INTRODUCCIÓN

Las microalgas corresponden a uno de los microorganismos más primitivos que aparecieron
en nuestro planeta y tienen un rol fundamental en la evolución de la vida desde hace más de
dos billones de años. La producción de oxígeno microalgal contribuyó en gran medida a la
formación de la atmósfera de nuestro planeta, permitiendo el predominio de las formas de
vida aeróbicas, primer paso para el surgimiento de las plantas y el origen de los diversos
grupos de eucariotas. A pesar de su gran importancia para nuestro Planeta, las microalgas
constituyen un grupo de microorganismos cuyos usos potenciales aún no han sido
suficientemente estudiados (Assunção, De la Jara, Carmona, & Freijanes, 2011). No
obstante, con el desarrollo de la tecnología, el cultivo de microalgas ha tenido un importante
desarrollo y su estudio ha iniciado una nueva fase a través de la utilización de los cultivos
masivos para distintos propósitos por ser ricos en varios fitoquímicos como los carotenoides,
fenólicos, aminoácidos, ácidos grasos poliinsaturados y polisacáridos sulfatados. La
microalga Chlorella vulgaris usada en este estudio, es una microalga unicelular verde que
habita en ríos, arroyos de agua dulce y suelos encharcados ha llamado la atención en el campo
de la biotecnología, al convertirse en una interesante fuente de biomasa para el sector de la
producción de biodiesel, pues como muchas otras microalgas, proporcionan excelentes
acciones biológicas entre las cuales se incluyen antioxidantes, antimicrobianas, antivirales,
antitumorales, anti-inflamatorio y antialérgicos; aprovechados por la industria de alimentos,
fármacos, biocombustibles y sectores de la industria, la agricultura y el medio ambiente.
El óptimo desarrollo de las propiedades anteriormente mencionadas de las microalgas se da
gracias a los diferentes procesos metabólicos que estas precisan, los cuales se comprenden
como:
Autótrofo: Son capaces de sintetizar todas las sustancias que necesitan para su metabolismo
a partir de sustancias inorgánicas, a este procedimiento se le conoce como fotosíntesis.
Fotótrofo: Son aquellos organismos que emplean la luz solar para realizar la fotosíntesis.
Heterótrofo: Hay seres vivos u organismos que se alimentan a su vez de otros (autótrofos o
heterótrofos) y de esa forma obtienen la energía necesaria para vivir. Los organismos
heterótrofos incorporan sustancias y las transforman en moléculas orgánicas sencillas a
través del proceso de la nutrición.
Mixótrofo: Son organismos capaces de sacar energía metabólica tanto de la fotosíntesis como
de fuentes externas. Se consideran autótrofos y heterótrofos.
De esta manera, las microalgas precisan de medios diversos para su crecimiento, medios que
les permitan desarrollarse según los nutrientes que necesitan para cada metabolismo, entre
ellos se encuentra el medio CHU13, pues es un medio enriquecido con compuestos
inorgánicos como minerales y elementos traza que son esenciales para el crecimiento de
microalgas; puede prepararse en medios líquidos y medios de agar con adición de ciertos
compuestos orgánicos para recrear condiciones heterótrofas.
La vinaza es un material líquido resultante de la producción de etanol, ya sea por destilación
de la melaza fermentada o de la fermentación directa de los jugos de la caña. Debido a esto,
la vinaza está compuesta por materiales orgánicos y nutrientes minerales que hacen parte de
compuestos y constituyentes vegetales como aminoácidos, proteínas, lípidos, ácidos
diversos, enzimas, bases, ácidos nucleicos, clorofila, lignina, quinonas, ceras, azúcares y
hormona ( García O. & Rojas C, 2006) por esta razón, es un sustrato que permite el desarrollo
de cultivos mixótrofos y jugara un papel importante en esta práctica permitiendo el
crecimiento de diversos microorganismos entre ellos las microalgas.
Todo lo anterior nos permite conocer el metabolismo de las microalgas incubadas bajo
diferentes condiciones nutricionales y reconocer diferentes morfologías de microalgas, así
como diferentes agrupaciones y otros aspectos a nivel macroscópico.

MATERIALES Y MÉTODOS
1.1) Materiales: Para llevar cabo la siembra por aislamiento, se utilizó caldo de Vinaza y
los medios de Agar Sabouraud con cloranfenicol, Nutritivo y Casoy. Para realizar las
fijaciones se utilizaron diferentes láminas, mechero y para su tinción su utilizó el kit
de tinción de Gram. Para el recuento, se utilizó la cámara de Neubauer y su respectiva
técnica. Finalmente, para realizar la caracterización y observar los detalles fue preciso
contar con un microscopio.
Para la caracterización microscópica, se tomó con el asa un volumen del cultivo mixto
de Chlorella vulgaris y prepararon laminas en fresco.
1.1.1) Reactivación de la cepa: Para realizar el recuento de los cultivos bajo
diferentes condiciones, fotótrofas, autótrofas, heterótrofas y mixtas, se
adiciono un vial de Chlorella vulgaris en 25mL de caldo CHU 13.
Se incubo durante 8 días a una temperatura de 23ºC en aireación constante y
flujo de luz de 2000 – 4000 lux. Finalizado este tiempo, se adiciono todo el
contenido del cultivo en 75mL de caldo CHU 13. Considerando este cultivo
para los posteriores procesos como el cultivo mixto.
1.1.2) Cultivo bajo condiciones Fotótrofas: Se tomaron 5mL del cultivo mixto y se
adicionaron en 25mL de CHU 13 suplementado con ampicilina y
cicloheximida.
Se incubo durante 8 días a una temperatura de 23ºC con aireación constante y
un flujo de luz de 2000 – 4000 lux.
1.1.3) Cultivo bajo condiciones Autótrofas: Se tomaron 5mL del cultivo mixto y se
adicionaron en 25mL de CHU 13 suplementado con ampicilina y
cicloheximida.
 Se incubaron durante 8 días a una temperatura de 23ºC con aireación constante
sin flujo de luz.
1.1.4) Cultivo bajo condiciones Heterótrofas: Se tomaron 5mL del cultivo mixto y
se adicionaron en 25mL de CHU 13 suplementado con glucosa, ampicilina y
cicloheximida. Adicionalmente, se tomaron 5mL del cultivo mixto y se
adicionaron en 25mL de CHU 13 suplementado con glicerol, ampicilina y
cicloheximida.
Se incubaron durante 8 días a una temperatura de 23ºC en aireación constante
y flujo de luz de 2000 – 4000 lux.
1.1.5) Cultivo bajo condiciones Mixótrofas:
Se tomaron 5mL del cultivo mixto y se adicionaron en 25mL de caldo de
vinaza 1%. Adicionalmente, se tomaron 5mL del cultivo mixto y se
adicionaron en 25mL de medio de agua residual 1%.
Se cubrieron con papel aluminio para evitar el contacto con la luz y se
incubaron durante 8 días a una temperatura de 23ºC con aireación constante
sin flujo de luz.
1.1.6) Recuento: Finalizado los 8 días de incubación, se realizó la descripción de las
características de cultivo a nivel macro y microscópico, de manera
consiguiente realizó un recuento siguiendo la técnica de recuento en cámara
de Neubauer.
1.1.7) Siembra por aislamiento: Se marcaron las cajas Petri de los agares Casoy,
Nutritivo y Sabouraud con los respectivos datos de identificación, la siembra
se realizó con el medio de cultivo bajo condiciones Mixótroficas, se incubó
durante 48 horas a una temperatura de 30ºC para el crecimiento de hongos y
levaduras y 35ºC para el crecimiento de bacterias.
1.1.8) Caracterización Microscópica: Con ayuda de un asa se tomó un volumen de
todos los cultivos y se prepararon laminas en fresco. Posteriormente se enfocó
al microscopio y se realizaron las diferentes descripciones microscópicas de
C. vulgaris.
1.1.9) Métodos de tinción: Tinción de Gram
Se marcaron las diferentes láminas con los nombres de los microorganismos,
se adicionó una gota de agua destilada a la lámina portaobjetos y con un asa
desechable se tomó una pequeña porción de la muestra del cultivo y se
homogenizo con el agua destilada de la lámina. Seguido a esto, se dejó secar
empleando un mechero. Después del secado, se adicionaron 10 gotas de cristal
violeta sobre la homogenización y se dejó actuar durante 1 min, luego se retiró
el exceso de colorante con agua destilada y se agregaron 10 gotas de Lugol
sobre la homogenización, se dejó actuar por 1 min, después se retiró el exceso
 nuevamente con agua destilada, posteriormente, se adicionaron 10 gotas de
Alcohol acetona y se dejó actuar durante 30 segundos y retirando el exceso
con agua destilada. Finalmente, se adicionaron 10 gotas de Fucsina sobre la
lámina y se dejaron actuar durante 1 min, retirando el exceso con agua
destilada, se fijó la muestra a la lámina con ayuda de un mechero y se
observaron las características de la muestra con un microscopio.

Referencias
García O., A., & Rojas C, C. (2006). Posibilidades de Uso de la Vinaza en la Agricultura de.

Assunção, P., De la Jara, A., Carmona, L., & Freijanes, K. (2011). POTENCIAL BIOTECNOLÓGICO DE
LAS MICROALGAS. EL PERIÓDICO DEL MUSEO ELDER.

(2017). Nutrición autótrofa y heterótrofa e influencia de las nuevas tecnologías. Obtenido de:
https://www.universidadviu.es/nutricion-autotrofa-heterotrofa-e-influencia-las-nuevas-
tecnologias/