ÁCIDOS GRASOS TRANS INSATURADOS POR CROMATOGRAFÍA DE GASES EN

COLUMNA CAPILAR
Definición
Este método describe un procedimiento para la determinación del contenido de ácidos grasos trans de grasas y aceites
vegetales mediante cromatografía de gases capilares (CG). Los ácidos grasos se identifican por sus tiempos de retención, y
se cuantifican por determinación de la relación de los niveles bajo el pico relevante, la suma de las áreas como todos los
picos para los ácidos grasos. La grasa o el aceite se convierten en su éster metílico de ácido graso y luego se analiza mediante
columna capilar. Este método no es ético para el método IOOC (referencias)
Según este método, el contenido de ácido graso trans de una grasa vegetal o se graba por la suma de los siguientes contenidos
de ácido con respecto a los ácidos grasos totales trans-octadecenore (1 n: 1); trans, trans, cis, cis, trans cis y trans, cis, cis
octadecatrienoico ((ICI + CCI + CIC + ICC) 18: 2))

Alcance
Aplicable a aceites y grasas contiene ácidos grasos con 10-24 átomos de carbono. Incluyen ácidos grasos transinsaturados
con 18 átomos de carbono que pueden estar presentes en concentraciones específicas en grasas y aceites vegetales naturales
y en aceites que han sido refinados. No es aplicable a las grasas vegetales que se han sometido a ningún proceso de
hidrogenación.

Aparatos 3. Muestra de referencia: ésteres metílicos de ácidos

1. Cromatógrafo de gases: aplicable para su uso con una
columna capilar equipada con un sistema de
esfigmomanómetro que consiste en
a) cámara termostática para la columna, capaz de
mantener la temperatura deseada a +/- 0.1ºC
b) unidad de inyección de temperatura controlada
c) detector de ionización de llama y convertidor
amplificador
d) medidores de flujo para gases portadores y
auxiliares
2. Columna capilar de vidrio o sílice fundida: 50m, 0,25-
0,32 mm de diámetro interno cementada con
cianopropil silicona hasta un espesor de 0-0,3 um. Las
columnas cromatográficas preparadas en forma
mancomunada se pueden explorar en el mercado: SP
2340. CP Sd 99 Silar 10.etc
3. Registrador-integrador-adecuado para usar con un
amplificador convertidor con un tiempo de respuesta
de no más de 1 segundo y una velocidad de papel
variable
4. Microjeringas para cromatografía de gases -10- αL
entrega con una aguja endurecida
5. Evaporador rotativo
6. Aparato de aguja para preparar los ésteres de metilo
Reactivos
1. Gas portador - helio puro o hidrógeno. Calidad de la
cromatografía de gases (ver Catión de Notes)
2. Gas auxiliar: aire e hidrógeno, calidad de la
cromatografía de gases (ver Notas Catión)
grasos puros. En particular, isómeros cis y trans de
octadecenore y octadecatrieno. Los ésteres metílicos
de octadecenoico y ácido octadecatrienoico se
pueden adquirir en el mercado. gramo. de talentos
como Allteeh Associates. Inc Deerfield. ILLINOIS.
NuChek Prep Elysran MN Supeleo Inc. Bellefonte
PA Los isómeros de octadecadienoico pueden
prepararse en el laboratorio por isomerización de
ácido linoleico puro con a-hexano (ver Notas).
Procedimiento
1. Preparación de ésteres metílicos: utilice un
procedimiento estandarizado que involucre catálisis
básica (procedimiento de vial cerrado de Na
metileno)
2. Grasas y aceites con una acidez libre >3% deben ser
neutralizados antes del inicio del análisis
3. Verificar el cromatógrafo de gases y el estado de la
columna
a) Lleve a cabo las verificaciones preliminares de la
unidad de injuria y grabador
b) Ajuste la columna en el cromatógrafo de gases
con la conexión de la salida al detector
c) Ejecute un flujo ligero de gas portador (1-2mL /
mm a través de la columna y calienta
gradualmente a 210ºC no menos de 4 horas.
Sostenga la columna a esta temperatura al menos
durante la noche y deje que se enfríe) y conecte la
unidad de inyección a temperatura de
acondicionamiento de los neumáticos. Conecte el
detector y el registrador y después de 3-4 horas
 verifique que la linealidad y la deriva de la línea
de base sean satisfactorias. Operando a una
sensibilidad por lo menos cuatro veces mayor que
la prevista para el análisis (una deriva positiva de
más del 5% / h para el valor de la venta completa
indica que la columna no se ha acondicionado
adecuadamente)
4. Condiciones de funcionamiento y comprobación de la
eficacia de la columna.
Las condiciones generales de operación son las
siguientes:
Ilustración 1 Cromatograma de muestra obtenido del análisis de columna capilar de los ácidos
grasos trans
Nota- Estas condiciones pueden variar a la
luz de la composición de la muestra y las
características de la columna y la
cromatografía de gases para garantizar la
separación de todos los ésteres de metilo y
la resolución de pico satisfactoria (ver
procedimiento 5 y Fig. 1). Compruebe que
el pico de ácido de linóleum (c18: 3)
aparece como un pico resuelto justo antes
del pico de ácido eicosenoico (C20: 1). Si
no es así Se pueden tomar dos pasos para
cambiar la temperatura del horno y / o usar
una columna de polaridad diferente.
5. Eficiencia de la columna: la eficiencia de
una columna está determinada por su
poder de separación y resolución. Debe
proporcionar cromatogramas que cumplan
con los siguientes requisitos que los
análisis deben realizar correccionalmente.
La temperatura de la columna 150-200ºC es posible
por la programación de la temperatura (e g 165ºC por
15 minutos y luego elevar la temperatura por 5ºC min
a 200º).
Temperatura del inyector 250ºC.
Temperatura detector 260-280ºC.
Volumen de gas portador (helio o hidrógeno) 1 2 ml /
min.
Cantidad de sustancia inyectada en 1 ol de disolución
en 290 en hexano
Potencia de separación: los picos de los
ésteres metílicos de todos los ácidos
grasos presentes deben ser bastante
distinto.
Potencia de resolución: los picos deben
estar completamente resueltos (es decir, el
pico trace debe regresar a la línea base
antes de irse para el siguiente pico) para
algunos pares típicos, por ejemplo, el
CCIC/cis ácidos incompletos, la
resolución es totalizada en tales casos la
columna se considera satisfactoria es el
índice de resolución >2. La resolución
índex entre dos picos se define por la
relación:
a
b
Donde:
 a = distancia desde la línea de base
hasta la punta del pico más
pequeño
b = distancia desde la línea de base
hasta el punto más bajo de la línea de
seguimiento entre dos picos
Para comprobar que se satisfacen los
requisitos anteriores, se inyectan
cuantificaciones iguales de la porción de
prueba de los ésteres metílicos, haciéndolo
varias veces, y se ajusta la temperatura y el
flujo del gas portador hasta que se obtengan
los mejores resultados de separación. También
verifique la potencia de resolución reduciendo
la porción de prueba si es necesario y
aumentando la sensibilidad hasta que se
obtenga la mejor resolución de pico
Si todos los ácidos grasos presentes están
separados y el índice de resolución es> 2, la
columna es adecuada y las condiciones
operativas seleccionadas deben mantenerse en
todas las determinaciones sucesivas. De lo
contrario, la columna no es eficiente.
6. Procedimiento analítico: utilizando la
microjeringa de 10uL, tome 1 uL de pf
hexano, extraiga 0.5uL de una abd 0.5 uL
+ 1 uL de la solución simple. Levante el
émbolo de la jeringa para que no quede
nada simple en la aguja de la jeringa.
Empuje la aguja a través de la membrana
de la unidad de inyección y después de 1-
2 vea inyectar rápidamente y luego retire
lentamente la jeringa después de 5
segundos. Continúe grabando hasta que
los ésteres de metilo presentes estén
completamente eludidos. La línea de base
siempre debe cumplir los requisitos
especificados en el procedimiento 5.
7. Identificación del pico: el orden en que los
ésteres metílicos de los ácidos grasos
aparecen en el cromatograma es una
definición directa del número de átomos
de carbono.
Los ésteres insaturados se separan después
de los correspondientes ésteres saturados
y su elución es una función directa del
número de dobles enlaces. Los ésteres de
ácidos grasos trans se separan antes de los
isómeros cis correspondientes
8. Los ésteres metílicos individuales se
identifican a continuación por los tiempos
de retención, que se comparan con los
tiempos de retención de las muestras de
referencia. Un cromatograma de muestra
se da en la figura 1
Análisis cuantitativo
1. Calcular las áreas de cada pico usando el
integrador electrones. Para asegurar la
sensibilidad analítica correcta, la altura del
pico correspondiente en el motil éster del
ácido araquíico no debe ser inferior al 20%
del valor de escala completa. En el caso de
aceites con alto contenido de ácido, la
altura no debe ser inferior al 50%.
2. el porcentaje para cada nerd graso se
calcula a partir de la relación de los que
están bajo el pico correspondiente a la
suma de las áreas bajo todos los picos
usando la fórmula

𝐴ℎ
= 100
∑𝐴
Dónde:
Ah = área máxima para ácidos grasos y
∑A = total de todas las áreas de los picos
El total de ácidos grasos trans es la suma del
contenido porcentual de los siguientes ácidos
trans-octadecenoico (C18: IT), trans trans (CH
2T) cis trans y trans cis octadecadienoico
(C18: CTTC) trans cis, trans cis, cis trans, cis
trans, cis y trans, cis octadecatrienoico
Expresar el resultado a dos decimales
Decisión
1. La precisión del método se evaluó sobre la
base de un ensayo interlaboratorio que
contó con la participación de 10
laboratorios que realizaron dos pruebas en
tres muestras de aceite de oliva virgen +
20% de aceite de soja, 1g de aceite de oliva
virgen + 10% de aceite de soja y uno de
aceite de soja puro. Los resultados de la
prueba se muestran en la tabla 1.
a) Receptibilidad cuando el método se aplica
de la manera correcta, la diferencia entre
dos resultados de prueba individuales
 obtenidos en un material de prueba
indebido probado por el mismo operador
utilizando el mismo equipo, que intervalos
cortos de tiempo no deberían ser mayores
que el límite de repetitividad dado en la
Tabla 1 con una probabilidad del 45%.
b) reproductibilidad: cuando el método se
aplica de la manera correcta, la diferencia
entre dos muestras de los resultados de las
pruebas obtenidas no debe, en promedio,
ser mayor que el límite de
reproducibilidad dado en la Tabla 1,
probabilidad del 95%
Análisis de los resultados de la prueba
colaborativa. los valores de precisión o el
método están vivos en los cuadros 2 y 19
laboratorios que reconocían el COI en su
momento participaron en la prueba de
colaboración organizada por los Secretarios
Ejecutivos en 1999. los laboratorios con ocho
países. La prueba se realizó en muestras a)
aceite de oliva virgen extra b) aceite de oliva
virgen + aceite de girasol refinado c) aceite de
oliva virgen + aceite de oliva refinado d) aceite
de oliva virgen + aceite de soja refinado +
aceite de girasol refinado e) aceite de oliva
refinado + aceite de orujo de oliva refinado +
aceite de soja refinado + aceite de oliva virgen
lampante. Los resultados de la prueba en vivo
de colaboración organizada por la Secretaría
Ejecutiva de IOOC han sido procesados
estadísticamente de acuerdo con la escala de
ejecución establecida en la Norma
Internacional ISO 5735 (Referencias 2-5)
exactitud y precisión de precisión de los
métodos de medición y resultados. Los otros
fueron evaluados por aplicación. Prueba de
Cochran y Grabbys para los resultados de
laboratorio para cada determinación replica a
y b) y la captura de la muestra.

Tabla 1: Medida de composiciones de ácidos grasos

A B C D E
El número de partes que diferencian 17 17 17 17 17
laboratorios
Otros una serie de laboratorios con valores 5 2 4 0 0
periféricos
Como = media de los resultados aceptados 0.012 0.020 0.020 0.021 0.001
Receptibilidad 0.007 0.009 0.010 0.010 0.020
Desviación estándar de receptibilidad 0.003 0.003 0.004 0.004 0.007
S, (A) = coeficiente de variación de 22.610 20.1+0 32.10 22.001 14.080
receptibilidad (b, * 1000 media)
Reproductividad 0.010 0.021 0.021 0.123 0.031
desviación estándar de reproducibilidad 0.04 0.008 0.008 0.008 0.011
SR (%) = coeficiente de variación de la 30.960 46.580 32.110 50.003 21.741
reproducibilidad (media Sr * 1000)

La prueba fue realizada en cinco muestras:

Aceite de oliva virgen extra
Aceite de oliva virgen + aceite de girasol refinado
Aceite de oliva virgen + aceite de oliva refinado
Aceite de oliva virgen + aceite de soja refinado + aceite de girasol refinado Aceite de oliva
refinado + aceite de orujo de oliva refinado + aceite de soja refinado + aceite de oliva virgen
lampante
Lotes botella cuando abra la válvula. Mantenga
botellas lejos de la luz del sol un poco de calor.
Aire comprimido embotellado El gas Cepa en un ambiente libre de corrosión. No
comprimido a alta presión se usa con inhalar Use sólidos para fines técnicos.
precaución en presencia de sustancias
combustibles en la temperatura de ignición Hidrógeno comprimido embotellado
establecida de la mayor parte del compuesto Altamente inflamable bajo presión. Mantener
orgánico en el aire, es considerablemente más alejado de fuentes de chispas de calor, llamas
bajo a alta presión. Asegúrese de que la desnudas o aparatos de vendedor no fabricados
válvula de la botella esté siempre cerrada con material no inflamable. Asegúrese de que
cuando no se use. Siempre use un regulador de la válvula de la botella esté cerrada cuando no
presión. Libere las tensiones del resorte esté en uso. Siempre use con una regulación de
regulador antes de abrir la válvula de la presión.
botella. No se pare desde el exterior de la
gimnasia cuando abra la válvula. No transfiera
gas de una botella a otra. No está en la botella.
Asegúrese de que los comentarios no pueden
llamar. Manténgalos alejados de la luz del sol
o fuentes, de calor más en un ambiente libre de
corrosión. No use botellas sin etiqueta
peligrosas. El aire destinado a aplicaciones
técnicas no debe utilizarse para inhalar ni para
aparatos respiratorios
Helio comprimido en botella Gas comprimido
en alto es seguro. Reduce la cantidad de
oxígeno disponible para respirar. Mantenga la
botella cerrada. Asegure una ventilación
adecuada durante el uso. No ingrese áreas de
almacenamiento de ventiatium durante el uso.
No ingrese a las áreas de almacenamiento a
menos que estén adecuadamente ventiladas.
Siempre use una presión regular o. Libere el
tendón del resorte del regulador antes de abrir
la válvula de la botella. No transfiera gar de
una botella a otra. No mezcle gas en la botella.
Asegúrate de que las botellas no puedan
derribar. No se ponga frente a la salida de la

Tabla 2: Composición de ácidos grasos trans (%) (18: 2T + C16: 3T)

A B C D E
El número de partes que diferencian 16 17 16 17 17
laboratorios
Otros una serie de laboratorios con valores 5 2 2 4 0
periféricos
Como = media de los resultados aceptados 0.014 0.032 0.011 0.044 0.303
Receptibilidad 0.011 0.01 0.007 0.01 0.043
 Desviación estándar de receptibilidad 0.004 0.004 0.003 0.004 0.015
S, (A) = coeficiente de variación de 34.92 13.361 18.983 9.852 5.061
receptibilidad (b, * 1000 media)
Reproductividad 0.016 0.02 0.017 0.023 0.131
desviación estándar de reproducibilidad 0.006 0.007 0.006 0.008 0.047
SR (%) = coeficiente de variación de la 47.702 25.643 42.801 22.413 15.392
reproducibilidad (media Sr * 1000)

La prueba fue realizada en cinco muestras:

Aceite de oliva virgen extra
Aceite de oliva virgen + aceite de girasol refinado
Aceite de oliva virgen + aceite de oliva refinado
Aceite de oliva virgen + aceite de soja refinado + aceite de girasol refinado Aceite de oliva
refinado + aceite de orujo de oliva refinado + aceite de soja refinado + aceite de oliva virgen
lampante

Libere la tensión del resorte del regulador Notas numéricas

antes de abrir la válvula de la botella. No se
1. Los ésteres de metilo del ácido
pare frente a la ventana de la caja de la válvula
cuando abra la válvula. Asegúrese de que haya
una ventilación adecuada durante. No
2. Los
suspender el hidrógeno de una botella para
desatascar. No mezcle gas en la botella. Haga
más que las botellas no puedan ser conocidas.
Mantenga las botellas alejadas del sobreluz y
3. Se toman ciertas precauciones para
de las canicas de calor. Almacenar en un
entorno libre de corrosión. No use botellas
dañadas sin etiqueta
β- hexano Altamente inflamable. Los humos
pueden encenderse. Manténgase lejos de
fuentes de chispas de calor o llamas desnudas.
Asegúrate de que las botellas estén siempre
bien cerradas. Asegure el uso apropiado de la
ventilación durante el uso. Evite la
acumulación de humos y elimine cualquier
posible riesgo de incendio, ya que los
calentadores o aparatos eléctricos no se
fabrican con materiales no inflamables. Es
muy ruidoso si se usa, ya que puede dañar a los
celtas del sistema de mercedes. Evite respirar
los humos. Use un aparato espiratorio
adecuado si es necesario. Evite el contacto con
los ojos y la piel.
octadecenoico y octadecatrienoico
están disponibles en el mercado.
isómeros del ácido
octadecadienoico pueden prepararse
en el laboratorio por isomerización de
ácido linoléico puro con selenio.
garantizar una evaluación analítica
adecuada de los resultados. Se pueden
formar pequeñas cantidades de ácido
oleico cuando la muestra se introduce
de la siguiente manera. Una muestra
de ésteres metílicos de un aceite de
oliva virgen extra de origen conocido
para un éster metílico con un
contenido mínimo de ácido oleico
contiene 60% de los que están
certificados libres de ácidos grasos y
se prepara según se describe en la
sección 2.1 y se analiza bajo las
condiciones específicas de ácidos
grasos trans. En este caso, la presencia
de ácidos grasos trans octadecenoicos
al 0.01% es tolerada. Si se registran
valores más altos, el inserto del
inyector debe reemplazarse por un
inserto perfectamente limpio y
desactivado, y los análisis deben
repetirse. Se debe tomar una
precaución adicional en el caso de los
inyectores invertidos picoteados con
una seguridad de los materiales (lana
de vidrio), ya que la presencia de tales
materiales puede ser, por lo general, el
producto de los ácidos grasos. Ciertas
precauciones deben tomarse antes.
Siempre hay una muestra de aceite de
oliva virgen extra de origen
desconocido en el caso anterior.
Muestre el porcentaje de ácidos grasos
trans cis decentes si los valles están
por encima del 0.01%, proceda de la
siguiente manera
Se debe tomar una precaución
adicional en el caso del inyector que
inserta los bolsillos con una seguridad
de los materiales:
a. Reemplace el inyector invertido
con un inserto de aceite limpio y
desechable
b. Baje la temperatura del inyector
por 30-50ºC y repita la prueba
hasta que los valores
obstaculizados para los ácidos
grasos trans isotadecenoicos sean
iguales a menos de 0.019
c. Retire el material de
estacionamiento de la herida (la
nota b es necesaria para usar
materiales de picoteo, lana de
vidrio, tierra de diseminación,
etc.) si la inyección es manual (el
material de picoteo puede ser
retirado)
Es aconsejable tomar más
precauciones cuando se analicen los
aceites de oliva virgen mg extra.
Cuando se analizan los aceites
auténticos, un pico forma el tiempo de
retención de la puta, algo que es
idéntico al de la cis trans linoleica.
Este pico cuyo valor varía en un
0,01% no debe tomarse en
consideración en el cálculo, si aparece
por sí mismo en el cromatograma, sin
embargo, debe tomarse en
consideración si aparece en el
cromatograma junto con el trans
linoleico.
Referencias
1. IOOC CO1/T20/DOC 17 Rev. 1
(2001)
2. ISO 5725-1. 1994 (Accuracy trueness
and precision) of measurement
methods and results – Part 1: general
principles and definitions.
3. ISO 5725-1. 1994 (Accuracy trueness
and precision) of measurement
methods and results – Part 2: best
method for the determination of the
repeatability after reproducibility of a
standard measurement method.
4. ISO 5725-1. 1994 (Accuracy trueness
and precision) of measurement
methods and results – Part 5:
alternative methods for the
determination of the precision of
standard measurement method.
5. ISO 5725-1. 1994 (Accuracy trueness
and precision) of measurement
methods and results – Part 6: Use in
practice of accuracy values.