MEDIOS DE CULTIVO

Objetivo general: Interpretar los medios de cultivo usados para los diferentes
tipos de microorganismos.

Marco teórico
Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo
de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe
sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos
van a crecer y multiplicarse para dar colonias. Los microorganismos son los seres más
abundantes de la tierra, pueden vivir en condiciones extremas de pH, temperatura y
tensión de oxígeno, colonizando una amplia diversidad de nichos ecológicos. Entre los
requerimientos más importantes para su desarrollo están el carbono, el oxígeno,
nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del
aporte extra de factores de crecimiento específicos en forma de suero, sangre y extracto
de levadura entre otros.(1)

 Clasificación de los medios de cultivo

Según su origen:
a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o
vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se
conoce exactamente.
b) SINTÉTICOS: son los medios que contienen una composición química definida cuali
y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
c) SEMISINTÉTICOS son los sintéticos a los que se les añaden factores de crecimiento
bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo extracto de
levadura. (1)

Según su consistencia:
a) LÍQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución acuosa.
b) SÓLIDOS: se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo) a razón de
15g/litro. El agar es una sustancia inerte polisacárida (hidrato de carbono) que se extrae
de las algas. Como esta sustancia no es digerida por las bacterias no constituye ningún
elemento nutritivo. Este conjunto convenientemente esterilizado puede ser vertido en
placas de Petri o en tubos de ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar
bacterias, "procesos que antes no eran posibles en medio líquido".
c) SEMISÓLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para determinar la
motilidad de las especies en estudio. Actualmente se encuentran disponibles
comercialmente con el agregado de agar. (1)

Según su composición: A causa de los requerimientos químicos del mundo

microbiano, a veces es necesario agregar o eliminar componentes químicos del medio.
a) COMUNES O UNIVERSALES: su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de los
microorganismos poco existentes. Es el medio más frecuentemente utilizado para
mantener colonias microbianas. Por ejemplo: agar común o caldo común.
b) ENRIQUECIDOS: están compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento
al cual se le puede agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos,
por ejemplo: sangre, suero, líquido ascítico, etc. Se utiliza para microorganismos que
tienen grandes exigencias nutricionales.
c) SELECTIVOS: son sólidos en los que la selectividad se consigue alterando las
condiciones físicas del medio o añadiendo o suprimiendo componentes químicos
específicos con el fin de inhibir el crecimiento de especies químicas cuyo crecimiento no
interesa. Este tipo de medio sólo permite el crecimiento de un grupo de microorganismos
e inhibiendo el de otros. Se utiliza para seleccionar y aislar microorganismos a partir de
poblaciones mixtas. Por ejemplo Agar salado-manitol o Chapman (permite el
crecimiento de ciertos estafilococos). (1)
4. Indicar brevemente que microorganismos patógenos aislaría de
estas muestras (no olvide referenciar lo investigado)

 Enterobacterias
La única familia que integra el orden Enterobacteriales. Esta familia contiene más de 30
géneros y más de 100 especies, son Gram negativas y pueden tener morfología de
bacilos o cocos. Los miembros de este grupo forman parte de la microbiota del intestino
(llamados coliformes) y de otros órganos del ser humano y de otras especies animales.
Algunas especies pueden vivir en tierra, en plantas o en animales acuáticos. Mueren
con relativa facilidad ante desinfectantes comunes, incluido el cloro. (2)

La familia Enterobacteriaceae se agrupa por fenotipo y deben cumplir los

siguientes criterios básicos:

 Gram negativos, la gran mayoría bacilos.

 Fácilmente cultivables.
 Son oxidasa negativa y catalasa positiva.
 Reducen nitratos a nitritos
 Anaeróbicos facultativos
 Realizan la fermentación de carbohidratos en condiciones anaeróbicas en la
cual pueden producir o no gas (CO2 y H2), y son oxidadores en condiciones
aeróbicas.
 Pueden tener o no flagelos que en caso de existir son peritricos.
 Además, son quimioheterótrofos que no forman esporas. (2)

1. E. coli
 Se pueden adquirir infecciones por E. coli al consumir alimentos que contienen
la bacteria. Para ayudar a evitar la intoxicación por alimentos y prevenir infecciones,
es preciso manipular la comida con seguridad, cocinar bien las carnes a alta
temperatura, lavar las frutas y verduras antes de comerlas o cocinarlas, y evitar la
leche sin pasteurizar. (3)

Características:

E. coli se caracteriza por poseer bacilos Gram negativos, no esporulante,

producción de indol a partir de triptófano, no utilización de citrato como fuente de
carbono y no producción de acetoína. Además, fermenta la glucosa y la lactosa con
producción de gas. (3)

Actualmente se reconocen 5 grupos:

 enteropatogena
 enterotoxigenico
 enteroinvasivo
 enterohemorragico
 enteroagregativp

DIAGNOSTICO clínico: Heces, Orina, EsputO, LCR, Sangre, Pus (abscesos)

DIAGNOSTICO LABORATORIO: Coprocultivo, McConkey, Hecktoen, EMB (4)

2. Shigellas

Shigella es un tipo de bacteria que puede infectar el aparato digestivo, provocando

un amplio abanico de síntomas, desde la diarrea, los retortijones, los vómitos y las
náuseas hasta complicaciones y enfermedades más graves. (5)

Características:

El género Shigella se incluye en la familia Enterobacteriaceae; está constituido por

bacilos cortos gramnegativos sin agrupación, que miden de 0.7 µm x 3 µm; son
inmóviles, no esporulan ni presentan cápsula y su DNA alcanza una similitud de
hasta 70-75% en relación con el de Escherichia coli, lo cual indica una gran relación
con esta última especie.(5)

Diagnóstico de laboratorio:
 Shigella se desarrolla bien en medios sencillos y en los enriquecidos (agar nutritivo,
agar tripticaseína-soya, agar sangre y agar chocolate), así como en los agares
eosina-azul de metileno (EMB), MacConkey, Salmonella-Shigella (SS), agar xilosa-
lisina-desoxicolato (XLD), verde brillante (VB) y Hecktoen. (5)

Diagnóstico clínico:
Se realiza mediante coprocultivo (cultivo de heces), que ofrece mejores resultados
en los primeros días de la enfermedad, y la posterior identificación bioquímica y
antigénica del microorganismo. (5)

3. Salmonella

Salmonella es una de las cuatro principales causas de enfermedades diarreicas.

Si bien la mayoría de los casos de salmonelosis son leves, algunas veces la
enfermedad puede ser mortal. La gravedad de la enfermedad depende de factores
propios del huésped y del serotipo de Salmonella. (6)

Características:

Salmonella es el nombre del género de una bacteria móvil (con excepción de las
bacterias S. gallinarum y S. pullorum que no son móviles), con forma de barra, no
espongiforme y Gram negativa.

Está presente muy frecuentemente en los animales, especialmente en las aves y los
porcinos. Entre las fuentes ambientales de este organismo se incluyen el agua, el suelo,
los insectos, las superficies de las fábricas, las superficies de las cocinas, las heces
fecales de los animales, las carnes crudas, el pollo crudo, los productos marinos crudos,
entre otros.(6)

Diagnostico clínico:

Con esta finalidad, es necesario realizar un análisis de las heces, un frotis rectal y un
análisis del vómito o de los restos de la comida contagiada, ya que ahí están contenidas
las bacterias de la salmonella. (6)

Diagnóstico de laboratorio:

 Mediante coprocultivo: Se analizan las heces del paciente para poder aislar la
salmonela, también se puede optar por un frotis rectal aunque se prefiere el primer
método. Sería el método más utilizado para el diagnóstico de la gastroenteritis causada
por esta bacteria.
 Mediante hemocultivos: es decir, cultivos llevados a cabo gracias a una muestra de
sangre. Esta técnica es útil en los casos graves, como la fiebre tifoidea (6)

 Cocos

Es de forma esférica. Estas se clasifican en: Diplococo: Cocos en grupos de dos.

Sarcinas: Cocos en grupos de cuatro. Estreptococo: Cocos en cadenas. Estafilococo:
Cocos en agrupaciones irregulares o en racimo.

1. Staphylococcus aureus

Estas bacterias se contagian por contacto directo con una persona infectada, al utilizar
un objeto contaminado o por inhalación de gotitas infectadas que se dispersan al
estornudar o toser. Las infecciones cutáneas son frecuentes, pero la bacteria puede
propagarse a través del torrente sanguíneo e infectar órganos distantes. Las infecciones
cutáneas pueden causar ampollas, abscesos y enrojecimiento e hinchazón de la zona
infectada.(7)

Características:

Los estafilococos son un amplio grupo de bacterias Gram-positivas, cuyo diámetro oscila
entre 0.5 y 1.5 micras. Se caracterizan porque se dividen en agrupaciones que asemejan
racimos de uva. (7)
Diagnóstico de laboratorio:
En el laboratorio esta bacteria crece tanto en agar sangre como en agar chocolate
después de 24 horas a 37°C, y se observan colonias medianas, blancas, cremosas,
brillantes, pasada las 24 horas (48-72 horas), se pueden ver esas colonias blancas
ahora de color amarillo. (7)
2. Streptococcus pneumoniae
El neumococo es un tipo de bacteria estreptocócica. La bacteria se disemina a través
del contacto con personas que están infectadas o con personas que no están enfermas
pero que portan la bacteria en la parte posterior de su nariz. Las infecciones
neumocócicas pueden ser leves o graves. (4)
Características:
Es un microorganismo patógeno capaz de causar en humanos diversas infecciones y
procesos invasivos severos. Se trata de una bacteria Gram positiva de 1,2-1,8 µm de
longitud, que presenta una forma oval y el extremo distal lanceolado. Es inmóvil, no forma
endosporas, y es un miembro alfa-hemolítico del género Streptococcus. (4)

Diagnostico clínico
Las infecciones neumocócicas más frecuentes son las localizadas o producidas por
diseminación directa: otitis media, rinosinusitis y neumonía no bacteriémica (80% de las
neumonías neumocócicas) (4)
Diagnóstico de laboratorio:
Los hemocultivos positivos son más frecuentes en los casos de meningitis neumocócica,
con tasas > 50% (8). En cuanto al esputo, es difícil obtener en niños muestras de calidad,
considerando como tal el que contiene < 10 células escamosas epiteliales y >25
polimorfonucleares (pmn) por campo de amplificación x100. Si presenta elevado número
de células epiteliales escamosas y bajo de pmn, se debe desechar, ya que la flora
hallada posiblemente sea comensal. La tinción de Gram más el cultivo de LCR sirven
para diagnosticar la mayoría de los casos de meningitis neumocócica (sensibilidad 84%,
especificidad 98%). El examen líquido pleural mediante aguja transtorácica proporciona
buen rendimiento diagnóstico. (4)
 Neisserias
Es un género de bacterias, perteneciente a las proteobacterias beta, un gran grupo de
bacterias Gram-negativas.
Las Neisseria son diplococos, que se asemejan a granos de café al ser observados con
el microscopio óptico.El género incluye las especies Neisseria gonorrhoeae (llamada
también gonococcus), causante de la gonorrea, y Neisseria meningitidis (llamada
también meningococcus), una de las causas más comunes de meningitis bacteriana y
agente causal de sepsis meningocócica. (8)
1. Neisseria gonorrhoeae
Se propaga con cualquier tipo de actividad sexual. Se puede contraer por contacto con
la boca, la vagina, el pene o el ano. La bacteria es altamente contagiosa, pero
solamente se encuentra en las mucosas.
Las bacterias proliferan en áreas corporales húmedas y cálidas, incluso el conducto que
transporta la orina fuera del cuerpo (uretra). En las mujeres, las bacterias se pueden
encontrar en el aparato reproductor (que incluye las trompas de Falopio, el útero y el
cuello uterino). Esta bacteria puede incluso proliferar en los ojos.(8)

Características:
La Neisseria gonorrhoeae o gonococo es una bacteria Gram-negativa, oxidasa positiva,
aeróbica, nutricionalmente fastidiosa, que microscópicamente aparece como
diplococos. Los humanos son los únicos hospedadores naturales del gonococo, el cual
se transmite por vía sexual. (8)
Diagnóstico clínico:
Es posible que algunos hombres con gonorrea no presenten ningún síntoma. Sin
embargo, los hombres que presentan síntomas pueden tener sensación de ardor al
orinar, secreción de color blanco, amarillo o verde del pene y dolor o inflamación en los
testículos. Los síntomas en las mujeres pueden ser muy leves o inespecíficos y se
pueden confundir con otro tipo de infección. Estos síntomas comprenden dolor o
sensación de ardor al orinar, aumento de la secreción vaginal y sangrado vaginal entre
periodos. (8)
Diagnóstico de laboratorio:
El aislamiento de N. gonorrhoeae mediante cultivo es el método estándar para el
diagnóstico. Las técnicas de amplificación de ácidos nucleicos basadas en PCR se
caracterizan por su rapidez y por tener una sensibilidad similar a la del cultivo pero mayor
especificidad. También se puede realizar el diagnóstico visualizando al microscopio una
tinción de Gram pero la sensibilidad no llega al 50% si se trata de hombres con uretritis
asintomática, o en muestras cervicales o rectales. (8)

2. Neisseria meningitis

La bacteria se transmite de persona a persona a través de gotículas de las secreciones

respiratorias o de la garganta. La propagación de la enfermedad se ve facilitada por el
contacto estrecho y prolongado (besos, estornudos, tos, dormitorios colectivos, vajillas
y cubiertos compartidos) con una persona infectada. El periodo de incubación medio es
de 4 días, pero puede oscilar entre 2 y 10 días. (8)
Características:

Neisseria meningitidis o meningococo es una bacteria Gram-negativa, oxidasa-positiva,

aeróbica, que microscópicamente aparece como diplococos. Las distintas cepas se
clasifican en serogrupos en función de los polisacáridos de la cápsula. Los
meningococos son una de las principales causas de la meningitis meningocócica. (8)
Diagnóstico clínico:
Los síntomas más frecuentes son rigidez de nuca, fiebre elevada, fotosensibilidad,
confusión, cefalea y vómitos. Incluso cuando se diagnostica tempranamente y recibe
tratamiento adecuado, un 5 a 10% de los pacientes fallece, generalmente en las
primeras 24 a 48 horas tras la aparición de los síntomas. (8)
Diagnóstico de laboratorio:
El examen macroscópico del LCR permite observar el color, la turbidez y la presencia
de depósitos y coágulos. El LCR de pacientes con meningitis bacteriana aguda tiene
habitualmente un aspecto turbio o purulento y la presión de salida es elevada. El
recuento celular muestra la presencia de leucocitos en número variable pero
habitualmente cercano a las 1.000 células/mm3 (valores normales < 5 células/mm3 en
el adulto), con un predominio de los polimorfonucleares (ordinariamente >90%). (8)

5. Materiales empleados
1. Elementos de bioseguridad: mandil, mascarilla y guantes.
2. caja Petri
3. algodón
4. alcohol
5. agar necesario para el medio de cultivo
6. probeta para medir volúmenes necesarios de caldo
7. parrilla eléctrica para disolver el caldo
8. autoclave para esterilizar
9. Incubadora para colocar los medios
10. Microscopio

6. Procedimiento breve
1. El medio de cultivo se reduce para la cantidad deseada del mismo y se disuelve en
agua destilada siguiendo las instrucciones del fabricante.
2. Las sustancias termolábiles, se esterilizan por filtración y se añaden al resto de los
componentes
3. Si es un medio sólido, se difunde en tubos ó en matraces será necesario fundir el
agar en baño María u horno microondas, una vez fundido y homogenizado, se distribuye
en caliente a los tubos o matraces.
3. Tienen que ser previamente esterilizados en la autoclave y enfriados a temperatura
ambiente o de ser posible a 40-50ºC si se trata de medios con agar.
4. Finalizada la esterilización los medios se dejaran enfriar a temperatura ambiente.
5. Se preparan las placas petri vertiendo el medio fundido y estéril dentro de ellas y en
un ambiente aséptico
6. Es conveniente homogenizar el medio en el transcurso de la operación para evitar
que el agar sedimente en el fondo del recipiente y no se distribuya por igual en todas las
placas.

7. Es posible conservar el medio destinado a preparar placas Petri solidificado y estéril

en tubos que se fundirán al baño Maria en el momento de la preparación de las mismas.

8. Los caldos y medios sólidos pueden conservarse, una vez esterilizados, a

temperatura ambiente pero para reducir su deshidratación y el consiguiente cambio en
las concentraciones de sus componentes es preferible conservarlos a 4ºC.

7. Representación grafica de lo observado

Hongos E.coli
8. Bibliografía
1. Martinez. Medios de cultivo. 2015. Disponible en:
http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf4
2. Guido.M , Vlez. A, . Enterobacterias. 2016. Disponible en:
https://www.ecured.cu/Enterobacterias.
3. Andrade. G. E.coli. 2016. Disponible en:
https://analizacalidad.wordpress.com/2015/01/14/caracteristicas-mas-importantes-de-
la-escherichia-coli/
4. Blades.M. Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica.2014.elviester.
Disponible en: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0213005X07742441
5. Molina.J. INFECCIONES POR SHIGELLA SPP. 2017. Universidad nacional de
Mexico. Disponible en:
http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/bacteriologia/shigella.html
6. Alvarez. N. Salmonelosis. 2015. Disponible en:
http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs139/es/
7. Socorro.G. Microbiología general de Staphylococcus aureus: Generalidades,
patogenicidad y métodos de identificación. 2013. Disponible en:
http://www.medigraphic.com/pdfs/revbio/bio-2014/bio143d.pdf
8. Jara. H. neiserias. 2015. Disponible en: http://www.vircell.com/enfermedad/40-
neisseria-gonorrhoeae/