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OBJETIVOS

 Facilitar el crecimiento y el aislamiento de las bacterias


presentes en una muestra clínica.

 Determinar qué bacterias entre las que se desarrollan


tienen más probabilidades de ser las causantes de la
infección y cuales son sus posibles contaminantes o
colonizadores.

 Obtener un desarrollo suficiente de las bacterias de


importancia clínica para permitir su identificación y su
caracterización.

 CULTIVO PURO
 CULTIVO MIXTO
 CULTIVO CONTAMINADO
DEFINICIÓN
 Sustrato sólido, líquido o semisólido que contiene
todos los nutrientes necesarios para el crecimiento y
desarrollo de los gérmenes.

 Fuentes de energía, carbono, nitrógeno, fósforo,


azufre y varios minerales.
 pH
Luz
Temperatura
 Esterilidad absoluta (salvo excepciones)
 Recipientes adecuados
Es importante destacar que la transición exitosa de un microorganismo in
vivo a un ambiente in vitro va a depender de:
Disponibilidad de nutrientes esenciales

Condiciones ambientales adecuadas

pH

Temperatura

Oxígeno y CO2

Presión

Luz
SÓLIDOS

LÍQUIDOS

SEMISÓLIDOS

Clasificación de los medios


de cultivo según consistencia
semisólido
Caldo nutritivo

Caldos de enriquecimiento

Caldos revitalizadores
Enriquecimiento

Nutritivo

Selectivo y
diferencial

Clasificación de los medios


de cultivo según utilización
MEDIOS NUTRITIVOS

Contienen nutrientes que


favorecen el desarrollo de la
mayoría de los
microorganismos sin
requerimientos especiales de
cultivo.

No promueven el
crecimiento de ningún
agente en particular
MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO
MEDIOS SELECTIVOS

Contienen uno o más agentes que inhiben el


crecimiento de los microorganismos que no se
quieren estudiar

Agentes inhibidores: colorantes, sales biliares,


alcoholes, ácidos y antibióticos
MEDIOS DIFERENCIALES

Contienen un factor o factores que permite que las


colonias de una especie o un tipo bacteriano
exhiban ciertas características metabólicas o de
cultivo que puedan utilizarse para diferenciarlas de
otras bacterias que crecen en el mismo agar
MEDIOS ESPECIALES

MEDIOS
CROMÓGENOS

MEDIOS DE
TRANSPORTE

MEDIOS DE
CONSERVACIÓN
Sustancias cromogénicas:
- Son productos químicos de síntesis que son
incoloros cuando se unen a sustratos naturales por enlaces
que son hidrolizados por enzimas microbianas específicas.
- Cuando la enzima microbiana hidroliza el enlace, se
libera el compuesto cromogénico, que adquiere un color
intenso.
- Ejemplo: Cromo agar (agentes uropatógenos), se
pone en evidencia la actividad enzimática de la B-
glucoronidasa o B- galactosidasa de las bacterias
formándose colonias de diferentes colonias según la especie.
- Identificación presuntiva, haciendo innecesaria la
realización de pruebas bioquímicas.
Medios para bacterias no exigentes
- agar
- extracto de carne
- peptona
- NACL
- leche descremada (congelar cepas)

NORMATIVA ISP, entregar


CONTROL DE CALIDAD

 El Control de Calidad en la preparación y evaluación de


los medios de cultivo es considerado como una esencial
y buena práctica de laboratorio, necesaria para mantener
el nivel y la ejecución de cualquier técnica microbiológica.

Proceso continuo que se extiende desde las materias


primas ; a través del productor hasta el producto final
utilizado en los diferentes departamentos de análisis y
diagnóstico microbiológico.
▪ Recuperación o supervivencia de los microorganismos de interés
(Productividad)
▪ Inhibición o suspensión de los microorganismos no deseados.
(Selectividad)
Propiedades bioquímicas (diferenciales y diagnósticas)
Propiedades físicas (por ejemplo, pH, Volumen)
Sea estéril .... etc.

 El Jefe inmediato responsable del área


* Deberá analizar mensualmente los resultados de las pruebas
realizadas por el responsable del departamento de control de calidad
* Evaluará el cumplimiento de objetivos a través de los resultados
CRITERIOS DE EVALUACIÓN DE LA CALIDAD
DE LOS MEDIOS DE CULTIVOS PREPARADOS.

Se evalúa utilizando criterios objetivos del medio respecto a:


 La recuperación o supervivencia de los microorganismos de interés
 La inhibición o supresión de los microorganismos no deseados tiene que ser
cuantitativa
 Los atributos ( por ejemplo: Propiedades físicas y bioquímicas)
 Rajadura del plato o envase
 Variaciones en el volumen del medio
 Hemólisis
 Cristales en el medio
 Presencia de burbujas
 Presencia de coágulos
 Cambio de color normal
 Contaminación
 Falla en la inhibición de microorganismos saprofitos
 Esterilidad
PRUEBAS FUNCIONAMIENTO
 Para evaluar cada lote de medio de cultivo que sea
recibido en el laboratorio, se emplean cepas patrones
(ATCC) de varios géneros y especies de acuerdo al
medio de cultivo a analizar.
 El control del funcionamiento consistirá en
comprobar:
 capacidad del medio de recuperar un bajo
número de los microorganismos más sensibles
para los que ha sido preparado.
 capacidad de inhibir un alto número de los
microorganismos que deben ser inhibidos en
caso de los medios selectivos y
diferenciar los microorganismos para los que ha
sido diseñado en caso de los medios diferenciales.
RECONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO
DESHIDRATADO
• Cumplir con las instrucciones de preparación del medio de cultivo
indicado en la etiqueta del envase

• Cumplir con los procedimientos técnicos de fórmulas enviadas por el


cliente

• Utilizar agua destilada de calidad

• Determinar el pH del M de C

• Esterilización del medio de cultivo

• Procedimiento escrito

• Control de esterilidad del Medio de Cultivo


AGAR INFUSION DE CARNE
MEDIO DE LOWENSTEIN JENSEN
AGAR SANGRE
ERRORES EN LA PREPARACIÓN

Apelmazamiento del producto deshidratado


 DEFECTO
 El envase no fue cerrado correctamente después de su
uso.
El envase permaneció
 Apelmazamiento del abierto por largo rato.
El producto
 Producto sobrepasó la fecha de vencimiento.
deshidratado

El valor de pH no coincide con el indicado

• No fue empleada agua destilada


• El medio fue sobrecalentado durante su preparación
 •El El Phde
valor nopHfue
nodeterminado
coincide correctamente
 •ConEl el
medio estaba vencido.
indicado
Aparición de turbiedad o precipitados:

 El medio preparado perdió agua por evaporación

 El medio se calentó en exceso

 El medio no se calentó lo suficiente.

 No fue empleada la cantidad del medio o suplemento recomendada.

El color del medio no coincide con el indicado:

 El medio fue sobrecalentado durante su preparación.

 El pH no fue ajustado correctamente.

 El recipiente empleado estaba sucio.

 Los azúcares contenidos en el medio se caramelizaron


El gel se obtiene más blando que lo característico para el
medio:

 No fue garantizada la disolución total del agar durante la preparación


del medio.
 No fue empleada la cantidad del medio recomendada o se añadió agua
en exceso.

El crecimiento de los microorganismos es


pobre:

 El medio fue sobrecalentado


 El valor del pH no fue ajustado correctamente.
 La adición de suplementos al medio se efectuó a excesiva temperatura.
 El medio no fue mezclado correctamente.
El crecimiento de los microorganismos es atípico:

 Quedaron residuos de sustancias inhibidoras del


crecimiento no deseables, en los recipientes donde se
preparó o distribuyó el medio.

 El medio de cultivo fue preparado de manera incorrecta.

 El producto sobrepasa la fecha de vencimiento.


ES, POR LO TANTO, MUY IMPORTANTE
QUE EL TECNÓLOGO MÉDICO SEA QUIEN
SUPERVISE Y CONTROLE TODOS LOS
FACTORES NECESARIOS EN LA
PREPARACIÓN Y CONSERVACIÓN DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO, PARA ASÍ LOGRAR
AISLAR E IDENTIFICAR CON
EXCELENCIA LOS DISTINTOS AGENTES
MICROBIANOS.
Microbiología, Prescott´s
Microbiología, Prescott´s
Los métodos de siembra se utilizan
para inocular por distintos métodos
sobre un medio de cultivo apropiado
una muestra que contenga
bacterias con el fin de reproducirlas
para aumentar el número de
individuos de la población y formar
colonias en el caso de medios
sólidos.
I. Siembra con rastrillo

II. Siembra con asa de cultivo


- Diseminación en superficie
- Agotamiento en superficie
- Tubos en superficie
- Tubos en profundidad o picada

III. Siembra con tórula


Figura 12: Siembra con rastrillo
Manual de microbiología 2011, U. Mayor
Figura 13: Siembra de diseminación en
superficie
Manual de microbiología 2011, U Mayor
Figura 14: Siembra semi-cuantitativa de
agotamiento en superficie.
Manual de microbiología 2011, U Mayor
Figura 15: Siembra de tubo en superficie.

Manual de microbiología 2011, U Mayor


Figura 16: Siembra de tubo profundidad.

Manual de microbiología 2011, U Mayor


 Pared celular bacteria gram
positiva y gram negativa
Gram positiva Gram negativa
Gram negativa

de Braun
Gram positiva
1 minuto 1 minuto

Decolorar 30
con alcohol- 15segund segundo
acetona os s
DIRECTOS

Primera aproximación
al posible diagnóstico
Técnicas rápidas y
baratas
Diagnósticos rápidos
y certeros
EXAMEN AL FRESCO
MATERIA GENITAL

Secreción Semen, Orina de


vaginal y/o secreción primer
uretral prostática chorro
LEVADURAS

BACTERIAS

CLUE CELLS

LEUCOCITOS

TRICHOMONAS

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