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PRÁCTICA 2
MICROSCOPÍA
RESUMEN
PALABRAS CLAVES:
MICROSCOPIO/MICROORGANISMOS/PREPARACIONES_FIJAS/PREPARACIONES
_FRESCAS
UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA INDUSTRIAL
1. OBJETIVOS
Conocer e identificar las partes de un Microscopio compuesto y sus funciones.
Adquirir habilidades en la utilización eficiente del Microscopio.
Observar en el microscopio compuesto preparaciones fijas y preparaciones
frescas.
2. TEORÍA
2.1. Tipos de microscopio.
1) Microscopio óptico
la muestra es iluminada mediante luz visible. Este es el tipo de microscopio más habitual pero
su resolución está limitada por la difracción de la luz. El aumento máximo que se puede obtener
con este tipo de microscopio alcanza alrededor de 1500x.
2) Microscopio electrónico
la muestra no es iluminada con luz sino que se utilizan electrones. Los electrones impactan
contra la muestra dentro de una cámara de vacío
3) Microscopio de luz ultravioleta
Iluminan la muestra, como el nombre indica, con luz ultravioleta. Este tipo de luz tiene una
longitud de onda más corta que la luz visible utilizada en los microscopios ópticos.
4) Microscopio de luz polarizada
También conocido como microscopio petrográfico. Este microscopio es en realidad un tipo de
microscopio óptico al que se la han añadido dos polarizadores.
5) Microscopio de fluorescencia
Los microscopios de fluorescencia son aquellos que utilizan las propiedades de fluorescencia
para generar una imagen de la muestra. Este microscopio permite observar sustancias que
emiten luz propia cuando son iluminadas con una longitud de onda determinada
2) Microscopio de campo oscuro
Esta técnica de microscopía consiste en iluminar la muestra oblicuamente. De este modo los
rayos de luz que llegan al objetivo no provienen directamente del foco de luz sino que han sido
dispersados primero por la muestra. Esta técnica permite ver muestras que de otro modo no
serían visibles debido a su transparencia.
3) Microscopio de contraste de fases
La luz viaja a distintas velocidades dependiendo del medio de propagación. Esta propiedad es
utilizada en el microscopio de contraste de fases ya que la luz atraviesa la muestra con distintas
velocidades en distintas secciones. Este efecto es amplificado para generar la imagen de la
muestra.
(Programa de Afiliados de Amazon EU, 2000)
2.2. Microscopio óptico
2.2.1. Sistema óptico.
El sistema óptico incluye todos los elementos necesarios para generar y desviar la luz
en las direcciones necesarias y así acabar generando una imagen aumentada de la
muestra.
Foco o fuente de luz: Este es un elemento esencial que genera un haz de luz dirigido
hacia la muestra. En algunos casos el haz de luz es primero dirigido hacia un espejo
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se coloca la muestra con el ocular por donde ésta se puede observar. Tanto las lentes
del objetivo como del ocular se encuentran también conectadas al brazo del
telescopio.
Platina: Esta es la superfície donde se coloca la muestra que se quiere observar. Su
posición vertical con respecto a las lentes del objetivo se puede regular mediante dos
tornillos para generar una imagen enfocada. La platina tiene un agujero en el centro a
través del cual se ilumina la muestra. Generalmente hay dos pinzas unidas a la
platina que permiten mantener la muestra en posición fija.
Pinzas: Las pinzas tienen la función de mantener fija la preparación una vez esta se
ha colocado sobre la platina.
Tornillo macrométrico: Este tornillo permite ajustar la posición vertical de la
muestra respecto el objetivo de forma rápida. Se utiliza para obtener un primer
enfoque que es ajustado posteriormente mediante el tornillo micrométrico
Tornillo micrométrico: El tornillo micrométrico se utiliza para conseguir un
enfoque más preciso de la muestra. Mediante este tornillo se ajusta de forma lenta y
con gran precisión el desplazamiento vertical de la platina.
Revólver: El revólver es una pieza giratoria donde se montan los objetivos. Cada
objetivo tiene proporciona un aumento distinto, el revólver permite seleccionar el
más adecuado a cada aplicación. Habitualmente el revólver permite escoger entre
tres o cuatro objetivos distintos.
Tubo: El tubo es una pieza estructural unida al brazo del telescopio que conecta el
ocular con los objetivos. Es un elemento esencial para mantener una correcta
alineación entre los elementos ópticos. (Programa de Afiliados de Amazon EU,
2000)
Tabla2.3-1 Relación del voltaje de aceleración, la longitud de onda del haz de electrones
y el poder de resolución en el microscopio electrónico de transmisión expresadas en
kilovoltios (kV), angstroms (Å) y nanómetros (nm). Modificado de Sjöstrand F. (1967).
Electron Microscopy of Cells and Tissues. Vol. 1, Instrumentation and Techniques (14).
Con el microscopio electrónico se puede alcanzar una resolución de aproximadamente 40.000
veces más que el poder de resolución del microscopio de luz y 2 x 106 veces el poder de
resolución del ojo humano.
(F, 1967)
Preparación fija Se coloca una suspensión homogénea de microorganismos en una gota de agua
sobre el portaobjetos y se fija (mediante calor o agentes químicos) y después se tiñen mediante
diferentes técnicas. Estas preparaciones se observan sin cubreobjetos y, habitualmente, con
objetivos de inmersión.
Preparación en fresco es aquel que no precisa un tratamiento en el que se maten las células,
como es la fijación o la inclusión. No presenta dificultades añadidas a las de cualquier técnica
microscópica, pero sí que requiere la máxima limpieza. (Universidad de España, 2006)
3. PARTE EXPERIMENTAL
3.1. Material y Equipos
Microscopio óptico.
Preparaciones fijas.
Portaobjetos y cubreobjetos.
Papel milimetrado.
Pipeta.
Lanceta
Toallas de papel absorbente
Picetas
3.3. Procedimiento
3.3.1. Preparaciones fijas.
3.3.1.1.Coloque una gota de agua en el portaobjetos.
3.3.1.2.Coloque un trozo de papel milimetrado y cubra la preparación.
3.3.1.3.Situé la placa sobre la platina sujetándola con las pinzas.
3.3.1.4.Precise la observación ajustando tanto el ajustador macrométrico y micrométrico
3.3.1.5. Observe con los lentes de 4x y 10x. Realice el cálculo del poder de resolución con
el lente de mayor aumento.
3.3.1.6.Grafique la observación.
3.3.1.7.Para la placa fija:
3.3.1.8.Enfocar las preparaciones fijas con los lentes 10x y 40x y observar.
3.3.1.9.Colocar una pequeña gota de aceite de inmersión sobre el frotis y observar con el
lente 100x, precaución de no tocar con el aceite los otros lentes.
3.3.1.10. Graficar lo observado
3.3.2. Preparaciones frescas.
3.3.2.1. Para el cabello ponga una gota de agua en el portaobjetos junto con el papel
milimetrado y coloque el trozo de cabello.
3.3.2.2.Cubra y observe con el lente de mayor aumento.
3.3.2.3.Calcule y anote el grosor del cabello en micras.
3.3.2.4. Para la sangre.
3.3.2.5.Desinfecte la zona, con mucho cuidado pinche una yema del dedo y con ayuda de la
pipeta tome una muestra de sangre.
3.3.2.6.Coloque inmediatamente en el portaobjetos y coloque el cubreobjetos sin formar
burbujas.
3.3.2.7.Observe con los diferentes lentes de aumento, analice las diferencias y grafique.
3.3.2.8.Realizar el mismo procedimiento de la sangre para el agua estancada.
4. DATOS
4.1 Datos Experimentales
Lente AN Λ
10 0.25 600mm
40 0.65 600
100 1.25 600
5. CÁLCULOS.
𝟎,𝟔∗𝝀
𝑷𝑹 = Ec. 5-1
𝑨𝑵
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𝟎,𝟔∗𝟔𝟎𝟎
𝑷𝑹 = =1440
𝟎.𝟐𝟓
Tabla 3. Observaciones.
Muestra Observación
Placa Fija 4x No se tuvo una
observación fija
más que una luz
10x Se observó
claramente los
microorganismos
que se encontraban
en esta placa que
ya se encontraba
preparada
Cabello Grosor cabello: el grosor del cabellos se
observó en el papel milimetrado y el
grosor fue de 0.5milimetros
observación en el
microscopio
10x Se observó
glóbulos rojos con
poca diferencia con
su entorno
40x Se pudo observar
los Globulos rojos
con una excelente
definición y
diferenciar su color
7. DISCUSIÓN
8. CONCLUSIONES
8.1. Los lentes ópticos de mayor resolución permite observar con mejor claridad la estructura
de los microorganismos ya que el aumento que tiene el objetivo permite el análisis
minucioso de este.
8.2. El enfoque que se puede observar por el ocular generalmente tiene un aumento de 10x,
esto se verifica según lo observado y se ve reflejado en la tabla de observaciones
sustentando la teoría ya que se evidenció experimentalmente.
8.3. Para observar correctamente las muestras se debe multiplicar el tamaño del ocular por
cada aumento de los objetivos.
9. APLICACIONES
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10. CUESTIONARIO.
10.1. Iluminación por el método de Köhler
La iluminación Köhler fue la primera descrita por August Köhler en 1893, y aun es la aceptada (casi
exclusivamente) como el método de iluminación en los microscopios modernos. La iluminación Köhler
elimina la iluminación dispareja en el campo de observación para que todas las partes de la fuente de luz
contribuyan a la iluminación del espécimen. Existen dos tipos de iluminación Köhler, un método en el cual
la luz es transmitida a través del espécimen (transmitida) y otro método cuando la luz es reflejada desde el
espécimen (incidente). La iluminación Köhler transmitida es usada para especimenes transparentes o
semitransparentes, mientras que la iluminación Köhler incidente es útil para objetivos como el metal, los
cuales no transmiten luz.
La iluminación Köhler requiere un lente colector en o cercano a la caseta lámpara que pueda ser ajustado
para enfocar la imagen del filamento de la lámpara al frente del plano focal del condensador donde se
posiciona el diafragma de apertura. Si la imagen del filamento de la lámpara esta centrado apropiadamente
y llena por completo la apertura, la iluminación del plano del espécimen es brillante y uniforme. Para
asegurar que el filamento de la imagen aparezca en plano focal del condensador, la altura del condensador
debe ser ajustada con frecuencia. Este es un ajuste crítico que junta los dos conjuntos de planos conjugados
(referidos como el conjunto de campo y el conjunto de apertura) en ubicaciones físicas precias dentro del
tren óptico del microscopio, y maximiza el desempeño del microscopio.
10.3. Cuando movió el tornillo hacia la derecha, izquierda, abajo y arriba, ¿hacia dónde se
desplazó la imagen?
Tornillo macrométrico: Este tornillo permite ajustar la posición vertical de la muestra respecto el objetivo
de forma rápida. Se utiliza para obtener un primer enfoque que es ajustado posteriormente mediante el
tornillo micrométrico
Tornillo micrométrico: El tornillo micrométrico se utiliza para conseguir un enfoque más preciso de la
muestra. Mediante este tornillo se ajusta de forma lenta y con gran precisión el desplazamiento vertical de
la platina.
10.4. ¿Por qué razón las muestras que se observan en el microscopio compuesto deben ser
delgadas y utilizar un medio de montaje?
Se debe a que las muestras deben ser lo mas finas posibles para que la luz las atraviese, y asi
puedan ser observadas a través del ocular.
El uso de un medio de montaje es necesario para fijar las preparaciones, evitando que se desplacen,
y localizar fácilmente la zona que queremos observar
10.5. Explique las razones porque NO deben tocarse los lentes de un microscopio con los
dedos. Investigue sobre las buenas prácticas en el uso de microscopio.
10.6. Investigue sobre los diferentes tipos de microscopios y su utilización.
1) Microscopio óptico
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En el microscopio óptico la muestra es iluminada mediante luz visible. Esto significa que existe
un foco de luz apuntando hacia la muestra. Esa misma luz es conducida a través del objetivo y
del ocular hasta llegar a formar la imagen en el ojo del observador. Este es el tipo de microscopio
más habitual pero su resolución está limitada por la difracción de la luz. El aumento máximo que
se puede obtener con este tipo de microscopio alcanza alrededor de 1500x.
mercurio. Estos microscopios incorporan además filtros de luz para aislar la luz correspondiente
a la muestra.
1) Microscopio monocular
Figura;Microscopio invertido
(Fuente: Zeiss Microscopy)
Los microscopios convencionales tienen una configuración vertical. Esto significa que el foco de
luz se encuentra en la parte inferior de la estructura. A continuación hay la platina donde se
coloca la muestra y finalmente el cabezal con los objetivos y el ocular en la parte superior. Esta
es la configuración más habitual pero no la única.
Existen también los microscopios invertidos. Esto microscopios tienen una configuración
totalmente opuesta a la del microscopio vertical. La muestra es iluminada desde la parte superior
y los elementos ópticos se encuentran debajo la platina. Con este tipo de microscopio es posible
observar muestras colocadas en el fondo de un recipiente. Esto es muy útil para mantenerlas
hidratadas y poder así observar muestras vivas y procesos biológicos que duran días.
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Microscopios digitales
Los microscopios digitales son aquellos que capturan una imagen digital de la muestra. Esto se
consigue conectando una cámara digital en lugar del ocular. Existen microscopios digitales con
distintas configuraciones. Habitualmente deben conectarse al ordenadorpara poder transmitir las
imágenes y a continuación visualizarlas. También es cierto que existen microscopios digitales
con una pantalla incorporada. Estos permiten ver la muestra en la pantalla y almacenar
imágenes que pueden transmitirse a continuación a un ordenador mediante conexión
USB o tarjeta SD.
Un tipo especial de microscopios digitales son los microscopios USB. Estos microscopios
consisten únicamente en una lente de gran aumento y una cámara digital. El aumento que se
alcanza es limitado en comparación con un microscopio óptico convencional. Aún así son
instrumentos muy versátiles y útiles para observar objetos cotidianos. Los microscopios USB se
conectan al ordenador mediante conexión USB y permiten guardar imágenes de la muestra.
Microscopio estereoscópico
El microscopio estereoscópico es un tipo de microscopio que permite observar la muestra de
forma tridimensional. Estos microscopios están equipados siempre con dos oculares. La imagen
de la muestra que llega a cada ocular es ligeramente distinta de modo que cuando se combinan se
consigue el efecto 3D. Este efecto no podría conseguirse si la muestra se observara con un solo
ocular.
El aumento que se consigue con el microscopio estereoscópico es inferior al que se consigue con
un microscopio óptico convencional. Sin embargo, los microscopios convencionales solo
permiten una observación bidimensional de la muestra. Los microscopios estereoscópicos son
muy utilizados en aplicaciones donde debe manipularse la muestra mientras se observa. Por
ejemplo para el montaje de circuitos o relojes.
Otros tipos de microscopios
Además de los microscopios anteriormente presentados existen multitud de técnicas de
microscopía adicionales optimizadas para tipos de muestra específicas. Algunos de los que vale
la pena mencionar son:
1) Microscopio confocal
Este es un tipo de microscopio de fluorescencia. En lugar de iluminar la muestra de forma
global se ilumina punto a punto de forma sucesiva y se reconstruye la imagen al final del
proceso. Este proceso de escaneado de la muestra es similar al que se produce en los
microscopios electrónicos de barrido. Este tipo de microscopio fue inventado por Marvin
Minsky en 1957.
2) Microscopio de campo oscuro
Esta técnica de microscopía consiste en iluminar la muestra oblicuamente. De este modo los
rayos de luz que llegan al objetivo no provienen directamente del foco de luz sino que han sido
dispersados primero por la muestra. Esta técnica permite ver muestras que de otro modo no
serían visibles debido a su transparencia. También tiene la ventaja que no requiere teñir la
muestra para aumentar su contraste y poder observarla.
muestra. Mediante esta técnica no hace falta utilizar tintes y, por lo tanto, pueden observarse
células vivas. El microscopio de contraste de fases fue inventado por Frits Zernike en 1932 y
recibió por ello el premio Nobel de física en 1953.
12. ANEXOS
12.1. Diagrama del equipo. (Microscopios con sus partes).