INDICE

1. INTRODUCCION .................................................................................................................... 2
2. OBJETIVOS............................................................................................................................. 2
3. MATERIALES Y EQUIPOS ....................................................................................................... 2
4. PROCEDIMIENTO Y MÉTODO ............................................................................................... 3
4.1. PARA EL MÉTODO CUANTITATIVO ............................................................................... 3
4.2. PARA EL MÉTODO CUALITATIVO.................................................................................. 3
4.3. PREPARACIÓN DEL BLANCO ......................................................................................... 3
5. RESULTADOS ......................................................................................................................... 3
5.1. CUALITATIVO ................................................................................................................ 3
5.2. CUANTITATIVO ............................................................................................................. 4
6. DISCUSIÓN ............................................................................................................................ 4
7. CONCLUSIONES ..................................................................................................................... 4
8. REFERENCIAS ........................................................................................................................ 5
9. ANEXOS ................................................................................................................................. 5
 PRACTICA N°1
DETERMINACION DE CARBOXIHEMOGLOBINA (HbCO) EN SANGRE
HUMANA

1. INTRODUCCION

El monóxido de carbono es un gas incoloro, inodoro, insípido y no irritante que se

origina de la combustión incompleta de la materia orgánica. Su afinidad a la
hemoglobina es aproximadamente 240 veces mayor que el oxígeno, de manera que
desplaza a este último provocando hipoxia. Es un tóxico no específico y se ha
encontrado que inhibe la actividad de la enzima citocromo a3
oxidasa, causando una peroxidación lipídica. La magnitud de sus efectos está
relacionada con las cantidades absorbidas y el tiempo de exposición. El complejo
monóxido de carbono-hemoglobina, conocido como carboxihemoglobina (HbCO), es
generalmente utilizado como bioindicador de intoxicación por este gas, aunque no es
100% fidedigno para evaluar la dimensión del daño en el organismo.
Las intoxicaciones por monóxido de carbono (CO) ocupan un especial interés en la
ciencia forense. Muchos incidentes de envenenamiento por CO se producen debido a
la combustión incompleta, el fuego, los gases de escape de automóviles entre otras
causas. Cuando una víctima es encontrada en la escena de un incendio, el grado
desaturación HbCO puede ser útil para juzgar si ha muerto por asfixia ante el humo
generado durante el fuego en sí o sí fue asesinada antes del mismo (muchos homicidas
incendian la escena del crimen para borrar cualquier evidencia). Dado que el CO tiene
una vida media muy corta, rara vez se recomienda su determinación en casos clínicos.
Para las mediciones del porcentaje de saturación de HbCO en la sangre, se disponen
generalmente de métodos espectrofotométricos y la cromatografía de gases. La
metahemoglobina (Met-Hb) aparece en muchas muestras de sangre y puede interferir
en estas determinaciones, por tanto, es importante utilizar métodos que no sean
influidos por la presencia de esta. En esta práctica se llevará a cabo un método
espectrofotométrico simple, fiable y selectivo para las mediciones de saturación de
HbCO.

2. OBJETIVOS

2.1 Utilizar los métodos cualitativo y cuantitativo para poder determinar

carboxihemoglobina en la sangre.
2.2 Conocer sobre la evaluación de intoxicaciones por monóxido de carbono.

3. MATERIALES Y EQUIPOS
 Muestra recolectada en  1 litro de solución salina
tubos con heparina. fisiológica (suero)
 2 jeringas de 5mL cada una  20mL de agua bidestilada
 1 papel filtro (agua estéril)
 1 litro de agua destilada  2 goteros de plástico
4. PROCEDIMIENTO Y MÉTODO
Con la ayuda de dos voluntarios, uno por cada mesa, se les extrae de 4 a 4.5mL de
sangre y se divide en dos partes iguales en dos tubos especiales para extracción de
sangre que contienen heparina. Uno de los tubos se rotula como “muestra control” y
el otro tubo como “muestra problema” el cual será expuesto a monóxido de carbono
durante un minuto.

4.1. PARA EL MÉTODO CUANTITATIVO

 Extraer con una jeringa 1mL de la muestra problema y combinar con 7mL
de solución salina fisiológica (suero).
 Extraer con una jeringa 1mL de la muestra control problema y combinar
con 7mL de solución salina fisiológica.
 Centrifugar durante 10 minutos a 3000 rpm y luego retirar el
sobrenadante.
 Agregar 1.5mL de agua bidestilada (agua estéril) al sedimento.
 Luego agregar 0.75mL de Ácido acético y 3mL de acetato de sodio.
Homogenizar.
 Filtrar utilizando el papel filtro en un embudo colocado en un trípode,
diluir a 1/10 ó 0.5/5 y tomar lectura en el espectrofotómetro a 556 nm.

4.2. PARA EL MÉTODO CUALITATIVO

 Agregar 3mL de ácido tánico a ambas muestras (problema y de control),
esto se utiliza para lograr la precipitación de la hemoglobina.
 Se utiliza 1mL de muestra problema y 1mL de muestra de control.

4.3. PREPARACIÓN DEL BLANCO

 Utilizar 1.5mL de agua bidestilada.
 Agregar 0.75mL de ácido acético.
 Por último, agregar 3mL de acetato de sodio.

5. RESULTADOS

5.1. CUALITATIVO

MUESTRA RELACIÓN CON ÁCIDO TÁNICO

Control Negativo
Problema Positivo

 Resultado positivo o negativo: el ácido tánico solo precipita la hemoglobina, si

se precipita es negativo porque solo hay hemoglobina y no
carboxihemoglobina.
 Foto 1: Resultados muestra control y problema

5.2. CUANTITATIVO

MUESTRA PORCENTAJE DE ABSORBANCIA

CARBOXILO (%)
Control -0.01880 0.04
Problema 45.66980 3.92810

 Utilizando la ecuación obtenida: 𝑦 = 0.0851𝑥 + 0.0416

Reemplazar:

0.04 = 0.0851𝑥 + 0.0416 X= -0.01880

3.92810 = 0.0851𝑥 + 0.0416 X= 45.66980

6. DISCUSIÓN

La carboxihemoglobina son formas alteradas de la hemoglobina, una proteína

presente en los glóbulos rojos que transportan el oxígeno y el dióxido de carbono
entre los pulmones y los tejidos corporales.
Los valores obtenidos fueron: para la muestra de control -0.01880% y para la muestra
problema 45.66980% lo cual nos indica que la muestra de control fue tomada de una
persona no fumadora y el valor se encuentra en el rango adecuado mientras que en la
muestra problema que fue expuesta al monóxido de carbono del tubo de escape de la
moto si se obtuvo un valor elevado logrando así poder diferenciar la variación
acentuada de los porcentajes de las muestras.

7. CONCLUSIONES

7.1. Utilizando los métodos cualitativo y cuantitativo se logró obtener los valores
esperados para cada muestra tanto en una persona no fumadora (muestra
control) como en la expuesta a CO (muestra problema).

7.2. La prueba de carboxihemoglobina nos ayuda a determinar la cantidad de gases

tóxicos que puede tener una persona a pesar de no ser fumadora.
8. REFERENCIAS
http://www.academia.edu/24123233/DETERMINACI%C3%93N_DE_CARBOXIHEMOGL
OBINA

https://es.scribd.com/doc/93107026/DETERMINACION-DE-CARBOXIHEMOGLOBINA-
EN-SANGRE-POR-COLORIMETRIA

9. ANEXOS

CURVA (HbCO) DE CALIBRACIÓN

HbCO Abs
1 0.154
3 0.293
6 0.487
9 0.849

ABSORBANCIA vs. HbCO

0.9
0.8
0.7
ABSORBANCIA

0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
y = 0.0851x + 0.0416
0.1
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
HbCO

IMÁGENES DEL PROCEDIMIENTO: