Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias

Biológicas
Departamento de Microbiología
Academia de Fisiología y Bioquímica Microbiana
Laboratorio de Bioquímica Microbiana

Práctica 1, “Balance de fermentación”

Grupo: 5IM2 Sección: 2 Equipo: 6
Integrantes:
 León Felipe
 Ramírez Rojano Alan
 Salinas Bailón Víctor Manuel
Fecha de entrega: 23 de Marzo de 2018
Hipótesis.
 La levadura Saccharomyces cerevisiae lleva a cabo una fermentación
alcohólica en ausencia de O2 y presencia de altas concentraciones de
glucosa,
o si es así, entonces la levadura producirá etanol y CO2 en una
proporción de moles igual al doble de los que consumió de glucosa.

Objetivos.

 Hacer un balance de fermentación del proceso de fermentación

alcohólica de la levadura Saccharomyces cerevisiae, a través de la
cuantificación de:
o etanol producido por el método de Conway,
o CO2 producido por gravimetría, y
o de glucosa residual por método del 3,5-DNS.

Numero de
Sustrato y mM Mol/ Mol de Valor Productos Productos carbono
producto. calculado. glucosa. de oxidados. reducidos. recuperado.
O/R.

Glucosa 0.5648 1 0 - - -
Etanol 0.4347 0.7696 -2 - 1.5392 1.5392
CO2 0.1638 0.2900 +2 0.58002 - 0.2900

Calculo dé % de carbono recuperado.

∑ 𝑆𝑢𝑚𝑎𝑡𝑜𝑟𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑐𝑎𝑟𝑏𝑜𝑛𝑜 𝑟𝑒𝑐𝑢𝑝𝑒𝑟𝑎𝑑𝑜 𝑒𝑛 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜𝑠
% Carbono recuperado = 𝑁𝑢𝑚𝑒𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑟𝑏𝑜𝑛𝑜 𝑝𝑜𝑟 𝑀𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑑𝑜

1.5392+0.29
% Carbono recuperado = ( ) (100) = 30.4868 %
6
Cálculo del índice O/R.
∑ 𝑃𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜𝑠 𝑜𝑥𝑖𝑑𝑎𝑑𝑜𝑠. 1.5392
Índice O/R = ∑ 𝑃𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜𝑠 𝑟𝑒𝑑𝑢𝑐𝑖𝑑𝑜𝑠.= = 2.6537
0.58002
Discusión.
La fermentación alcohólica es un tipo de fermentación en la cual a partir de una
etapa de descarboxilación y una etapa de oxidación se produce a partir de una
molécula de α-D glucosa, dos moléculas de etanol u dos de dióxido de carbono. El
balance de fermentación dicta la estequiometria que siguen los metabolitos
secundarios respecto al sustrato, para así definir la eficiencia de la fermentación en
términos de % de carbono recuperado y del índice de O/R.
Las levaduras como microorganismos quimioheterótrofos requieren como fuente de
carbono y de energía compuestos orgánicos como la glucosa. Levaduras como en
este caso, Saccharomyces cerevisae, llevan a cabo un metabolismo fermentativo,
dando como metabolitos secundarios dióxido y etanol, el cual es impulsado en
condiciones aerobias por un aporte importante de sustrato, en este caso glucosa.
Para determinar la cantidad de glucosa empleada en el proceso fermentativo, se
determina la cantidad de glucosa transportada por la cuantificación del ácido 3-
amino 5- nitro salicílico. Para determinar la cantidad de dióxido de carbono
producido durante el proceso fermentativo se emplea un método gravimétrico
indirecto tras la cuantificación de 𝐵𝑎𝐶𝑂3. Finalmente, para determinar la cantidad de
etanol producido se emplea el método de Conway.
Según dicta la estequiometria, por cada mol de glucosa transportada se producen
dos moles de 𝐶𝑂2 y dos moles de etanol, de manera que puede entenderse que el
índice O/R debe ser igual a 1 puesto que la cantidad de productos oxidados, como
en este caso el 𝐶𝑂2, y la cantidad de productos reducidos (etanol), son exactamente
iguales. Dado que el índice O/R es de 2.6537, puede entenderse que la cantidad de
dióxido de carbono es mayor a la cantidad de etanol, por tanto no es coherente a la
estequiometria de la reacción; esto a su vez es confirmado por que ni la
concentración de dióxido de carbono ni la concentración de etanol consiguen
duplicar la concentración de glucosa transportada durante la fermentación, por lo
que existe una merma en la cantidad de carbono recuperado, el cual refleja un valor
del 30.4868 %. A todo ello se aprecia una pérdida de eficiencia.
Tras haber obtenido una cantidad de productos oxidados de 1.5392 mM, se puede
inferir que el método para la determinación de 𝐶𝑂2 no es conveniente, dado que la
superficie de contacto es tan limitada que no permite que todo el 𝐶𝑂2 producido
pueda ser llevado a 𝑁𝑎2 𝐶𝑂3, y no lo es tanto por la cantidad de NaOH que se
adicionó, puesto que los moles que existen en 0.2 ml de NaOH al 20% que son 100
mmol, son suficientes para que puedan reaccionar con 2 mmol de 𝐶𝑂2 a partir de 1
mmol de glucosa adicionada. Otro punto a considerar para que exista una pérdida
en la cantidad de productos oxidados (𝐶𝑂2) es un mal sellado del recipiente
propiciando la fuga del mismo, o bien, una mala recuperación del precipitado
durante el filtrado.
El método de Conway consiste en una reacción óxido-reducción donde el Cr (VI) es
reducido a Cr (III) y deja de manifiesto el 𝐾2 𝐶𝑟2 𝑂7 que no reaccionó y que por tanto
permite cuantificar un aumento de etanol acorde a un decremento del mismo. El
rendimiento teórico estequiométrico para la transformación de glucosa a etanol es
de 0.7696 mM de etanol por 1 mM de glucosa, y con una recuperación de 20.7976
mg de etanol, lo que corresponde a un 12.82 % del total de glucosa transportada,
por tanto puede inferirse que el rendimiento no es el mejor y que el método no es el
indicado por el motivo que sigue:
Al igual que en la determinación de 𝐶𝑂2, la cantidad de 𝐾2 𝐶𝑟2 𝑂7 que reacciona no
es la suficiente, debido a que la superficie de contacto es limitada, y el etanol no
logra difundirse a través de esta, impidiendo que pueda ser cuantificado todo el
etanol producido.
Otro punto a considerar es que al modificar las condiciones fisicoquímicas del medio
pueden variar, entonces el metabolismo puede estarse dirigiendo a la formación de
productos diferentes, tales reflejan el valor adquirido al % carbono recuperado, pero
para confirmar o rechazar esto último es necesario realizar una prueba
característica.

Conclusiones.
 La cantidad de dióxido de carbono producido fue de 0.29001 mM de 𝐶𝑂2/ mM
de glucosa.
 La cantidad de etanol recuperado fue de 0.7696 mM de etanol/ mM glucosa.

Bibliografía.