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Cuestionario

1. Defina Ud. los siguientes términos y mencione 1 ejemplo de microorganismo:


Aerobios obligados: requieren oxígeno (21%). Ej. Bacillus, hongos, Acetobacter aceti,
etc.
Anaerobio facultativo: no son sensibles al oxígeno (crecen en ausencia o
presencia de oxígeno de hasta 8%). Ej. Enterococcus faecalis.
Anaerobio aerotolerante: no requieren O2, pero el desarrollo es mejor con O2. Ej. E. coli.
Anaerobio estricto: no toleran O2, muere en su presencia. Ej. Methanobacterium,
Clostridium.
Microaerofilo: requieren niveles menores (5-10%). Ej. Azospirillum

2. ¿Cuáles son las condiciones que debe reunir un medio de cultivo?


disponibilidad de nutrientes adecuados: Un medio de cultivo adecuado para la investigación
microbiológica ha de contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales
inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del
crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes
o captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan lugar.
consistencia adecuada del medio: Partiendo de un medio líquido podemos modificar su
consistencia añadiendo productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos
medios en estado semisólido o sólido.
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusión
de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.
Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, pero hay
también gran cantidad de medios líquidos cuyo uso está ampliamente extendido en el
laboratorio.
pH: La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los
microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque
los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe olvidar que la presencia de ácidos
o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o
incluso alterar sus procesos metabólicos normales.
Temperatura: Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre
15 y 43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a
temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos humanos crecen en
rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofítos tienen rangos más
amplios.

3. ¿Cuál es a la función del agar-agar en los medios de cultivo?


El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo.
Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40
grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es
atacado por aquellas que crecen en él.
4. ¿Por qué es difícil para los microorganismos crecer en medios con valores bajos de
aw?
Como los microorganismos dependen del agua para la síntesis de sus componentes celulares, es
necesario que ésta se encuentre disponible en el medio de cultivo para que los microorganismos
la puedan utilizar para su crecimiento.
5. ¿A qué se denomina medio sintético o definido? De 3 ejemplos.
se utilizan componentes de alta pureza, por lo que se conoce su composición química (cualitativa
y cuantitativamente).
 Agar McConkey …. 50 g/l
 Agar nutritivo ……. 20 g/l
 Agar LIA …………. 32 g/l
6. ¿Qué es un medio complejo? De 3 ejemplos.
No se conocen los componentes ni las cantidades exactas presentes, y están compuestos por
mezclas de extractos de materiales complejos (extracto de levadura, extracto de carne, etc.).
7. ¿Qué es un medio selectivo? De 3 ejemplos.
cuando favorecen el crecimiento de ciertos microorganismos mientras suprimen el de otros.
Un medio selectivo puede usar un antibiótico, como la ampicilina, para permitir únicamente el
crecimiento de las bacterias resistentes a éste.
8. ¿Qué es un medio diferencial? De 3 ejemplos.
Capaz de distinguir dos m.o por su crecimiento diferencial en el mismo, usando las
propiedades metabólicas de ambos en presencia de un determinado nutriente y de un indicador
que evidencia por ejemplo, un pH ácido en su entorno. (Agar LIA: Lisine iron agar (lisina
hierro, Agar Eosina Azul de Metileno (EMB))
9. Realice una gráfica donde se coloquen los rangos de temperatura para el
crecimiento microbiano, y clasifique en categorías diferentes según los rangos de
temperatura de su crecimiento (psicrófilos. Psicrótrofos, mesófilos, termófilos,
Hipertermófilos?

10. ¿Con qué sustancias puede enriquecerse un medio de cultivo? Mencione por lo
menos 4.
Adición de sangre, suero o extractos de tejidos animales y plantas.
11. ¿Qué es un medio de transporte y para qué sirve? De 2 ejemplos.
es un medio de cultivo que es capaz de mantener viva una muestra o cepa
de microorganismos por un periodo prolongado, manteniendo a los microorganismos vivos y
sobre todo sin alterar su concentración.

 Caldo de Tioglicolato para anaerobios estrictos.


 Medio de transporte Stuart: Medio destinado a la recolección, transporte y
preservación de muestras clínicas aptas para exámenes bacteriológicos. Es útil
para mantener la viabilidad de gonococos y de otros microorganismos de difícil
desarrollo.
12. ¿Qué medios diferenciales conoce? ¿Qué utilidades tienen?
TSI (Triple Sugar Iron)
se busca determinar la capacidad de la bacteria para degradar los azucares, formación de gas
y sulfuros de hidrógeno.
CITRATO DE SIMMONS
Este medio nos permite comprobar la capacidad de la bacteria de utilizar el citrato como
única fuente carbono.
MEDIO SIM (Sulfuro-Indol-Motilidad)
se utiliza para comprobar la motilidad, formación de sulfuros de hidrógeno y la producción de
indol por parte de la bacteria.
13. ¿Qué es un medio selectivo y qué función tiene? Mencione por lo menos 3 y ¿qué
sustancias se le agregan para que cumpla esa función?
son utilizados para favoreces el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una población
polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el
crecimiento de una población polimicrobiana específica. ejemplo de estos medios es:
Caldo Selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto
de enterobacterias.
agar SPS (agar Sulfito sódico- Polimixina- Sulfadiacina) se utiliza para el recuento de
clostridios sulfito-reductores en aguas. Contiene dos inhibidores (Polimixina y Sulfadiacina)
que impiden el crecimiento de varios microorganismos distintos de los clostridos.
Agar Sabouraud: funciona como medio de enriquecimiento para hongos y que en caso de
contener cloranfenicol u otro antibiótico, se convierte en un medio selectivo para los mismos.
El medio contiene peptonas y una elevada concentración de glucosa que favorece el crecimiento
de los hongos sobre las bacterias. Es utilizado para el cultivo de hongos,
especialmente dermatofitos, aunque también pueden desarrollarse en él cierto tipo de bacterias
filamentosas tales como Nocardia inhibidor acondicionado antibiotico antibacteriano
14. ¿Cómo pueden incubarse los microorganismos anaerobios estrictos?
Los anaerobios pueden crecer en las placas de agar en una atmósfera sin O 2, generalmente N 2 al
80%, CO 2 al 10% e H 2 al 10%. El CO 2 estimula el crecimiento y el H 2 combinado con O 2 , que
pueda estar presente, sirven para mantener las condiciones anaerobias.
Algunos sistemas para el cultivo de anaerobios son
 Técnica de jarra anaeróbica
 Técnica de cámaras de anaerobios
 Medios Pre-reducidos
Técnica de la jarra anaeróbica
El principio básico de ésta, es como la de todas: La remoción del oxígeno presente en la cámara
ocurre por la reacción con el hidrógeno producido, en presencia de un catalizador, para formar agua.
La reacción se describe como 2H2 + O2 >>> 2H2O
El catalizador está compuesto de un pellet de aluminio revestido de 0.5 % de paladio. El catalizador
puede ser inactivado en la jarra por la producción de sulfuro de hidrógeno u otros metabolitos
volátiles producidos por las bacterias. Por ello se recomienda que los catalizadores sean
reemplazados cada vez que se va a cerrar la jarra. Los mismos pueden restaurar su actividad si son
calentados a 160 - 170 ºC por 2 horas; luego de lo cual son almacenados en un lugar seco y limpio
a temperatura ambiente.
El sobre generador de GasPak contiene un papel de filtro, una tableta de borohidruro de sodio, una
tableta de bicarbonato de sodio y ácido cítrico. El sobre es activado al añadir 10 ml de agua y el
ambiente se obtiene en aproximadamente 30 minutos, visualizándose por una condensación del
agua dentro de la jarra.
El sistema produce un potencial de oxido-reducción ( Redox ) de -100 Mv dentro de
1 hora y - 200 Mv en 2 horas. Dentro de una hora de incubación a 35 ºC , la concentración
de gases es de aproximadamente 4 a 10% de CO2.
Las condiciones anaeróbicas pueden ser monitoreadas utilizando un indicador de óxido-reducción;
una tira de papel de filtro impregnada de azul de metileno puede ser utilizada con éste propósito. El
azul de metileno se degrada a incoloro y permanece así mientras se mantengan las condiciones de
ausencia de oxígeno.
Si el la tira indicadora se observa azul, hay falla en la producción del ambiente y los cultivos deben
ser repetidos. El azul de metileno se decolora en aproximadamente
4 a 6 horas a 35 ºC.
Existen en mercado diversas marcas para generadores de ambientes, entre los que llama
la atención el Genbox de bioMerieux que no requiere agua para su activación ni catalizador. No
desprende Hidrógeno y requiere ser colocado en menos de 1 minuto en la jarra, ya que la reacción
es inmediata.
Normalmente el periodo de incubación de los platos es de 48 h, sin embargo algunos requieren más
de 3 días como el Fusobacterium y algunos cocos anaeróbicos. Generalmente el periodo máximo de
incubación es de 72 horas , con observación de los platos a las 48h.

15. ¿Cómo pueden incubarse los microorganismos microaerófilos?


 Incubadoras de dióxido de carbono
 Sobres generadores de microaerofilia
Método de la vela: consiste en introducir una vela encendida en un recipiente ,antes de
que sea sellado herméticamente ,la vela consume el oxigeno acumulado y esto genera
una atmosfera rica en CO2 y pobre en O2.
16. ¿Para qué sirve utilizar un medio de cultivo semisólido? ¿Cómo se obtiene la
consistencia del agar blando?
Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos un agente solidificante en una
proporción menor que para preparar medios sólidos. Uno de sus usos es la investigación de la
movilidad de las bacterias.
Uno de sus usos es la investigación de la movilidad de las bacterias
Contiene 0.5% de agar y se preparan en matraces pequeños

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