba se realiza agregando alfa-
naftol e hidróxido de potasio al caldo Voges-Proskauer que se ha inoculado con
bacterias. Un color rojo cereza indica un resultado positivo, mientras que un color amarillo-
marrón indica un resultado negativo. [1]
La prueba depende de la digestión de glucosa a acetilmetilcarbinol . En presencia de
oxígeno y una base fuerte, el acetilmetilcarbinol se oxida a diacetilo, que luego reacciona
con compuestos de quanidina que se encuentran comúnmente en el medio de peptona del
caldo. El alfa-naftol actúa como un potenciador del color, pero el cambio de color a rojo
puede ocurrir sin él.
Procedimiento: Primero, agregue el alfa-naftol; luego, agregue el hidróxido de potasio. Una
inversión en el orden de los reactivos que se agregan puede dar como resultado una
reacción débilmente positiva o falsamente negativa.
VP es una de las cuatro pruebas de la serie IMViC , que prueba la evidencia de una
bacteria entérica. Las otras tres pruebas incluyen: la prueba de indol [I], la prueba de
metilo rojo [M] y la prueba de citrato [C]. [2]
Los microorganismos VP positivos incluyen Enterobacter , Klebsiella , Serratia
marcescens , Hafnia alvei , Vibrio cholera biotipo eltor y Vibrio alginolyticus . [3]
Los organismos VP negativos
incluyen Citrobacter sp., Shigella , Yersinia , Edwardsiella , Salmonella , Vibrio
furnissii , Vibrio fluvialis , Vibrio vulnificus y Vibrio parahaemolyticus . [3]

Historia [ editar ]
La reacción fue desarrollada por Daniel Wilhelm Otto Voges y Bernhard
Proskauer , bacteriólogos alemanes en 1898 en el Instituto de Enfermedades Infecciosas
. Ureasa
Fundamento

Algunas bacterias son capaces de emplear la urea como única fuente de nitrógeno. En tal caso la bacteria ha d
enzima, la ureasa, capaz de atacar la urea. Al descomponerse se libera amoniaco que alcaliniza el medio.
El medio de cultivo posee un indicador de pH que vira a un color rosa intenso cuando dicho pH se hace básico;
podemos detectar la producción de amoniaco y, en última instancia, la presencia del enzima ureasa. El medio de
emplear es el agar urea.

Realización práctica

En una placa de Petri conteniendo el medio agar urea se realiza una siembra mediante la técnica del agotamien

Se incuba a 37ºC durante 24 horas al cabo de las cuales se observa si el medio vira del color ámbar claro inicia
rosa intenso (fucsia).
Los posibles resultados positivos se muestran en las siguientes figuras. Algunas bacterias producen una elevad
enzima y vira toda la placa a color fucsia, y otras producen menos cantidad y el viraje es menor.
 AGAR UREA Medio de cultivo UREA
INTRODUCCIÓN:
El medio UREA preparado por MEDIBAC LAB es un Medio utilizado para diferenciar
microorganismos en base a la actividad ureásica. Se utiliza para identificar bacterias que
hidrolizan urea, tales como Proteus spp, otras enterobacterias y estafilococos.
COMPONENTES

Prueba del indol

La prueba del indol es una prueba bioquímica realizada en especies bacterianas para
determinar la habilidad del organismo de romper el indol del aminoácido triptófano. Esta
división molecular es lograda por una serie de enzimas intracelulares diferentes, un
sistema que en conjunto se le llama con frecuencia triptofanasa.

Se genera el indol por una desaminación reductiva del triptófano via la molécula
intermediaria ácido indolpirúvico. Las triptofanasas catalizan la reacción de desaminación,
durante el cual se remueve el grupo amino (NH2) de la molécula de triptófano. Los
productos finales de la reacción son el indol, ácido pirúvico, amoníaco (NH3) y energía.
Como coenzimade la reacción se requiere al fosfato de piridoxal.

Índice
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 1Procedimiento
 2Bacterias indol positivas
 3Bacterias indol negativas
 4Referencias
Procedimiento[editar]
Tal como ocurre con muchas pruebas bioquímicas, los resultados de una prueba de indol
se indican con el cambio de color que sigue a la reacción. El cultivo bacteriano puro debe
ser sembrado en un caldo con triptofano o peptona estériles o ambos por 24 a 48 horas
antes de realizar la prueba. Luego de la incubación, se añaden cinco gotas de reactivo
Kovac (alcohol isoamilo, p-dimetilaminobenzaldehído y ácido clorhídrico concentrado) al
caldo del cultivo.
Una variante de la prueba se realiza usando el reactivo de Ehrlich (usando alcohol
etílico en lugar del alcohol isoamilo, desarrollado por Paul Ehrlich), en especial si se tiene
un organismo que no sea fermentador y en organismo anaeróbico.
Los resultados positivos originan un color rojo o rojo-violeta en la superficie de la capa de
alcohol en el cultivo. Un resultado negativo se muestra amarillo. Un resultado variable
puede ocurrir cuando se muestra un color anaranjado. Ello es debido a la presencia
de escatol, también conocido como metil-indol o indol metilado, otro posible producto de la
degradación del triptófano.

Bacterias indol positivas[editar]

Resultado Positivo para prueba de Indol

Las bacterias que resultan indol positivas al romper el indol del triptófano, incluyen:

 Aeromonas hydrophila, Aeromonas punctata,

 Bacillus alvei,
 La mayoría de los Citrobacter spp.,
 Edwardsiella spp.,
 Escherichia coli,
 Flavobacterium spp.,
 Haemophilus influenzae,
 La mayoría de los Proteus spp. (excepto P. mirabilis),
 Klebsiella oxytoca
 Plesiomonas shigelloides,
 Pasteurella multocida, Pasteurella pneumotropica, y
 Vibrio spp.
 Staphylococcus aureus
Bacterias indol negativas[editar]
Las bacterias que generan un indol negativo en esta prueba, incluyen:

 Actinobacillus spp.,
 Aeromonas salmonicida,
 Alcaligenes spp.,
 La mayoría de los Bacillus spp.,
 Bordetella spp.,
 Enterobacter spp.,
 La mayoría de los Haemophilus spp.,
 La mayoría de los Klebsiella spp.,
 Neisseria spp.,
 Pasteurella haemolytica, Pasteurella ureae,
 Proteus mirabilis,
 Pseudomonas spp.,
 Salmonella spp.,
 Serratia spp.,
 Yersinia spp.
 Cedecea spp.

MÉTODOS DE SIEMBRA DE MICROORGANISMOS

Siembra por estrías
Este método de siembra se realiza sobre la superficie de los medios de cultivo
sólidosdistribuidos en placas de "Petri" o en tubos de ensayo solidificados en forma de
cuña.
Procedimientos

Coger el asa por el cabo, en forma similar, a cuando tomamos el lápiz para escribir.

Introduzca el asa de alambre de platino directamente en la zona de color azul de lallama

del mechero, hasta que se ponga al rojo vivo. Seguidamente, proceda a
introducirlentamente el resto del alambre para lograr el mismo efecto.

Retire el instrumento de la llama y espere de 4 a 5 segundos con el objetivo de que elasa

se enfríe.

Con el asa estéril y fría tome el volumen o fragmento de la muestra que será sembradoy
trasládelo de inmediato para el medio del cultivo seleccionado.
Con la mano opuesta a la que sujeta el asa de platino, tome la placa dePetri, de manera
que la tapa quede hacia arriba. Con ayuda del dedo pulgar abra parcialmente la placa.

Introduzca el asa con la muestra y proceda a deslizarla suavemente en forma de

zigzag,desde la pared, hasta cubrir aproximadamente un tercio de toda la superficie.

Cierre la placa y gírela varios cm, en contra de las manecillas del reloj, procediendo
aabrirla nuevamente por igual procedimiento.

Introduzca nuevamente el asa y haga un segmento similar alanterior, de manera que las
bacterias sembradas en el primersegmento sean removidas para el segundo.

Repita esta operación una o dos veces más.

Finalmente cierre la placa y colóquela sobre la mesa de trabajo boca abajo.

Esterilice el asa de platino a la llama del mechero, en la forma explicada antes dedejarla
en el puesto de trabajo.
Siembra por estría por agotamiento
Con éste procedimiento se puede conseguir una buena separación de las colonias
yaislarlas fácilmente. Para ello se funde el medio de cultivo, se vuelca en caja de Petri y
sedeja solidificar. Con el asa previamente esterilizada se toma material de un
cultivoheterogéneo y se descarga sobre la superficie del medio formando estrías. Esto
puederealizarse de varias formas:I.

Al comienzo se coloca el inoculo, luego se continúa con las estrías. Cuando sequiere
obtener colonias muy separadas se puede utilizar dos o tres placas de Petri, para lo cual
se repite la operación sin tomar con el asa nuevo material.II.

Se puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una vez depositado elmaterial en
el primero, siguiendo el sentido de las agujas del reloj, se hace una estríaluego en el
segundo, tercero y cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el asa; en elúltimo cuadrante
aparecerán las colonias aisladasIII.

El inóculo se extiende sobre una pequeña zona de la placa, próxima al borde,

seesteriliza el asa y se traza otra estría a partir del depósito y así sucesivamente.
Siembra por punción
El instrumento de siembra a emplear será la aguja de platino y el medio de cultivo
sólido,generalmente, en tubo de ensayo. Las manipulaciones y la observancia de las
precaucionesde asepsia, son similares que cuando se utiliza el asa.La particularidad que
tiene este método, es que la aguja (con el inoculo) debe atravesar perpendicularmente el
medio de cultivo.
Siembra por dilución
Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo simple. Se toma el material
adiluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada con el material
bacteriológico, seagita, con movimientos moderados. La finalidad poner a la bacteria en
suspensión.
Siembra por TSI
El TSI (Triple Sugar Iron) es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro
y unindicador que es el rojo fenol.En este medio se siembra por picadura y estrías en
superficie.A lo largo del canal se desarrollan los microorganismos, y según lo hagan en
la partesuperior o inferior del tubo, estarán indicando su comportamiento frente a los
azucares.