Universidad del Perú, Decana de América

E.A.P FARMACIA Y BIOQUÍMICA

Departamento Académico De Química Básica Y Aplicada
Laboratorio de Química Medicinal I

“Practica No2”

REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO
C3

Mg: Julio Ruiz Quiroz

INTEGRANTES:
Caparachin Gonzales Maria
Cubas Luca Sheila
Intusca Huayta Jeanette
Susanibar Villavicencio Sheyla
Victoria Tinoco Lourdes

2017
 REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO 2017

I. INTRODUCCIÓN

La reacción antígeno-anticuerpo (Ag-Ac) es la piedra angular de la respuesta

inmune y se pone de manifiesto in vitro por la formación de un precipitado o
aglutinación de partículas (eritrocitos). El acoplamiento estructural entre las
macromoléculas está dado por varias fuerzas débiles que disminuyen con la
distancia, como los puentes de hidrógeno, las fuerzas de Van Der Waals, las
interacciones electrostáticas y las hidrofóbicas. El reconocimiento Ag-Ac es una
reacción de complementariedad, por lo que se efectúa a través de múltiples
enlaces no covalentes entre una parte del antígeno y los aminoácidos del sitio
de unión del anticuerpo. La reacción se caracteriza por su específicidad,
rápidez, espontaneidad y reversibilidad: 1

 Específicidad: capacidad de los anticuerpos para distinguir entre dos

ligandos de estructura similar. La unión dada por la especificidad es muy
precisa y permite distinguir entre grupos químicos con diferencias
mínimas.
 Rapidez: la velocidad con que ocurre la primera etapa de la reacción Ag-
Ac es del orden de milésimas de segundo, y está limitada únicamente
por la difusión. La segunda etapa, que es más larga, incluye todas las
manifestaciones que se presentan como consecuencia de la interacción,
tales como precipitación, aglutinación, neutralización, etcétera.
 Espontaneidad: la reacción Ag-Ac no requiere energía adicional para
efectuarse.
 Reversibilidad: dado que la reacción se debe a fuerzas no covalentes, es
reversible y, en consecuencia, se ve afectada por factores como la
temperatura, la proporción de Ag-Ac, el pH y la fuerza iónica. En
pruebas de laboratorio que usan la aglutinación como punto final, la
alteración de las condiciones físicas del sistema puede incrementar o
reducir la sensibilidad de la prueba.

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II. METODOLOGIA
MATERIALES Y REACTIVOS

- Lámina portaobjetos - Sangre humana

- Hisopos - Suero- anti A
- Algodón - Suero- anti B
- Alcohol - Suero- anti D
- Lanceta

PARTE EXPERIMENTAL

- Primero se limpió la lámina portaobjetos con alcohol, se dejó secar.

- Con ayuda de la lanceta se dejó tres gotas de sangre sobre la lámina
portaobjetos.
- Se añadió una gota de los reactivos (Anti A, anti B, anti D).

III. RESULTADOS

Anti- A Anti- B Anti- D

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Obs: La muestra sin

reactivo Anti-A

- + +

Idealmente las pruebas de rutina para determinar el grupo sanguíneo ABO

deben hacerse en dos partes: primero buscando en los eritrocitos la presencia
de antígenos A y/o B en la membrana (prueba globular o directa), y segundo,
buscando en el suero o plasma los anticuerpos anti-A y/o anti-B que
correspondería tener esa persona (prueba sérica o inversa).12
INTERPRETACIÓN
(-): Sin aglutinación. Rh-
(+): Reacción de aglutinación. Rh+
Las aglutinaciones evidenciadas fueron observadas a los 3min de incluir el
reactivo a la muestra sanguínea por lo que se debe a:

1. La muestra de sangre del individuo es del grupo Rh+ es decir que se

produjo la reacción de aglutinación a los 3 minutos con el suero anti-D,
donde puede observar un pequeño cambio de coloración por la
agregación de anticuerpos junto con la aparición de pequeños “grumos”.

2. Ejemplo: Si la muestra de sangre es del grupo AB aglutina con el suero

anti B y si la muestra de sangre es del grupo 0, si no aglutina ni con el
suero anti anti-B.

3. Si el individuo es del grupo Rh+, entonces es receptor de sangre del

grupo Rh+ y del grupo Rh-.Pero fuera caso contrario si un individuo es
de grupo sanguíneo Rh- entonces solo es receptor de sangre del grupo
Rh- y no del grupo Rh+

CONCLUSIÓN

El grupo sanguíneo del individuo es Rh+, debido a la reacción de aglutinación

con el anti- D.

IV. CUESTIONARIO

1. ¿Cuáles son las diferencias y semejanzas entre aglutinación y

precipitación? ¿Tienen igual sensibilidad? 2,3

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Los precipitados inmunológicos son complejos insolubles formados por la unión

de anticuerpos (precipitinas) y antígenos (precipitinógenos) que se encuentran
en solución. Para la formación de una malla de precipitado se requiere que
tanto las precipitinas como los precipitinógenos sean al menos bivalentes. Esta
reacción tiende a ocurrir más rápido con el aumento de la temperatura, aunque
la precipitación más completa es obtenida usualmente a temperaturas bajas (0-
4ºC). Está determinada por el fenómeno de zona, lo cual quiere decir que la
máxima precipitación ocurre en un punto o zona de equivalencia que para
poder ser visible es necesario determinar las proporciones óptimas de los
reactivos.
Las reacciones de aglutinación consisten en la agregación de material en
partículas, tales como células o material sintético por los anticuerpos llamados
aglutininas. La reacción toma lugar sobre la superficie de las partículas que
poseen el antígeno disponible para los sitios de unión específica de los
anticuerpos. La aglutinación es un ejemplo de una reacción inmune secundaria.

2. ¿Qué es el fenómeno de prozona y cuáles pueden ser las causas

que lo expliquen?

El fenómeno de prozona produce reacciones falsas negativas de aglutinación a

concentraciones elevadas de anticuerpo como resultante de la mala formación
de estructuras de enrejado molecular y por el bloqueo estérico por el exceso de
anticuerpo, el uso de diluciones seriadas estándar elimina esta dificultad. (2) El
efecto “prozona” se debe a que en exceso de Ac se forman preferentemente
complejos Ag-Ac solubles (como los formados en la zona de exceso de Ac en
la curva de precipitación). 4

3. Compare las variantes metodológicas de aglutinación en tubo,

placa plana y microplaca. Ventajas y desventaja de cada una.

- Técnicas en tubo
Es una técnica que proporcionan un menor número de reacciones falsas
negativas/positivas, se pueden añadir aditivos para potenciar la reacción: LISS,
enzimas, AGH, permite la manipulación. Entre sus desventajas la aglutinación
es inestable, requiere manipulación y lectura cuidadosa, utiliza una cantidad
importante de hematíes y suero.

- Aglutinación en placa plana

Es una prueba rápida y específica para despistaje. Los valores positivos deben
ser interpretados clínicamente y/o evaluados con pruebas más sensibles, como
son las aglutinaciones en tubo.

- Técnicas en microplacas
Es una técnica donde la aglutinación se produce en los pocillos y los reactivos
están unidos a la superficie de los estos. Permite automatización y se usan
para grandes series de muestras, ahorro de tiempo de técnico, rapidez, ahorro

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 REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO 2017

de reactivo y poco utillaje preciso. Existen métodos manuales,

semiautomatizados y automatizados. Utilizan antígenos o anticuerpos
inmovilizados. 5

4. Enumere aplicaciones concretas de la aglutinación directa.

- Aglutinación de los eritrocitos del grupo A, B, AB por antisueros antiA, antiB,

antiAB respectivamente
- Aglutinación de los eritrocitos RH positivos por el antisuero anti-D
- Aglutinación del antígeno brucelar por anticuerpos anti-Brucella 6

5. ¿Qué es la hemoaglutinación pasiva o indirecta? ¿Qué tipo de

glóbulos rojos pueden usarse? Enumere algunos métodos de
estabilización de los glóbulos rojos y la marcación con distintos
tipos de antígenos.

La hemaglutinación indirecta (HAI), también llamada hemaglutinación reversa

pasiva, se basa en la propiedad que tienen los anticuerpos de producir
aglutinación específica en presencia de glóbulos rojos sensibilizados con los
correspondientes antígenos. En el suero existen anticuerpos inespecíficos
(heterófilos) que son capaces de aglutinar glóbulos rojos de distintas especies.
Su presencia se investiga enfrentando el suero con GR no sensibilizados. Los
anticuerpos interferentes se eliminan mediante tratamiento con 2-
mercaptoetanol. 7
Este tipo de aglutinación se lleva a cabo utilizando eritrocitos recubiertos de
antígenos, o anticuerpos acoplados de manera espontánea (adsorción pasiva)
o mediante un acoplamiento químico, utilizando diversas sustancias para este
fin, tales como Acido tánico Bencidina bisdiazoada (BDB), Cloruro crómico
(CrCIs), Glutaraldehído, clorurocianúrico entre otros.8
Algunas de las substancias que se absorben para la hemaglutinación:
• Antígenos de Escherichia coli.
• Antígenos de Yersinia.
• Lipopolisacáridos de Neisseria meningitidis.
• Antígenos de Toxoplasma.
• Derivado proteico purificado (DPP).
• Endotoxina de especies de Micoplasma.
• Virus.
• Antibióticos, especialmente penicilina.
• Ovalbúmina.
• Albúmina sérica bovina.
• Haptenos.
• Antígenos de polen.
• Gonadotrofina coriónica.

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6. Enumere otros soportes que puedan utilizarse en la aglutinación

pasiva y explique algunas variantes metodológicas (aglutinación
reversa e inhibición de la aglutinación). Mencione algunos ejemplos
de cada uno

Una variante es la aglutinación pasiva reversa, en donde lo que se

detecta es el antígeno y las partículas están recubiertas por el
anticuerpo9.
Este tipo de aglutinación se lleva a cabo utilizando eritrocitos recubiertos
de antígenos, o anticuerpos acoplados de manera espontánea
(adsorción pasiva) o mediante un acoplamiento químico, utilizando
diversas sustancias para este fin, tales como Acido tánico Bencidina
bisdiazoada (BDB), Cloruro crómico (CrCIs), Glutaraldehído,
clorurocianúrico entre otros. Algunas de las substancias que se
absorben para la hemaglutinación9

Inhibición de la hemaglutinación
La inhibición de la aglutinación de los eritrocitos recubiertos con
antígeno por el antígeno homólogo es un método sensible y específico
para la identificación de pequeñas cantidades de antígeno soluble en la
sangre o en otros líquidos de los tejidos. El principio de este análisis es
que, el anticuerpo incubado previamente con antígenos homólogos
solubles o de reacción cruzada, es «inactivada» cuando se incuba con
eritrocitos recubiertos de antígeno. En este método los posibles Ac
existentes en la muestra problema son neutralizado previamente, por lo
que la lectura de resultados se interpreta en sentido contrario a la
hemaglutinación10:
– REACCIÓN POSITIVA: presencia de botón.
– REACCIÓN NEGATIVA: aparición de velo.

7. ¿Qué son los anticuerpos incompletos?

Son los anticuerpos tipo IgG (o incompletos) que son incapaces de producir la
aglutinación de los eritrocitos por si solos, sin embargo son capaces de
adherirse a su superficie tanto in vivo como in vitro (pueden requerir de
adyuvantes para aglutinar eritrocitos), capaces de fijar el complemento sin
llegar a producir la hemolisis de los eritrocitos.
Estos anticuerpos tipo IgG pueden reaccionar con un suero de conejo en el que
existen anticuerpos antiglobulina humana del tipo IgM (completos). El resultado
de esta reacción es una aglutinación de los eritrocitos.11
La prueba de Coombs para antiglobulinas permite detectar los anticuerpos de
tipo bloqueante, las globulinas y el complemento que se encuentran fijados a
los antígenos del eritrocito en los fenómenos de isosensibilización. 12
8. ¿Qué es la isosensibilización por Rh? ¿Cómo puede producirse?

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La isosensibilización es un proceso que se produce en el sistema inmunológico

de la madre como reacción frente a agentes extraños, se conoce como
isoinmunización Rhesus, enfermedad Rh (D), incompatibilidad Rhesus,
enfermedad Rhesus, enfermedad hemolítica RhD. Se forman anticuerpos en la
sangre materna que destruyen los glóbulos rojos del bebé, apareciendo la
“enfermedad hemolítica fetal”, que puede traer consecuencias graves en la
salud del niño.13
Esta enfermedad ocurre cuando los anticuerpos anti-Rh pueden atravesar la
placenta y producen la destrucción de los glóbulos rojos del bebé: La causa
más común de incompatibilidad Rh es la exposición de una madre Rh negativa
por sangre fetal Rh positivo durante el embarazo o el parto. Como
consecuencia, la sangre de la circulación fetal puede filtrarse en la circulación
materna y, después de una exposición significativa, se produce una
sensibilización que conduce a la producción de anticuerpos maternos contra el
antígeno Rh externo. Una vez producidos, los anticuerpos maternos de
inmunoglobulina G (IgG) persisten de por vida y pueden cruzar libremente
desde la placenta hasta la circulación fetal, donde forman complejos antígeno-
anticuerpo con eritrocitos fetales Rh positivos y finalmente se destruyen, lo que
produce una aloinmune fetal.14
La presencia o la ausencia de antígeno Rh, tiene una importancia fundamental
en las reacciones de transfusión, paternidad y fenómenos de isosensibilización.
Hay 8 fenotipos de Rh sanguíneos que se determinan por su reacción con tres
aglutininas séricas específicas (anti-Rho, anti-rh´, anti-rh¨). Los anticuerpos Rh
son aglutininas salinas (completas) o bien anticuerpos “bloqueantes”
(incompletos) y estos anticuerpos son del tipo G, que se utilizan en los
procedimientos para pruebas de RH y con mayor frecuencia en reacciones de
isosensibilización o autoinmunes. 13

V. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. Bautista J. Factores que intervienen en la reacción antígeno-anticuerpo y
clasificación antigénica eritrocitaria. Rev Med Inst Mex Seguro Soc.
2005; 43 (1): 9-12
2. Garcia V. Reacciones de aglutinación. Gac Méd Méx. 2004; 140 (3): 50-
52
3. Duke J. Anestesia (Secretos). 3 ed. Colorado: Editorial Elsevier. 2006
4. UBA. Guía de técnicas inmunológicas. [sede web] Facultad de Medicina.
Buenos Aires. 2008. Disponible en:
http://www.fmed.uba.ar/depto/microbiologia/guia01.pdf
5. Buesa C. Pruebas de compatibilidad, ¿qué técnica emplear? XIV
Jornadas de Medicina Transfusional. Hospital Universitario Central de
Asturias. [Web] [Acceso 22 de noviembre 2017] Disponible en:
https://www.asturias.es/Astursalud/Ficheros/AS_Calidad%20y%20Siste

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 REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO 2017

mas/AS_Calidad/SEGURIDAD%20DEL%20PACIENTE/GHAS%202011/
Jornadas/Pruebas%20compatibilidad_DraBuesa.pdf
6. Aguilar v. Reacciones de aglutinación. Gac Méd Méx Vol. 140,
Suplemento No. 3, 2004
7. Prueba de hemaglutinación indirecta para la detección de anticuerpos
contra el Trypanosoma cruzi [Pagina Web]. [Acceso 22 de noviembre del
2017]. Disponible en: http://www.wiener-
lab.com.ar/DesignFiles/ImagenesHomePortal/Chagas/6377_chagatest_h
ai_sp.pdf.
8. Raichle TL, Paranto ME. Compatibility testing. En: Hardening MD.
Modern blood bancking and transfusión practices. Philadelphia:FA Davis;
1994.p.256-75. 5. Radillo González A. Medicina Transfusi
9. Epidemiología Molecular de Enfermedades Infecciosas. Visualizado el
26 de noviembre 2017. Disponible en:
http://epidemiologiamolecular.com/reacciones-hemaglutinacion-lisis/
10. Aguilar V. Reacciones de aglutinación. Gac Méd Méx. 140(3). 2004
11. García B, Rubio F., Crespo M. Técnicas de análisis Hematológico.
Editorial Paraninfo. Ed 1,2015:pág. 422
12. Genaro A. Remington: The science and practice of Pharmacy. Editorial
Panamericana. Ed 20th, Vol 1. 2000: pág. 655
13. Salem L., Singer K. Medsacape Education. [Actualizado noviembre
2017]. Sitio web: https://emedicine.medscape.com/article/797150-
overview
14. Arbeláez C. Sistema de grupo sanguíneo ABO. Medicina & Laboratorio,
Vol15, Números 7-8, 2009 : pág. 339