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“Año del diálogo y la reconciliación nacional”

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA


LA MOLINA

​ EPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA


D
CURSO: QUÍMICA ANALÍTICA - LABORATORIO

INFORME DE PRÁCTICA N°2

Título:​ Determinación nitrógeno orgánico, método Kjeldahl.

ALUMNO CÓDIGO FIRMA


Landeo Guerrero, Fátima 20151400

Hernandez Urbano, Gianella 20150400

Pacheco Cuadros, María Elena 20160408

Ramos Quispe,Dina 20151452

Kohayagawa Martinez, Estefania 20150443

Facultad y especialidad​: Ciencias-Química analítica.


Horario de práctica:​ Lunes-11a1pm
Profesor(a)​: Alegría Arnedo, María Cecilia.
Fecha de la práctica:​ 02/04/18
Fecha del informe:​ 08/04/18

LA MOLINA-LIMA-PERÚ
1. INTRODUCCIÓN

El nitrógeno lo encontramos,tanto en sustancias orgánicas como inorgánicas.Son


muy útiles para la investigación.En las orgánicas encontramos las proteínas,
aminoácidos,aminas,úreas,medicamentos,mezclas alimentarias,efluentes,
fertilizantes orgánicos,materias orgánicas de aguas naturales,potables,residuales,
etc.El nitrógeno se puede utilizar por varios métodos como el Kjeldahl,el
método de Dumas,espectrofotometría,entre otros.

Un método que se puede utilizar es por volumetría ácido-base Bronsted y Lowry.


Para utilizar este método;primero debemos poner al nitrógeno en su forma ácido-
base,es decir:amonio NH4,ácido y amoniaco,NH3,base. Si el nitrógeno se encuentra
como NH4 y NH3,se debe separar como amoniaco gaseoso,el NH3 por destilación
Kjeldahl y recibirlo con un medio ácido y finalmente titularlo con una base.

Si el nitrógeno lo encontramos en forma orgánica se usa el método Kjeldahl que


comprende las siguientes etapas:

a) Una etapa previa de digestión o calcinación vía húmeda;con esto lograremos


que la muestra se convierta en NH4.
b) Destilación y captura de NH3,donde el amoniaco se arrastra por vapor de
agua y es capturado en la reacción en una solución ácida.
c) Titulación con ácido o base según el ácido usado para determinar las
las moles de NH3 producido.

Se puede calcular la concentración de proteína usando un factor gravimétrico de


nitrógeno a proteína en cereales,carnes,otros materiales biológicos.Descrita en 1883
siendo uno de los métodos más utilizados en el análisis químico para determinar
compuestos orgánicos nitrogenados.

1.1 ​JUSTIFICACIÓN

Este trabajo se realiza en pos de comprobar la existencia de nutrientes, en especial


el porcentaje de proteínas en​ ​Chenopodium quinoa​ “​quinua”, por medio de la
presencia de nitrógeno en sus formas de amonio y amoniaco, sometido al método
Kjeldahl, en sus tres etapas, desde digestión hasta titulación. ​Se caracteriza por el
uso de ebullición, ácido sulfúrico concentrado que efectúa la destrucción oxidativa de
la materia orgánica de la muestra y la reducción del nitrógeno orgánico a amoníaco
el amonio es retenido como bisulfato de amonio y puede ser determinado ​in situ ​o
por destilación alcalina y titulación.

1.2 ​OBJETIVOS

➢ Determinación de nitrógeno en la muestra.

1
➢ Determinación de proteínas en la muestra.

​1.3 ​HIPÓTESIS

La concentración de amoniaco,NH3,una base de Lowry porque acepta iones H+


formando amonio NH4+ ,puede determinarse desprendiendo y arrastrándolo como
gas NH3 con vapor de agua en una reacción ácido-base usando la técnica de la
retrovaloración o valoración inversa y aplicando las leyes de estequiometria.

2. REVISIÓN DE LITERATURA

​ Proceso analítico en el Método de Kjeldahl para nitrógeno orgánico


Este método comprende dos operaciones unitarias previas a la titulación:
Calcinación por vía húmeda donde utilizamos ácido sulfúrico concentrado,
catalizadores y temperatura alta para que el nitrógeno orgánico pase a
nitrógeno -NH4 como sulfato de amonio y el otro es la destilación;al
completar la digestión,la solución se enfría y se alcaliniza con hidróxido de
sodio concentrado para que el amonio se transforme en gas amoniaco.
El amoniaco liberado se arrastra con vapor de agua por destilación,se recoge
en solución ácida y se titula.

a) DIGESTIÓN
La muestra es oxidada por vía húmeda con ácido sulfúrico, catalizadores
químicos y temperatura alta en un digestor, carbono, hidrógeno, oxígeno, azufre que
pueda contener se gasifican y se emiten al exterior como dióxido de carbono, agua,
óxidos de azufre, etc. Si la muestra está compuesta de nitrógeno amídico y amínico
se convierte en ion amonio. El objetivo en sí es transformar N-orgánico con enlaces
peptídicos formando macromoléculas a N-amoniacal, inorgánico, simple de carácter
ácido base.

b) ALCALINIZACIÓN,ARRASTRE Y CAPTURA DE AMONIACO,NH3 EN


ÁCIDO
Este proceso es después de la digestión y antes de realizarlo se debe
dejar enfriar la solución ácida con hidrógeno sulfato de amonio. Luego se añade un
exceso de hidróxido de sodio concentrado para neutralizar el exceso de ácido
sulfúrico y alcalinizar el medio y el ion amonio se transforma en amoniaco.

c) TITULACIÓN
​ Se utiliza el ácido sulfúrico por retrovaloración,cuando el amoniaco se recibió
en un exceso de una solución de un ácido fuerte.se titula el remanente del
ácido con una base estandarizada.

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3. MATERIALES Y MÉTODOS

3.1 ​MATERIALES:
❖ Bureta de 25 a 50 ml

❖ Matraz Erlenmeyer de 125 o 250 ml

❖ Vasos de precipitado de 50 o 100 ml

❖ Pizeta con agua destilada

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❖ Pipeta volumétrica

❖ Balón de digestión Kjeldahl

❖ Ácido sulfúrico

❖ Fenolftaleína

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❖ Hidróxido de sodio

❖ Equipo de destilación Kjeldahl

3.2 ​MÉTODOS:

❖ DIGESTIÓN N-org→ N-NH4

● Tomar una muestra húmeda de quinoa y pesarla, en este caso, de 0,5552g.


A continuación envolverla en papel y colocarla en en el balón Kjeldahl.
● Añadir 1 g de catalizador, 2.5ml de H2SO4 y en presencia de alta temperatura en el
digestor, dejar aprox 2 horas, hasta una solución incolora.

❖ DESTILACIÓN NH4HSO4

-Para la captura de amoniaco arrastrado por el flujo de vapor de agua

● En un matraz Erlenmeyer de 125ml.


● Con una pipeta tomar 25 ml de H2SO4 0.05M y verter en el matraz mas 5 o 6 gotas
de fenolftaleína (indicador).Reservar.

-Para generar flujo de vapor de agua y alistar el equipo de destilación

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● Identificar el equipo de destilación y sus partes, luego verificar que todas las llaves
estén abiertas.
● Encender la plancha y esperar que el agua hierva a 100ºC.
● Comprobar la circulación de agua (entrada y salida).

-Para alcalinizar el N-NH4+ y pasar a N-NH3(g), arrastrandolo con flujo


vapor de agua y atraparlo en ácido

● Calentar el balón con la muestra cristalizada para pasar al estado líquido


● Tomar 5 ml del NaOH 2M.
● Alistar 5ml de agua destilada.
● Verter la muestra digestada en el destilador, y enjuagar con agua destilada
● Agregar 5 o 6 gotas de fenolftaleína por la cámara de entrada (embudo).
● Colocar el matraz con H2SO4 en el extremo del refrigerante.
● Esperar un lapso de 5 min de destilación, luego comprobar de haber atrapado todo
el NH3(g), usamos una cinta indicadora de pH hasta que marque incoloro.

❖ TITULACIÓN

● Enrasar la bureta con un vaso de precipitado con NaOH 0.1 M estandarizado.


● Titular gota a gota, hasta que vire a color rosa.

4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

4.1 ​RESULTADOS

Chenopodium quinoa​ “​quinua​”

A Peso de muestra en gramos 0,5552g

B Volumen de H2SO4 para la captura de NH3 25mL

C Molaridad de H2SO4 estandarizada 0.0572M

D Volumen de NaOH gastado en la titulación 16mL

E Molaridad de NaOH estandarizado 0.0986M

F F.E. 2 NaOH + H2SO4 → Na2SO4 + 2 H2O 0.5

G 2 NH3 + H2SO4 → (NH4)2SO4 2

H milimoles de H2SO4 que Rx con el NH3 1.43

I milimoles de NH3 equivalente 2.86

6
J Milimoles de N equivalente 2.86

K W(g) N = Jx0.014g/mmol 0.4004

L %N(p/p) 3.2337%

M %proteínas (p/p) = %N x 6,25 20.2107%

%N= ​(VxMH2SO4t - VxMNaOH X FE = 0.5 exceso)x FE= 2 x 0.014​ x 100 =


0.5552g

● %N=​(25 x 0.0572 - 16 x 0.0986 x 0.5)x 2 x 0.014​ x 100 =


0.5552g
​3.2337%

%P= %N x 6.25 = ​20.2107 %


5. DISCUSIONES

● El método de Kjeldahl está basado en la combustión húmeda de la muestra, calentándose


con ácido sulfúrico concentrado en presencia de catalizadores metálicos y de otro tipo para
efectuar la reducción del nitrógeno orgánico de la muestra a amoníaco, el cual es retenido en
solución como sulfato de amonio. La solución de digestión se hace alcalina y se destila o se
arrastra con vapor para liberar el amoníaco que es atrapado y titulado.

● El análisis de nitrógeno/proteínas según el método Kjeldahl se presenta como un método de


análisis complejo de varias etapas. Este sirve para la determinación de proteínas en
alimentos y piensos y es de aplicación universal gracias a que acepta pesos elevados de las
muestras. A lo largo de los años se ha ido implantando como método de referencia en el
análisis de alimentos.

● A pesar de los numerosos métodos alternativos existentes hoy en día como, p. ej., el ya
mencionado análisis de combustión de Dumas, el análisis Kjeldahl sigue ocupando una
posición dominante. Esto no solo se debe a su gran flexibilidad y aplicación universal con
material de muestra con baja homogeneidad,

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6. CONCLUSIONES

➔ La muestra posee un 20, 2107% de proteína.

Cuadro 1. Valores máximos y mínimos de la composición del grano de quinua según varios
autores (g/100 g).

➔ De acuerdo a los valores teóricos establecidos​ (Junge, 1975)​. Se puede afirmar que están
en el intervalo de 11- 21.3 %.
Por lo tanto al hallarse un 20,2107%, se concluye que el valor hallado esta dentro de dicho
intervalo y se considera aceptable, además de proceder a hallar el error porcentual:

EP = 21.3- 20.2107/ 21.3* 100 =​ 5.1141%

Con un error porcentual se de 5, 1141 % de termina el % proteinas en la quinua.

7. RECOMENDACIONES

➔ Hay que familiarizarse con los elementos de seguridad disponibles y localizar las salidas
principales de emergencia. Deben respetarse siempre sin ser invadidas por objetos
innecesarios. Además, se debe conocer la localización exacta de extintores, mangueras,
duchas de seguridad y lavaojos.
➔ Es obligatorio usar gafas de seguridad y no llevar lentes de contacto.
➔ El uso de bata es obligatorio, deberá estar siempre cerrada y no ser utilizada fuera del
laboratorio. Se recomienda llevar zapatos cerrados y no sandalias. Se utilizarán guantes
para protección de las manos. El pelo largo deberá estar siempre recogido. Se evitará el
uso de anillos, pulseras, etc.
➔ No comer ni beber en el laboratorio. Hay que lavarse siempre las manos antes de salir
del mismo.

8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

❏ Adrian, J. Potus, J. Poiffait, A. Dauvillier, P.:​ ​(2000)​“Análisis nutricional de los


alimentos”​, EDITORIAL. Acribia, pág. 41-43
❏ Moron, C. Zacarias, I. Pablo, S.: (1997) ​“​Producción y manejo de datos de
composición química de alimentos en nutrición” ​FAO. Dirección de Alimentación y
Nutrición, pág. 15
❏ http://www.fao.org/docrep/018/ar364s/ar364s.pdf

8
❏ https://es.scribd.com/document/350325721/5-Cuantificaicon-de-Proteinas-Por
-El-Metodo-Del-Acido-Bicinconinico-y-Bradford
❏ http://www.labome.es/method/Protein-Quantitation.html
❏ http://www.gerhardt.de/fileadmin/Redaktion/downloads/Stickstoffanalyse_-_Di
e_Methode_von_Johan_Kjeldahl_gekuerzt_f_Homepage-spa-ES.pdf

9. ANEXOS

CUESTIONARIO DE PREGUNTAS

a) ¿Cuál es el título,propósito he hipótesis de la Práctica 2?

TÍTULO:Volumetría ácido-base.Determinación nitrógeno orgánico.Método Kjeldahl.


PROPÓSITO: Determinar la concentración de nitrógeno amoniacal en compuestos
inorgánicos y orgánicos por la técnica de la volumetría ácido-base
por retrovaloración titulando con NaOH estandarizado y aplicando las
leyes de estequiometría.
HIPÓTESIS: La concentración de amoniaco,,NH3,una base de Lowry porque acepta
iones H+ formando amonio NH4+ ,puede determinarse desprendiendo y
arrastrándolo como gas NH3 con vapor de agua en una reacción
ácido-base usando la técnica de la retrovaloración o valoración inversa y
aplicando las leyes de estequiometria.

b) ¿Cómo demuestra que el resultado reportado por usted es confiable?


El experimento de laboratorio está analizado estadísticamente al 95%. Si bien, sólo se
realizó un ensayo, el error porcentual tal vez no sea muy bajo, además de los errores
sistemáticos que se puedan hallar, sin embargo el resultado se halla en el intervalo de
valores teóricos, por lo tanto podemos decir que es confiable.

c) ¿Cómo demuestra usted que trabajó de manera segura?


El manejo y la utilización de reactivos se deben realizar de acuerdo a lo establecido
en el Manual de Gestión de Seguridad y Salud Ocupacional.
También utilizamos material y equipo de protección personal que la práctica lo exija:
guantes para calor,protector de ojos,mandil o guardapolvo.

d) ¿Cómo demuestra usted que el impacto ambiental de su actividad en el laboratorio


fue mínimo?
Aplicar los lineamientos del Manual de Gestión de Residuos de Laboratorio.
Manejar las instrucciones de tratamiento y disposición de residuos sólidos ,efluentes
y/o emisiones en área de trabajo.
Utilizar los recipientes para disposición de residuos sólidos y líquidos.

e) Investigue el fundamento analítico para la determinación de proteínas por cada uno


de los siguientes métodos.

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➢ Método Biuret

El método se debe a al compuesto coloreado formado por la condensación de 2


moléculas de urea con eliminación de amoniaco. Si una solución alcalina de sulfato
cúprico se añade una solución de proteína se forma un complejo entre el ion cúprico
y el enlace peptídico

➢ Método de Lowry
Es un método colorimétrico de relación cuantitativa de las proteínas. A las muestras
se le añaden un reactivo que forma un complejo coloreado. Siendo la intensidad de
color proporcional a la concentración de proteínas, según la ley de Lambert-Beer.

➢ Método del ácido Bicinconínico (BCA)


Es un reactivo cromogénico específico para Cu +1 , y en el segundo paso de la
reacción dos moléculas de BCA reaccionan con una de ion de Cu +1 . La cantidad de
Cu +2 reducido es una función de concentración de proteínas y ser determinada
espectrofotométricamente por un cambio en el color de la solución a púrpura, la cual
absorbe a 562 nm

➢ Método de absorción UV a 280 nm


Los aminoácidos aromáticos tirosina y triptófano le dan a las proteínas su
característico espectro de absorción ultravioleta a 208 nm. También fenilalanina y
puentes disulfuro pueden contribuir a la absorción pero muy ligeramente. Este
método requiere de un volumen demasiado pequeño porque los espectrofotómetros
tienen un sistema de retención de muestra durante la medición por eso la muestra
proteica debe encontrarse pura y no contener componentes no proteicos con el
mismo espectro de absorción, tales como ácidos nucleicos contaminantes.

➢ Método de adhesión de colorante


Controlando el pH y la fuerza iónica del medio los grupos funcionales ácidos y básico
de las proteínas pueden interactuar con grupos orgánicos de carga opuesta. En esta
unión se presenta coloración o bien cambio de esta. Normalmente se usa colorantes
sulfonados los cuales reaccionan a pH ácido con el grupo e-amino de la lisina y el
grupo guanidina de la arginina, el imidazol de la histidina y un número limitado de
a-amino terminales.

➢ Método de Bradford
Está basado en el cambio de color del colorante Coomassie brilliant blue G-250 en
respuestas a diferentes concentraciones de proteínas . Este compuesto interacciona
con aminoácidos básicos y aromáticos. Esta unión del colorante con las proteínas
provoca un cambio en el máximo de absorción del colorante desde 465 a 595 nm.
Este método se basa en la propiedad del Azul Brillante de Coomassie G-250 de
presentarse en dos formas con colores diferentes, rojo y azul. La forma se convierte
en azul cuando el colorante se une a la proteína.

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➢ Método de la Ninhidrina
Es un poderoso reactivo que reacciona con la proteína y aminoácidos para
diferenciarse de otros compuestos como los carbohidratos. Este reactivo reacciona con la
alfa-aminoácido que está dentro de la proteína dándole un color púrpura pero menos el
hidroxiprolina y prolina que le dan un color amarillento.

➢ Método turbidimétrico

f) Un determinado cereal contiene 16% de proteínas.Calcular el peso del cereal que se


tomaría como muestra para que al analizar con el método de Kjeldahl del ácido bórico
se utilice 50 ml de HCL 0,025 M;(factor de conversión =5,7)

%Proteína= %Nx5.7
= 16x5.7
= 91.2
%N = ​MxVHClxF.Ex0.014x100
W(g)
91.2 = 0.025x50x5.7x0.014 x 100÷W
= 9.975g

g) Una muestra de leche desecada pesa exactamente 1 g y se analiza por el método


Kjeldahl. El amoniaco se recoge en 50 ml de HCL 0.122M y el exceso de ácido gasta 20.7
ml de NaOH 0.145 M. Calcular el % de proteínas.

%N= ​(VxMHCl- VxMNaOH X FE = 0.5 exceso)x FE= 2 x 0.014​ x 100 =

%N= ​(50x0.122 - 20.7x0.145x0.5)2x 0.014​ x 100 =


1g
=12.88%
%P= %N x 6.25
= 12.88x6.25
=80.5

h) Una muestra de 0.5 g de un embutido es analizada por la técnica de Kjeldahl


(modificación: ácido bórico). El gasto de HCl 0.116 M fue de 7.2 ml. Calcular el % de
proteínas totales en la muestra.
Muestra= 0.5g
Ac bórico, FE=1
HCl 0.116M = 7.2mL
%N=2.339%
%Proteína=2.339%x6.25=14.616%

i) Un gramo de fertilizante comercial es analizado por el procedimiento de Kjeldahl. El


amoniaco es destilado es recibido en 30 ml de solución de ácido bórico al 2%. Finalmente
se necesitaron 45.32 ml de HCl 0.182 M. Calcular el % de nitrógeno en el fertilizante
Muestra=1g

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Ac bórico FE=1
HCl 0.182M= 45.32mL
%N=11.547%
%Proteínas=11.547%x6.25=72.172%

j) ¿ Cuál será el peso en gramos de muestra que se analizará para que por la técnica de
Kjeldahl, variante ácido bórico, el gasto de HCl 0.1 M consumido en la titulación final sea
igual al % de proteínas totales de la muestra?
HCl 0.35 M= XmL
%P= XmL
Ac. Bórico FE= 1
%P=%Nx6.25=X
x100
W=3.0625

k) Una muestra impura de 0.25g de urea es analizada por la técnica Kjeldahl. El gasto en la
valoración final fue de 44.2 ml de HCl 0.35 M. Calcular el % de pureza de la muestra.

W=0.25 urea
Masa molar úrea=60.06 g/mol
HCl 0.35M=44.2mL
Pureza= =37.165%

l) Se sabe que un embutido contiene 20.09 de proteínas totales. ¿Cuál será el volumen de
HCl 0.125 M que se gastara en la valoración final si se analiza una muestra de 0.875 g por
la técnica de Kjeldahl?

Muestra=0.875g
%Proteína=20.09%
HCl 0.125 M= VmL
20.09=%Nx6.25 %N=3.2144
3.2144=
V=16.072mL

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