UNIVERSIDAD DE CUENCA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

ESCUELA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
INFORME DE PRÁCTICAS DE BACTERIOLOGÍA I

Docente: Dra. Claudia Carchipulla Fecha: 05 de octubre del 2016.

Integrantes: Xavier Gómez. Grupo: 5 A
Cristina Guaraca.

PRÁCTICA N° 1
1. TÍTULO: PREPARCIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO. RECUPERACIÓN DE MICROORGANISMOS
PRESENTES EN DIFERENTES AMBIENTES: TINCIÓN DE BACILOS ESPORULADOS.
2. OBJETIVOS:
 Conocer la clasificación de los medio de cultivo considerando diferentes criterios.
 Relacionar el fundamento de los diferentes medios de cultivo con el metabolismo de las
bacterias que crecen en cada uno de ellos.
 Realizar tinciones correspondientes a bacilos esporulados.
3. LOGROS DE APRENDIZAJE VINCULADOS
 Evidenciar destrezas para la preparación de medio de cultivo observando normas de calidad y
bioseguridad.
 Fundamentar el uso de cada medio preparado.
 Conocer el fundamento de las tinciones de Gram y Shaefer.
4. FUNDAMENTO TEORICO
Medios de cultivos
Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo de
microorganismos, en las condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el
medio de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para
dar colonias.
Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra, pueden vivir en condiciones extremas de
pH, temperatura y tensión de oxígeno, colonizando una amplia diversidad de nichos ecológicos. Los
medios de cultivo, debe contener los nutrientes adecuados para el microorganismo específico que se
desea desarrollar, también debe contener humedad suficiente, un pH ajustado de manera apropiada y
una concentración conveniente de oxígeno, tal vez ausente por completo. El medio que se va a sembrar
debe ser estéril, es decir, en un principio no debe contener microorganismos viables, de modo que el
cultivo contenga sólo los microbios que se agreguen al medio. Por último, el medio de cultivo sembrado
debe incubarse en una temperatura correcta.
Se dispone de una amplia variedad de medio de cultivo para el crecimiento de microorganismos en el
laboratorio. Casi todos esos medios, disponibles en el comercio, están constituidos por componentes
mezclados con anterioridad y sólo precisan del agregado de agua y luego la esterilización. (Alarcon,
2001) (Tortora, Funke, & Case, 2007)

Clasificación de los medios de cultivo:

Según su utilización (DIAZ, GAMAZO, & LOPEZ-GOÑI, 1994)
 Medios generales: Permiten el desarrollo de una gran variedad de microorganismos.
 Medios de enriquecimiento: Favorecen el crecimiento de un determinado tipo de microorganismos,
sin llegar a inhibir totalmente el crecimiento del resto.
 Medios selectivos: Permiten el crecimiento de un tipo microbiano determinado, inhibiendo el
desarrollo de los demás.
 Medios diferenciales: Son aquellos en los que se pone de relieve propiedades que posee un
determinado tipo de microorganismos.
Según su estado físico (Mª Concepción Casado González, 2012)
 Medio líquido: Son los que se presentan en este estado, denominándose por esta razón caldos. El
medio líquido más utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de
carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando pretende la obtención de una
suspensión bacteriana de una determinada concentración.
 Medio solido: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregándoles un agente gelificante. Los
más utilizados son la gelatina y el agar. Gelatina es una proteína animal obtenida de los huesos.
 Medio semisólido: Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a estos un agente
solidificante en una proporción menor para preparar medios sólidos. Uno de sus usos es la
investigación de la movilidad de las bacterias.
Según su origen (Mª Concepción Casado González, 2012)
 Naturales: Son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal como ser
extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se conoce exactamente.
 Sintéticos: Son los medios que contienen una composición química definida cualitativamente y
cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
 Semisintético: Son los sintéticos a los que se les añaden factores de crecimiento bajo una forma de
un extracto orgánico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.

5. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

EQUIPOS MATERIALES REACTIVOS

Autoclave Matraz Erlenmeyer 250ml Medios de cultivo

Baño María Varilla Colorantes

Cocina eléctrica Caja Petri Agua destilada

Balanza analítica Tubos de tapa rosca

Cámara de flujo laminar Espátula

Probeta 500ml
6. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

6.1 PROCEDIMIENTO MEDIO DE CULTIVO

 Disolver la cantidad
en gramos según el
volumen adecuado.

Calentar suavemente
Pesar las cantidades en la cocina eléctrica.
requeridas según el
volumen a preparar.

Dejar enfriar a 45-50°C

Verter en placas o tubos

dentro de la CBS y dejar
Autoclavar a 121°C solidificar.

6.2 Tinción para la técnica de Shaefer

Observar al
microscopio las
Prepara la Seguir las
esporas de color
extensión en un instrucciones de la
verde y los cuerpos
portaobjetos técnica
baciliares de color
rojo
7. DATOS AREGISTRAR
Medidas de bioseguridad observadas
 Usar mandil guantes, cofia y mascarilla.
 Emplear barreras primarias de bioseguridad como la CBS y recipientes cerrados.
Composición de los medios de cultivo

EMB: Este medio (también denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram
negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las
especies de la familia Enterobacteriaceae. Es un medio nutritivo por la presencia de peptona que
favorece el desarrollo microbiano. La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y
sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de
metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre una amplia variedad de bacterias Gram positivas. El
agar es el agente solidificante. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un
característico brillo metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada
o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. (Britania, 2010)

Brolacin: Medio de cistina y lactosa, deficiente en electrólitos, recomendado para el aislamiento e

identificación de bacterias de la orina.

Agar base sangre: Medio para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos.

La infusión de músculo de corazón y la peptona es útil tanto para el aislamiento y cultivo de
microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes. El agregado de sangre al medio de
cultivo, en concentración final de 5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite
detectar hemólisis. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. (Britania, 2010)

Agar base sangre chocolate: El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al
medio base. Este medio es usado para el aislamiento de microorganismos patógenos, principalmente
especies de Neisserias y Haemophilus, contiene GC agar base, Hemoglobina, e isovitalex. La base GC
contiene nutrientes un buffer fosfatado para mantener el pH, la Hemoglobina provee el factor X a las
especies de Haemophilus. Si se adiciona uno o varios antibióticos pueden lograrse medios inhibidores o
selectivos para el crecimiento de determinados microorganismos. (MDM, 2015)

Agar manitol salado: Es un medio selectivo por la alta concentración de sal y diferencial por la
capacidad de fermentación del manitol. El medio de cultivo contiene extracto de carne, peptona y la
tripteína que constituyen la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales que permite el
crecimiento de microorganismos; el rojo de fenol es el indicador de pH y el agar es la sustancia
solidificante Las bacterias que crecen en un medio con alta concentración de sal y fermenta el manitol,
producen ácidos que modifican el pH el cual cambia de color rojo a amarillo. Este medio de cultivo es
recomendado para estafilococos de muestras clínicas, alimentos y cosméticos. (Britania, 2010)
Agar Mueller Hinton: Es un medio utilizado para la realizar pruebas de susceptibilidad antimicrobiana
de microorganismo aerobios. El medio de cultivo contiene extracto de carne, peptona de caseína que son
la fuente de carbono, nitrógeno. Vitaminas y aminoácidos. El almidón es agregado para absorber
cualquier metabolito tóxico y el agar es la sustancia solidificante. (Casado González, Torrico Cabezas, &
Medina Anguita, 2012)

8. CÁLCULOS
EMB
36g 1000ml
X=9g 250ml
Brolacin
33g 1000ml
X=8,25g 250ml

Agar base sangre

40g 1000ml
X=10,4g 260ml
Agar base sangre chocolate
40g 1000ml
X=10,4g 260ml
Agar manitol salado
111g 1000ml
X=27,75g 250ml
Agar Muller Hinton
38g 1000ml
X=9,55g 250ml

9. CONCLUSIONES
En esta práctica se aprendió sobre la importancia de los medios de cultivos los cuáles son uno de los
métodos más usados para el análisis de microorganismos, observando su crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales que fueron preparadas en el laboratorio además aporta información valiosa sobre
los mismos si se realiza de manera adecuada e higiénica para evitar la contaminación del medio y la
alteración de los resultados. Para que los microorganismos crezcan de manera adecuada en un medio de
cultivo éstos deben cumplir una serie de condiciones como temperatura, humedad, factores de
crecimientos necesarios.
10. RECOMENDACIONES
Nivel dos de bioseguridad
Usar ropa de protección y mandil anti fluidos, mascarilla y cofia.
11. BIBLIOGRAFÍA

Alarcon, L. R. (2001). Manual de practicas de Microbiología básica y Microbiología de alimentos ...

Juarez: Universidad autonoma de la cuidad Juarez.

Britania. (Febrero de 2010). Britania Lab. Obtenido de

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Casado González, M. C., Torrico Cabezas, G., & Medina Anguita, M. (2012). Obtenido de
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DIAZ, R., GAMAZO, C., & LOPEZ-GOÑI, I. (1994). MANUAL PRACTICO DE MICROBIOLOGIA.
Barcelona: MASSON.

Mª Concepción Casado González, G. T. (18 de 09 de 2012). 2012 MEDIOS DE CULTIVO EN UN

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA. Obtenido de 2012MEDIOS DE CULTIVO EN UN LABORATORIO
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MDM. (2015). Obtenido de

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Tortora, Funke, & Case. (2007). Introducción a la microbiología. Buenos Aires: Ed Médica Panamericana.